地貧篩查中的血紅蛋白電泳課件

地貧篩查中的血紅蛋白電泳

操作技術(shù)

解放軍第三0三醫(yī)院血液實(shí)驗(yàn)室

王榮新地貧篩查中的血紅蛋白電泳血紅蛋白的組成血紅蛋白由血紅素與珠蛋白組成血紅素：鐵原子與原卟啉Ⅸ復(fù)合物。珠蛋白：包括α、β、γ、δ、ε和ζ珠蛋白6種。血紅蛋是由兩種不同的鰲合了血紅素的珠蛋白肽鏈所形成的四聚體結(jié)構(gòu)，在人體的不同發(fā)育時(shí)期，其主要的血紅蛋白（Hb）組成不同。地貧篩查中的血紅蛋白電泳人體發(fā)育過(guò)程中Hｂ的組成發(fā)育期血紅蛋白肽鏈組成胚胎期

Gower1ζ2ε2Gower2α2ε2胎兒期Porlandζ2γ2Fα2γ2Aα2β20－2周歲左右Fα2γ2Aα2β2A2α2δ22周歲后以后Aα2β2A2α2δ2Fα2γ2地貧篩查中的血紅蛋白電泳Hb的種類A.正常的Hb分三類a.HbA(α2β2)b.HbF(α2γ2)c.HA2(α2δ2)B.異常Hb有兩類a.快速異常Hb:穩(wěn)定Hbb.慢速異常Hb:不穩(wěn)定Hb地貧篩查中的血紅蛋白電泳基層常用的電泳分析方法醋酸纖維膜電泳瓊脂凝膠電泳地貧篩查中的血紅蛋白電泳

醋酸纖維膜電泳→主要過(guò)程←瓊脂凝膠電泳↓RBC洗滌↓制備溶血↓點(diǎn)樣↓電泳↓染色與脫色↙↘掃描法↙比色法:分區(qū)剪下色帶，洗脫分區(qū)切割色帶,融化瓊脂，干燥,透明→比色

地貧篩查中的血紅蛋白電泳血紅蛋白電泳設(shè)備地貧篩查中的血紅蛋白電泳醋酸纖維膜電泳地貧篩查中的血紅蛋白電泳

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▋▋▉▋▋▋HJKAGDE點(diǎn)樣線→正常→▉▍▋▋

AFA2CA

地貧篩查中的血紅蛋白電泳地貧篩查中的血紅蛋白電泳HbA2的常用測(cè)定方法原理:根據(jù)不同Hb自帶電荷的不同、分子量大小的不同、結(jié)構(gòu)和等電點(diǎn)的不同,在一定pH值的緩沖液中朝特定方向泳動(dòng)，在一定的電壓下經(jīng)一定時(shí)間，可分離出各自的區(qū)帶。主要類別:醋酸纖維素膜電泳法瓊脂凝膠電泳法HbA2含量測(cè)定:洗脫法掃描法地貧篩查中的血紅蛋白電泳

血紅蛋白A2測(cè)定

不連續(xù)電泳將HbA2分離后，分別剪出膜條中的HbA和HbA2區(qū)帶，分別放入試管中，HbA加蒸餾水20ml，HbA2加4ml，浸泡30分鐘，不定時(shí)搖動(dòng)，使Hb完全冼脫下來(lái)后混勻，用721分光光度計(jì)以波長(zhǎng)413nm蒸餾水校正零點(diǎn)，讀取光密度OD值并計(jì)算出結(jié)果。地貧篩查中的血紅蛋白電泳抗堿血紅蛋白(HbF)測(cè)定設(shè)備：721分光光度計(jì)，刻度吸管，秒表，玻璃漏斗，濾紙。試劑：1/12mol/LKOH或NaOH溶液，酸性半飽和硫酸銨溶液。方法：取兩支試管，測(cè)定管加入溶血液0.1ml，對(duì)照管加入0.02ml，于測(cè)定管中加入KOH1.6ml，搖勻，1分鐘時(shí)立即加入酸性半飽和硫酸銨溶液3.4ml，倒轉(zhuǎn)6次，放10分鐘，濾取溶液檢測(cè)，用波長(zhǎng)540nm蒸餾水校正零點(diǎn)，分別讀取測(cè)定管和對(duì)照管光密度OD值，計(jì)算出結(jié)果。地貧篩查中的血紅蛋白電泳

HbCS的區(qū)帶多在HbA2位置的前后，含量低，2％左右，很不穩(wěn)定，有時(shí)還可分開(kāi)成三或四小區(qū)帶，用聯(lián)苯胺染色可確定。HbE為慢速異常區(qū)帶，其位置相當(dāng)于HbA2。HbH和HbBart’s為快速異常區(qū)帶。

地貧篩查中的血紅蛋白電泳全自動(dòng)Hb電泳儀目前國(guó)內(nèi)使用的主要有美國(guó)的Helena電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)。法國(guó)的Sebia電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)。國(guó)產(chǎn)的金桑特電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)。1.通過(guò)掃描定量給出HbA、HbA2和HbF值。2.異常區(qū)帶通過(guò)查表確定。

地貧篩查中的血紅蛋白電泳HbE區(qū)帶的鑒別A.聯(lián)苯胺染色,鑒定是否為HbB.區(qū)帶位于HbA2區(qū)帶位置上,在陰性(-)泳動(dòng)速度最慢的一種異常Hb,難與A2區(qū)分開(kāi)C.HbA2定量在10%以上,應(yīng)考慮為HbED.HbE純合子只有HbF和HbE,HbE高達(dá)95%以上地貧篩查中的血紅蛋白電泳HbH區(qū)帶的鑒定A.聯(lián)苯胺染色,確定是否為Hb

B.在陽(yáng)極(+)泳動(dòng)速度最大的Hb區(qū)帶C.HbH包含體陽(yáng)性(+)D.pH6.5緩沖液(酸性)唯一向陽(yáng)性(+)移動(dòng)的Hb區(qū)帶E.Hb↓MCV↓MCH↓F.HbBart’s區(qū)帶在HbH區(qū)帶后,泳動(dòng)速度比HbH稍慢些,有Bart’s區(qū)帶,一般都有H區(qū)帶,H含量高達(dá)30%多,但不會(huì)超出40%,低少到1%左右。地貧篩查中的血紅蛋白電泳HbA2

在血紅蛋白病中的意義HbA2組成:α2δ2HbA2參考值:1.2%-3.5%HbA2含量的改變:HbA2水平升高,是β地貧基因攜帶者的特征性標(biāo)志,故HbA2定量的準(zhǔn)確與否,對(duì)于臨床一線β地貧基因攜帶者的篩查至關(guān)重要。地貧篩查中的血紅蛋白電泳血紅蛋白（Hb）病1.血紅蛋白?。夯蛲蛔儗?dǎo)致合成的珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)異常（如：鐮狀細(xì)胞血紅蛋白病/HbS）2.地中海貧血：基因突變導(dǎo)致一種或多種珠蛋白肽鏈合成減少或缺如（α/β地貧）3.獲得性血紅蛋白?。航佑|或誤服化學(xué)藥物地貧篩查中的血紅蛋白電泳Hb病為世界上發(fā)病率最高危害最大的單基因遺傳病，被WHO列為嚴(yán)重危害人類健康六大疾病之一。全球約有4.83%的人口攜帶Hb病基因,每年各類重型地貧(包括地貧復(fù)合異常Hb病類型)患兒的出生率不低于2.4‰。據(jù)此推算,全球每年至少約35萬(wàn)Hb病患兒出生;至今為止，全球在分子水平上已鑒定出近1000種不同的珠蛋白突變基因，其中包括700多種異常Hb變異體和200余種β地貧基因以及70多種α地貧突變,其中中國(guó)人群中異常Hb、β地貧基因和α地貧突變各占70多種、34種和11種。地貧篩查中的血紅蛋白電泳臨床常見(jiàn)的異常血紅蛋白以速度快慢排序1.血紅蛋白E/A22.血紅蛋白D/S3.血紅蛋白G4.血紅蛋白K5.血紅蛋白J6.血紅蛋白H地貧篩查中的血紅蛋白電泳Hb電泳操作中的經(jīng)驗(yàn)與教訓(xùn)1.RBC洗滌：離心的速度和時(shí)間要夠，生理鹽水與血比例要5：1，血漿與冼滌生理鹽水要盡量吸干凈。2.制備溶血：加入的溜水、溶血?jiǎng)┡c紅細(xì)胞體積要符合要求。離心的速度和時(shí)間要夠。3.點(diǎn)樣:血紅蛋白液適量，不能太寬。4.電泳:醋纖膜浸泡時(shí)間要夠長(zhǎng)，平衡時(shí)間要夠。5.染色與脫色:時(shí)間要夠。地貧篩查中的血紅蛋白電泳1.正常新生兒9.輕型β地中海貧血2.胎兒水腫綜合征10.異常HbD雜合子3.α地中海貧血1(臍血)

11.異常HbG雜合子4.HbCS-HbH病型12.輕型β地中海貧血復(fù)合HbE5.重型β地中海貧血復(fù)合HbE13.正常成人6.輕型β地中海