T-BPMA 25-2024 人體糞便樣本中溶藻弧菌檢測

BPMADetectionofVibrioalginolyticusinhuI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1人體糞便樣本中溶藻弧菌檢測僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試4設(shè)備和材料4.3全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。4.6低溫高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥12000r/min。25.4弧菌顯色培養(yǎng)基。從樣本盒中挑取黃豆粒大小糞便樣本(水樣便大約取300μL～500μL),加入到10mL的3%氯化鈉堿性蛋白胨水中，充分混勻，36℃±1℃增菌培養(yǎng)8h～1藻弧菌菌落在TCBS瓊脂上呈圓形、表面光滑、大而扁平的黃色菌落，直徑2mm～33菌落，接種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂，先穿刺接種柱狀部分，再劃線接種觀察結(jié)果。溶藻弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為柱狀部分黃色，斜面部分粉色，不產(chǎn)氣，不產(chǎn)h～24h后，取純培養(yǎng)物分別接種含3%氯化鈉的甘露醇試驗(yàn)培養(yǎng)基、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基、V-P培培養(yǎng)18h～24h后進(jìn)行ONPG試驗(yàn)?？蛇x擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系注：如選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng),從3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上挑取菌落,用生理氧化酶賴氨酸精氨酸鳥氨酸明膠脲酶蔗糖乳糖阿拉伯糖0368V.alginolyticus++-++-+++---++--++++++-++V-+-V-+++--+++-++-++--+-++-+V+-++--++-++-V++---+++++---++-++--+----+++++---+-+-+--V++-++++-++V-+-+-+---+--++++-+++-4氧化酶賴氨酸精氨酸鳥氨酸明膠脲酶蔗糖乳糖阿拉伯糖0368-++-+-+V+---+++-++V-+---------++---++--注表示陽性表示陰性；nd表示未試驗(yàn)；V表示可變。模板)用于實(shí)時(shí)熒光PCR檢測。若不能及時(shí)檢測，將上HEX－CACAAATTGCTCGTTCCACTGCCCACC－菌株核酸或含有目的DNA片段的質(zhì)粒DNA；陰性對照模板為不含溶藻弧菌的DNA，空白對照模板為無菌超純水。若選用商品化溶藻弧菌熒光PCR檢測試劑盒，則依據(jù)試劑5型的S型，則判定該菌落檢測結(jié)果為溶藻弧菌陽性；35＜Ct值≤40，需重復(fù)試驗(yàn)，如重復(fù)試驗(yàn)后Ct判斷為陰性。若選用商品化溶藻弧菌熒光PCR檢測試劑6.5.3基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmass選擇線性操作模式，正離子模式，質(zhì)譜掃描范圍：2000Da-20000Da；激光點(diǎn)擊數(shù)：每圖譜40次(6次激光累積)；激光頻率：60.0Hz；始質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集。數(shù)據(jù)采集完成后，將經(jīng)過處理的質(zhì)譜數(shù)據(jù)自動/手動導(dǎo)入本地微生物指紋圖譜庫并鑒MALDI-TOFMS鑒定結(jié)果給出指紋圖譜數(shù)據(jù)庫中與鑒定菌種最為匹配的10個菌株種屬，并給出相根據(jù)6.5.1或6.5.2或6.5.3的鑒定結(jié)果，報(bào)告樣本中檢出或未檢出溶藻弧菌。有一個可疑菌6A.1Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基A.1.1成分A.1.2制法A.2.1成分A.2.2制法A.3硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCA.3.1成分7A.3.2制法A.43%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂A.4.1A.4.2A.5革蘭氏染色液A.5.1結(jié)晶紫染色液8A.5.1.1成分95％乙醇20.0mLA.5.1.2制法A.5.2革蘭氏碘液A.5.2.1成分碘化鉀2.0gA.5.2.2制法A.5.3沙黃復(fù)染液A.5.3.1成分A.5.3.2制法A.5.4染色法9A.6氧化酶試劑A.6.1成分A.6.2制法A.6.3試驗(yàn)方法A.73%氯化鈉三糖鐵瓊脂A.7.1A.7.2制法A.8嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基A.8.1成分A.8.2制法A.93％氯化鈉甘露醇試驗(yàn)培養(yǎng)基A.9.2制法A.10.1成分A.10.2制法A.10.3試驗(yàn)方法A.113％氯化鈉V-P培養(yǎng)基A.11.1成分A.11.2制法A.13.1緩沖液A.13.1.1成分A.13.1.2制法A.13.2.1成分A.13.2.2制法A.13.3試驗(yàn)方法A.14.1.1成分A.14.1.2制法A.14.2