2025年高考二輪復(fù)習(xí)生物大單元8生物技術(shù)與工程層級二關(guān)鍵突破提升練4

層級二關(guān)鍵突破提升練學(xué)生用書P209

突破點1微生物培養(yǎng)與發(fā)酵1.(2024·山東淄博一模)甲醇蛋白是畢赤酵母的胞內(nèi)蛋白,可用甲醇作為碳源來培養(yǎng)畢赤酵母生產(chǎn)甲醇蛋白。畢赤酵母無毒性,甲醇對大多數(shù)微生物有毒性。下列敘述錯誤的是()A.篩選能高效利用甲醇的畢赤酵母時,培養(yǎng)基應(yīng)以甲醇為唯一碳源B.雖然甲醇對多數(shù)微生物有毒性,發(fā)酵生產(chǎn)甲醇蛋白時也需檢測是否有雜菌污染C.發(fā)酵時,發(fā)酵溫度、培養(yǎng)液的滲透壓和pH影響甲醇蛋白產(chǎn)量D.用作動物飼料時,需從畢赤酵母菌體中分離、純化甲醇蛋白答案D解析甲醇蛋白是畢赤酵母的胞內(nèi)蛋白,篩選能高效利用甲醇的畢赤酵母時,應(yīng)以甲醇為唯一碳源,A項正確;微生物培養(yǎng)的核心是防止雜菌污染,因此雖然甲醇對多數(shù)微生物有毒性,發(fā)酵生產(chǎn)甲醇蛋白時也需要檢測是否有雜菌污染,B項正確;發(fā)酵時,發(fā)酵溫度、培養(yǎng)液的滲透壓和pH會影響畢赤酵母的生長繁殖,因此也會影響甲醇蛋白產(chǎn)量,C項正確;飼料微生物是指作為畜、禽和魚類的飼料以及適用于加工或改善飼料質(zhì)量的微生物,因此用作動物飼料時,需要直接培養(yǎng)畢赤酵母菌體,D項錯誤。2.(2024·山東青島三模)稀釋涂布平板法和稀釋倒平板法是分離微生物的兩種方法。稀釋倒平板法是指將稀釋的菌液和瓊脂混合,然后將其倒入無菌培養(yǎng)皿中進行培養(yǎng)。下列說法正確的是()A.培養(yǎng)過程中所用的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿均可采用濕熱滅菌法滅菌B.兩種方法均可通過統(tǒng)計菌落數(shù)實現(xiàn)對活菌的準確計數(shù)C.稀釋倒平板法對好氧菌、熱敏感菌的分離效果優(yōu)于稀釋涂布平板法D.為了防止培養(yǎng)基溫度過高殺死微生物,應(yīng)將瓊脂冷卻至室溫后再倒平板答案A解析為了防止雜菌污染,培養(yǎng)過程中所用的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿均可采用濕熱滅菌法滅菌,A項正確;稀釋涂布平板法和稀釋倒平板法都不能通過統(tǒng)計菌落數(shù)實現(xiàn)對活菌的準確計數(shù),B項錯誤;稀釋倒平板法是指將稀釋的菌液和瓊脂混合,然后將其倒入無菌培養(yǎng)皿中進行培養(yǎng),瓊脂可以隔絕空氣,不能及時散熱,因此稀釋涂布平板法對好氧菌、熱敏感菌的分離效果優(yōu)于稀釋倒平板法,C項錯誤;倒平板操作中需要將培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時進行,D項錯誤。3.(2024·山東菏澤二模)稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是危害最為嚴重的真菌病害之一。土壤中某些微生物能合成并分泌幾丁質(zhì)酶,能抑制稻瘟菌的生長,可用于稻瘟病的防治?？蒲腥藛T試圖從土壤中篩選出能高效降解幾丁質(zhì)的菌株,通過微生物培養(yǎng)獲得幾丁質(zhì)酶。下列說法錯誤的是()A.篩選土壤中目的微生物時需用以幾丁質(zhì)為唯一碳源的培養(yǎng)基B.純化培養(yǎng)時,可選擇稀釋涂布平板法或平板劃線法接種C.在以幾丁質(zhì)為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長的菌落均能分泌幾丁質(zhì)酶D.可依據(jù)單菌落周圍“水解圈直徑/菌落直徑”的值來篩選目的菌株答案C解析篩選土壤中目的微生物即能高效降解幾丁質(zhì)的菌株時,應(yīng)用以幾丁質(zhì)為唯一碳源的培養(yǎng)基進行篩選,A項正確;純化培養(yǎng)時,可選擇稀釋涂布平板法或平板劃線法接種,兩種方法均可得到單菌落,B項正確;在以幾丁質(zhì)為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長的菌落不一定都能分泌幾丁質(zhì)酶,培養(yǎng)基上可能有些微生物是以幾丁質(zhì)的分解產(chǎn)物為碳源,C項錯誤;水解圈是產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶的菌株產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生的,水解圈直徑/菌落直徑越大,說明該菌降解能力越強,故可依據(jù)單菌落周圍“水解圈直徑/菌落直徑”的值來篩選目的菌株,D項正確。4.(不定項)(2024·山東泰安三模)如圖為利用谷氨酸棒狀桿菌生產(chǎn)谷氨酸的途徑,尿素是谷氨酸生產(chǎn)中培養(yǎng)基的重要成分之一,尿素分解釋放出的氨會使發(fā)酵液的pH上升,而發(fā)酵過程中,氨的利用以及有機酸和谷氨酸等進入發(fā)酵液又會使發(fā)酵液pH下降。與細胞膜通透性改變有關(guān)的基因發(fā)生某種堿基替換,可使細胞膜的通透性發(fā)生改變。下列敘述錯誤的是()A.可通過誘變育種增加細胞膜通透性,進而提高谷氨酸產(chǎn)量B.發(fā)酵過程中適時增加尿素的量,可避免酶活性的改變C.尿素過多時,易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺D.過濾、沉淀是從培養(yǎng)液中提取谷氨酸最常用的方法答案CD解析與細胞膜通透性改變有關(guān)的基因發(fā)生堿基的替換,可使細胞膜的通透性發(fā)生改變,而細胞膜通透性改變會減少細胞內(nèi)的谷氨酸積累,降低谷氨酸對谷氨酸脫氫酶的抑制作用,進而提高谷氨酸的產(chǎn)量,A項正確;在培養(yǎng)細菌時,一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性,發(fā)酵過程中,氨的利用以及有機酸和谷氨酸等進入發(fā)酵液,會使發(fā)酵液pH下降,pH下降可能導(dǎo)致某些酶活性改變,加入尿素后分解釋放出氨,會使發(fā)酵液的pH上升,能避免酶活性的改變,B項正確;谷氨酸的發(fā)酵生產(chǎn)中,在中性和弱堿性條件下會積累谷氨酸,在酸性條件下則容易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺,加入尿素過多,分解產(chǎn)生的氨增多,不會使溶液呈酸性,故尿素過多時,不易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺,C項錯誤;產(chǎn)品是菌體時,采用過濾、沉淀等方法將菌體分離,谷氨酸為代謝物,需根據(jù)產(chǎn)物的性質(zhì)采取適當(dāng)?shù)姆蛛x措施來獲得產(chǎn)品,D項錯誤。突破點2比較植物細胞工程和動物細胞工程5.(2024·山東泰安模擬改編)紅豆杉能產(chǎn)生抗癌藥物紫杉醇。為了培育產(chǎn)生紫杉醇的柴胡,科研人員將紅豆杉(2n=24)與柴胡(2n=12)進行了不對稱體細胞雜交。用一定劑量的紫外線照射紅豆杉原生質(zhì)體,破壞部分染色體,與未經(jīng)紫外線照射的柴胡原生質(zhì)體用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)融合,得到融合細胞。誘導(dǎo)融合后,科研人員只統(tǒng)計了7組染色體數(shù)目不大于24條的細胞,如表所示。紅豆杉和柴胡的親緣關(guān)系較遠,兩種植物細胞的染色體間排斥較為明顯。下列敘述錯誤的是()材料融合細胞組號1234567染色體數(shù)/條9~111212~1412~16131424A.將紅豆杉愈傷組織和柴胡愈傷組織用纖維素酶和果膠酶分別處理,各自獲得有活力的原生質(zhì)體B.篩選的目標(biāo)細胞不包括染色體數(shù)目大于24條的細胞,因為柴胡細胞染色體數(shù)為12條,并且紅豆杉細胞一個染色體組的染色體數(shù)為12條C.判斷組號為3、4、5、6的細胞為雜交細胞,并進一步采用PCR方法鑒定這幾組細胞D.應(yīng)在能夠高效合成紫杉醇的雜種細胞中選擇紅豆杉的核基因含量較高的雜種細胞進行培養(yǎng)答案D解析將紅豆杉愈傷組織和柴胡愈傷組織用纖維素酶和果膠酶分別處理,去掉細胞壁,可以各自獲得有活力的原生質(zhì)體,A項正確;因為柴胡細胞染色體數(shù)為12條,并且紅豆杉細胞一個染色體組的染色體數(shù)為12條,目標(biāo)是篩選得到具有紫杉醇合成基因的柴胡,所以此雜種細胞理論應(yīng)該包含全部柴胡染色體和一套紅豆杉染色體(含有一個紫杉醇合成基因)即可,所以科研人員篩選的目標(biāo)細胞不包括染色體數(shù)目大于24條的細胞,B項正確;柴胡細胞染色體數(shù)為12條,多余的染色體是其他細胞融合參與進去的,故可判斷組號為3、4、5、6的細胞為雜交細胞,并進一步采用PCR方法鑒定這些細胞,C項正確;紅豆杉和柴胡的親緣關(guān)系較遠,兩種植物細胞的染色體間排斥較為明顯,應(yīng)在能夠高效合成紫杉醇的雜交細胞中選擇紅豆杉的核基因含量較低的雜交細胞進行培養(yǎng),D項錯誤。6.(2024·山東煙臺一模)抗體由恒定區(qū)段和可變區(qū)段兩部分構(gòu)成,其中可變區(qū)段決定抗體的特異性。利用小鼠制備的鼠源性單克隆抗體需經(jīng)人源化改造才可應(yīng)用于臨床免疫治療。下列說法錯誤的是()A.制備鼠源性單克隆抗體需將小鼠B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合B.鼠源性單克隆抗體是由雜交瘤細胞產(chǎn)生的天然抗體C.人源化改造降低了人對鼠源性單克隆抗體的免疫排斥反應(yīng)D.人源化改造即將鼠源性單克隆抗體的可變區(qū)段替換成人的相應(yīng)區(qū)段答案D解析制備鼠源性單克隆抗體需將小鼠B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合,并經(jīng)篩選獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞,A項正確;鼠源性單克隆抗體是由雜交瘤細胞產(chǎn)生的,是沒有經(jīng)過改造的天然抗體,B項正確;不同生物體的組織相容性抗原不同,若將鼠源性單克隆抗體直接用于人,會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng),由于抗體的可變區(qū)段決定抗體的特異性,即為識別抗原的部位,因此可將鼠源性單克隆抗體的恒定區(qū)段替換成人的相應(yīng)區(qū)段,減少人對鼠源性單克隆抗體的免疫排斥反應(yīng),C項正確,D項錯誤。7.(2024·山東模擬)草莓在進行無性繁殖過程中,感染的病毒會在體內(nèi)逐年積累,導(dǎo)致產(chǎn)量降低、品質(zhì)變差。下圖是培育高品質(zhì)草莓的流程圖。下列敘述正確的是()方法一:草莓→甲無病毒苗方法二:SMYELVCP草莓

細胞抗病毒

草莓注:SMYELVCP是草莓輕型黃邊病毒的抗性基因。A.甲需經(jīng)滅菌處理后才能用于無病毒苗的培育B.選取體積分數(shù)為95%的酒精溶液對甲進行30s消毒處理C.A、C過程與生長素、細胞分裂素的調(diào)節(jié)密切相關(guān)D.兩種培育方法的效果可通過病毒接種實驗進行檢測答案C解析在植物組織培養(yǎng)過程中,甲需經(jīng)消毒處理后才能用于無病毒苗的培育,A項錯誤;需要用體積分數(shù)為70%的酒精溶液和質(zhì)量分數(shù)為5%左右的次氯酸鈉溶液對甲進行消毒,保證植物組織培養(yǎng)的成功,B項錯誤;A、C過程屬于植物組織培養(yǎng),都需要經(jīng)過脫分化形成愈傷組織和再分化形成根、芽,最終發(fā)育成植株,與生長素、細胞分裂素的調(diào)節(jié)密切相關(guān),C項正確;無病毒苗應(yīng)根據(jù)植株性狀檢測,不抗病毒,不需要接種病毒,抗病毒苗需要通過病毒接種的方式來判斷選育方法的效果,因此只有方法二需要通過病毒接種實驗,D項錯誤。8.(2024·山東泰安模擬)某些種類的癌細胞表面高表達膜蛋白PSMA,能抑制T細胞的活化,使癌細胞發(fā)生免疫逃逸。CD28是T細胞表面受體,其在癌細胞與T細胞結(jié)合部位聚集可有效激活T細胞?？蒲腥藛T嘗試利用單抗技術(shù)通過誘導(dǎo)兩種雜交瘤細胞融合形成雙雜交瘤細胞,構(gòu)建既能結(jié)合PSMA,又能結(jié)合CD28的雙特異性抗體PSMA×CD28。下列說法錯誤的是()A.臨床上給癌癥患者注射抗PSMA受體的抗體有一定的抗癌作用B.雙雜交瘤細胞產(chǎn)生多種抗體的原因是融合細胞能表達出可隨機組合的L鏈和H鏈C.同時將PSMA和CD28注射到小鼠體內(nèi),可獲得同時產(chǎn)生兩種抗體的雜交瘤細胞D.PSMA×CD28使CD28在癌細胞與T細胞結(jié)合部位聚集,從而有效激活T細胞殺傷癌細胞答案C解析某些種類的癌細胞表面高表達膜蛋白PSMA,能抑制T細胞的活化,使癌細胞發(fā)生免疫逃逸,因此臨床上給癌癥患者注射抗PSMA受體的抗體使其結(jié)合PSMA之后,無法抑制T細胞的活化,有一定的抗癌作用,A項正確;據(jù)圖可知,雙雜交瘤細胞有L鏈和H鏈,雙雜交瘤細胞產(chǎn)生多種抗體的原因是融合細胞能表達出可隨機組合的L鏈和H鏈,B項正確;雜交瘤細胞是經(jīng)篩選后獲得的,一種雜交瘤細胞由一種B淋巴細胞和骨髓瘤細胞組成,而一種B淋巴細胞經(jīng)分化后只能產(chǎn)生一種抗體,故同時將PSMA和CD28注射到小鼠體內(nèi),不能獲得同時產(chǎn)生兩種抗體的雜交瘤細胞,C項錯誤;PSMA×CD28同時結(jié)合癌細胞表面的PSMA和T細胞表面受體CD28,前者避免抑制T細胞活化,后者激活T細胞,從而有效激活T細胞殺傷癌細胞,D項正確。9.(不定項)(2024·山東棗莊二模)科學(xué)家將A、B、C、D基因通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)入小鼠的成纖維細胞中,然后在培養(yǎng)ES細胞的培養(yǎng)基上培養(yǎng)這些細胞。幾周后,這些細胞顯示出ES細胞的形態(tài),具有活躍的分裂能力,它們就是iPS細胞。研究人員為了確定四種基因在此過程中的作用,依次去掉1個基因,將其他3個基因轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細胞中,然后通過與轉(zhuǎn)入4個基因的小鼠成纖維細胞的誘導(dǎo)情況進行比較,來推測缺失的那個基因?qū)φT導(dǎo)iPS細胞的影響,進而判斷每個基因作用的相對大小。下列敘述正確的是()A.培養(yǎng)iPS細胞的培養(yǎng)基需要先添加血清再滅菌B.確定四種基因作用的實驗利用了“減法原理”C.ES細胞和成纖維細胞都具有全能性D.已經(jīng)分化的T細胞、B細胞也能被誘導(dǎo)成iPS細胞答案BD解析培養(yǎng)iPS細胞的培養(yǎng)基先添加血清再滅菌,會破壞血清的成分,A項錯誤;為了確定四種基因在此過程中的作用,依次去掉1個基因,利用了“減法原理”,B項正確;成纖維細胞是已經(jīng)分化的細胞,不具有全能性,C項錯誤;已經(jīng)分化的T細胞、B細胞也能被誘導(dǎo)成iPS細胞,D項正確。10.(不定項)(2024·山東泰安模擬預(yù)測)擬矮牽牛的原生質(zhì)體在X培養(yǎng)基(A)上只能形成小細胞團,不能形成植株,在含放線菌素D的X培養(yǎng)基(B)上培養(yǎng)結(jié)果相同;矮牽牛的原生質(zhì)體在A上能分化成植株,但在B上不能生長。在A、B上利用植物體細胞雜交技術(shù)均可培養(yǎng)出可育雜種矮牽牛。下列說法正確的是()A.酶解法制備原生質(zhì)體時,應(yīng)在等滲或稍微高滲溶液中進行B.只有雜種細胞能在B上形成植株C.獲得的雜種矮牽?？捎?說明擬矮牽牛和矮牽牛屬于同一物種D.植物體細胞雜交技術(shù)應(yīng)用的原理是細胞膜的流動性和植物細胞的全能性答案ABD解析原生質(zhì)體是植物細胞去除細胞壁后的結(jié)構(gòu),為避免原生質(zhì)體吸水漲破,酶解法制備原生質(zhì)體時,應(yīng)在等滲或稍微高滲溶液中進行,A項正確;根據(jù)題干信息,“擬矮牽牛的原生質(zhì)體在X培養(yǎng)基(A)上只能形成小細胞團,不能形成植株,在含放線菌素D的X培養(yǎng)基(B)上培養(yǎng)結(jié)果相同;矮牽牛的原生質(zhì)體在A上能分化成植株,但在B上不能生長”,雜種細胞兼有兩者的特點,能在B上形成植株,B項正確;物種的判斷標(biāo)準是指在自然狀態(tài)下能相互交配并產(chǎn)生可育后代,上述過程是植物體細胞雜交技術(shù),是人為狀態(tài)下實現(xiàn)的,故雜種矮牽?？捎?不能說明擬矮牽牛和矮牽牛屬于同一物種,C項錯誤;植物體細胞雜交首先要使原生質(zhì)體融合形成雜種細胞,其次要把雜種細胞經(jīng)過植物組織培養(yǎng)培育成雜種植株,細胞融合的原理是細胞膜具有一定的流動性,植物組織培養(yǎng)的原理是植物細胞的全能性,D項正確。11.(2024·河北保定二模)(10分)研究發(fā)現(xiàn)細胞毒性T細胞通過表面受體(TCR)識別抗原呈遞細胞呈遞的腫瘤抗原后被激活,進而攻擊腫瘤細胞(如圖1所示)。圖2為腫瘤細胞的一種免疫逃逸機制示意圖。其中腫瘤細胞大量表達PDL1,并能與細胞毒性T細胞表面的PD1結(jié)合,抑制細胞毒性T細胞的活化,使其逃避細胞毒性T細胞的攻擊。請根據(jù)資料和所學(xué)內(nèi)容,回答下列問題。圖1圖2(1)TCR的化學(xué)本質(zhì)是。細胞毒性T細胞通過TCR只能識別帶有相應(yīng)(填“抗原”或“抗體”)的腫瘤細胞。

(2)為阻斷圖2中腫瘤細胞的免疫逃逸通路,可利用細胞工程中制備技術(shù),制備抗(填“PD1”或“PDL1”)的抗體。該抗體注入體內(nèi)后可通過體液傳送與腫瘤細胞相結(jié)合,從而解除腫瘤細胞對細胞毒性T細胞的活化抑制。

(3)該種抗體的制備流程如下圖所示:步驟①和步驟⑤應(yīng)分別向小鼠注射和。過程③中存活的細胞為。

(4)為應(yīng)用于腫瘤的臨床免疫治療,需對上述抗體進行人源化改造。除抗原結(jié)合區(qū)域外,其他部分都替換為人抗體區(qū)段,這樣做的目的是。該種嵌合抗體的研制過程屬于工程的研究范疇。

答案(1)蛋白質(zhì)抗原(2)單克隆抗體PDL1(3)PDL1蛋白能分泌抗PDL1抗體的雜交瘤細胞雜交瘤細胞(4)降低免疫排斥蛋白質(zhì)解析(1)細胞毒性T細胞可依靠其表面受體(TCR)識別抗原,識別帶有同樣抗原的腫瘤細胞對其進行裂解,TCR的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)。(2)由圖2可知,腫瘤細胞表面的PDL1通過與細胞毒性T細胞表面的PD1蛋白特異性結(jié)合,抑制細胞毒性T細胞的增殖分化,從而逃避免疫系統(tǒng)的攻擊,故可以通過注射抗PDL1抗體阻斷腫瘤細胞的逃逸通路。制備該種抗體需要用到單克隆抗體技術(shù)。抗PDL1抗體進入人體后,通過體液運輸與腫瘤細胞表面的PDL1蛋白結(jié)合,從而解除腫瘤細胞對細胞毒性T細胞的活化抑制。(3)在進行單克隆抗體制備時首先要向小鼠注射相應(yīng)的抗原即PDL1蛋白,以刺激免疫系統(tǒng)相應(yīng)細胞的增殖。第⑤步時需將能分泌抗PDL1抗體的雜交瘤細胞注入小鼠腹腔內(nèi),使其增殖。過程③是用選擇培養(yǎng)基篩選相互融合的雜交瘤細胞,在此培養(yǎng)基中存活的細胞為雜交瘤細胞。(4)由于單克隆抗體是利用鼠的骨髓瘤細胞與漿細胞融合而成的雜交瘤細胞分泌產(chǎn)生的,對人來說是異物,將該單克隆抗體注入人體后會引起免疫排斥反應(yīng)。為了降低免疫排斥,需要對單克隆抗體進行改造,除抗原結(jié)合區(qū)域外,其他部分都替換成人抗體區(qū)段。對這種現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行進一步的加工、修飾和改造屬于蛋白質(zhì)工程的研究范疇。突破點3表達載體的構(gòu)建及基因編輯技術(shù)12.如圖為某質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。某基因不含圖中限制酶識別序列,為使PCR擴增的該基因與該質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒,則擴增的該基因兩端需分別引入哪兩種限制酶的識別序列?()注:圖中限制酶的識別序列及切割形成的黏性末端均不相同。A.NdeⅠ和BamHⅠB.NdeⅠ和XbaⅠC.XbaⅠ和BamHⅠD.EcoRⅠ和KpnⅠ答案A解析構(gòu)建重組質(zhì)粒時,要將目的基因插入啟動子和終止子之間,而且不能破壞啟動子、終止子、復(fù)制原點、抗生素抗性基因等部位。故只能選用NdeⅠ和BamHⅠ切割質(zhì)粒,因此在PCR擴增的該基因的兩端需分別引入NdeⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列。13.(2024·山東威海二模)ω3多不飽和脂肪酸(LCPUFA)有預(yù)防心血管疾病的作用,但大多數(shù)動物體內(nèi)不能合成?？蒲腥藛T利用轉(zhuǎn)染技術(shù)(將外源DNA轉(zhuǎn)入受體細胞的技術(shù))將LCPUFA—合成酶基因(fat1基因,含1229bp)導(dǎo)入小鼠受精卵,培育出轉(zhuǎn)基因小鼠,基本流程如圖甲所示。圖乙表示提取不同實驗組別小鼠受精卵DNA后,利用fat1基因的引物進行PCR擴增后電泳的結(jié)果。下列說法錯誤的是()甲乙A.采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可確保圖甲中轉(zhuǎn)染的效果B.PCR擴增3輪后,只含一種引物的DNA分子的比例為1/4C.由圖乙可知,只有2組轉(zhuǎn)染成功D.若fat1基因單點插入,則轉(zhuǎn)基因小鼠相互交配產(chǎn)生的大多數(shù)后代體內(nèi)能合成LCPUFA答案A解析農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法適用于植物細胞,對于動物細胞受精卵應(yīng)采用顯微注射法導(dǎo)入目的基因,A項錯誤;PCR擴增3輪后,共得到8個DNA分子,只有最原始的1個DNA分子的兩條鏈不含引物,導(dǎo)致含有這兩條鏈的2個DNA分子只含有其中一種引物,其余6個DNA分子均含有兩種引物,故PCR擴增3輪后,只含一種引物的DNA分子的比例為1/4,B項正確;分析圖乙,M2組和1組沒有擴增出DNA片段,故細胞內(nèi)不存在目的基因,即可能是細胞內(nèi)導(dǎo)入PEB質(zhì)?；蛘呶闯晒D(zhuǎn)染,而M2組是PEB質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞PCR產(chǎn)物,故1組是未成功轉(zhuǎn)染細胞PCR產(chǎn)物,2組出現(xiàn)一條DNA條帶,即為目的基因條帶,2組是成功轉(zhuǎn)染細胞PCR產(chǎn)物,C項正確;若fat1基因單點插入,相應(yīng)的基因型表示為FO,則轉(zhuǎn)基因小鼠相互交配后代基因型為1FF、2FO、1OO,即產(chǎn)生的大多數(shù)后代體內(nèi)能合成LCPUFA,D項正確。14.(2024·山東模擬改編)研究人員用酶M和酶N兩種限制酶同時處理某DNA分子和質(zhì)粒,得到的DNA片段如圖所示。圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類,其他堿基的種類未注明。下列敘述錯誤的是()A.該DNA分子和質(zhì)粒上均含有酶M的一個切割位點和酶N的一個切割位點B.根據(jù)圖示信息不能確定圖中形成的不同黏性末端與這兩種限制酶的對應(yīng)關(guān)系C.用T4DNA連接酶可以將片段乙和片段丁連接起來D.片段乙、片段丁、片段戊可依次連接形成一個環(huán)狀DNA分子答案D解析該DNA分子經(jīng)酶M和酶N兩種限制酶切割后,產(chǎn)生了三個DNA片段且兩個切口形成的黏性末端不同,說明該DNA分子含有酶M的一個切割位點和酶N的一個切割位點,質(zhì)粒為環(huán)狀DNA,其經(jīng)酶M和酶N兩種限制酶切割后,產(chǎn)生了兩個DNA片段,觀察兩個切口形成的黏性末端,可推出質(zhì)粒含有酶M的一個切割位點和酶N的一個切割位點,A項正確;根據(jù)圖中黏性末端可知,酶M和酶N識別的序列可能是或,但無法確定其對應(yīng)關(guān)系,B項正確;圖中經(jīng)酶切后形成的片段均是黏性末端,T4DNA連接酶可以“縫合”雙鏈DNA片段互補的黏性末端,片段乙和片段丁黏性末端互補,C項正確;根據(jù)圖中黏性末端可知,片段乙、片段丁、片段戊三個片段不能連接成環(huán)狀DNA分子,D項錯誤。15.(2024·重慶二模)單細胞生物并沒有免疫系統(tǒng),但是科學(xué)家發(fā)現(xiàn)細菌中存在消除入侵病毒DNA的功能系統(tǒng),并發(fā)明了CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)。該系統(tǒng)主要包含單鏈向?qū)NA和Cas9蛋白兩個部分,能特異性識別并結(jié)合特定的DNA序列,從而引導(dǎo)Cas9蛋白到相應(yīng)位置并剪切DNA,最終實現(xiàn)對靶基因序列的編輯。下列敘述錯誤的是()A.Cas9蛋白通過切斷磷酸二酯鍵對DNA進行剪切B.CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)本質(zhì)上是對靶基因進行編輯引發(fā)染色體結(jié)構(gòu)變異C.識別序列與β鏈存在的堿基互補配對方式為U—A、A—T、G—C、C—GD.向?qū)NA的序列越短,會導(dǎo)致脫靶率越高答案B解析Cas9蛋白作用對象是DNA,通過切斷磷酸二酯鍵對DNA進行剪切,A項正確;CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)本質(zhì)上是對靶基因進行編輯引發(fā)基因突變,B項錯誤;根據(jù)堿基互補配對原則可推測,識別序列RNA與β鏈存在的堿基互補配對方式為U—A、A—T、G—C、C—G,C項正確;向?qū)NA的序列越短,其結(jié)合的區(qū)域隨機性增加,進而導(dǎo)致脫靶率越高,D項正確。16.(2024·山東菏澤二模)(12分)由P基因編碼的P蛋白是一種水通道蛋白,該蛋白在植物調(diào)節(jié)水分吸收方面發(fā)揮著重要作用?？蒲腥藛T成功培育出超量表達P蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米。培育過程中所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點如圖1所示。圖1注:MunⅠ:5'C↓AATTG3'、SpeⅠ:5'A↓CTAGT3'、XbaⅠ:5'T↓CTAGA3'、EcoRⅠ:5'G↓AATTC3'。(1)構(gòu)建基因表達載體時,切割Ti質(zhì)粒應(yīng)選用酶。從切割DNA片段和Ti質(zhì)粒到構(gòu)建基因表達載體完成共需種酶。

(2)將農(nóng)桿菌浸泡過的玉米愈傷組織進行植物組織培養(yǎng),培養(yǎng)基中需加入(填“潮霉素”“卡那霉素”或“潮霉素或卡那霉素”)進行篩選,理由是。篩選出的愈傷組織最終培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因玉米。

(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法除了用于獲取轉(zhuǎn)基因植物外,還可以通過TDNA插入基因內(nèi)部使基因沉默,獲得突變體。為了獲得mm突變體,某科研小組利用野生型MM,