臨床檢驗(yàn)科操作SOP

一、檢驗(yàn)科檢測項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（見附錄）A、臨檢室A1、血常規(guī)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程A2、尿常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程B、生化室B1、糖尿病檢測（診斷酶聯(lián)試劑盒）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程二、檢驗(yàn)室工作流程圖各實(shí)驗(yàn)室接收各類標(biāo)本并核對各實(shí)驗(yàn)室接收各類標(biāo)本并核對定期檢驗(yàn)標(biāo)本當(dāng)天檢驗(yàn)標(biāo)本特殊結(jié)果或疑難結(jié)果，報(bào)各實(shí)驗(yàn)室組長簽發(fā)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室技術(shù)主管核準(zhǔn)質(zhì)控及分析結(jié)果記錄儀器有關(guān)參數(shù)室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果室內(nèi)質(zhì)量控制調(diào)整各類儀器運(yùn)行狀態(tài)檢驗(yàn)分析按要求處理標(biāo)本、存放貼條碼編號，并處理標(biāo)本

定期檢驗(yàn)標(biāo)本當(dāng)天檢驗(yàn)標(biāo)本特殊結(jié)果或疑難結(jié)果，報(bào)各實(shí)驗(yàn)室組長簽發(fā)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室技術(shù)主管核準(zhǔn)質(zhì)控及分析結(jié)果記錄儀器有關(guān)參數(shù)室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果室內(nèi)質(zhì)量控制調(diào)整各類儀器運(yùn)行狀態(tài)檢驗(yàn)分析按要求處理標(biāo)本、存放貼條碼編號，并處理標(biāo)本住院病人就診檢驗(yàn)流程醫(yī)生在電腦網(wǎng)絡(luò)中申請檢驗(yàn)項(xiàng)目醫(yī)生在電腦網(wǎng)絡(luò)中申請檢驗(yàn)項(xiàng)目申請、填寫檢驗(yàn)申請輸入電腦網(wǎng)絡(luò)各類穿刺液等各類穿刺液等護(hù)士工作站打印條碼粘貼護(hù)士工作站打印條碼粘貼大小便血液大小便血液囑病人按要求留取標(biāo)本穿刺標(biāo)本按要求處理囑病人按要求留取標(biāo)本穿刺標(biāo)本按要求處理按有關(guān)要求抽取血液樣本按有關(guān)要求抽取血液樣本 送回各病房并簽收各實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后簽發(fā)報(bào)告單具體實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)檢驗(yàn)科各實(shí)驗(yàn)室簽收

送回各病房并簽收各實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后簽發(fā)報(bào)告單具體實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)檢驗(yàn)科各實(shí)驗(yàn)室簽收門診病人就診檢驗(yàn)流程病人就診卡病人就診卡醫(yī)生填寫檢驗(yàn)申請單輸入電腦網(wǎng)絡(luò)醫(yī)生填寫檢驗(yàn)申請單輸入電腦網(wǎng)絡(luò)病人持就診卡到收費(fèi)處、記帳或交費(fèi)病人持就診卡到收費(fèi)處、記帳或交費(fèi)體液大小便血液標(biāo)本檢驗(yàn)體液大小便血液標(biāo)本檢驗(yàn)到相應(yīng)科室取標(biāo)本病人留取標(biāo)本病人憑就診卡到門診抽血中心刷卡打印條碼，按有關(guān)要求抽血，囑到相應(yīng)科室取標(biāo)本病人留取標(biāo)本病人憑就診卡到門診抽血中心刷卡打印條碼，按有關(guān)要求抽血，囑病人取報(bào)告時(shí)間體液實(shí)驗(yàn)室或相關(guān)部門體液實(shí)驗(yàn)室或相關(guān)部門取回報(bào)告各實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后并簽發(fā)報(bào)告各實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后并簽發(fā)到醫(yī)生處診療取回報(bào)告

三、檢驗(yàn)科各項(xiàng)規(guī)章制度取回報(bào)告各實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后并簽發(fā)報(bào)告各實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后并簽發(fā)到醫(yī)生處診療取回報(bào)告生物安全制度1、醫(yī)務(wù)人員1）每1—２年做體檢一次，并接受乙肝疫苗接種。2）每1—2年檢查乙肝病毒抗原抗體水平，發(fā)現(xiàn)乙型肝炎者應(yīng)進(jìn)行隔離治療。3）檢驗(yàn)人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿好工作服，不允許在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)食和吸煙。4）檢驗(yàn)人員在工作前后和被污染后，應(yīng)用肥皂和流水清洗，必要時(shí)由消毒液浸泡雙手，每季度抽查檢驗(yàn)人員的手，并做細(xì)菌培養(yǎng)一次。2、環(huán)境消毒隔離1）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)分為清潔區(qū)和操作區(qū)，清潔區(qū)要注意保護(hù)不受污染。操作有氣溶膠可能的標(biāo)本應(yīng)配置生物安全柜及其它防護(hù)設(shè)置，如紫外線燈，排氣扇等操作區(qū)的工作臺及地面每日用消毒液擦拭一次，有污染時(shí)隨時(shí)消毒，每周大掃除一次。2）采血室每日操作前用清水擦拭操作臺一次，采血結(jié)束用消毒液擦拭操作臺、桌子和地面一次，紫外線每日照射消毒一次，每月空氣細(xì)菌培養(yǎng)一次，紫外線強(qiáng)度定期測定。并做記錄。3、各種檢驗(yàn)標(biāo)本的收集，送檢必須用相應(yīng)指定的容器留取，不得外溢污染。4、靜脈及末稍采血，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離措施，靜脈抽血做到一人一針一筒一巾一帶一消毒，所用止血帶及紙墊每日消毒，末稍采血一人一片一管，杜絕交叉污染。5、一次性醫(yī)用器具包括采血針，注射器、尿杯、血紅蛋白微量吸血吸管，應(yīng)嚴(yán)格做好領(lǐng)發(fā)登記，注射器先浸泡消毒后由供應(yīng)室一對一調(diào)換，統(tǒng)一處理，其余一次性器具浸泡消毒后裝入污物袋送焚燒爐焚燒。6、檢驗(yàn)人員在進(jìn)行靜脈抽血時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作技術(shù)，操作前必須洗手必須戴好帽子與口罩，操作臺和手被污染時(shí)應(yīng)用肥皂和流水認(rèn)真洗手，必要時(shí)用消毒液浸泡雙手，酒精、碘酒瓶每周更換消毒兩次。7、凡是肝炎病人和透析病人的血液標(biāo)本及疑有黃疸的血標(biāo)本，都視為肝炎的污染標(biāo)本，應(yīng)貼上紅色危險(xiǎn)標(biāo)記，放在規(guī)定區(qū)域內(nèi)，引起警惕和防止擴(kuò)大污染面。8、溢出試管外的血液，應(yīng)立即用碘酒棉簽擦拭干凈，注意防止玻璃碎片刺傷手，并注意試管有無破裂。9、當(dāng)針頭和碎玻璃刺傷手時(shí),用流水沖洗,擠出血水,應(yīng)立即用碘酒消毒局部。10、實(shí)驗(yàn)室操作時(shí)應(yīng)戴上手套。吸取標(biāo)本，離心振蕩等應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程，防止自身和實(shí)驗(yàn)室受污染。11、已檢查標(biāo)本與容器分別浸泡于施康1號消毒液(2000mg/L)中兩小時(shí)后，標(biāo)本傾棄，一次性容器送焚燒，重復(fù)使用的經(jīng)清洗消毒和滅菌后再使用，均要有記錄。有毒化學(xué)試劑和放射性試劑使用后要經(jīng)無害化處理，防止污染環(huán)境。12、菌種、毒種按《傳染病防治法》進(jìn)行管理。13、三級醫(yī)院必須設(shè)置清潔區(qū)，污染區(qū)，操作有氣溶膠可能的標(biāo)本應(yīng)配置生物安全柜及其它防護(hù)設(shè)置，如紫外線燈，排氣扇等。14、非科室工作人員不準(zhǔn)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，外來人員參觀需經(jīng)科主任同意方可進(jìn)入 質(zhì)量管理制度1、各專業(yè)實(shí)驗(yàn)室根據(jù)省臨檢中心的有關(guān)規(guī)定，開展實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的質(zhì)量控制，并制定有關(guān)措施。對室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)每日有記錄，對失控情況有糾正方法，有預(yù)防性措施，對于目前尚無完整的室內(nèi)質(zhì)控體系的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)積極創(chuàng)造條件，建立室內(nèi)質(zhì)量控制體系。2、各專業(yè)實(shí)驗(yàn)室必須參加部、省的各次室間質(zhì)控活動，對每次質(zhì)控評價(jià)應(yīng)有記錄。3、計(jì)量儀器（包括分析天平，天平、分光光度計(jì)等）應(yīng)定期校正，每年一次。4、大型分析儀器必須專人負(fù)責(zé)，有使用維修記錄。5、商品化的試劑盒的申購由各專業(yè)室的組長負(fù)責(zé)申報(bào)，每月一次報(bào)科主任審批，不得使用過期，無批準(zhǔn)文號的劣質(zhì)試劑，進(jìn)貨統(tǒng)一由科室管理，自配試劑須嚴(yán)格校正后方可使用。6、各專業(yè)實(shí)驗(yàn)室必須建立完整的操作程序，并應(yīng)嚴(yán)格按程序執(zhí)行。7、當(dāng)日發(fā)出的全部檢驗(yàn)報(bào)告單須經(jīng)當(dāng)日科室總值班人員嚴(yán)格審核后方可發(fā)出。8、科室在完成嚴(yán)格的室內(nèi)、室間質(zhì)量控制體系的同時(shí)，應(yīng)逐步建立全面質(zhì)量控制體系，對標(biāo)本的采集，運(yùn)送，保存等納入嚴(yán)格的管理之中。每日送檢的標(biāo)本應(yīng)簽收。9、急診檢驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格按照急診制度執(zhí)行。安全制度1、菌種、毒種、劇毒品及貴重儀器物品指定專人保管、有防盜措施，建立帳冊，記錄進(jìn)出數(shù)量，定期檢查制度。劇毒藥品專人保管，由科室主任，主管試劑的同志負(fù)責(zé)，放保險(xiǎn)柜，領(lǐng)用時(shí)須有主管同志在場，作好領(lǐng)用登記。2、易燃物品專柜存放，普通試劑按常規(guī)分類存放，并由科室主任和主管試劑同志負(fù)責(zé)，注意用電安全，特別是電爐子、大烤箱、火焰光度計(jì)，由各科使用同志負(fù)責(zé)安全，嚴(yán)防火災(zāi)。對工作中可能發(fā)生的觸電、失火、玻璃割傷、針頭刺傷、燒傷、不慎中毒、傳染性標(biāo)本的污染，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有應(yīng)急處理的方法，有關(guān)人員均應(yīng)熟悉。4、用電設(shè)備、電源線路、CO2氣體、給排水系統(tǒng)的安全性符合使用要求，不能帶電檢修儀器。5、使用強(qiáng)酸堿腐蝕品時(shí)，應(yīng)在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下正確操作，防止腐蝕、灼傷、中毒、火災(zāi)和爆炸等事件發(fā)生。注意安全，隨手隨時(shí)關(guān)門，下班時(shí)要做好水，電，門的安全保衛(wèi)工作，防火防盜防水。7、科室安全保衛(wèi)負(fù)責(zé)：鄭軍（四）試劑管理制度1、各專業(yè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)各自的工作需要，按月向科主任申報(bào)所購試劑，并應(yīng)做到及時(shí)盤存清點(diǎn)，入庫做到心中有數(shù)。2、所有試劑的申請，進(jìn)貨一律由科室統(tǒng)一管理，嚴(yán)格按市衛(wèi)生局招標(biāo)要求執(zhí)行，做到三證齊全。無三無產(chǎn)品。3、各專業(yè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對試劑庫存定期檢查，不使用過期變質(zhì)的試劑。4、自配試劑須以嚴(yán)格校正后方可使用。5、試劑的保存應(yīng)嚴(yán)格按照要求，以保證有效期內(nèi)能有效地使用，杜絕浪費(fèi)現(xiàn)象。6、試劑外借一律須經(jīng)科主任同意方可執(zhí)行。7、劇毒試劑必須由科主任和負(fù)責(zé)科室保衛(wèi)的同志負(fù)責(zé)保存，放保險(xiǎn)箱內(nèi)，使用時(shí)應(yīng)有兩人在場，并做好登記。8、易燃，易爆試劑應(yīng)分開存放遠(yuǎn)離火源和電源。9、供應(yīng)商所送的試劑必須先經(jīng)藥庫清點(diǎn)才能接受，檢驗(yàn)科人員清點(diǎn)后必須在貨單上簽字，有出入者必須向科主任或試劑管理員、組長報(bào)告，再將貨單交給試劑管理員，以便月底結(jié)帳。10、科室試劑管理員：鐘梁。（五）實(shí)習(xí)生管理制度1、科室按實(shí)習(xí)大綱安排實(shí)習(xí)時(shí)間表，如遇特殊情況科室統(tǒng)一安排。2、實(shí)習(xí)生必須服從實(shí)習(xí)單位和科室的直接管理，遵守實(shí)習(xí)單位的規(guī)章制度，參加實(shí)習(xí)單位的政治、業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)和有關(guān)活動、會議。3、實(shí)習(xí)生必須加強(qiáng)醫(yī)德醫(yī)風(fēng)修養(yǎng)，文明行醫(yī)，禮貌待人，主動熱情為病人服務(wù)。4、實(shí)習(xí)生應(yīng)在指導(dǎo)老師指導(dǎo)下進(jìn)行實(shí)習(xí)和工作，一切實(shí)驗(yàn)結(jié)果均須指導(dǎo)老師簽名后方能發(fā)出報(bào)告。不得擅自簽名發(fā)出報(bào)告，指導(dǎo)老師應(yīng)嚴(yán)格把關(guān)逐步培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立工作能力。5、嚴(yán)格請假制度，學(xué)生一般情況下不得請事假，節(jié)假日按國家法定給與準(zhǔn)假，請假一律寫報(bào)告，一天內(nèi)經(jīng)指導(dǎo)老師同意，科主任批準(zhǔn)，報(bào)告交俞北偉老師登記，三天內(nèi)經(jīng)醫(yī)教科批準(zhǔn)，三天以上經(jīng)學(xué)校批準(zhǔn)。6、實(shí)習(xí)生必須準(zhǔn)時(shí)上班，不遲到早退，要有嚴(yán)格的實(shí)習(xí)作風(fēng)，不得離崗，為了培養(yǎng)學(xué)生的應(yīng)急處理能力，實(shí)習(xí)生必須每天晚上輪流跟班（6.00-9.00）7、實(shí)習(xí)生必須嚴(yán)格保護(hù)實(shí)驗(yàn)儀器和公物，科室貴重儀器必須在指導(dǎo)老師具體指導(dǎo)下進(jìn)行操作。（六）標(biāo)本管理制度一、標(biāo)本采集按每個(gè)項(xiàng)目要求，告訴病人、病房護(hù)士或本室采血人員最佳采血時(shí)間、采血前空腹或飲食注意、用藥情況、活動情況、體位等。2、明確抗凝劑種類、抗凝劑與血的比例、抽血時(shí)注意事項(xiàng)。3、體液、分泌物、細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本按要求留足量、及時(shí)送檢。標(biāo)本運(yùn)送運(yùn)送過程中，原則上帶蓋（不能用棉花等吸水物品），以防倒翻和溢出或雨淋。凡含傳染源的標(biāo)本必須帶蓋，外套尼龍袋，以防溢出而污染環(huán)境。不能劇烈振蕩，以防標(biāo)本溶血和有形成分破壞。必須及時(shí)送檢。標(biāo)本接收必須認(rèn)真核對標(biāo)本上病人姓名、病區(qū)、床號、聯(lián)號與申請單符合。必須觀察標(biāo)本的量、標(biāo)本類型、是否抗凝或有小凝塊、細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本是否符合無菌要求。是否有明顯溶血或脂濁。不符要求的標(biāo)本，必須及時(shí)填寫退回理由單，及時(shí)反饋臨床。標(biāo)本檢測在檢測每一過程中，都應(yīng)復(fù)核標(biāo)本接收過程中的每一步驟。在標(biāo)本足夠的情況下，不能浪費(fèi)、隨意丟棄或損壞標(biāo)本。標(biāo)本儲存當(dāng)天不能完成的標(biāo)本，必須分離血清，按要求儲存在2℃-8℃或-20℃。當(dāng)天檢測完成的標(biāo)本，血常規(guī)儲存在2℃-8℃3天以上，生化免疫儲在2℃-8℃7天以上，腦脊液、胸腹水等重要標(biāo)本儲存在2℃-8℃7天以上。特殊標(biāo)本按要求保存。標(biāo)本處理檢驗(yàn)標(biāo)本先用含2-3g/L有效氯消毒靈浸泡半小時(shí)，再煮沸清洗試管，烘干備用。用雙層專用黃色醫(yī)用垃圾袋專人收集所有廢棄醫(yī)用垃圾。送專門存放醫(yī)用垃圾處統(tǒng)一處理。并做好登記。.七．外單位標(biāo)本外單位送檢的樣本,一律由服務(wù)臺同志登記后,再轉(zhuǎn)交各實(shí)驗(yàn)室檢測。實(shí)驗(yàn)室保留原始申請單。八、多張檢驗(yàn)單標(biāo)本凡有兩張以上的檢驗(yàn)申請單(包括其他實(shí)驗(yàn)室或外送兄弟醫(yī)院)原則上要分裝各管,隨檢驗(yàn)申請單一起分別放置各樣本盒,對采樣困難者要主動跟蹤樣本,并作詳細(xì)記錄以免漏檢,分清責(zé)任。附錄：檢驗(yàn)科檢測項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程A、檢室A1、血常規(guī)檢驗(yàn)（1）標(biāo)本用EDTA-K20.2ul抗凝靜脈血1ml,門診病人在CD-1700儀器上做三分類測定,住院病人在COULTERHMX儀器上做五分類測定。（2）試劑及儀器COULTERHMX五分類血球分析儀及配套試劑，質(zhì)控用COULTER4CPLUS全血質(zhì)控品，COULTERHMX五分類血分析儀及配套試劑，質(zhì)控用COULTER5C全血質(zhì)控品。（）（3）操作門診：收到血常規(guī)標(biāo)本后，查看核對檢驗(yàn)項(xiàng)目，立即編號，放混勻器上混勻3分鐘。如有血型立即用玻片法和試管法測定血型，輸入電腦。血標(biāo)本在ABBOTCD-1700上檢測，結(jié)果入庫。對于中間細(xì)胞比較多的應(yīng)當(dāng)手工涂片染色分類，對于血小板等圖形不好或結(jié)果異常較大的應(yīng)手工復(fù)查。結(jié)果核對后，在半小時(shí)內(nèi)報(bào)告。病房：采集血常規(guī)標(biāo)本后，立即編號，試管加蓋后放于專用試管架上放入HMX上自動混勻，如有血型用玻片法和試管法測定血型，輸入電腦。血標(biāo)本在COULTERHMX上機(jī)檢測，結(jié)果入庫。對于分類圖形不好的結(jié)果應(yīng)當(dāng)手工涂片染色分類，對于血小板等結(jié)果圖形不好或結(jié)果異常較大的應(yīng)手工復(fù)查。（復(fù)查條件）結(jié)果核對后，簽發(fā)報(bào)告單。如果急診則電話報(bào)告，有血型的話，通知病房來拿報(bào)告單。（血液項(xiàng)目）（4）項(xiàng)目HYPERLINK"H:\myhomepage\網(wǎng)頁\ksgc\""H:\myhomepage\網(wǎng)頁\ksgc\"代號中文名單位WBC白細(xì)胞計(jì)數(shù)×109/LLY%(LY)淋巴細(xì)胞分類%MO%單核細(xì)胞分類%NE%(GR)中性細(xì)胞分類%LY#淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)×109/LMO#單核細(xì)胞計(jì)數(shù)×109/LNE#中性細(xì)胞計(jì)數(shù)×109/LRBC紅細(xì)胞計(jì)數(shù)×1012/LHGB血紅蛋白g/LHCT紅細(xì)胞壓積MCV平均紅細(xì)胞體積flMCH平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量pgMCHC平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度g/LRDW紅細(xì)胞分布寬度PLT血小板計(jì)數(shù)×109/LMPV平均血小板體積flPCT血小板比積%PDW血小板分布寬度EO%嗜酸性細(xì)胞分類%BO%嗜堿性細(xì)胞分類%EO#嗜酸性細(xì)胞計(jì)數(shù)×109/LBO#嗜堿性細(xì)胞計(jì)數(shù)×109/L（5）特殊規(guī)定在檢驗(yàn)血常規(guī)時(shí),科室所有工作人員及同志如發(fā)現(xiàn)以下樣本結(jié)果過高可過低,務(wù)必作登記,復(fù)查和及時(shí)報(bào)告,以備查詢。1.血紅蛋白低于100g/L.2.白細(xì)胞低于3000/ul.3.血小板低于8萬/ul.4.發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞分類異常圖形時(shí).5.發(fā)現(xiàn)其中一項(xiàng)過高時(shí),或是臨床指定要鏡檢時(shí).（6）臨床意義（6．1）WBC計(jì)數(shù)參考范圍4-10×109/L1、增加(l)生理性：初生兒、妊娠末期、分娩期、經(jīng)期、飯后、劇烈運(yùn)動后、冷水浴后及極度恐懼與疼痛等。(2)病理性：大部分化膿性細(xì)菌所引起的炎癥、尿毒癥、嚴(yán)重?zé)齻魅拘詥魏思?xì)胞增多癥、傳染性淋巴細(xì)胞增多癥、急性出血、組織損傷、手術(shù)創(chuàng)傷后、白血病等。2．減少病毒感染、傷寒、副傷寒、黑熱病、瘧疾、再生障礙性貧血、極度嚴(yán)重感染、X線及鐳照射、腫瘤化療后、非白血性白血病等。（6．2）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)(6.2.1)染色液1.瑞氏—姬姆薩復(fù)合染色液I液取瑞氏染粉lg、姬姆薩染粉1g，加入甲醇(分析純)，充分振搖，第二天加甘油10ml,混勻即能使用。Ⅱ液pH6．4—6．8磷酸鹽緩沖液（或用H2O替代緩沖液）磷酸二氫鉀(無水)6．648磷酸氫二鈉(無水)2．56g加少量蒸餾水溶解，用磷酸鹽調(diào)整pH，加水至1000ml。染色置玻片于染色架上，滴加染液3—5滴，使其迅速蓋滿血膜，約1min后，滴加緩沖液5一10滴，輕輕搖動玻片或?qū)?zhǔn)血片吹氣，與染液充分混和，5一10min后用水沖去染液，待干。或染色液蓋滿血片后半分鐘即可水洗鏡檢。2．快速染色液I液:磷酸二氫鉀6．648磷酸氫二鈉2．56g水溶性伊紅Y4g(或伊紅B2．5g)蒸餾水1000ml石炭酸40ml煮沸，待冷備用。Ⅱ液亞甲藍(lán)4g蒸餾水1000m1高錳酸鉀2．48g煮沸，待冷備用。染色把干燥血片浸入快速染色液的I液中30s，水洗，再浸入Ⅱ液30s，水洗待干。注：本染色法除了能快速用于急癥外，對玻片質(zhì)量要求也不高。隨著染液多次使用，可適當(dāng)延長染色時(shí)間或更換新液。3．30s快速單一染色液貯存液瑞氏染粉2．0g姬姆薩染粉0．68天青E0．6g甘油10．0ml聚乙烯D比咯烷酮(PVP)20．0g甲醇1000mI磷酸鹽緩沖液(pH6.2-6．8)磷酸二氫鉀6．648磷酸氫二鈉0．268石炭酸4．0ml蒸餾水加至1000mI應(yīng)用液l液、2液按3：1比例混合放置14天后備用。染色將染液鋪滿血膜或?qū)⒀肴旧變?nèi)，30s后用自來水沖洗。注：加表面活性劑PVP可增加染料的溶解度并起穩(wěn)定作用，加入天青E可縮短染色時(shí)間。(6.2.2)參考范圍LY:18．7％-47％LY#：(1．0—3．3)×109／LMO:3．5％-7．9％MO#：(0．2—0．7)×109／LGR:46．0％一76．5％GR#：(1．8—6．4)×109／L1．增多(l)中性粒細(xì)胞：急性化膿感染、粒細(xì)胞白血病、急性出血、溶血、手術(shù)后、尿毒癥、酸中毒、急性汞中毒、急性鉛中毒等。(2)嗜酸性粒細(xì)胞：變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲病、某些皮膚病、某些血液病、手術(shù)后、燒傷等。(3)嗜堿性粒細(xì)胞：慢性粒細(xì)胞白血病、何杰金病、癌轉(zhuǎn)移、鉛及鉍中毒等。(4)淋巴細(xì)胞：百日咳、傳染性單核細(xì)胞增多癥、慢性淋巴細(xì)胞白血病、麻疹、腮腺炎、結(jié)核、傳染性肝炎等。(5)單核細(xì)胞：結(jié)核、傷寒、亞急性感染性心內(nèi)膜炎、瘧疾、黑熱病、單核細(xì)胞白血病、急性傳染病的恢復(fù)期等。2．減少(l)中性粒細(xì)胞：傷寒、副傷寒、瘧疾、流感、化學(xué)藥物中毒、X線和鐳照射、抗癌藥物化療、極度嚴(yán)重感染、再障、粒細(xì)胞缺乏等。(2)嗜酸性粒細(xì)胞：傷寒、副傷寒以及應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素后。(3)淋巴細(xì)胞：多見于傳染病急性期、放射病、細(xì)胞免疫缺陷等。（6.3）常見的異常白細(xì)胞形態(tài)的變化在外周血象中，除了各類白血病幼稚細(xì)胞外，通常能見到一些細(xì)胞形態(tài)上的異常變化。(6.3.1)中性粒細(xì)胞1．核象變化：反映中性粒細(xì)胞的成熟程度。正常血象中有少量桿狀核細(xì)胞出現(xiàn)，它與分葉核細(xì)胞之間的比值約占1：13。(1)核左移：是指桿狀核細(xì)胞增多，常見于感染。如晚幼粒、中幼粒等細(xì)胞增多為核象極度左移，多見于類白血病反應(yīng)或白血病。①伴白細(xì)胞總數(shù)增高的核左移：稱再生性左移，常見于急性化膿性感染，如大葉性肺炎等。②白細(xì)胞總數(shù)不增加或減低的核左移：稱退行性左移，常見于嚴(yán)重感染、機(jī)體抵抗力低下時(shí)，如傷寒、伴感染中毒性休克的敗血癥等。(2)核右移：是指不僅分葉核粒細(xì)胞增多，且分葉過多，常見4葉、5葉(正常時(shí)多分3葉)，這是造血功能衰退或造血物質(zhì)缺乏的表現(xiàn)。常見于營養(yǎng)性巨幼細(xì)胞性貧血和使用抗代謝藥物后。此外，在疾病進(jìn)行期突然出現(xiàn)核象右移，表示預(yù)后不良。2.毒性變化：嚴(yán)重感染、惡性腫瘤、各種重金屬或藥物中毒、大面積燒傷等癥時(shí)，中性粒細(xì)胞可出現(xiàn)形態(tài)變異。(l)細(xì)胞大小不均：為骨髓內(nèi)幼稚粒細(xì)胞發(fā)生不規(guī)則的分裂增殖所致。(2)毒性顆粒：胞漿中部分或全部顆粒變粗，著色深，顆粒的分布及大小不等?？赡転橹行灶w粒成熟過程中發(fā)生變性所致。(3)空泡：可在胞漿或核中出現(xiàn)，常為多個(gè)，被認(rèn)為是細(xì)胞脂肪變性后未能著色所致。(4)Dohle體：腦漿內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性點(diǎn)、線、梨形或云霧狀物質(zhì)，可能為核漿發(fā)育不平衡所致，為細(xì)胞嚴(yán)重毒性變的表現(xiàn)。(5)核棘突：胞核有各種形態(tài)的芽狀突出，臨床意義尚不明確，可能與中毒、癌轉(zhuǎn)移、嚴(yán)重放射損傷等有關(guān)。3.退行性變：表現(xiàn)為胞體腫大，結(jié)構(gòu)模糊，邊緣不清。胞核可呈固縮、腫脹、破碎、溶解等變化，退行變可以是細(xì)胞衰老死亡的表現(xiàn)。(6.3.2)淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞形態(tài)變異在多種疾病如各種病毒感染、傳染性單核細(xì)胞增多癥最為常見。此外，瘧疾、過敏性疾病、淋巴結(jié)炎等亦可見，統(tǒng)稱為異型淋巴細(xì)胞。傳染性單核細(xì)胞增多癥患者血液中常可出現(xiàn)3種異型淋巴細(xì)胞，即空泡型、不規(guī)則型和幼稚型。（6.4）血紅蛋白HYPERLINK"H:\myhomepage\網(wǎng)頁\ksgc\""H:\myhomepage\網(wǎng)頁\ksgc\"[參考值]男:120-160g/L女:110-150g/L（6.5）RDW為反映紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)，常以所測得紅細(xì)胞體積大小的變異系數(shù)(CV％)來表示。它比血涂片上紅細(xì)胞形態(tài)大小不均的觀察更為客觀、準(zhǔn)確。RDW增大時(shí)有臨床意義。(l)用于缺鐵性貧血(IDA)的診斷與療效觀察：缺鐵性貧血時(shí)RDW增大，尤其是MCV尚處于參考值范圍時(shí)(缺鐵性貧血時(shí)MCV應(yīng)下降)RDW增大更是早期缺鐵的指征；MCV減小時(shí)，RDW增大更為顯著，當(dāng)給予鐵劑治療有效時(shí)，RDW將比給藥前更大，以后逐漸降至正常水平。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因，主要是因補(bǔ)鐵后產(chǎn)生網(wǎng)織紅細(xì)胞，及正常紅細(xì)胞生成并釋放人血與給藥前的小紅細(xì)胞并存，故RDW先增大，隨著正常紅細(xì)胞的增多和小紅細(xì)胞的減少，RDW便逐漸降至參考范圍。(2)用于小細(xì)胞低色素性貧血的鑒別診斷：IDA和輕型地中海性貧血時(shí)，MCV均可減小。但I(xiàn)DA時(shí)RDW增大，而輕型地中海性貧血時(shí)RDW正常。(3)用于貧血的分類(Bessman分類法)：MCV只能反映紅細(xì)胞平均體積的大小，不能代表紅細(xì)胞體積大小的異質(zhì)性，對紅細(xì)胞體積大小的評價(jià)，過去靠血涂片上紅細(xì)胞形態(tài)的觀察，這種觀察常受血涂片制作以及觀察者的主觀因素的影響較大，而且不能定量，RDW能較好地反映紅細(xì)胞體積的異質(zhì)性，把MCV和RDW結(jié)合用于對貧血的分類將更為完善(表l—l—2)。表l-1-2BessmanMCV／RDW貧血分類類別MCVRDW正常→→缺鐵性貧血↓↑巨幼細(xì)胞性貧血↑↑溶血性貧血↑↑鐵粒幼細(xì)胞貧血→↑再生障礙性貧血→→單純小細(xì)胞性貧血↓→注：→無變化;↑增大;↓減少（6.6）平均血小板體積MPV的臨床意義要結(jié)合PLT變化才有價(jià)值。(1)鑒別血小板減少的原因：①當(dāng)骨髓造血功能損傷致血小板減少時(shí)，MPV減少；②當(dāng)血小板在周圍血液中破壞增多時(shí)，導(dǎo)致血小板減少，MPV增大；③血小板分布異常致血小板減少時(shí)，MPV正常。(2)MPV增大可作為骨髓造血功能恢復(fù)的較早期指征：骨髓造血功能衰竭時(shí)，MPV與PLT同時(shí)持續(xù)下降；造血功能抑制越嚴(yán)重，功能恢復(fù)時(shí)，MPV增大常先于PI。T升高。MPV越??；當(dāng)造血(3)其他方面應(yīng)用：①M(fèi)PV增大：見于骨髓纖維化、原發(fā)性血小板減少性紫痰(ITP)、血栓性疾病及血栓前狀態(tài)、脾切除、慢粒、巨大血小板綜合征、鐮刀細(xì)胞性貧血等。②MPV減?。阂娪谄⒖?、化療后、再障、巨幼細(xì)胞性貧血等。（6.7）.血小板比積(plateletcrit，PCT)參考范圍男0．108％-0．272％女0．114％一0．282％PCT與PLT和MPV正相關(guān)，所以PLT、MPV的增減均可使PCT發(fā)生變化。增高：見于骨髓纖維化、脾切除、慢粒等。減低：見于再障、化療后、血小板減少癥等。（6.8）血小板體積分布寬度(plateletvolumedistributionwidth，PDW)參考范圍0．155-0．181(15．5％-18．1％)(以血小板體積變異系數(shù)CV％表示)PDW是反映血小板體積大小的異質(zhì)性參數(shù)。增大：急非淋化療后、巨幼細(xì)胞性貧血、慢粒、脾切除、巨大血小板綜合征、血栓性疾病等。（6.9）血細(xì)胞體積分布直方圖的應(yīng)用(l)紅細(xì)胞體積分布直方圖：將MCV和RDW配合直方圖分析，可直接觀察紅細(xì)胞體積的分布情況。①只現(xiàn)一個(gè)峰：見于正常人、缺鐵性貧血(峰左移)、巨幼細(xì)胞性貧血(峰右移)。②可現(xiàn)兩個(gè)峰：缺鐵性貧血給予鐵劑治療有效時(shí)，可出現(xiàn)一個(gè)小紅細(xì)胞峰和另一個(gè)正紅細(xì)胞(或網(wǎng)織紅細(xì)胞)峰。巨幼(紅)細(xì)胞性貧血給予葉酸、維生素Bl2治療有效時(shí)亦可見兩個(gè)峰。(2)白細(xì)胞體積分布直方圖：靜脈血比毛細(xì)管血白細(xì)胞數(shù)量略低。中檔的血細(xì)胞分析儀一般為三分群，它是根據(jù)加入溶血劑后，白細(xì)胞膜通透性改變而發(fā)生皺縮，不同類型的白細(xì)胞皺縮后體積有明顯差別，每個(gè)皺縮白細(xì)胞通過血細(xì)胞分析儀的微孔時(shí)產(chǎn)生的脈沖信號經(jīng)放大、甄別后，微機(jī)處理數(shù)據(jù)得到其體積分布直方圖。淋巴細(xì)胞群為35—90fI大小中間細(xì)胞群為90一160fl大小粒細(xì)胞群為160—450fI大小三群細(xì)胞的百分比與白細(xì)胞數(shù)量的乘積為其絕對數(shù)正常人白細(xì)胞體積分布直方圖，可見兩個(gè)明顯分離的峰，左峰為小細(xì)胞群(淋巴細(xì)胞)，右峰為大細(xì)胞群(粒細(xì)胞)，兩峰之間為中間細(xì)胞群的分布。急性白血病時(shí)，由于異常的原始、幼稚細(xì)胞增多，可見中間細(xì)胞明顯增高，這時(shí)直方圖上見一個(gè)峰，峰值常在90一160fl之間。這時(shí)必須推片染色鏡檢。(3)血小板體積分布直方圖：正常人血小板體積主要分布在2—20fl之間，21—30fI之間有少量大血小板，一般儀器以30fI為最大的分析界標(biāo)。血小板體積增大時(shí)，直方圖會出現(xiàn)明顯拖尾現(xiàn)象。有小紅細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片干擾時(shí)，直方圖尾部會抬高。（6.10）三種紅細(xì)胞參數(shù)平均值的計(jì)算1、原理根據(jù)紅細(xì)胞、血紅蛋白濃度和紅細(xì)胞比積，計(jì)算紅細(xì)胞平均容量、紅細(xì)胞平均血紅蛋白量、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度，用作貧血的形態(tài)學(xué)分類。2、計(jì)算方法（1）平均紅細(xì)胞體積(meancorpuscularvolume，MCV)：是指每個(gè)紅細(xì)胞的平均體積，以飛升(fI)為單位。每L血液中紅細(xì)胞體積(L)×1015MCV＝──────────────＝××fl每L血液紅細(xì)胞數(shù)(個(gè))（2）平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(meanCorpuscularhemoglobin，MCH)：是指每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)所含血紅蛋白的平均量，以皮克(pg)為單位。每L血液中血紅蛋白濃度(g)×1012MCH＝──────────────＝××pg每L血液紅細(xì)胞數(shù)(個(gè))（3）平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(meanCorpuscularhemoglobinconcentration，MCHC)：是指平均每L紅細(xì)胞中所含血紅蛋白濃度(g/L)。每L血液中血紅蛋白g數(shù)(g/L)MCHC＝──────────────＝××g/L每L血液紅細(xì)胞比積(L/L)3、臨床意義正常人和各型貧血時(shí)紅細(xì)胞平均參考值表平均值MCH(pg)MCV(fl)MCHC(g/L)正常27-3182-95320-360大細(xì)胞性貧血↑↑-正常細(xì)胞性貧血單純小細(xì)胞性貧血↓↓-小細(xì)胞低色素性貧血↓↓↓注：-正常;↑增大;↓減少（6.11）紅細(xì)胞參數(shù)1、紅細(xì)胞(redbloodceII，RBC)男(4．0-5．5)×1012／L女(3．5-5．0)×1012／L2、血紅蛋白(hemoglobin，HGB)男120一160g／L女l10-150g／L3、紅細(xì)胞比積(hematocrit，HCT)男0．40—0．50(40％一50％)女0．35—0．45(35％一45％)

A2、嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)[標(biāo)本]EDTA-K210ul抗凝靜脈血1ml[原理]手工法血液中嗜酸性粒細(xì)胞在含有伊紅的低滲溶液中被染成紅色，而紅細(xì)胞及其他白細(xì)胞破裂或溶解。儀器法（VCS原理）[試劑]手工法嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)的稀釋液種類較多，各有一定的優(yōu)缺點(diǎn)，尚待大家繼續(xù)實(shí)驗(yàn)，找出最佳配方。下列3種稀釋液供參考。1．Hinkelmann液伊紅0．2g95％石炭酸0．5m140％甲醛0．5ml蒸餾水加到100m12．乙醇—伊紅稀釋液90％乙醇30ml甘油10ml碳酸鉀lg枸櫞酸鈉0．5g20g幾伊紅液10ml蒸餾水加至100m1本配方背景清晰，嗜酸性粒細(xì)胞著色鮮明，缺點(diǎn)是含10％甘油，比較粘稠，細(xì)胞不易混勻，故計(jì)數(shù)前必須充分振搖。3．伊紅—丙酮稀釋液20g/L伊紅液5mI丙酮5mI蒸餾水90ml新鮮配制效果好，每周配1次。儀器法五分類血細(xì)胞儀及專用試劑[操作]手工法1．小試管中加稀釋液0．38mI。2．常法取末梢血20μl，加入管內(nèi)混勻，待紅細(xì)胞溶解后兩側(cè)充池。3．靜置3—5min，用低倍鏡(必要時(shí)用高倍鏡)鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。儀器法操作同血常規(guī)[計(jì)算]10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)×20×lO＝嗜酸性粒細(xì)胞/L[參考值](50-300)×106／L(50-300／μl)[附注]l.血液稀釋后應(yīng)于1h內(nèi)計(jì)數(shù)完畢，否則嗜酸性粒細(xì)胞會逐漸被破壞，使結(jié)果偏低或不易辨認(rèn)。2.充池前要充分混勻，但又不宜用力過猛，特別是使用含甘油的稀釋液要適當(dāng)延長混勻時(shí)間。3.注意與中性粒細(xì)胞區(qū)別,以免誤認(rèn),中性粒細(xì)胞一般不著色,但也有著淺紅色的,其顆粒較小。4．住院病人采標(biāo)本時(shí)間力求統(tǒng)一，以免受日間生理變化的影響。5．用白細(xì)胞總數(shù)與分類百分率求得的絕對值不如直接計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確。[臨床意義]1．直接計(jì)數(shù)主要用于觀察傳染病預(yù)后、手術(shù)和燒傷病人的預(yù)后及測定腎上腺皮質(zhì)功能。2．其他變化的臨床意義同白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)中嗜酸性粒細(xì)胞的增減。

A3、紅細(xì)胞沉降率測定[標(biāo)本]200ul枸櫞酸鈉抗凝靜脈血1.1ml，顛倒混勻。[原理]離體抗凝血液置于特制刻度測定管(魏氏法血沉管)內(nèi)，垂直立于室溫中，一定時(shí)間時(shí)觀察上層血漿高度的毫米數(shù)值報(bào)告之。[儀器及試劑]MONITORJI血沉儀、專用血沉管109mmoI／L(32g/L)枸櫞酸鈉溶液：取含二分子結(jié)晶水的枸櫞酸鈉(分子量294．12)3．28，用蒸餾水溶解，稀釋至100ml。此液在室溫保存不得超過2周。[操作]1．專用血沉管1支，加抗凝劑0．2ml。2．靜脈采血后，取下針頭，加血至刻度，顛倒混勻。3．用血沉管(300mm×2．5mm)吸取上述混勻血液至“0”刻度處，拭去管外附著的血液，將血沉管直立在血沉架上。（MONITORJI操作）4．記時(shí)，室溫中靜置lh，讀出血沉儀上的讀數(shù)即是血沉值。[參考值]男:＜15mm／60min女：＜20mm／60min[附注]1．紅細(xì)胞在單位時(shí)間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量和質(zhì)，血漿中脂類的量和質(zhì)，紅細(xì)胞的大小與數(shù)量，是否成串錢相聚以及血沉管的內(nèi)徑、清潔度、放置位置是否垂直，室溫高低等因素都有關(guān)系。2．要求(l)標(biāo)本采集時(shí)避免脂肪血。(2)血液和抗凝劑比例要準(zhǔn)確。(3)血沉管內(nèi)徑要標(biāo)準(zhǔn)(2．5mm)，放置要垂直。(4)做血沉的標(biāo)本要在采集后3h內(nèi)測定，并充分混勻。3．室溫過低、過高和貧血時(shí)，對結(jié)果都有影響。為此，血沉應(yīng)盡量放在18—25℃室溫下測定。室溫過高時(shí)血沉加快，可以按溫度系數(shù)校正。室溫過低時(shí)血沉減慢，無法校正。[臨床意義]增快：(l)生理性：年幼小兒、經(jīng)期、妊娠3個(gè)月至產(chǎn)后1個(gè)月。(2)病理性：急性炎癥、結(jié)締組織病、活動性結(jié)核、風(fēng)濕熱活動期、組織嚴(yán)重破壞、貧血、惡性腫瘤、高球蛋白血癥、重金屬中毒等。

A4、血型鑒定（1）ABO血型鑒定根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或／和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種。可利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或／和B抗原；所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗—A或／和抗—B。[試劑和材料]1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清，制備方法見本節(jié)附注；2．5％A、B及O型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注；3．受檢者血清；4．受檢者5％紅細(xì)胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注。[方法]1．試管法(1)取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)3支，分別標(biāo)明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分別加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5％紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混和。(2)另取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)3支，分別標(biāo)明A、B和O細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清l滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和O型5％試劑紅細(xì)胞懸液l滴，混和。(3)立即以1000r／min離心lmin。(4)將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。(5)觀察結(jié)果時(shí)既要看有無凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、B亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。(6)凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4十紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3十紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2十紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。1十肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞土鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞MF混合凝集外觀(mixedfield)是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。一表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。2．玻片法(1)取清潔玻片1張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗-A、抗-B和抗-A十B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清l滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者2％紅細(xì)胞懸液1滴，混和。(2)另取潔凈玻片一張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。(3)將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約15min，以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應(yīng)。如以玻片作試驗(yàn)時(shí)，也可用低倍鏡觀察結(jié)果。[結(jié)果判定]ABO血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞受檢者血型受檢者血清+試劑紅細(xì)胞抗-A抗-B抗-A十BA細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞十─十A─十──十十B十一────O十十─十十十AB───注：十為凝集；一為─不凝集。[附注]1．分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。2．試劑紅細(xì)胞以3個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌1次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。3．試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。4．操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。5．按理IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫(20—24℃)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37℃可使反應(yīng)減弱。6．離心時(shí)間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。7．觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。8．判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄，避免筆誤。[正反定型結(jié)果不一致的原因]有技術(shù)性問題或紅細(xì)胞和血清本身的問題，常見者有以下幾種：1.分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗—A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。2．紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。3．受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少(如亞型)或抗原性減弱(見于白血病或惡性腫瘤：以及類B或cisAB等。4．受檢者血清中蛋白紊亂(高球蛋白血癥)，或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。5．受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A及或抗—B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。6．各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體.7．由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。8．血清中有意外抗體，如自身抗—I，常引起干擾。9．老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型結(jié)果不一致，先要重復(fù)作試驗(yàn)1次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果，就可解決明顯的問題，對一些疑難問題月必須進(jìn)一步研究。[檢查步驟]1．另從受檢者采取l份新鮮血液標(biāo)本這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。2．將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5％鹽水細(xì)胞懸液，用抗—A、抗—B、抗—Al，抗—A十B及抗H做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。3．對受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。4．用Al、Az、B、O紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗—I，用O型(或ABO相合的)臍血紅細(xì)胞檢查。5．如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和4℃放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。6．如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗—A或抗—B血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受檢者唾液作A、B、H血型物質(zhì)測定。后者只對80％HAB分泌型的人有用。7．如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水l滴，混和，往往可使絹錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不