《大蒜及其制品中蒜氨酸含量測(cè)定》

ICS

CCS

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/GDNBXXXX—2023

大蒜及其制品中蒜氨酸含量測(cè)定

Determinationofallinicacidingarlicanditsproducts

（征求意見稿）

在提交反饋意見時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

廣東省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)?發(fā)布

T/GDNBXXXX—2023

大蒜及其制品中蒜氨酸含量測(cè)定

1范圍

本文件規(guī)定了大蒜及以蒜氨酸為主要活性成分產(chǎn)品中蒜氨酸含量的測(cè)定方法。

本文件適用于以蒜氨酸為主要活性成分的片劑、粉劑及飲料中蒜氨酸含量的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法術(shù)語和定義

3術(shù)語與定義

3.1

蒜氨酸alliin

蒜氨酸為大蒜中特有的含硫氨基酸，分子式：C6H11NO3S;分子量：177.2214；CAS號(hào)：556-27-4；

密度：1.205；熔點(diǎn)：164℃～166℃。該物質(zhì)是大蒜素的主要前體物質(zhì)，穩(wěn)定性好，具有多種活性功

能，是大蒜中主要的活性成分。

4原理

蒜氨酸在紫外光區(qū)214nm波長處有最大吸收，經(jīng)磷酸溶液提取、HPLC分離后，紫外檢測(cè)器測(cè)定，

外標(biāo)法定量。

5試劑或材料

除非另有規(guī)定，本文件所用試劑均為分析純。水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

試劑

5.1.1甲醇（CH3OH）:色譜純。

5.1.2磷酸（H3PO4）:優(yōu)級(jí)純。

溶液配置

磷酸溶液（0.01%，體積分?jǐn)?shù)）：準(zhǔn)確吸取0.10mL磷酸（5.1.2）與預(yù)先加入一定量水的1000mL

容量瓶，稀釋至刻度，經(jīng)0.22μm水相濾膜過濾。

標(biāo)準(zhǔn)品

蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（Alliin，C6H11NO3S，CAS號(hào)：556-27-4）：含量≥98%。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液配置

蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000mg/L）：稱取蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（5.2）10mg（精確到0.01mg）于10mL容

量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，4℃保存，有效期為1個(gè)月。

6儀器設(shè)備

1

T/GDNBXXXX—2023

分析天平：感量0.01g、0.001g和0.01mg。

離心機(jī)：最高轉(zhuǎn)速8000r/min。

組織搗碎機(jī)。

微波爐：功率900W。

超聲波清洗器。

高效液相色譜儀：配備紫外或二極管陣列檢測(cè)器。

7實(shí)驗(yàn)步驟

試樣處理

7.1.1大蒜樣品

取有代表性的大蒜樣品可食部分，混勻縮分至約50g（精確至0.01g），置于250mL燒杯中，微

波功率900W高火滅酶1min，冷卻至室溫，用水補(bǔ)充微波滅酶過程中損失的質(zhì)量，再按縮分后樣品質(zhì)

量（約50g）比1:1加水，用組織搗碎機(jī)粉碎制成蒜泥，作為試樣。試樣置于密閉容器內(nèi)，-20℃冷

凍保存。平行做3份試驗(yàn)。稱取試樣2g（精確至0.001g）于100mL三角瓶中，加入60mL磷酸溶液

（5.4），手動(dòng)振蕩1min后超聲提取15min，靜置至恢復(fù)室溫，用磷酸溶液（5.4）轉(zhuǎn)移至50mL容量

瓶中并定容，取10mL溶液于15mL離心管中，8000r/min離心15min，上清液過0.22μm水相濾

膜，待測(cè)。

7.1.2片劑

取10g～20g片劑粉碎、磨細(xì)（過80目篩）后混勻。準(zhǔn)確稱取試樣1g（精確至0.001g）于100

mL三角瓶中，加入30mL磷酸溶液（5.4），超聲提取15min使其充分溶解，放冷至室溫后，用磷酸溶

液（5.4）轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中定容。取10mL溶液于15mL離心管中，使用超高速離心機(jī)8000r/min

離心15min，再經(jīng)微孔濾膜（0.22μm）過濾，取濾液待測(cè)。

7.1.3粉劑

取10g～20g粉劑充分混勻。準(zhǔn)確稱取試樣1g（精確至0.001g）于100mL三角瓶中，加入30

mL磷酸溶液（5.4），超聲提取15min使其充分溶解，放冷至室溫后，用磷酸溶液（5.4）轉(zhuǎn)移至50mL

容量瓶中定容。取10mL溶液于15mL離心管中，使用超高速離心機(jī)8000r/min離心15min，再經(jīng)

微孔濾膜（0.22μm）過濾，取濾液待測(cè)。

7.1.4飲料

搖勻后準(zhǔn)確吸取混勻的試樣1mL于50mL容量瓶中用磷酸溶液（5.4）定容至刻度，搖勻。經(jīng)微孔

濾膜（0.22μm）過濾，取濾液待測(cè)。

色譜條件

7.2.1耐水相色譜柱：C18，250mm×4.6m，5μm，或相當(dāng)者；

7.2.2流動(dòng)相：磷酸溶液（5.4）—甲醇（95/5，υ/υ），使用前經(jīng)濾膜過濾，超聲。

7.2.3流速：0.8mL/min。

7.2.4進(jìn)樣量：10μL。

7.2.5柱溫：30℃。

7.2.6檢測(cè)波長：214nm。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確吸取一定量的蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.3），梯度稀釋成濃度約為100mg/L、200mg/L、400mg/L、

600mg/L、800mg/L、1000mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液供高效液相色譜儀測(cè)定。

樣品測(cè)定

2

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取待測(cè)液（7.1）或相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（7.3）接照7.2色譜參考條件測(cè)定，作單點(diǎn)校準(zhǔn)或多點(diǎn)校

準(zhǔn)，以保留時(shí)間定性，以色譜峰面積外標(biāo)法定量。待測(cè)液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中蒜氨酸的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢

測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見附錄A。

8數(shù)據(jù)處理

試樣中蒜氨酸的含量按如下公式進(jìn)行計(jì)算：

×10-3

?1×?1×?

ω——試樣中蒜氨酸的含量，單位為克每千克或克每升（g/kg或g/L）；

?=?1

c1——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算樣品測(cè)定液中蒜氨酸濃度，單位為（mg/L）；

v1——定容體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；

m1——樣品質(zhì)量，單位為克或毫升（g或mL）；

n——樣品儲(chǔ)備液稀釋倍數(shù)；

測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表述，計(jì)算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

9精密度

重復(fù)性

在重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于這2個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的10%。

再現(xiàn)性

在再現(xiàn)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于這2個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的15%。

3

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附錄A

（資料性）

蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖A.1。

mV(x1,000)

2.00

1.75

1.50

1.25

1.004

.

2

3

1

0.75

0.50

0.25

3

2

5

1345

00233

.

.

.

....

0.00.....

0

3

1

6273

26646

1

0

4

1457