2024北京生物高考專題復(fù)習(xí)-專題24 基因工程

專題24基因工程

五年高考

考點基因工程

1.（2320北京.12.2分）為了對重金屬污染的土壤進行生物修復(fù).研究者將從楊樹中克隆的重金屬轉(zhuǎn)運蛋白（HMA3層因與外源高

效啟動子連接.導(dǎo)入楊樹基因組中（如圖），

楊樹內(nèi)唆楊樹內(nèi)

源DNA源l）、A

-I//I/A3堪閃卜止

±至a±

（注：①、②、③、④表小引揚）

為檢測獲得的轉(zhuǎn)基因楊樹苗中是否含有導(dǎo)入的HMA3基因.同時避免內(nèi)源HMA3基因的干擾.在進行PCR擴增時.應(yīng)選擇的引

物組合是（）

A.①+③B.①+（②

C.③+②D.（D+^）

答案B

242J18北京理綜56分）用XhoI和SalI兩種限制性核酸內(nèi)切酶（限制性內(nèi)切核酸酶）分別處理同一DNA片段，酶切位點及酶切

產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。以下敘述不乏碉的是（）

-XahoIS露alISa▲lISal1XhoI

圖I酶切位點圖

①②

圖2電泳結(jié)果示意圖

A.圖I中兩種酶識別的核吉酸序列不同

B.圖2中的切產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組DNA

C泳道①中是用SalI處理得到的酶切產(chǎn)物

D.圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA

答案D

3.（2323浙江I月選考22分）以哺乳動物為研究對象的生物技術(shù)已獲得了長足的進步.對生物技術(shù)應(yīng)用于人類,在安全與倫理

方面有不同的觀點，下列敘述正確的是（）

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A.試管嬰兒技術(shù)應(yīng)全面禁止

氏治療性克隆不需要監(jiān)控和審查

C生殖性克隆不存在倫理道德方面的風(fēng)險

D.我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗

答案D

4.（2323新課標66分）某同學(xué)擬用限制陶酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具.將目的基因（兩端含相應(yīng)限制騎的識別

序歹J和切割位點）和質(zhì)粒進行切割、連接.以構(gòu)建重組表達載體。限制酶的切割位點如圖所示。

II

5,-GAATTC-3,5'-GGATCC-3'

3'-CTTAAC-5'3'-CCTACC-5'

tt

醐I前2

II

5'-CCCGGG-3'5r-AGATCT-3'

3,-GGGCCC-5/3,-TCTAGA-5

If

艇3彬4

下列重組表達載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是（）

A.質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接

B.質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割.用T4DNA連接酶連接

C.質(zhì)粒和目的基因都用酶I和酶2切割用T4DNA連接酶連接

D.質(zhì)粒和目的基因都用前2和前4切割.用E.coliDNA連接酶連接

答案C

5.（2322山東J3.2分）關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法錯誤的是（）

A.過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解

B.離心研磨液是為了加速DNA的沉淀

C.在一定溫度下,DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍色

D.粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)

答案B

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6.（2322遼寧」2,2分）抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12-5是我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種.為給監(jiān)管轉(zhuǎn)基因生物安全提供依據(jù)，采用

PCR方法進行目的基因監(jiān)測,反應(yīng)程序如圖所示。下列敘述正確的是（）

頸變性變性

94*12.1min94匕30,延伸后延伸

［復(fù)性/7272V.Amin

581c,30s

-35次循環(huán)?

A.預(yù)變性過程可促進模板DNA邊解旋邊復(fù)制

B.后延伸過程可使目的基因的擴增更加充分

C延伸過程無需引物參與即可完成半保留復(fù)制

D.轉(zhuǎn)基因品種經(jīng)檢測含有目的基因后即可上市

答案B

7.（2321湖北16.2分）某實驗利用PCR技術(shù)獲取目的基因.實驗結(jié)果顯示除目的基因條帶（引物與模板完全配對）處還有2條非特

異條帶（引物和模板不完全配對）。為了減少反應(yīng)中非特異條帶的產(chǎn)牛.以下措施中有效的是（）

A.增加模板DNA的量B.延長蝌性的時間

C.延長延伸的時間D.提高復(fù)性的溫度

答案D

8.（2321江蘇.13,2分）如圖是剔除轉(zhuǎn)基因植物中標記基因的一種策略.下列柜關(guān)敘述惜誤的是（）

無篩選標記轉(zhuǎn)基因植株

II的

基因農(nóng)桿菌I雜交分離

GOIGOI共

12

SW6

A.分別帶有目的基因和標記基因的兩個質(zhì)粒，都帶有T-DNA序列

B.該方法建立在高轉(zhuǎn)化頻率基礎(chǔ)上，標記基因和目的基因須轉(zhuǎn)到不同染色體上

C.若要獲得剔除標記基囚的植株,轉(zhuǎn)化植株必須經(jīng)過有性繁殖階段遺傳重組

D.獲得的無篩選標記轉(zhuǎn)基因植株發(fā)生了染色體結(jié)構(gòu)變異

答案D

9.（2321遼寧J4.2分）騰水合酶（No）廣泛應(yīng)用于環(huán)境保護和醫(yī)藥原料生產(chǎn)等領(lǐng)域.但不耐高溫.利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)在N。的a和p

亞基之間加入一段連接肽.可獲得熱穩(wěn)定的融合判青水合酶（NO。下列有關(guān)敘述錯誤的是（）

A.N.與No氨基酸序列的差異是影響其熱穩(wěn)定性的原因之一

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B.加入連接肽需要通過改造基因?qū)崿F(xiàn)

C.獲得Ni的過程需要進行轉(zhuǎn)錄和翻譯

D.檢測N1的活性時先將N.與底物充分混合.再置于高溫環(huán)境

答案D

10.(2022北京,21.11分)生態(tài)文明建設(shè)已成為我國的基本國策。水中雌激素類物質(zhì)(E物質(zhì))污染會導(dǎo)致魚類雌性化等異常.并通

過食物搪影響人體健康和生態(tài)安全。原產(chǎn)南亞的斑馬魚、其肌細胞、生殖細胞等存在E物質(zhì)受體,且幼體透明?？茖W(xué)家將綠色熒

光蛋白(GFP)等基因轉(zhuǎn)入斑馬魚.建立了一種經(jīng)濟且快速的水體E物質(zhì)監(jiān)測方法。

(I)將表達載體導(dǎo)入斑馬魚受精卵的最佳方式是.

(2)為監(jiān)測E物質(zhì)，研究者設(shè)計了如圖所示的兩種方案制備轉(zhuǎn)基因斑馬魚，其中ERE和酵母來源的UAS是兩種誘導(dǎo)型啟動子，分

別被E物質(zhì)-受體復(fù)合物和酵母來源的Gal4蛋白特異性激活,啟動下游基因表達。

?:.E物質(zhì)

,產(chǎn))受體

OE物質(zhì)-受體經(jīng)合物

I轉(zhuǎn)及inRNA副浮

/匚衛(wèi)生(；FP蛋白

ERECFP基因終止于

方案I

:?E物質(zhì)

?衿)受體

OE物質(zhì)-受體經(jīng)合物

VAS基因終止了

方案2

與方案1相比.方案2的主要優(yōu)勢是.囚而被用于制備監(jiān)測魚(MO)。

(3)現(xiàn)擬制備一種不育的監(jiān)測魚SM.用于實際監(jiān)測。SM需經(jīng)MO和另一親本(X)雜交獲得。欲獲得X,需從以下選項中選擇啟動

子和基因、構(gòu)建表達載體并轉(zhuǎn)入野生型斑馬魚受精卵.經(jīng)培育后進行篩選。請將選項的序號填入相應(yīng)的方框中.

0-0—?

I.啟動子：

①ERE②UAS③使基因僅在生殖細抱表達的啟動子(P生)④使基因僅在肌細胞表達的啟動子(P肌)

第4頁共24頁

II.基因:

A.GFPB.Gal4C.雌激素受體基因(ER)D.僅導(dǎo)致生殖細胞凋亡的基因(dg)

(4)SM不育的原因是:成體SM自身產(chǎn)生雌激素、與受體結(jié)合后_______________________________________________________

造成不育。

(5)使擬用于實際監(jiān)測的SM不育的目的是。

答案⑴顯微注射(2)監(jiān)測靈敏度更高(3)②D(4)激活ERE誘導(dǎo)6；|4表達0；|14結(jié)合1^$誘導(dǎo)^18表達生殖細胞凋亡

(5)避免轉(zhuǎn)基因斑馬魚逃逸帶來生物安全問題

11.(2020北京,17,12分)枯草芽泡桿菌可分泌纖維素酶.研究者篩選到一株降解纖維素能力較強的枯草芽抱桿菌菌株(B菌)，從

中克隆得到了一種纖維素酶(G酶)基因,將獲得的Ci酎基因與高效表達載體(HT質(zhì)粒)連接,再導(dǎo)入B菌,以期獲得降解纖維素

能力更強的工程菌。

⑴纖維素屬于糖.因此經(jīng)過一系列酶催化最終可降解成單糖，該單糖是.

(2)對克隆到的G酶基因測序，與觸庫中的Ci酶基因編碼序列相比有兩個堿基對不同,但兩者編碼出的蛋白的氨基酸序列相同.

這是因為?

(3)Ci酶基因以B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈.轉(zhuǎn)錄時mRNA自身的延伸方向為為了使。酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT

質(zhì)粒連接.克隆G的基因時在其兩端添加了SmaI和BamllI的酶切位點。該基因內(nèi)部沒有這兩種酶切位點。圖1中酶切位點

I和2所對應(yīng)的酶分別是

前切位點1陰切位點2

Q酶塔因八呼5,||r

晦3'切5'

I連接、

\心

/4啟動了

HT質(zhì)粒

------------------1

f圖I

圖2

(4H密纖維素含量為20%的培養(yǎng)基分為三組，一組接種工程菌.對照組I不進行處理.對照組2進行相應(yīng)處理。在相同條件下培養(yǎng)

96小時.檢測培養(yǎng)基中纖維素的含量。結(jié)果(圖2)說明工程菌降解纖維素的能力最強。對照組2的處理應(yīng)

為,

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（5）預(yù)期該工程菌在處理廢棄物以保護環(huán)境方面可能的應(yīng)用。（舉一例）

答案⑴多葡萄糖（2）編碼同一種氨基酸的密碼子可以有多個（3）BamH1.SmaI（4）接種（等量）B菌⑸處理綠化廢

棄物，’處理農(nóng)作物秸稈

12.（2023全國甲,38.15分）接種疫苗是預(yù)防傳染病的一項重要措施，乙肝疫苗的使用可有效阻止乙肝病毒的傳播,降低乙型肝炎

發(fā)病率。乙肝病毒是一種DNA病毒。重組乙肝疫苗的主要成分是利用基因工程技術(shù)獲得的乙肝病毒表面抗原（一種病毒蛋白）。

回答下列問題。

（I）接種上述重組乙肝疫苗不會在人體中產(chǎn)生乙肝病毒.原因是

__?

（2）制備重組乙肝疫苗時，需要利用重組表達載體將乙肝病毒表面抗原基因（目的基因）導(dǎo)入酵母細胞中表達。重組表達載體中通

常含有抗生素抗性基因，抗生素抗性基因的作用是.能識別載體中的啟動子并驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄

的酶是.

（3）目的基因?qū)虢湍讣毎?若要檢測目的基因是否插入染色體中.需要從醉母細胞中提取進行DNA分子雜

交.DNA分子雜交時應(yīng)使用的探針是_

__?

（4）若要通過實驗檢測目的基因在酵母細胞中是否表達出目的蛋白，請簡要寫出實驗思路。

答案（D該疫苗不含乙肝病毒DNA.不會在人體細胞內(nèi)增殖產(chǎn)生乙肝病毒（2）作為標記基因篩選出轉(zhuǎn)化成功的酵母細胞

RNA聚合酶（3）基因組DNA放射性同位素等標記的含有目的基因的DNA片段（4）從酵母細胞中提取蛋白質(zhì).用乙肝病毒

表面抗原的特異性抗體進行抗原-抗體雜交.若有雜交帶出現(xiàn),說明酵母細胞中表達出目的蛋白。

13.（2023全國乙,38,15分）GFP是水母體內(nèi)存在的能發(fā)綠色熒光的一種蛋白?？蒲腥藛T以GFP基因為材料,利用基因工程技術(shù)獲

得了能發(fā)其他顏色熒光的蛋白.豐富了熒光蛋白的顏色種類?；卮鹣铝袉栴}，

（I胸建突變基因文庫?？蒲腥藛T將GFP基因的不同突變基因分別插入載體.并轉(zhuǎn)入大腸桿菌制備出GFP基因的突變基因文庫。

通常.基因文庫是指O

（2胸建目的基因表達載體?？蒲腥藛T從內(nèi)建的GFP突變基因文庫中提取目的基因（均為突變基因）構(gòu)建表達載體.其模式圖如下

所示（箭頭為GFP突變基因的轉(zhuǎn)錄方向）。圖中①為；②為，其作用是；圖中氨節(jié)

青霉素抗性基因是一種標記基因，其作用是0

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⑶目的基因的表達。科研人員將構(gòu)建好的表達載體導(dǎo)入大腸桿菌中進行表大，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌有的發(fā)綠色熒光，有的發(fā)黃色熒光,

有的不發(fā)熒光。請從密碼子特點的角度分析，發(fā)綠色熒光的可能原因是（答出I

點即可）。

（4）新蛋白與突變基因的關(guān)聯(lián)性分析。將上述發(fā)黃色熒光的大腸桿菌分離純化后.對其所含的GFP突變基因進行測序.發(fā)現(xiàn)其堿

基序列與GFP基因的不同.將該GFP突變基因命名為YFP基因（黃色熒光蛋白基因）。若要通過基因工程的方法探究YFP基因

能否在真核細胞中表達，實驗思路是.

答案（1）將含有某種生物不同基因的許多DNA片段.導(dǎo)入受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因

（2）終止子啟動子識別和結(jié)合RNA聚合酶.驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄將含有目的基因的細胞篩選出來（3）密碼子的簡并性（4）

獲取YFP基因并構(gòu)建表達載體，導(dǎo)入真核細胞，檢驗其能否發(fā)出黃色熒光

14.（2023海南,20,13分）基因遞送是植物遺傳改良的重要技術(shù)之一，我國多個實驗室合作開發(fā)了一種新型基因遞送系統(tǒng)（切-浸

一生芽Cul-Dip-Budding,簡稱CDB法）。圖1與圖2分別是利用常規(guī)轉(zhuǎn)化法和CDB法在某植物中遞送基因的示意圖。

幅株A|一帆麗一帆傷組織I一幗傷組織與含重組載I

體的農(nóng)桿菌共培養(yǎng)I第遂泡苗|一母可

mA

圖?

切斷根莖

連接處

下直株上半部分

沒人含于組建

體的農(nóng)桿菌液|’幅株長出

篩選

毛狀根|與切］陽福

生芽

狀根段［盤栽］幼苗|一廚^

SSB

圖2

回答下列問題。

⑴圖1中.從外植體轉(zhuǎn)變成愈傷組織的過程屬于:從愈傷組織到幼苗的培養(yǎng)過程需要的激素有生長素和.

該過程還需要光照.其作用是。

⑵圖1中的愈傷組織，若不經(jīng)過共培養(yǎng)環(huán)節(jié)，直接誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的植株可以保持植株A的.圖I中,含有外源基因

的轉(zhuǎn)化植株A若用于生產(chǎn)種子,其包裝需標注.

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（3）圖1與圖2中，農(nóng)桿菌侵染植物細胞時，可將外源基因遞送到植物細胞中的原因

是.

（4）已知某酶（PDS）缺失會導(dǎo)致植株白化。某團隊構(gòu)建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因編輯載體（含有綠色熒光蛋白標

記基因）.利用圖2中的CDB法將該重組載體導(dǎo)入植株B.長出毛狀根、成功獲得轉(zhuǎn)化植株B。據(jù)此分析、從毛狀根中獲得陽性毛

狀根段的方法是.圖2中.鑒定導(dǎo)入幼苗中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法

是，依據(jù)是0

（5方常規(guī)轉(zhuǎn)化法相比，采用CDB法進行基因遞送的優(yōu)點是（答出2點即可）。

答案⑴脫分化細胞分裂素誘導(dǎo)葉綠素的形成.使幼苗能夠進行光合作用（2）遺傳特性轉(zhuǎn)基因種子⑶農(nóng)桿菌細胞內(nèi)

含Ti質(zhì)粒,當(dāng)它侵染植物細胞后，能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移并整合到受體細胞染色體DNA上（4）檢測毛狀根段是否有綠

色熒光植物PDS中靶區(qū)域測序（或根據(jù)PDS基因的堿基序列設(shè)計引物進行PCR擴增）若導(dǎo)入幼苗的基因編輯載體成功發(fā)

揮作用，則PDS基因被敲除，靶區(qū)域的測序就會出現(xiàn)序列缺失，（或PCR無法擴增出條帶）（5）不需要無菌操作、不需要進行植物

組織培養(yǎng)、操作簡便

15.（2023湖南,21.13分）某些植物根際促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等作用?；卮鹣铝袉栴}：

（1）若從植物根際土壤中篩選分解淀粉的固氮細菌、培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括水和。

（2）現(xiàn)從植物根際土壤中篩選出一株解淀粉芽抱桿菌H,其產(chǎn)生的抗菌肽抑菌效果見表。據(jù)表推測該抗菌肽7寸

的抑制效果較好.若要確定其有抑菌效果的最低濃度，需在Mg-mL濃度區(qū)間進一步實驗。

抗菌肽濃度（陽-mL1）

測試菌

55.2027.6013.8（）6.9（）3.451.730.86

金黃色葡

-----++

萄球菌

枯草芽

......................++

抱桿菌

禾谷鐮

-++++++

泡菌

假絲酵母-++++++

注:“+”表示長菌，表示未長菌

（3）研究人員利用解淀粉芽抱桿菌H的淀粉酶編碼基因M構(gòu)建高效表達質(zhì)粒載體.轉(zhuǎn)入大腸桿菌成功構(gòu)建基因工程菌A.在利

用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉醒M過程中.傳代多次后.生產(chǎn)條件未變,但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶Mo分析可能的原因是

（答出兩點即可）。

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⑷研究人員通過肺上皮干細胞誘導(dǎo)生或市類器官，可自組裝或與成熟細胞組裝成市類裝配體，如圖所示。肺類輟體培養(yǎng)需要

滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及（答出兩點）等基本條件。肺類裝配體形成過程中是否運

用了動物細胞融合技術(shù)?（填“是”或“否”）.

肺呷S:細t胞初錄細胞

（一分化―II篩選

肺類器官A肺類器官BV"

肺類裝配體】肺類裝配體2

（5）耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是一種耐藥菌.嚴重危害人類健康?？蒲腥藛T擬用MRSA感染M類裝配體建立感染模型.

來探究解淀粉芽抱桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力。以下實驗材料中必備的是0

①金黃色葡萄球菌感染的肺類裝配體

②MRSA感染的肺類裝配體

③解淀粉芽抱桿菌H抗菌肽

④生理鹽水

⑤青霉素（抗金黃色葡萄球菌的藥物）

⑥萬古霉素（抗MRSA的藥物）

答案⑴淀粉、無機鹽（2）金黃色葡萄球菌和枯草芽抱桿菌1.73~3.45⑶淀粉酶M基因發(fā)生突變或含有M基因的表達載

體丟失（4）適宜的氣體和無菌、無毒的環(huán)境否（5）②③④⑥

16.（2023廣東20.14分）種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對野生型擬南芥（2n=10）進行誘變.篩選到一株種子增大的突變

體。通過遺傳分析和測序發(fā)現(xiàn)野生型DA1基因發(fā)生一個堿基G到A的替換.突變后的基因為隱性基因.據(jù)此推測突變體的表型

與其有關(guān)、開展相關(guān)實驗。

回答下列問題：

（I*以采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DA1基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型碰由該突變造成，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應(yīng)與—

植校的種子大小相近。

（2）用PCR反應(yīng)擴增DA1基因、用限制性核酸內(nèi)切酶對PCR產(chǎn)物和進行切割.用DNA連接酶將兩者連接。為確

保插入的DA1基因可以正常表達.其上下游序列需具備。

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（3）轉(zhuǎn)化后,T-DNA（其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時不發(fā)生交換）可在基因組單一位點插入也可以同時插入多個位點。在插入片段均遵

循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單一位點插入的植株，并進一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株（圖1）.月于后續(xù)驗證突

變基因與表型的關(guān)系。

農(nóng)桿菌（T-DNA攜帶D\I基因和

卡那寄素抗性基因）

?銀沒于空乎藥液進行，化

卡那寄素選4&卜那?&泰選4屋卜那儺索選

”代擇培養(yǎng)胚篩擇培養(yǎng)居篩擇培養(yǎng)睡篩

選種子選種f選種子

①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化To代植株并自交.將Ti代種子播種在選擇培養(yǎng)基上.能夠萌發(fā)并生長的陽性個體即表示其基因組中插入

②「代陽性植株自交所得的T2代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基,選擇陽性率約—％的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。

③將②中選出的T2代陽性植株（填“自交”“與野生型雜交”或“與突變體雜交”）所得的Ta代種子按單株收種

并播種于選擇培養(yǎng)基，陽性率達到%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標轉(zhuǎn)基因植株。

為便于在后續(xù)研究中檢測該突變.研究者利用PCR擴增野生型和突變型基因片段.再使用限制性核酸內(nèi)切酹X切割產(chǎn)物.

通過核酸電泳即可進行突變檢測.相關(guān)信息見圖2,在電泳圖3中將酶切結(jié)果對應(yīng)位置的條帶涂黑。

…皿5'CCIITTCArrUAGGACTCTGCCrTTTACAACTTA3'

TI"

yGGAAAAGTAA……CTCCTGAGACCCAA……AATCTTCAAT5'（150bp）

突變以5'CCTTTTCATr.......AJAGGACTCTGCCTT?…TTACAACTTA

yGGAAAAGTAA.......TTCCTCAGACCGAAAATGTTCAAT5'（150則

限制性內(nèi)切酶XAAGGNNNNNNCCTT

識別及切割序列TTCCNNNNNNCCAA（、代表任意核苛酸）

標潛參照物野生型突變型

150郵

100bp

（hp指核甘酸對）

50bp

答案⑴野生型⑵基因表達載體（或質(zhì)粒.或載體）啟動子、終止子⑶①T-DNA片段（或DA1基因或目的基因）②75

③自交100

標批參照物卻生型突變型

150hp

100bp

（hp指核昔暇對）

(4)SObp

17.（2023山東,25,10分）科研人員構(gòu)建了可表達J-V5融合蛋白的重組質(zhì)粒并進行了檢測.該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖甲所示。其中

V5編碼序列表達標簽短肽V5.

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啟動子唐因丫5編碼序列終止子

鏈

*?mKIK2

注：Fl、F2、Hl,H2表示引物

圖甲

條帶1?■條帶1

012

抗J諾白抗體抗V5抗體

圖乙

（1）與圖甲中啟動子結(jié)合的酶是o除圖甲中標出的結(jié)構(gòu)外.作為載體.質(zhì)粒還需具備的結(jié)構(gòu)有

（答出2個結(jié)構(gòu)即可）。

（2胸建重組質(zhì)粒后，為了確定J基因連接到質(zhì)粒中且插入方向正確.需進行PCR檢測.若僅用一對引物.應(yīng)選擇圖甲中的引

物.已知J基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈位于b鏈.由此可知引物F1與圖甲中J基因的（填“a鏈”或“b鏈”）相應(yīng)部

分的序列相同.

（3）豆組質(zhì)粒在受體細胞內(nèi)正確表達后，用抗J蛋白抗體和抗V5抗體分別檢測相應(yīng)蛋白是否表達以及表達水平,結(jié)果如圖乙所示。

其中，出現(xiàn)條帶1證明細胞內(nèi)表達了，條帶2所檢出的蛋白（填“是”或“不是”）由重組質(zhì)粒上的J基

因表達的。

答案⑴RNA聚合酶標記基因、復(fù)制原點（或限制性酶切位點）（2）F2和R1（或“F1和R2"）a鏈

（3）J-V5融合蛋白不是

18.（2022湖南.22.15分）水蛭是我國的傳統(tǒng)中藥材.主要藥理成分水蛭素為水連蛋白中重要成分之一.具有良好的抗凝血作用。擬

通過蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu).提高其抗凝血活性?；卮鹣铝袉栴}：

⑴覆白質(zhì)工程流程如圖所示物質(zhì)a是物質(zhì)b是.在生產(chǎn)過程中，物質(zhì)b可能不同.合成的蛋白質(zhì)空間構(gòu)

象卻相同，原因是—

---預(yù)期功能

—?生物功能

（2）^白質(zhì)工程是基因工程的延伸，基因工程中獲取目的基因的常用方法有、和利用PCR技術(shù)

擴增。PCR技術(shù)遵循的基本原理是,

（3）將提取的水捱蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后.分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性，結(jié)果如圖所示。推測兩種處理后

酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的（填“種類”或“含量”）有關(guān).導(dǎo)致其活性不同的原因是

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0246810

陶甲處理

筋乙處理

版解時間（h）

（4）若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水姓蛋白酶解產(chǎn)物和天然水拴素的抗凝血活性差異.簡要寫出實臉設(shè)計思路一

答案（1）多肽鏈.nRNAmRNA上決定氨基酸的密碼子具有簡并性（2）從基因文庫中獲取人工合成DNA半保留復(fù)制

（3）種類酶處理后形成的肽中氨基酸的種類、數(shù)目和排列順序不同（4）在唱同條件下.將蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、水蛭蛋

白帖解產(chǎn)物和天然水蛭素分別進行抗凝血實驗上戚三組血液凝固所需時間長短.所需時間越長說明其抗凝血活性越大

19.（2022山東,25,12分）某種類型的白血病由蛋白P引發(fā).蛋白UBC可使P被蛋白酶識別并降解，藥物A可通過影響這一過程對

該病起到治療作用。為探索藥物A治療該病的機理，需構(gòu)建重組載體以獲得融合蛋白FLAG-P和FLAG-PA。PA是缺失特定氨

基酸序列的P.FLAG是一種短肽,連接在P或PA的氨基端.使融合蛋白能與含有FLAG抗體的介質(zhì)結(jié)合，但不影響P或PA的功

能。

（1）為構(gòu)建重組載體.需先設(shè)計引物.通過PCR特異性擴增P基因。用于擴增P基因的引物需滿足的條件

是。為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割.需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識別序列.該限制屬

識別序列應(yīng)添加在引物的（填“3端”或“5端”）.

⑵PCR擴增得到的P基因經(jīng)酶切連接插入載體后，與編碼FLAG的序列形成一個融合基因，如圖甲所示，其中“ATGTGCA”為

P基因編碼鏈起始序列。將該重組載體導(dǎo)入細胞后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA序列正確,翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸

序歹」正確.但P基因?qū)?yīng)的氨基酸序列與P不同。據(jù)圖甲分析，出現(xiàn)該問題的原因

是。修改擴增P基因時使用的帶有EcoRI識^序列的弓I物來解決該問題,

具體修改方案是O

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