微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一課件

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一1.應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室安靜，切勿高聲喧嘩和隨意走動(dòng)。2.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食、吸煙、及用嘴濕潤(rùn)鉛筆和標(biāo)簽等物。3.使用顯微鏡和其它貴重儀器時(shí)，應(yīng)在教師同意后方可使用，切勿擅自拆卸，否則因此而損壞儀器，應(yīng)予以賠償。4.遇意外發(fā)生，應(yīng)立即報(bào)告教師，不可自己隨意處理。實(shí)驗(yàn)室須知微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)：每次實(shí)驗(yàn)前必須認(rèn)真預(yù)習(xí)，課堂上注意聆聽(tīng)教師對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的講解，注意觀察教師的示范操作。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)仔細(xì)認(rèn)真，嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，注意改變生活中的習(xí)慣動(dòng)作，以掌握微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的科學(xué)操作方法。使用貴重儀器應(yīng)先事先熟知操作規(guī)程，遇儀器故障時(shí)請(qǐng)教師幫助解決。實(shí)驗(yàn)中如遇菌液外溢、皮膚劃傷或菌液吸入等意外，應(yīng)立即報(bào)告老師及時(shí)進(jìn)行處理，不得隱瞞，以免釀成后患。5.注意安全，易燃物品如二甲苯、吸水紙等應(yīng)遠(yuǎn)離火源。打火機(jī)只能用于點(diǎn)燃酒精燈，酒精燈用完應(yīng)及時(shí)蓋上燈帽。6.實(shí)驗(yàn)完畢，必須將儀器放到指定地點(diǎn)，帶菌工具應(yīng)先進(jìn)行消毒。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一7.實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行培養(yǎng)的材料，要標(biāo)明姓名、組別、日期后，放于教師指定的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。8.未經(jīng)教師同意，實(shí)驗(yàn)室中的任何菌種和物品不得攜帶出室外。9.實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)認(rèn)真進(jìn)行觀察和操作，做好實(shí)驗(yàn)記錄；有疑難問(wèn)題向教師求教。10.勵(lì)行節(jié)約，對(duì)水、電、染色液、鏡油、擦鏡紙、吸水紙及其它藥品等均應(yīng)節(jié)約使用。11.實(shí)驗(yàn)后應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室整理清掃，洗手后方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室，關(guān)窗鎖門。實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的器皿1．試管2．吸管3．培養(yǎng)皿4．三角燒瓶5．載玻片與凹玻片普通載玻片用于微生物涂片、染色，作形態(tài)觀察等凹玻片是在一塊厚玻片的當(dāng)中有一圓形凹窩，作懸滴觀察活細(xì)菌以及微室培養(yǎng)用。6.滴瓶：用來(lái)裝各種染料、生理鹽水等7.接種工具：接種環(huán)、接種針等微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一常用器材酒精燈1/人接種環(huán)1/人試管夾1/人吸耳球1/2人計(jì)數(shù)器1/2人鑷子1/2人香柏油1/2人擦鏡紙1/2人微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式基本信息的填寫（不能留空）。題目目的原理材料和器皿方法和步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果畫圖文字描述分析和討論思考題實(shí)驗(yàn)報(bào)告必須以實(shí)事求是、嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度，按照指導(dǎo)書的要求按時(shí)完成。實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該簡(jiǎn)明扼要、敘述準(zhǔn)確、數(shù)據(jù)完整、繪圖清晰且寫實(shí)，應(yīng)有討論、有分析，結(jié)論明確。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一清潔與衛(wèi)生保持實(shí)驗(yàn)臺(tái)的清潔與試劑架的整齊潔凈。廢紙、培養(yǎng)基等廢棄物一律丟入垃圾桶內(nèi)，嚴(yán)禁放入水槽！培養(yǎng)皿、玻片、試管等玻璃儀器清洗后一律擱置涼在不朽鋼網(wǎng)框里。玻片上的染液必須徹底清洗干凈（用洗衣粉洗）。培養(yǎng)皿、試管等玻璃儀器上做的標(biāo)記必須徹底洗凈。最終垃圾由值日生倒入衛(wèi)生間籮框里，濕拖把掛在水槽水龍頭架上滴水涼干。每次值日生4人。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一顯微鏡油鏡的使用及細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法實(shí)驗(yàn)二

細(xì)菌的革蘭氏染色及芽孢染色法實(shí)驗(yàn)三鞭毛染色法及活細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察實(shí)驗(yàn)四四大類微生物菌落及個(gè)體形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)五微生物大小測(cè)定及血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)六培養(yǎng)基配制及滅菌實(shí)驗(yàn)七微生物的分離純化與平板菌落計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)八微生物的生理生化反應(yīng)（一）實(shí)驗(yàn)九微生物的生理生化反應(yīng)（二）

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一顯微鏡油鏡的使用及細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法實(shí)驗(yàn)一教學(xué)目標(biāo)或要求：鞏固和掌握顯微鏡油鏡的正確使用；學(xué)習(xí)細(xì)菌制片和簡(jiǎn)單染色技術(shù)；觀察細(xì)菌的三種基本形態(tài)；初步建立無(wú)菌操作的概念；微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的構(gòu)造

1.光學(xué)部分:接目鏡、接物鏡、照明裝置(聚光鏡、反光鏡等).它使檢視物放大,造成物象.

2.機(jī)械部分:鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、載物臺(tái)轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細(xì)調(diào)節(jié)器等部件.它起著支持、調(diào)節(jié)、固定等作用.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一油鏡使用的原理

油鏡，即油浸物鏡。當(dāng)光線由反光鏡通過(guò)玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的放大倍數(shù)、分辨率和數(shù)值孔徑

1.放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)

2.分辨率：是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點(diǎn)之間距離的能力，可用公式表示為：δ=0.61×λ/N.A

式中：

δ：物鏡分辨出物體兩點(diǎn)間的最短距離。：可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（平均0.55m)N.A:數(shù)值孔徑

3.數(shù)值孔徑(N.A)=n×sinα/2其意為玻片和物鏡之間的折射率（n）乘以光線投射到物鏡上的最大夾角（a）的一半的正弦。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一（一）顯微鏡使用步驟1.放置好顯微鏡2.調(diào)節(jié)光源3.低倍鏡觀察4.高倍鏡觀察5.油鏡觀察6.清潔和還原顯微鏡微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一1.放置好顯微鏡

置顯微鏡于平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊沿約為3-4cm。鏡檢者姿勢(shì)要端正。（取、放顯微鏡時(shí)應(yīng)一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時(shí)睜開(kāi)觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或紀(jì)錄。2.調(diào)節(jié)好光源接通電源，打開(kāi)光源。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一瞳距調(diào)節(jié)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一粗調(diào)松緊調(diào)節(jié)旋鈕微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一聚光鏡中心調(diào)節(jié)②10X物鏡①標(biāo)本④聚光鏡升降旋鈕微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一3.低倍鏡的觀察。將標(biāo)本片放在載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，調(diào)節(jié)標(biāo)本移動(dòng)螺旋，使觀察的目的物處于物鏡的正下方。調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使物鏡（10×）與標(biāo)本靠近，眼睛在測(cè)向注視物鏡，防止物鏡和載玻片相碰。張開(kāi)雙眼向目鏡里觀察，如果見(jiàn)到目的物，但不十分清楚，可用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)，至目的物清晰為止。通過(guò)玻片夾推進(jìn)器慢慢移動(dòng)玻片，認(rèn)真觀察標(biāo)本各部分，找到合適的目的物，仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一4.高倍鏡的觀察使用高倍鏡前，必須先用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后將它移至視野正中處。旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器換高倍鏡。如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動(dòng)，這說(shuō)明原來(lái)低倍鏡并沒(méi)有調(diào)準(zhǔn)，目的物并沒(méi)有真正找到，必須用低倍鏡重新調(diào)節(jié)。如果高倍鏡下觀察目的物有點(diǎn)模糊，調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，直到視野清晰。調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時(shí)要注意旋轉(zhuǎn)方向與載物臺(tái)上升或下降的關(guān)系，防止鏡頭與載玻片強(qiáng)力接觸，損壞鏡頭或載玻片。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一5.油鏡的觀察

降低載物臺(tái)約1.5-2.0cm，將油鏡轉(zhuǎn)到光路上來(lái)。在載玻片目標(biāo)物上滴加一滴香柏油。從側(cè)面注視，上升載物臺(tái)，使油鏡前端浸入香柏油。防止發(fā)生油鏡壓破玻片或進(jìn)一步發(fā)生玻片頂壞油鏡前的透鏡的危險(xiǎn)。然后一邊觀察一邊用細(xì)調(diào)節(jié)器緩緩下降載物臺(tái)，直至視野中出現(xiàn)清晰的物像。如果油鏡已經(jīng)離開(kāi)油面，則必須重新從側(cè)面注視，再將油鏡頭浸入油中，重復(fù)上面操作。（應(yīng)特別注意不要在升降載物臺(tái)時(shí)用力過(guò)猛，或者調(diào)焦時(shí)誤將粗調(diào)節(jié)螺旋向反方向轉(zhuǎn)動(dòng)而損壞鏡頭及載玻片）微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一6.清潔顯微鏡和還原顯微鏡.

觀察結(jié)束后，調(diào)節(jié)光源到最小再關(guān)掉電源開(kāi)關(guān)。調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使載物臺(tái)下降到最低，取下玻片。.觀察完畢，把油鏡轉(zhuǎn)離光軸，應(yīng)及時(shí)把鏡頭上的香柏油擦去。擦拭時(shí)先用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上的油滴，然后再用二甲苯潤(rùn)濕一新的擦鏡紙，一直線方向擦拭鏡頭1-2次，最后再用干凈的擦鏡紙擦1-2次去除二甲苯殘漬。.用擦油鏡頭的方法擦觀察過(guò)的標(biāo)本片。

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡注意事項(xiàng)1使用油鏡必須按先用低倍鏡和高倍鏡觀察，再用油鏡觀察2下降鏡頭時(shí)，一定要從側(cè)面注視，切忌用眼睛對(duì)著目鏡，邊觀察邊下降鏡頭的錯(cuò)誤操作，以免壓碎玻片而損壞鏡頭。3使用二甲苯擦鏡頭時(shí)，注意二甲苯不能過(guò)多，以防溶解固定透鏡的樹(shù)脂。4注意保持顯微鏡的潔凈，對(duì)金屬部分要用軟布擦拭，擦鏡頭必須用擦鏡紙，切勿用手或用普通布、紙等，以免損壞鏡頭。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一六、顯微結(jié)構(gòu)圖的繪制

（1）繪圖要用黑色硬鉛筆，不要用軟鉛筆或有色鉛筆，一般用2H鉛筆為宜。（2）畫圖時(shí)先用輕淡小點(diǎn)或輕線條畫出輪廓，再依照輪廓一筆畫出與物象相符的線條。線條要清晰，比例要準(zhǔn)確。(3)圖的明暗及濃淡，應(yīng)用細(xì)點(diǎn)表示，不要采用涂抹方法。點(diǎn)細(xì)點(diǎn)時(shí)，要點(diǎn)成圓點(diǎn)，不要點(diǎn)成小撇。(4)整個(gè)圖要美觀、整潔，還要特別注意準(zhǔn)確性微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一（二）細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色1.定義

是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)，不能辨別細(xì)菌細(xì)胞的構(gòu)造，通常采用堿性染料（如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等）使其著色。1、原理微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一菌種：培養(yǎng)18-24h的枯草芽孢桿菌染色液和試劑：美藍(lán)、香柏油、生理鹽水標(biāo)本片：細(xì)菌三型涂片器材：載玻片、接種環(huán)、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。2、實(shí)驗(yàn)器材微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)程序——細(xì)菌簡(jiǎn)單染色生理鹽水涂片接種環(huán)自然干燥固定

美藍(lán)染色1min水洗干燥擦拭水洗時(shí)不要直接沖菌膜微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一染色注意事項(xiàng)1.涂片過(guò)程中，取生理鹽水和細(xì)菌不宜過(guò)多，涂菌要均勻，不宜過(guò)厚。2.固定時(shí)溫度不可過(guò)高，以載玻片背面不燙手背為宜，因?yàn)闇囟冗^(guò)高會(huì)破壞細(xì)胞的形態(tài)。3.水洗時(shí)，不應(yīng)直接沖洗細(xì)菌涂面，水流不應(yīng)過(guò)大、過(guò)急，以免細(xì)菌涂面被沖掉。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一