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5.人工培養(yǎng)細(xì)菌的實(shí)際意義有:(1)傳染病的診斷與治療,分離培養(yǎng)致病菌并做藥敏試驗(yàn),可指導(dǎo)臨床用藥。(2)細(xì)菌的鑒定與研究,研究細(xì)菌的生物學(xué)特性、致病性、免疫性等都要進(jìn)行細(xì)菌的人工培養(yǎng)。(3)生物制品的制備和基因工程。(4)做細(xì)菌的毒力分析和衛(wèi)生檢測(cè).1、簡(jiǎn)述菌群失調(diào)癥及其發(fā)生機(jī)制。正常菌群的成員組成和數(shù)量發(fā)生明顯變化就為菌群失調(diào),若進(jìn)一步發(fā)展引起一系列臨床癥狀和體征,就稱之為茵群失調(diào)癥。其發(fā)生機(jī)制包括:(1)長(zhǎng)期使用抗生素:特別是長(zhǎng)期使用廣譜抗生素,在抑制致病菌的同時(shí)也抑制了正常菌群中的敏感菌,使耐藥菌過度增殖,出現(xiàn)菌群失調(diào),進(jìn)而引起菌群失調(diào)癥。(2)機(jī)體免疫力低下或內(nèi)分泌失調(diào):惡性腫瘤、長(zhǎng)期糖尿病等使全身或局部免疫功能低下,導(dǎo)致正常菌群中某些菌過度生長(zhǎng),形成菌群失調(diào)。嚴(yán)重的會(huì)出現(xiàn)一系列臨床癥狀和體征,導(dǎo)致菌群失調(diào)癥。3、簡(jiǎn)述與細(xì)菌致病性有關(guān)的因素。(1)細(xì)菌的致病性:與其毒力、侵入機(jī)體的途徑及數(shù)量密切相關(guān)。(2)細(xì)菌的毒力;取決于它們對(duì)機(jī)體的侵襲力和產(chǎn)生的毒素。(3)細(xì)菌的侵襲力:是指病原菌突破機(jī)體防御功能,在體內(nèi)定居、繁殖和擴(kuò)散的能力。侵襲力與其表面結(jié)構(gòu)和產(chǎn)生的侵襲性酶有關(guān)。(4)細(xì)菌毒素:分為外毒素和內(nèi)毒素兩類。外毒素:是某些革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌在生長(zhǎng)繁殖過程中產(chǎn)生并分泌到菌體外的毒性物質(zhì)。它們對(duì)組織細(xì)胞有高度的選擇性,毒性作用強(qiáng),可引起各種特殊病變和臨床癥狀。內(nèi)毒素:是革蘭陰性菌細(xì)胞壁中的脂多糖成分,只有當(dāng)細(xì)菌死亡裂解或用人工方法裂解菌體后才能釋放出來(lái)。6、人體屏障結(jié)構(gòu)的組成和功能。皮膚與粘膜屏障:其作用主要有:①機(jī)械性阻擋與排除作用:健康完整的皮膚與粘膜能有效地阻擋細(xì)菌的侵入;②分泌殺菌物質(zhì):例如皮膚的汗腺分泌乳酸,使汗液呈酸性,不利于細(xì)菌的生長(zhǎng);③正常菌群的拮抗作用:寄居在皮膚、粘膜上的正常菌群,可通過生存競(jìng)爭(zhēng)和代謝過程中產(chǎn)生的某些抗菌物質(zhì),對(duì)某些病原菌有拮抗和抑制作用。血腦屏障:能阻擋病原微生物及其毒性產(chǎn)物從血流進(jìn)人腦組織或腦脊液,從而保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)。嬰幼兒因血腦屏障尚未發(fā)育完善,故較易發(fā)生腦膜炎等中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。胎盤屏障:由母體子宮內(nèi)膜的基蛻膜和胎兒絨毛膜構(gòu)成。能阻止母體血流中的病原微生物進(jìn)入胎兒體內(nèi),保護(hù)胎兒免受感染。8、抗體和補(bǔ)體的調(diào)理作用:抗體和補(bǔ)體單獨(dú)都能對(duì)某些病原菌起調(diào)理作用,若二者聯(lián)合,作用更強(qiáng)。(1)IgGFc介導(dǎo)的調(diào)理作用;中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面具有IgGFc受體。當(dāng)IgG通過其抗原結(jié)合部位(Fab段)與細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合,其Fc段與吞噬細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合后,可在細(xì)菌與吞噬細(xì)胞之間形成“抗體橋”,促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬。(2)補(bǔ)體(C3b)介導(dǎo)的調(diào)理作用:IgC或IgM類抗體與細(xì)菌結(jié)合形成的抗原抗體復(fù)合物可激活補(bǔ)體,其活化產(chǎn)物C3b可通過其N端非穩(wěn)定結(jié)合部位與菌體結(jié)合,其C端穩(wěn)定結(jié)合部位與具有C3b受體的吞噬細(xì)胞結(jié)合,從而使細(xì)菌與吞噬細(xì)胞相連,起到促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬和細(xì)胞內(nèi)的殺菌作用。10、非特異性免疫和特異性免疫的組成和特點(diǎn)(1)非特異性免疫:又叫先天性免疫,由屏障結(jié)構(gòu)、吞噬細(xì)胞和體液中的殺菌物質(zhì)組成。其特點(diǎn):一是與生俱有,可遺傳下一代;二是作用無(wú)特異性,可殺滅任何病原微生物。(2)特異性免疫:又稱后天免疫,是后天獲得,具有明顯的特異性。由B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫和T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫組成;對(duì)胞外菌的感染主要靠體液免疫保護(hù);胞內(nèi)菌主要靠細(xì)胞免疫清除;外毒素主要靠IgG和SIgA中和。1l、預(yù)防和治療菌群失調(diào)癥:當(dāng)正常菌群的組成和數(shù)量發(fā)生明顯改變時(shí)會(huì)出現(xiàn)菌群失調(diào)。當(dāng)這種失調(diào)狀態(tài)進(jìn)一步發(fā)展,出現(xiàn)一系列臨床癥狀和體征,稱菌群失調(diào)癥(菌群交替癥)。對(duì)菌群失調(diào)癥的處理是:①停用原抗菌藥物;②分離培養(yǎng)條件致病菌并做藥敏試驗(yàn),選用合適的抗生素;③使用微生物制劑,恢復(fù)正常的生態(tài)平衡。1、簡(jiǎn)述真菌的形態(tài)特征:真菌按形態(tài)可分單細(xì)胞真菌和多細(xì)胞真菌兩類。單細(xì)胞真菌呈圓形或卵圓形,如酵母菌。多細(xì)胞真菌大多長(zhǎng)出菌絲和孢子,交織成團(tuán),稱絲狀菌,又稱霉菌。有些真菌可因環(huán)境條件(如營(yíng)養(yǎng)、溫度、氧氣等)的改變,出現(xiàn)兩種不同形態(tài),稱為二相性真菌,如能侵犯皮下組織和內(nèi)臟的球孢子菌、組織胞漿菌等。二相性真菌在病理組織中或在含有動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)時(shí)呈酵母型,在普通培養(yǎng)基上,252、簡(jiǎn)述真菌的培養(yǎng)特性:真菌的營(yíng)養(yǎng)要求不高,常用的是沙保瓊脂培養(yǎng)基,主要含蛋白胨、葡萄糖和瓊脂,酸堿度是pH4.0~6.0。淺部感染真菌培養(yǎng)的最適溫度為22~28℃,其生長(zhǎng)緩慢,約1~4周才出現(xiàn)典型菌落。深部感染真菌則在371.病毒遺傳物質(zhì)的特點(diǎn):(1)只有一種核酸,但是存在形式多種多樣:病毒的DNA或RNA可以是雙鏈或單鏈,單鏈可以分為正鏈和負(fù)鏈,可以分節(jié)段或不分節(jié)段,可以呈環(huán)狀或線狀。(2)基因數(shù)目少,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。(3)復(fù)制方式多種多樣,如半保留復(fù)制、經(jīng)過復(fù)制中間型、逆轉(zhuǎn)錄復(fù)制等等。(4)較大的變異性,尤其是RNA病毒的變異性更大。2.病毒攜帶遺傳信息方式的特點(diǎn):(1)病毒只有一種核酸DNA或RNA,DNA病毒在DNA上攜帶遺傳信息,RNA病毒也可用RNA攜帶遺傳信息。其他微生物含有兩種核酸,但是僅由DNA攜帶遺傳信息。(2)翻譯蛋白質(zhì)時(shí),其他微生物僅有DNA→RNA(正向)一種傳遞遺傳信息的方向,而RNA病毒特別是逆轉(zhuǎn)錄病毒可RNA→DNA逆向傳遞遺傳信息。3.病毒衣殼的基本概念、結(jié)構(gòu)和生物學(xué)意義:(1)衣殼是包繞在病毒核酸外面的蛋白質(zhì)外殼,是病毒的基本結(jié)構(gòu)之一。(2)由一條或數(shù)條多肽按一定的方式對(duì)稱排列構(gòu)成殼粒,一定數(shù)量的殼粒按螺旋對(duì)稱、立體對(duì)稱、復(fù)合對(duì)稱方式排列包繞在核心之外,即形成衣殼。(3)衣殼的生物學(xué)意義是:①保護(hù)病毒核酸。②裸露病毒體的衣殼可吸附易感細(xì)胞,構(gòu)成感染的第一步;某些病毒的衣殼蛋白對(duì)細(xì)胞有毒性。③刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。④可用于病毒的鑒別。4.常見的病毒變異現(xiàn)象及醫(yī)學(xué)意義有:(1)毒力變異人工誘導(dǎo)毒力減弱變異可用于制備減毒活疫苗,如牛痘疫苗。(2)抗原性變異如流感病毒、人類免疫缺陷病毒常易發(fā)生抗原性變異,在體內(nèi)逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別和攻擊,使感染慢性化;同時(shí)也給疫苗研制、疾病的診斷和治療帶來(lái)困難。(3)表型混合:兩種病毒感染同一個(gè)細(xì)胞時(shí),發(fā)生裝配錯(cuò)誤。一種病毒的核心可能裝配在另一種病毒的衣殼里面,一種病毒的包膜表面插著另一種病毒的刺突。這種變異是不穩(wěn)定的,因?yàn)槠浠蜻€沒有改變;但是其抗原性改變影響臨床診斷和治療。(4)對(duì)宿主范圍適應(yīng)及理化因素抵抗力的變異:如溫度敏感突變株、宿主適應(yīng)突變株;常伴有毒力減弱,可用于疫苗制備。在溫度和時(shí)間相同的條件下,濕熱滅菌法的效果比干熱法好,原因是:(1)在濕熱條件下,細(xì)菌吸收水份,菌體蛋白質(zhì)易于凝固變性。(2)濕熱蒸氣的穿透力比干熱空氣強(qiáng),能較快提高滅菌物體的內(nèi)部溫度。(3)熱蒸氣與物品接觸,由汽態(tài)變液態(tài)時(shí)可放出大量潛熱,能迅速提高滅菌物體的溫度紫外線波長(zhǎng)在240~300nm時(shí)具有殺菌作用,以265~266nm波長(zhǎng)殺菌力最強(qiáng)。紫外線的殺菌機(jī)制主要是損傷細(xì)菌的DNA構(gòu)型,干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄,從而導(dǎo)致細(xì)菌死亡或變異。在使用紫外線滅菌時(shí),應(yīng)注意:紫外線的穿透力較弱,不能透過玻璃和紙張等,因此紫外線殺菌法僅適用于空氣和物體表面的消毒;紫外線對(duì)人體的皮膚和眼角膜有一定的損傷作用,所以使用紫外線燈照射時(shí)應(yīng)注意防護(hù)?;瘜W(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制主要包括:(1)使菌體蛋白質(zhì)變性或凝固化學(xué)消毒劑通過與菌體蛋白結(jié)合或使蛋白質(zhì)脫水,導(dǎo)致細(xì)菌蛋白質(zhì)變性或凝固而死亡。(2)干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)通過改變或破壞胞內(nèi)酶活性基團(tuán)的功能,使酶活性喪失,導(dǎo)致細(xì)菌代謝發(fā)生障礙而死亡。(3)損傷細(xì)菌胞膜通過改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),干擾其正常功能,使細(xì)菌死亡。有的化學(xué)消毒劑可改變細(xì)胞膜的通透性,使細(xì)菌內(nèi)容物外流,菌外的液體進(jìn)人細(xì)菌,導(dǎo)致細(xì)菌破裂。影響消毒劑作用的因素:消毒劑的性質(zhì)①作用時(shí)間,在一定消毒劑濃度下,作用時(shí)間愈長(zhǎng),效果愈好。②消毒劑的濃度,一般而言消毒劑的濃度與消毒效果成正比,但乙醇例外。濃度為70~75%的乙醇?xì)⒕ψ顝?qiáng),高濃度時(shí)效果反而較差。原因是高濃度乙醇使蛋白質(zhì)迅速脫水而凝固,影響乙醇繼續(xù)向菌體內(nèi)滲入,故殺菌效果較差。2.溫度和酸堿度殺菌過程是一種生化反應(yīng),其速度隨溫度升高而加快,故溫度高時(shí)效果較好。當(dāng)PH值偏低或偏高時(shí),細(xì)菌就容易被消毒劑迅速殺死。3.細(xì)菌種類與數(shù)量同一種消毒劑對(duì)于不同種類的細(xì)菌或同種類處于不同時(shí)期的細(xì)菌,其殺菌效果不盡相同。芽胞比繁殖體抵抗力強(qiáng),老齡菌比幼齡菌抵抗力強(qiáng),細(xì)菌數(shù)量越多抵抗力越強(qiáng)。4.環(huán)境中有機(jī)物與拮抗物的影響細(xì)菌與某些有機(jī)物混在一起,影響消毒劑對(duì)細(xì)菌的殺傷作用。簡(jiǎn)述L型細(xì)菌的形成、特點(diǎn)及臨床意義。在某些因素如溶菌酶、青霉素等的影響下,某些細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖合成受抑制,可使細(xì)胞壁部分或完全缺失,形成細(xì)胞壁缺陷型細(xì)菌,也稱為L(zhǎng)型細(xì)菌。L型細(xì)菌形態(tài)不規(guī)則,大小不一,多呈球形,有時(shí)可呈巨球狀或長(zhǎng)絲狀;革蘭染色均呈陰性;需用高滲培養(yǎng)基培養(yǎng)。臨床上由于抗菌藥物使用不當(dāng),可使患者體內(nèi)細(xì)菌發(fā)生L型變異。某些L型細(xì)菌有致病性,可引起腎盂腎炎、骨髓炎、心內(nèi)膜炎等疾病。簡(jiǎn)述常見的細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)變異現(xiàn)象及其意義。常見的細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)變異有:(1)細(xì)胞壁缺陷型(L型)變異:臨床上由于抗菌藥物使用不當(dāng),使患者體內(nèi)細(xì)菌發(fā)生L型變異。某些L型細(xì)菌有致病性,可引起腎盂腎炎、骨髓炎、心內(nèi)膜炎等疾病。(2)莢膜變異:例如從患者標(biāo)本中分離的肺炎球菌有較厚的莢膜,致病性強(qiáng),但在無(wú)血清的培養(yǎng)基中傳代數(shù)次后,可失去莢膜,致病性亦隨之減弱。(3)鞭毛變異:例如將有鞭毛的變形桿菌接種在普通固體培養(yǎng)基表面,由于鞭毛的動(dòng)力作用,細(xì)菌呈播散生長(zhǎng);若將此變形桿菌接種于含1%石炭酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng),則鞭毛生長(zhǎng)受抑制,生長(zhǎng)僅限于接種部位。(4)芽胞變異:例如將能形成芽胞,毒力強(qiáng)的炭疽桿菌置42℃簡(jiǎn)述質(zhì)粒的概念及主要特性。質(zhì)粒:是細(xì)菌染色體外的遺傳物質(zhì),為雙股閉合環(huán)狀DNA,分子量為核質(zhì)的0.5~1%,主要特性如下:(1)質(zhì)??梢再x予細(xì)菌某些遺傳性狀:例如:①F質(zhì)粒編碼細(xì)菌性菌毛。②R質(zhì)粒帶有一種或多種耐藥基因,可使細(xì)菌獲得對(duì)抗茵藥物的耐藥性。③Vi質(zhì)粒編碼細(xì)菌毒力。④Col質(zhì)粒使大腸桿菌產(chǎn)生大腸菌素。(2)質(zhì)粒可以自主復(fù)制,可以不依賴染色體而獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制。有的質(zhì)粒既能獨(dú)立復(fù)制,又能整合到宿主細(xì)菌的染色體上,與其共同復(fù)制,隨細(xì)菌分裂傳人子代菌。(3)質(zhì)粒不是細(xì)菌必備的結(jié)構(gòu),可以自行丟失或經(jīng)人工處理消除。失去質(zhì)粒的細(xì)菌,其生命活動(dòng)不受影響。(4)質(zhì)??赏ㄟ^接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移。(5)一個(gè)細(xì)菌可帶有一種或幾種質(zhì)粒。簡(jiǎn)述細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移與重組的四種方式。細(xì)菌從外源取得DNA,并與自身染色體DNA進(jìn)行重組,引起細(xì)菌原有基因組的改變,導(dǎo)致細(xì)菌遺傳性狀的改變,稱基因的轉(zhuǎn)移與重組?;蜣D(zhuǎn)移與重組的四種方式是:轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合、溶原性轉(zhuǎn)換。其具體內(nèi)容見學(xué)習(xí)指導(dǎo):四、細(xì)菌變異機(jī)制。R質(zhì)粒決定耐藥的機(jī)制:(1)使細(xì)菌產(chǎn)生滅活抗生素的酶類,水解抗生素,使其失去作用。(2)控制細(xì)菌改變接受藥物作用的靶位,使其不能與細(xì)菌結(jié)合。(3)控制細(xì)菌細(xì)胞對(duì)藥物的通透性,使抗生素不能進(jìn)入菌體內(nèi)發(fā)揮作用?;蚬こ痰牟襟E是:(1)從供體細(xì)胞DNA上切取一段需要表達(dá)的基因,即目的基因。(2)將目的基因結(jié)合在合適的載體(質(zhì)?;蚴删w)上。(3)通過載體將目的基因轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi),隨著細(xì)菌的大量繁殖,可表達(dá)出大量
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