人教版高中生物選擇性必修3《生物技術(shù)與工程》知識(shí)點(diǎn)考點(diǎn)復(fù)習(xí)提綱

人教版（2019）高中生物選擇性必修3生物技術(shù)與工程知識(shí)點(diǎn)考點(diǎn)復(fù)習(xí)提綱

第1章發(fā)酵工程

第1節(jié)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用

［知識(shí)必備］

1.腐乳一直受到人們的喜愛。這是因?yàn)榻?jīng)過微生物的發(fā)酵，豆腐中的蛋白質(zhì)被分解成小

分子的肽和氨基酸,味道鮮美，易于消化吸收，而腐乳本身又便于保存。多種微生物參與了豆

腐的發(fā)酵，如酵母、曲霉和毛霉等，其中起主要作用的是玉霉。（P5）

2.直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次發(fā)酵保存下來的面團(tuán)、鹵汁等發(fā)

酵物中的微生物進(jìn)化發(fā)酵、制作食品的技術(shù)一般稱為傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)。（P5）

3.傳統(tǒng)發(fā)酵以退食菌種的固體發(fā)酵及半固體發(fā)酵為主，通常是家庭式或作坊式的。（P5）

4.乳酸菌是厭氧細(xì)菌，在無氧的情況下能將葡萄糖分解成乳酸［反應(yīng)簡(jiǎn)式為C6Hl2。6—里

2c3H6。3（乳酸）+能量］,可用于乳制品的發(fā)酵、泡菜的腌制等。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和

乳酸桿菌。（P5）

5.酵母菌是兼性厭氧微生物,在無氧條件下能進(jìn)行酒精發(fā)酵［反應(yīng)簡(jiǎn)式為C6Hl2。6—醒-

2c2H50H（酒精）+2C（h+能量］,可用于釀酒、制作饅頭和面包等。溫度是影響酵母菌生長的

重要因素，釀酒酵母的最適生長溫度約為28°Co（P6）

6.用于制作泡菜的蔬菜應(yīng)新鮮，若放置時(shí)間過長，蔬菜中的亞硝酸鹽含量相對(duì)較高。用

清水和食鹽配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為烈必0%的鹽水。鹽的用量過高，乳酸發(fā)酵受抑制，泡菜風(fēng)味差；

用量過低，雜菌易繁殖，導(dǎo)致泡菜變質(zhì)。鹽水要煮沸后冷卻。煮沸的作用：一是除去鹽水中的

Qi，二是殺滅雜菌等微生物。（P6“探究.實(shí)踐”）

7.泡菜在腌制過程中會(huì)有亞硝酸鹽產(chǎn)生。膳食中的亞硝酸鹽一般不會(huì)危害人體健康，但

如果人體攝入過量，會(huì)發(fā)生中毒，甚至死亡。（P6“探究.實(shí)踐”）

8.醋酸菌是好氧細(xì)菌，當(dāng)02、糖源都充足時(shí)能通過復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)將糖分解成乙酸［反

應(yīng)簡(jiǎn)式為C6Hl2。6+2。2—醒-2cH3co0H（乙酸）+2H2O+2CO2+能量］;當(dāng)缺少糖源時(shí)則直接

將乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛變?yōu)橐宜幔鄯磻?yīng)簡(jiǎn)式為C2H5OH+O2—醵-CH3co0H（乙酸）+H20

+能量］。醋酸菌可用于制作各種風(fēng)味的醋。多數(shù)醋酸菌的最適生長溫度為30-35,0Co（P7）

9.果酒自然發(fā)酵時(shí)，利用葡萄皮上的野生酵母菌;工業(yè)生產(chǎn)時(shí)，人工接種純化的酵母菌，

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以提高發(fā)酵效率。(P7“探究.實(shí)踐”)

10.果酒變果醋發(fā)酵改變兩個(gè)條件：一、遞氧，因?yàn)榇姿峋呛醚跫?xì)菌；二、升高溫度,

因?yàn)楣频陌l(fā)酵溫度為18?30℃,而果醋的發(fā)酵溫度為30?35℃o(P7“探究.實(shí)踐”)

11.果酒與果醋發(fā)酵流程：挑選葡萄一沖洗(再去梗)一榨汁一酒精發(fā)酵器乙酸發(fā)酵。

(P7“探究.實(shí)踐”)

第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

［知識(shí)必備］

1.培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等。另外，培養(yǎng)基還要滿足微生物生

長對(duì)血、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如,培養(yǎng)乳酸枉菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素；

培養(yǎng)霉菌時(shí)，一般需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸隹；培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，一般需要將pH調(diào)至中性或弱堿

在；培養(yǎng)厭氧微生物時(shí),則需要提供無氧的條件。(P10)

2.培養(yǎng)基的種類及用途

(1)按物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)

或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定,半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運(yùn)

動(dòng)及菌種保藏等。

(2)按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。

3.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌沒染。(P10)

4.消毒

(1)消毒是指使用較為溫和的物理「化學(xué)更生物笠方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物

(不包括芽抱和抱子)。

(2)消毒方法常用到意跡道凄法、里氐道毒法(對(duì)于一些不耐高溫的液體)，還有化學(xué)藥物消

毒(如酒精、氯氣、石炭酸等)、紫外線消毒。(P10-11)

5.滅菌

(1)滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱子。

(2)滅菌方法有灼燒滅菌、壬熱滅菌、濕熱滅菌等。

①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法滅菌;

②玻璃器皿、金屬用具等使用土熱滅菌法滅菌，所用器械是王熱滅菌箱；

③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法滅菌,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。(P10-11)

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6.比較消毒和滅菌

比較理化因素的消滅微生芽抱和抱子

項(xiàng)目作用強(qiáng)度物的數(shù)量能否被消滅

部分生活狀

消毒較為溫和不能

態(tài)的微生物

滅菌強(qiáng)烈.全部微生物能

7.微生物的純培養(yǎng)包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟。(P11)

8.分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)

結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。采用于板劃線法和箍移途布乎板達(dá)能將單個(gè)微生物分散在固

體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。(P12“探

究?實(shí)踐”)

［重要圖解］

1.倒平板的具體操作步驟

①拔出錐形瓶的棉塞。

②將瓶口迅速通過火焰。

③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的

縫隙，將培養(yǎng)基(10~20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋

上皿蓋。

④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后.將培養(yǎng)皿倒過來放置。

(1)培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻至50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基

的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛丕燙壬時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。

(2)通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

(3)平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，

既可以避免培養(yǎng)基史的水分過快地蒸發(fā),又可以防止叫蓬上的水珠落△培養(yǎng)基二造成污染。

(4)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，則該平板不能

繼續(xù)培養(yǎng)微生物了。原因是空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。(P12"探

究?實(shí)踐”)

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2.平板劃線法的具體操作步驟

①②③④

⑤⑥⑦

①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬

絲燒紅。

②在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時(shí)，拔出裝有酵母菌

培養(yǎng)液的試管的棉塞。

③將試管口通過火焰。

④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。

⑤將試管口通過火焰，并塞上棉塞。

⑥在火焰附近將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，用接種環(huán)

在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。

⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末

端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、

四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第

一次的劃線相連。

(1)劃線前第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃

線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種;劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能

及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作.者。

(2)灼燒接種環(huán)后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

(3)劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上二次劃線的末端開始,能

使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。

(P12"探究.實(shí)踐”)

二、微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

［知識(shí)必備］

1.在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)財(cái)域阻止其他種類微生物生長

的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。(P16)

2.分解尿素的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻倜?，月尿酶催化尿素分解產(chǎn)生

NH3,NH3作為細(xì)菌生長的氮源。(P16"思考?討論”)

3.稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品

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的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)

計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落

數(shù)為如吆世的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。（P18）

4.用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)

胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)

來表示。（P18）

5.除活菌計(jì)數(shù)外，利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，也是一種常用的、快速直觀的測(cè)定微生物

數(shù)量的方法。該方法利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，然后再

計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。（P18）

6.細(xì)菌計(jì)數(shù)板和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理相同。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板比細(xì)菌計(jì)數(shù)板厚，常用于

相對(duì)較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌抱子等的計(jì)數(shù)。用細(xì)菌計(jì)數(shù)板可對(duì)細(xì)菌笠較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和

計(jì)數(shù)。（P18“相關(guān)信息”）

7.絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成月尿酶的微生物才能分解尿素。利用

以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。（P18"探究?實(shí)踐”）

［重要圖解］

1.稀釋涂布平板法操作示意圖

①鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中■

1mL1mL1mL1mL1mL1mL

將10g土樣加

入盛有90mL

無菌水的錐形

瓶中，充分搖

IxlO71x10slxltflxl04lxltfIxlO290mL

無菌水勻。取1mL上

9mL無菌水清液加入盛有

9mL無菌水

的試管中，依

次等比稀釋

④將涂布器浸

③取0.1mL菌液，滴在盛有酒精

加到培養(yǎng)基表面的燒杯中

⑥用涂布器將菌液均勻⑤將涂布器放在火焰

地涂布在培養(yǎng)基表面。上灼燒，待酒精燃

涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，盡、涂布器冷卻后,

使涂布均勻再進(jìn)行涂布

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如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌，僅有選擇培養(yǎng)基是不夠的，還需要對(duì)土

樣進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚硪约翱茖W(xué)的測(cè)定微生物數(shù)量的方法?？刹捎孟♂屚坎计桨宸?。(P17)

2.地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸，其中40%?60%能被土壤中某些微生物

分解利用，這是因?yàn)樗鼈兡軌虍a(chǎn)生纖維素酶。對(duì)這些微生物的研究與應(yīng)用，使人們能夠利用秸

稈等生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。已知?jiǎng)偣t是一種染料，它可以與像纖維素這樣

的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不與水解后的纖維二糖、葡萄糖等發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)?/p>

含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物；而當(dāng)纖維素被纖維素

分解菌分解后，復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以這些菌為中心的透明圈(如下圖所示)。

(P20”練習(xí)與應(yīng)用”拓展應(yīng)用2)

幾種纖維素分原菌在剛果紅

培養(yǎng)基上形成的透明圈

第3節(jié)發(fā)酵工程及其應(yīng)用

［知識(shí)必備］

1.發(fā)酵工程一般包括菌種的選育，擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)基的配制、滅菌，接種，發(fā)酵，產(chǎn)物

的分離、提純等方面。(P22)

2.性狀優(yōu)良的菌種可以從自然界中篩選出來，也可以通過誘變育種或基因工程育種獲得。

(P22)

3.現(xiàn)代發(fā)酵工程使用的大型發(fā)酵罐均有計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)，能對(duì)發(fā)酵過程中的溫度、明、

溶解氧、罐壓、通氣量、攪拌、泡沫和營養(yǎng)等進(jìn)行監(jiān)測(cè)和控制；還可以進(jìn)行反饋控制，使發(fā)酵

全過程處于最佳狀態(tài)。(P23)

4.環(huán)境條件不僅會(huì)影響微生物的生長繁殖，而且會(huì)影響微生物代謝物的形成。如谷氨酸

的發(fā)酵生產(chǎn)：在中性和弱堿性條件下會(huì)積累谷氨酸；在酸性條件下則容易形成谷氨酰胺和總

乙酰谷氨酰胺。(P23)

5.如果發(fā)酵產(chǎn)品是微生物細(xì)胞本身，可在發(fā)酵結(jié)束之后，采用過濾、沉淀等方法將菌體

分離和干燥，即可得到產(chǎn)品。如果產(chǎn)品是代謝物，可根據(jù)產(chǎn)物的性質(zhì)采取適當(dāng)?shù)奶崛?、分離和

統(tǒng)化措施來獲得產(chǎn)品。(P23)

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6.發(fā)醇工程在食品工業(yè)方面的應(yīng)用：生產(chǎn)傳統(tǒng)的發(fā)酵產(chǎn)品，如啤酒等；生產(chǎn)各種各樣的

食品添加劑、酶制劑，如味精、a-淀粉酶等。在醫(yī)藥工業(yè)方面的應(yīng)用：生產(chǎn)抗生素、激素、免

疫調(diào)節(jié)劑等。在農(nóng)牧業(yè)方面的應(yīng)用：生產(chǎn)微生物肥料；生產(chǎn)微生物農(nóng)藥；生產(chǎn)微生物飼料。在

其他方面的應(yīng)用：利用纖維廢料發(fā)酵生產(chǎn)酒精、乙烯等能源物質(zhì)，嗜熱菌、嗜鹽菌用來生產(chǎn)洗

滌劑等。(P24-27)

［重要圖解］

發(fā)酵罐示意圖(P23)

電動(dòng)機(jī)

排氣管

培養(yǎng)物或營養(yǎng)pH計(jì)

物質(zhì)的加入口

觀察孔

取樣管冷卻水排出口

冷卻夾層

發(fā)酵液

溫度傳感器

攪拌葉輪

和控制裝置

生物傳感

器裝置

空氣

入口

---------放料管

第2章細(xì)胞工程

第1節(jié)植物細(xì)胞工程

一、植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)

［知識(shí)必備］

1.細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)等多學(xué)科的原理和方法，通

過細(xì)胞器、細(xì)胞或組織水平上的操作，有目的地獲得特定的細(xì)胞、組織、器官、個(gè)體或其產(chǎn)品

的一門綜合性的生物工程。(P31)

2.細(xì)胞經(jīng)分裂和分化后，仍然具有產(chǎn)生完整生物體或分化成其他各獨(dú)細(xì)胞的潛能，即細(xì)

胞具有全能性。(P34)

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3.植物細(xì)胞一般具有全能性。在一定的激素和營養(yǎng)等條件的誘導(dǎo)下，已經(jīng)分化的細(xì)胞可

以經(jīng)過脫分化，即失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能，轉(zhuǎn)變成未分化的細(xì)胞，進(jìn)而形成不定形的薄壁組

織團(tuán)塊，這稱為愈傷組織。愈傷組織能重新分化成芽、根等器官，該過程稱為再分化。植物激

素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素，它們的濃度、比例等

都會(huì)影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向。（P35"探究?實(shí)踐”）

4.誘導(dǎo)愈傷組織期間一般丕需要光照，在后續(xù)的培養(yǎng)過程中，每日需要給予適當(dāng)時(shí)間和

強(qiáng)度的光照。（P35"探究.實(shí)踐”）

5.在進(jìn)行體細(xì)胞雜交之前，必須先利用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體。

（P37）

6.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)在打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種等方面展

示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。（P38）

［重要圖解］

1.植物組織培養(yǎng)流程圖

器、六―包'''7片/?

外植體益誘導(dǎo)生芽煽移栽成活

誘導(dǎo)愈傷組織~一誘導(dǎo)生根

植物組織培養(yǎng)是指將離體的植物器官、組織或細(xì)胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予

適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù)。（P35）

2.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)流程圖

付_@

A細(xì)胞^$@0

/E在融合的

0原生質(zhì)體

B細(xì)胞B原生

質(zhì)體

?/M雜種移栽后

再生出植株的植株

細(xì)胞壁

人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法基本可以分為兩大類一一物理法和化學(xué)法。物理法包括電融

合法、離心法等;化學(xué)法包括聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+—高pH融合法等。融合后得到

的雜種細(xì)胞再經(jīng)過誘導(dǎo)可形成愈傷組織，并可進(jìn)一步發(fā)育成完整的雜種植株。（P37-38）

二、植物細(xì)胞工程的應(yīng)用

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［知識(shí)必備］

1.用于快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù)，被人們形象地稱為植物的快速繁殖技術(shù),

也叫作微型繁殖技術(shù)。它不僅可以高效、快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖，還可以保持優(yōu)良品種的

遺傳特性。(P39)

2.單倍體育種可以先通過花藥(或花粉)培養(yǎng)獲得單倍體植株，然后經(jīng)過誘導(dǎo)染色體加倍,

當(dāng)年就能培育出遺傳性狀相對(duì)穩(wěn)定的純合二倍體植株，這極大地縮短了育種的年限，節(jié)約了大

量的人力和物力。(P40)

3.植物代謝會(huì)產(chǎn)生一些一般認(rèn)為不是植物基主的生命活動(dòng)所必需的產(chǎn)物一次生代謝物。

如酚類、香料和色素等。(P41)

4.植物細(xì)胞培養(yǎng)是指在離體條件下對(duì)單個(gè)植物細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù)。

(P41)

第2節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程

一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

［知識(shí)必備］

1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成里個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的

培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。(P43)

2.一般來說，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件。(P43)

無菌、無毒

的環(huán)境

糖類、氨基一，動(dòng)物細(xì)、

酸、無機(jī)鹽、胞培養(yǎng)所,適宜的溫度、

<1需的基本/

維生素……pH和滲透醫(yī)

\條件/適宜而植

環(huán)境

3.在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，必須保證環(huán)境是無菌’無毒的，即需要對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具

進(jìn)行滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。培養(yǎng)液還需要定期更換，以便清除代謝物,防止細(xì)

胞代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。(P44)

4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有02和C02。02是細(xì)胞代謝所必需的，C02的主要作用是

維持培養(yǎng)液的pH。在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，并將它們置于含有25%

空氣犯的混合氣體的C02培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。(P44)

5.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞貼璧。懸浮培養(yǎng)

的細(xì)胞會(huì)因細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻。貼壁

第9頁共20頁

細(xì)胞在生長增殖時(shí)，除受上述因素的影響外，還會(huì)發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象,即當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長

到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖。(P44)

6.在一定條件下，干細(xì)胞可以分化成其他類型的細(xì)胞。干細(xì)胞存在于早期胚胎、骨髓和

臍帶血等多種組織和器官中，包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞等。(P46)

7.2006年，科學(xué)家通過體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞，獲得了類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞,

將它稱為透目多熊干細(xì)胞(簡(jiǎn)稱iPS細(xì)胞)，并用iPS細(xì)胞治療了小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血。(P46)

［重要圖解］

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程示意圖

人們通常將分瓶之前的細(xì)胞培養(yǎng)，即動(dòng)物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)，將分瓶

后的細(xì)胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞直接用離心法收集；貼壁細(xì)

胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，然后再用離心法收集。之后，將收集的

細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)。(P45)

二、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單抗隆抗體

［知識(shí)必備］

1.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)就是使兩仝嵬妥企動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成

的雜交細(xì)胞具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。(P48)

2.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同。誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法有

PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等。(P48)

3.細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)綾雜交成為可能。(P48)

4.制備單克隆抗體需要的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。制備單克隆抗體的

原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞增殖。

第10頁共20頁

5.第一次篩選的目的是篩選出雜交瘤細(xì)胞,方法是用特定的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)。經(jīng)過篩

選后未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜文瘤細(xì)胞才能生長。

第二次篩選的目的是篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞,方法是專一抗體檢測(cè)。（P48-49）

6.抗體一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，

實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。（P50"思考?討論”）

［重要圖解］

1.制備單克隆抗體過程的示意圖（P48?49）

用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的將抗體檢測(cè)呈陽從細(xì)胞培

用特定的抗原對(duì)小篩選：在該培養(yǎng)基上，未雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆性的雜交瘤細(xì)胞養(yǎng)液或小

鼠進(jìn)行免疫，并從融合的親本細(xì)胞和融合的化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，在體外條件下大鼠腹水中

該小鼠的脾中得到具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死經(jīng)多次篩選，就可獲規(guī)模培養(yǎng)，或注獲取大量

能產(chǎn)生特定抗體的亡，只有融合的雜交瘤細(xì)得足夠數(shù)量:的能分泌射到小鼠腹腔內(nèi)的單克隆

B淋巴細(xì)胞。胞才能生長。所需抗體的細(xì)胞。增殖?？贵w。

⑥。砌?礴

多種雜

交細(xì)胞

注射特定的抗原多種B淋巴細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞（分單克隆

誘導(dǎo)融合;砂@）泌的抗體能與特抗體

④定抗原結(jié)合）

注射到小

將骨髓瘤細(xì)胞與雜交瘤細(xì)胞（既能迅速大鼠腹腔內(nèi)

培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞融合量增殖，又能產(chǎn)生抗體）

2.ADC的作用機(jī)制示意圖（P50）

ADC被細(xì)胞吞噬

三'動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物

［知識(shí)必備］

1.動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵堤細(xì)胞中，使這個(gè)重新

組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。（P52）

2.減數(shù)分裂n中期（MH期）卵母細(xì)胞中的“核”其實(shí)是紡錘體工染色體復(fù)合物。書中所說

的“去核”是去除該復(fù)合物。（P52“相關(guān)信息”）

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3.哺乳動(dòng)物核移植可以分為魅臉細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植。由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程

度低，表現(xiàn)全能性相對(duì)容易，而動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，表現(xiàn)全能性十分困難，因此動(dòng)物體細(xì)

胞核移植的難度明顯鹿王胚胎細(xì)胞核移植。（P52）

4.目前動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作這。也有人采用梯度離心、

紫外線短時(shí)間照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細(xì)胞透明帶的情況下去

核或使其中的DNA變性。（P54“相關(guān)信息”）

［重要圖解］

體細(xì)胞核移植流程圖（P53）

從屠宰場(chǎng)收集牛卵

”,

巢，采集卵母細(xì)胞

（左邊照片為研究人

J..

員正在使用設(shè)備從高產(chǎn)血牛（供南

牛的卵巢采集卵母

細(xì)胞），在體外培養(yǎng)從供體高產(chǎn)奶牛

通過電融合法使兩

細(xì)胞融合，供體核

進(jìn)入卵母細(xì)胞，形

____________成重構(gòu)胚。

用物理或化學(xué)方法（如電刺激、

Ca2+載體、乙醇、蛋白酶合成抑制

劑等）激活重構(gòu)胚，使其完成細(xì)胞

分裂和產(chǎn)育進(jìn)程J

生出與供體奶牛將胚胎移入受體

遺傳物質(zhì)基本相（代孕）母牛體內(nèi)

同的犢牛

第3節(jié)胚胎工程

一、胚胎工程的理論基礎(chǔ)

［知識(shí)必備］

1.胚胎工程是指對(duì)生殖細(xì)胞、受精卵或呈期胚胎細(xì)胞進(jìn)行多種顯微操作和處理，然后將

獲得的胚胎移植到雌性動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)后代，以滿足人類的各種需求。胚胎工程技術(shù)包括體外受

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精、胚胎移植和胚胎分割等。(P56)

2.在自然條件下，哺乳動(dòng)物的受精在輸卵管內(nèi)完成。(P56)

3.在精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間，卵細(xì)胞膜外的透明道會(huì)迅速發(fā)生生理反應(yīng)，阻止后來的

精子進(jìn)入透明帶。然后，精子入卵。精子入卵后，卵細(xì)胞膜也會(huì)立即發(fā)生生理反應(yīng)，拒絕其他

精子再進(jìn)入卵內(nèi)。(P57)

4.精子入卵后，尾部脫離，原有的核膜破裂并形成一個(gè)新的核膜，最后形成一個(gè)比原來

精子的核還大的核，叫作雄原核。與此同時(shí)，精子入卵后被激活的卵子完成減數(shù)分裂II,排出

第二極體后,形成雌原核。(P57)

5.多數(shù)哺乳動(dòng)物的第一極體不進(jìn)行減數(shù)分裂H,因而不會(huì)形成兩個(gè)第二極體。在實(shí)際胚胎

工程操作中，常以觀察到兩個(gè)極倭或者雌、雄原核作為受精的標(biāo)志。(P58“相關(guān)信息”)

6.聚集在胚胎一端的細(xì)胞形成內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，將來發(fā)育成胎兒的備種組織；而沿透明帶內(nèi)壁

擴(kuò)展和排列的細(xì)胞，稱為滋養(yǎng)層細(xì)胞，它們將來發(fā)育成胎膜和胎盤。(P58)

［重要圖解］

哺乳動(dòng)物胚胎的早期發(fā)育示意圖(P58)

受精卵.

2細(xì)胞

4細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞團(tuán)昨隼層

格透明用上

8細(xì)胞哪、%一'

桑甚胚

囊胚

二、胚胎工程技術(shù)及其應(yīng)用

［知識(shí)必備］

1.哺乳動(dòng)物的體外受精技術(shù)主要包括卵母細(xì)胞的采集、精子的獲取和受精等步驟。(P60)

2.采集到的卵母細(xì)胞和精子，要分別對(duì)它們進(jìn)行成熟培養(yǎng)和獲能處理，然后才能用于體

外受精。(P60)

3.胚胎移植是指將通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到回種的、生理狀態(tài)相同

的雌性動(dòng)物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。其中提供胚胎的個(gè)體稱為“供體”，接受胚

第13頁共20頁

胎的個(gè)體叫“愛倭”o通過任何一項(xiàng)技術(shù)(如轉(zhuǎn)基因、核移植和體外受精等)獲得的胚胎，都必

須移植給受體才能獲得后代。(P61)

4.胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移。(P62"思考?討

論”)

5.進(jìn)行胚胎移植的優(yōu)勢(shì)是可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力。(P62)

6.超數(shù)排卵是指應(yīng)用外源促性腺激素，誘發(fā)卵巢排出比自然情況下更多的成熟卵子。

(P62“相關(guān)信息”)

7.胚胎分割所需要的主要儀器設(shè)備為體視顯微鏡和顯微操作儀。在進(jìn)行胚胎分割時(shí)，應(yīng)

選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑甚胚或囊胚,將它移入盛有操作液的培養(yǎng)皿中，然后在顯微鏡下

用分割針或分割刀分割。在分割囊胚階段的胚胎時(shí)，要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割。(P62)

［重要圖解］

1.牛胚胎移植示意圖

優(yōu)良供體母牛受體母牛

(遺傳性狀優(yōu)良、(有健康的體質(zhì)和

生產(chǎn)能力強(qiáng))正常繁殖能力)

進(jìn)行同期

發(fā)情處理

超數(shù)排卵處理受體發(fā)情

發(fā)情配種或據(jù)臉移植胚胎

優(yōu)良公牛人工授精

???對(duì)受體進(jìn)行

收集胚胎妊娠檢查

并檢查

正常繁殖或兩

三個(gè)月后進(jìn)行

具有優(yōu)良性狀的后代

另一次移植

以牛的胚胎移植為例，胚胎移植主要包括供體、受體的選擇和處理，配種或人工授精,胚

胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存，胚胎的移植，以及移植后的檢查等步驟。(P61)

2.牛胚胎性別鑒定和分割示意圖(P63)

分割針取樣滋養(yǎng)層做DNA分析,

江、一鑒定性別

囊胚腔/.已知性別胚胎

在顯微透明帶、I二分胚二胚胎移植

鏡下切滋養(yǎng)層片...

割胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)一、◎一?

分割針內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

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第3章基因工程

第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具

［知識(shí)必備］

1.基因工程是指按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出

更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在誣幺分

王水壬上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作重組DNA.技術(shù)。(P67)

2.1944年，艾弗里等人通過肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，不僅證明了遺傳物質(zhì)是DNA,還

證明了DNA可以在同種生物的不同個(gè)體之間轉(zhuǎn)移。(P68“科技探索之路”)

3.切割DNA分子的工具是限制性內(nèi)切核酸酶，簡(jiǎn)稱限制酶，這類酶主要是從原核生物

中分離純化出來的。它們能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核昔酸序列，并且使每一條鏈中特定

部位的磷酸二酯鍵斷開,產(chǎn)生黏性末端或生本端兩種形式的末端。(P71)

4.DNA連接酶主要有兩類，一類是由就LDXA蓑接醉，另一類是以DNA灌接酶。后

者既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA片段的年端，

但連接平末端的效率相對(duì)較低。(P72)

5.質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外，

并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。(P72)

6.載體必須具備的條件：(1)能在受體細(xì)胞中保存下來并能目或復(fù)制；(2)具有一個(gè)或多個(gè)

限制酶切割位點(diǎn),以便與外源基因連接；(3)具有標(biāo)記基因。(P72)

7.在基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外，還有噬菌體、動(dòng)植物病毒等。它們的來源不同，

在大小、結(jié)構(gòu)、復(fù)制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大差別。(P73)

8.DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以初步分離DNA與蛋

白質(zhì)。DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。在一定

溫度下,DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)魚，因此二苯胺試劑可以作為鑒定DNA的試劑。(P74"探

究?實(shí)踐”)

［重要圖解］

1.限制酶切割DNA分子產(chǎn)生兩種不同末端的示意圖(箭頭表示酶的切割位置)(P71)

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EcoRi…“3,釬

(在G與A之.Jc泗哺

間切割)A

中金線,黏性末端

溫；之;一噩疆

間切勘中心平末端

2.大腸桿菌及質(zhì)粒結(jié)構(gòu)模式圖(P72)

擬核DNA質(zhì)粒

大腸桿菌

細(xì)胞目的基因

氨芳青霉素插入位點(diǎn)

抗性基因

復(fù)制原點(diǎn)

第2節(jié)基因工程的基本操作程序

［知識(shí)必備］

1.培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉主要需要四個(gè)步驟：目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。(P76)

2.PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫。它是一項(xiàng)根據(jù)DNA半保式復(fù)制的原理，在體外提供

參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對(duì)目的基因的核甘酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。(P77)

3.PCR反應(yīng)過程可以分為變性、一復(fù)性和延伸三步。(P78)

4.PCR反應(yīng)過程可以在PCR擴(kuò)增儀(PCR儀)中自動(dòng)完成，完成以后，常采用瓊脂糖凝膠

由泳來鑒定PCR的產(chǎn)物。(P79)

5.構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,一并且遺傳給下二代,一一

同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。(P80)

6.基因表達(dá)載體要包括以下四個(gè)基本的結(jié)構(gòu)：1的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因。

(P80)

7.啟動(dòng)子位于基因的上漩，它是瞪IA聚食醵識(shí)別和結(jié)合的部位。(P80)

8.標(biāo)記基因的作用：鑒別受體細(xì).胞史是查含有且的基因,――叢而將在有目的基因的細(xì)胞篩

選出來(或供重組DNA的鑒定和選擇)。

9.花粉管通道法有多種操作方式。例如，可以用微量注射器將含目的基因的DNA溶液

第16頁共20頁

直接注入子房中；可以在植物受粉后的一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴加在花柱切面

上，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊。除此之外，將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法還

有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(P80?81)

10.轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。

(P81“資料卡”)

11.農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，

而對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能

將Ti質(zhì)粒上的T-DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色傕

DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這種特點(diǎn)，如果將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中，通過農(nóng)桿菌的

轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞。(P81“資料卡”)

12.檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功，首先是分子水平的檢測(cè)，包括通過PCR等技術(shù)檢

測(cè)棉花的染色體DNA上是否插入了Bt基因或檢測(cè)及基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA；從轉(zhuǎn)基因棉

花中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原二抗體雜交，檢測(cè)及基因是否翻譯成Bt抗蟲蛋白等。

其次，還需要進(jìn)行仝住生物空水平的鑒定。例如，通過采摘抗蟲棉的葉片飼喂棉鈴蟲來確定

及基因是否賦予了棉花抗蟲特性以及抗性的程度。(P82)

13.在獲得轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的過程中，還可以通過構(gòu)建基因文庫來獲取目的基因。(P82)

14.將目的基因?qū)雱?dòng)物受精卵最常用的一種方法是利用顯微注射將目的基因注入動(dòng)物的

受精卵中，這個(gè)受精卵將發(fā)育成為具有新性狀的動(dòng)物。在基因工程操作中，常用原核生物作為

受體細(xì)胞，其中以大腸桿菌應(yīng)用最為廣泛。研究人員一般先用Cat處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)

胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。

(P82)

［重要圖解］

1.PCR反應(yīng)過程示意圖(P78?79)

第17頁共20頁

DNA*邛

iiiiiiiiiiinn

3,/

4種脫:氧嘻光耐高Q溫的DNA聚合酶

核甘酸幽引物miiiiiiiiiiii

5，V3,5,

riiiiiiiiniini5，~---y

rIJT

5unnnnnnr^5lllllllllllllll

5urn卿3；1,11111111111115；

，/射r

待擴(kuò)增的DNA片段5'3'

Trnwnwnnr3%.-3-5,

皿5'

5,iiiiniiiiiiin

5，3'

3,miiHijiiuurUHmlrrmTr

3如皿山山》~

￡5,

血5,

5，------3,

B?5'

變性當(dāng)溫度復(fù)性當(dāng)溫度下延伸當(dāng)溫度上升到第一輪循環(huán)的產(chǎn)第二輪循環(huán)的產(chǎn)

超過90t時(shí)，降到50t左右時(shí)，72七左右時(shí)，溶液中物作為第二輪反物作為第三輪反

雙鏈DNA解聚兩種引物通過堿的4種脫氧核甘酸在應(yīng)的模板，經(jīng)過應(yīng)的模板，經(jīng)過

為單鏈?；パa(bǔ)配對(duì)與兩耐高溫的DNA聚合酶變性、復(fù)性和延變性、復(fù)性和延

條單鏈DNA結(jié)合。的作用下，根據(jù)堿基伸三步產(chǎn)生第二伸三步產(chǎn)生第三

互補(bǔ)配對(duì)原則合成新輪循環(huán)的產(chǎn)物。輪循環(huán)的產(chǎn)物。

的DNA鏈c

2.基因表達(dá)載體構(gòu)建模式圖(P80)

限制酶切割位點(diǎn)

啟動(dòng)終止子

目的基因

標(biāo)記里吹魏'」'制酶切割位點(diǎn)

基因

限制酶G限制酶

金青獲取目的基因

:組DN.

分子,

3.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法示意圖(P81)

TiT-DNA