微生物實(shí)驗(yàn)二課件

實(shí)驗(yàn)二斜面接種，用平板劃線法分離菌種與微生物培養(yǎng)【課前預(yù)習(xí)】

微生物純種分離有哪些方法？微生物實(shí)驗(yàn)二【目的要求】1.懂得微生物接種技術(shù)的重要性與應(yīng)用面；2.正確掌握無菌操作法移接斜面菌種的步驟與方法；3.了解平板劃線法分離菌種的基本原理；4.熟練掌握平板劃線法的操作方法；5.掌握超凈工作臺的使用方法。微生物實(shí)驗(yàn)二【基本原理】

一、斜面接種與培養(yǎng)基本原理

操作為：用滅菌的接種環(huán)取單個菌落或少許細(xì)菌，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線，一直劃到斜面頂端。二、用平板劃線法分離菌種基本原理

步驟：用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線而達(dá)到純化分離微生物的一種方法。是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離的目的。用于目的微生物的分離。微生物實(shí)驗(yàn)二【實(shí)驗(yàn)用品】1.菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌斜面培養(yǎng)基。2.培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基。3.儀器：恒溫培養(yǎng)箱，無菌操作臺，高壓蒸汽滅菌器。4.其它用品：培養(yǎng)皿（每組4個），無菌水，滅菌棉簽，接種環(huán)(25個)，酒精燈（25盞），試管架，記號筆（25支）。微生物實(shí)驗(yàn)二【方法步驟】一、斜面接種操作步驟1.接種前的準(zhǔn)備工作<1>貼上標(biāo)簽<2>旋松棉塞<3>點(diǎn)燃酒精燈2.用接種環(huán)轉(zhuǎn)接菌種<1>手持試管<2>灼燒接種環(huán)微生物實(shí)驗(yàn)二圖1接種環(huán)的火焰滅菌步驟微生物實(shí)驗(yàn)二【方法步驟】二、平板劃線法操作步驟1.融化培養(yǎng)基：瓊脂培養(yǎng)基放入水浴中加熱至融化。2．倒平板3．劃線分區(qū)4．劃線操作微生物實(shí)驗(yàn)二【方法步驟】

<3>拔出棉塞<4>管口過火與停留<5>取培養(yǎng)物<6>接種<7>殺滅環(huán)上殘留菌3．培養(yǎng)與觀察4．培養(yǎng)物后處理<1>清洗<2>清理桌面微生物實(shí)驗(yàn)二【方法步驟】(1)挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環(huán)，按無菌操作法挑取少量菌種。(2)劃A區(qū)A區(qū)B區(qū)C區(qū)D區(qū)微生物實(shí)驗(yàn)二【方法步驟】4.恒溫培養(yǎng)5.挑單菌落6.清洗培養(yǎng)皿微生物實(shí)驗(yàn)二【方法步驟】微生物實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果記錄斜面劃線接種后生長的培養(yǎng)物特征（菌名、菌苔特征），并圖示。菌苔特征描寫方法參考如下：形態(tài)：松針狀，樹枝狀干濕情況：干燥，濕潤，粘稠高度：扁平，隆起，凹下

微生物實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)結(jié)果

透明度：透明度，半透明，不透明顏色：黃色，金黃色，灰色，乳白色，紅色，粉紅色，黑色等邊緣：整齊，不整齊接種情況：稀疏、致密、水膜等微生物實(shí)驗(yàn)二【注意事項(xiàng)】1.接種前，務(wù)必核對菌種和菌株名，防止混淆或錯接菌種。2.接種環(huán)自菌種管移至待接斜面過程中，切莫接觸其他物品，以免斜面接種污染。3.接種環(huán)在接種前需用酒精燈進(jìn)行灼燒，灼燒后必須等接種環(huán)完全冷卻后，才能進(jìn)行接種，以防止所接菌種失活。4.劃線時，環(huán)口與平板間的夾角不宜太大，動作要輕巧，以防劃破平板。5.用于劃線的平板，在倒平板的時候不能倒得太薄，最好在使用前一天倒好。為防止平板表面產(chǎn)生冷凝水，倒平板時，培養(yǎng)基溫度不要太高。微生物實(shí)驗(yàn)二【注意事項(xiàng)】

6.分段劃線時，在每次劃線后，都需將接種環(huán)進(jìn)行灼燒，待冷卻后再進(jìn)行下一次劃線。7.接種前，務(wù)必核對菌種和菌株名，防止混淆或錯接菌種。8.接種環(huán)自菌種管移至待接斜面過程中，切莫接觸其他物品，以免斜面接種污染。9.接種環(huán)在接種前需用酒精燈進(jìn)行灼燒，灼燒后必須等接種環(huán)完全冷卻后，才能進(jìn)行接種，以防止所接菌種失活。微生物實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)思考（1）接種時可否將棉塞放在桌上？菌種管和待接種新鮮斜面試管可否平放在桌面上？為什么？（2）為了防止斜面接種時避免雜菌污染，在操作中應(yīng)注意哪些問題？（3）用平板劃線法進(jìn)行純種分離的原理是