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DB32TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detePart12:Invitrodeterminationofantiviraleffectofd江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I——第1部分:生物樣本采集、運輸和保存;——第3部分:核酸熒光PCR檢測程序;——第6部分:血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢測程序;——第10部分:微量血清中和試驗;——第11部分:全基因組高通量測序;——第12部分:藥物體外抗病毒效果測定。1DB32/T3762.3新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范第3部分:核酸熒光PCR檢測程序新型冠狀病毒實驗室生物安全指南中華人民共和國國家衛(wèi)生健醫(yī)療機構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊中華人半最大效應濃度half-maximaleff24環(huán)境與設(shè)施4.1實驗室資質(zhì)及級別要求應符合《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南》的要求,病毒培養(yǎng)包括病毒的分離、培養(yǎng)、滴定等取得開展相應活動的資質(zhì)。病毒核酸熒光PCR檢測程序可參照DB32/T37624.2操作人員資質(zhì)及防護要求上崗證。操作人員在健康狀態(tài)良好的情況下經(jīng)實驗室主任批準后方可開展活動,應根據(jù)《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南》要求,按照BSL-3個人防護的5.2耗材手套、防水靴套、帶濾芯Tip頭、一次性平皿、EP管6.1.1Hanks溶液(每毫升6.1.4消化液(0.25%胰酶和36.2.2待檢藥物和陽性對照藥物(少試驗、病毒抗原測定、病毒核酸測定等方法來判斷,本文件通過病毒核酸測定來評價藥物體8.1.2待檢藥物稀釋:將待檢藥物用細胞培養(yǎng)液做倍比稀釋,使其稀釋度分別為原液(選定濃度)、8.1.3分別取200μl不同稀釋倍數(shù)的待檢藥物及相同條件稀釋的藥物溶劑(如DMSO)滴加于細胞培8.2.2待檢藥物稀釋:將待檢藥物選用最大無毒濃度,用DMEM48.2.6在待檢藥物組、陽性對照藥物組和病毒對照組的細胞孔中加入新型冠狀病毒(2μl/孔,0.02),8.2.8病毒滅活與核酸提?。号囵B(yǎng)結(jié)束后,在倒置顯微鏡下核酸提取試劑的裂解液中,混勻后按照核酸提取試劑盒和核酸提取儀操作說明進行核酸8.2.9核酸檢測:參照DB32/T37計算公式為(1-2-△CT)×100其中△CT=待檢藥物組CT值-病毒對照組CT值)。以病毒被抑制的9清場與消毒9.1操作結(jié)束后,及時清理生物安全柜要
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