醫(yī)學(xué)逆轉(zhuǎn)錄病毒專題知識(shí)講座

逆轉(zhuǎn)錄病毒專題知識(shí)講座第一節(jié)人類免疫缺陷病毒第二節(jié)人類嗜T細(xì)胞病毒重點(diǎn)難點(diǎn)熟悉了解掌握逆轉(zhuǎn)錄病毒的特性；HIV的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、復(fù)制周期及傳播途徑；HIV的致病性及防治原則。HIV的微生物學(xué)檢查；人類嗜T細(xì)胞病毒的致病性。

逆轉(zhuǎn)錄病毒科的病毒分類。人類免疫缺陷病毒humanimmunodeficiencyvirus,HIV第一節(jié)1.1981年，美國科學(xué)家MichaelS.Gottlieb報(bào)道5例卡氏肺囊蟲肺炎，“GayCancer”2.美國疾控中心將其命名為“獲得性免疫缺陷綜合征”（AcquiredImmuneDeficiencySyndrome,AIDS），即艾滋病3.1983年，法國科學(xué)家LucMontagenier等分離到病毒，命名為HumanImmunodeficiencyVirus,HIV4.1988年12月1日定為第一個(gè)“世界艾滋病日”（一）人類免疫缺陷病毒的發(fā)現(xiàn)一、概述一、概述（二）人類免疫缺陷病毒的分型1.HIV-1：全球流行，容易發(fā)生變異，是導(dǎo)致AIDS的主要病原體，病毒感染后導(dǎo)致嚴(yán)重免疫缺陷，最終死于各種機(jī)會(huì)性感染和惡性腫瘤2.HIV-2：主要在西非和西歐局部流行（三）HIV/AIDS在我國的流行特點(diǎn)1.性途徑為主要傳播途徑，男-男同性戀的性傳播比例上升明顯2.局部地區(qū)和特定人群疫情嚴(yán)重3.感染者陸續(xù)進(jìn)入發(fā)病期，AIDS死亡人數(shù)增加（一）病毒的大小與形態(tài)1.HIV病毒顆粒呈球形2.中等大小，直徑約100nm~120nm二、生物學(xué)性狀HIV-1病毒顆粒結(jié)構(gòu)

（復(fù)旦大學(xué)陸路教授提供）二、生物學(xué)性狀（二）病毒的結(jié)構(gòu)1.包膜病毒，含兩種刺突（糖蛋白gp120和跨膜糖蛋白gp41）2.核衣殼為二十面體立體對(duì)稱（p24）3.核心含有2條完全相同的+ssRNA（約9.2kb）4.核心還包括逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）、整合酶（IN）和蛋白酶（PR）5.gp120糖蛋白與受體CD4分子及輔助受體（CXCR4/CCR5）分子結(jié)合，為中和性抗原，較容易發(fā)生變異6.gp41為跨膜糖蛋白，介導(dǎo)病毒包膜與宿主細(xì)胞膜的融合，較少發(fā)生變異二、生物學(xué)性狀（三）病毒的基因組結(jié)構(gòu)及編碼蛋白gag5’vifpolenv前體蛋白p55，切割為：衣殼蛋白p24內(nèi)膜蛋白p17核衣殼蛋白p7主要構(gòu)成病毒的衣殼前體蛋白p150，切割為：逆轉(zhuǎn)錄酶p66/p51整合酶p32組成病毒的核心前體蛋白gp160，切割為：胞膜糖蛋白gp120胞膜糖蛋白gp41組成病毒包膜及表面刺突+ssRNA（9.2kb）LTR3’LTR基因組編碼蛋白vprrevvpuneftatHIV-1基因組結(jié)構(gòu)及其主要編碼蛋白二、生物學(xué)性狀HIV-1基因組及其編碼蛋白基因編碼蛋白及功能結(jié)構(gòu)基因gag先編碼前體蛋白p55，經(jīng)蛋白酶剪切為基質(zhì)蛋白p17、衣殼蛋白p24、核殼蛋白p7pol編碼產(chǎn)生蛋白酶p11、逆轉(zhuǎn)錄酶p51、RNA酶H（p15）、整合酶p32env編碼前體蛋白gp160，隨后裂解為gp120（吸附靶細(xì)胞）和gp41（介導(dǎo)膜融合）調(diào)節(jié)基因tatTat（p14），反式激活轉(zhuǎn)錄因子，激活HIV基因的轉(zhuǎn)錄revRev（p19），促進(jìn)部分剪接和未剪接的病毒mRNA從核轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)nefNef（p24），增強(qiáng)病毒的復(fù)制和感染性；抑制感染細(xì)胞凋亡；下調(diào)感染細(xì)胞MHC-I類分子的表達(dá)vpuVpu（p16），介導(dǎo)CD4分子降解，促進(jìn)病毒裝配、成熟和釋放vprVpr（p15），促進(jìn)病毒DNA轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核vifVif（p23），在某些類型細(xì)胞中，增強(qiáng)病毒感染能力二、生物學(xué)性狀（四）病毒的感染與復(fù)制1.吸附：HIV-gp120+CD4分子-靶細(xì)胞2.穿入：gp41介導(dǎo)HIV包膜與宿主細(xì)胞膜的融合3.脫殼：脫去病毒衣殼，釋放RNA于細(xì)胞核中4.生物合成：細(xì)胞核中進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞漿中進(jìn)行翻譯5.組裝釋放：病毒核酸和結(jié)構(gòu)蛋白裝配形成核衣殼，從宿主細(xì)胞釋放時(shí)獲得包膜，形成完整的有感染性的子代病毒體，感染其它宿主細(xì)胞二、生物學(xué)性狀（五）抗原變異與型別1.HIV-1型和HIV-2型的病毒核苷酸序列差異超過40%2.HIV病毒容易發(fā)生變異，疫苗研制困難HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶無校正功能env基因最易發(fā)生突變gp120表面抗原變異有利于病毒逃避免疫清除二、生物學(xué)性狀（六）抵抗力：對(duì)理化因素抵抗力弱1.0.5%次氯酸鈉、5%甲醛、2%戊二醛、70%乙醇處理10~30min，可滅活病毒2.煮沸100℃，20min可滅活病毒3.在20~37℃環(huán)境下可存活15天4.在冷凍血制品中，68℃加熱72h才能滅活病毒三、致病性（一）傳染源1.HIV感染者2.HIV攜帶者（二）傳播途徑：HIV主要存在于血液、精液、陰道分泌物、乳汁等體液中1.性傳播：同性、異性2.血液傳播：輸血或血制品、器官移植、人工授精、藥癮者共用注射器等3.母嬰傳播（垂直傳播）：胎盤、產(chǎn)道、哺乳三、致病性（三）臨床表現(xiàn)：艾滋病潛伏期長（幾年至十幾年），臨床病程分為1.急性感染期：出現(xiàn)類似流感的非特異性癥狀，一般約2~3周后癥狀自行消退；急性期血中HIV抗體可能尚未轉(zhuǎn)陽，可檢到HIV抗原p24作早期診斷2.無癥狀潛伏期：潛伏長達(dá)數(shù)年至數(shù)十年，患者一般無臨床癥狀，或癥狀輕微，伴無痛性淋巴結(jié)腫大，血中HIV抗體檢測顯示陽性3.AIDS相關(guān)綜合征（AIDS-relatedcomplex，ARC）：出現(xiàn)發(fā)熱、盜汗、疲乏、體重減輕、慢性腹瀉和淋巴結(jié)腫大等4.典型AIDS，即免疫缺損期：機(jī)會(huì)感染及腫瘤三、致病性（三）臨床表現(xiàn)：HIV感染結(jié)局三、致病性（四）免疫性：細(xì)胞免疫、體液免疫1.細(xì)胞免疫：CTL、NK細(xì)胞2.體液免疫：感染后血清中出現(xiàn)抗HIV抗體——IgG、IgM（抗gp120），為中和抗體，具有保護(hù)作用，但HIV容易發(fā)生變異，逃逸抗體作用3.目前，尚無有效疫苗，預(yù)防才是硬道理四、微生物學(xué)檢查（一）檢測病毒抗體：ELISA法初步篩查，蛋白質(zhì)印記法（WB）確證（二）檢測病毒抗原：P24可用于HIV感染的早期診斷，在感染早期（約2~3周）即可檢測到，常用于窗口期的輔助診斷（三）檢查病毒核酸：RT-PCR檢查HIV-RNA，用于疾病進(jìn)展及療效觀察（四）病毒分離：外周血單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng)法，臨床上不常用五、防治原則（一）預(yù)防1.宣傳教育、潔身自好2.對(duì)獻(xiàn)血、獻(xiàn)器官、獻(xiàn)精液者必須作HIV抗體檢測3.HIV抗體陽性婦女，應(yīng)避免懷孕或母乳喂養(yǎng)4.建立HIV感染的監(jiān)測網(wǎng)，及時(shí)掌握疫情五、防治原則（二）治療：高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（highlyactiveanti-retroviraltherapy，HAART，俗稱“雞尾酒”療法）1.逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑：包括核苷類/非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑2.病毒蛋白酶抑制劑3.病毒入胞抑制劑：包括融合抑制劑（FI）和CCR5拮抗劑4.整合酶抑制劑人類嗜T細(xì)胞病毒humanTlymphotropicviruses,HTLV第二節(jié)一、概述（一）人類嗜T細(xì)胞病毒，

humanTlymphotropicviruses，HTLV1.HTLV-1：是成人T淋巴細(xì)胞白血?。╝ldultTcellleukemia，ATL）的病原體2.HTLV-2：是引起毛細(xì)胞白血病的病原體（二）HTLV的分型1.HTLV屬于人類逆轉(zhuǎn)錄病毒科的δ反轉(zhuǎn)錄病毒屬，是引起人類惡性腫瘤的RNA腫瘤病毒2.HTLV是20世紀(jì)70年代后期發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)人類逆轉(zhuǎn)錄病毒二、生物學(xué)性狀（一）病毒形態(tài)與結(jié)構(gòu)1.HTLV-1顆粒呈球形，直徑約100nm2.包膜病毒，包膜上有兩種刺突：糖蛋白gp46（與靶細(xì)胞表面的CD4分子結(jié)合）；糖蛋白gp21（為跨膜蛋白）3.衣殼：由衣殼蛋白p24組成二十面體立體對(duì)稱結(jié)構(gòu)4.核心：由核殼蛋白（p15）及2條相同的+ssRNA（約9.0kb）組成，5.核心還含有逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶及蛋白酶等二、生物學(xué)性狀HTLV病毒基因組及其主要編碼蛋白gagLTR5’3’LTRpolenv編碼前體蛋白切割為：基質(zhì)蛋白p19衣殼蛋白p24核衣殼蛋白p15組成病毒的衣殼及核衣殼編碼前體蛋白切割為：逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白酶整合酶組成病毒核心的一部分編碼前體蛋白切割為：表面糖蛋白gp46跨膜蛋白gp21組成病毒包膜及表面刺突+ssRNA（9.0kb）（二）HTLV基因組結(jié)構(gòu)三、致病性與免疫性（一）致病性1.傳染源：患者和HTLV感染者2.傳播途徑：主要通過輸血、性接觸傳播，亦可經(jīng)母嬰途徑傳播3.所致疾?。篐TLV-1主要感染CD4+T細(xì)胞，是成人T細(xì)胞白血?。ˋTL）的病原體；ATL好發(fā)于40歲以上成人，日本、印度、非洲等為高發(fā)區(qū)，我國福建沿海和北方少數(shù)民族地區(qū)有流行4.ATL臨床表現(xiàn)：急性型、淋巴瘤型、慢性型和隱匿型三、致病性與免疫性（二）致病機(jī)制1.HTLV-1—Tax蛋白—反式激活NF-kB—上調(diào)IL-2基因和IL-2R基因表達(dá)—T細(xì)胞過度增殖——腫瘤2.前病毒DNA整合—導(dǎo)致染色體畸變—細(xì)胞轉(zhuǎn)化—白血?。ㄈ┟庖咝?.細(xì)胞免疫：可殺傷病毒感染的靶細(xì)胞2.體液免疫：特異性抗體出現(xiàn)，病毒抗原表達(dá)減少，影響細(xì)胞免疫作用四、微生物學(xué)檢查（一）血清中HTLV特異性抗體檢測1.初篩試驗(yàn)：ELISA法或免疫熒光檢測血清中HTLV-1/2抗體2.確認(rèn)試驗(yàn)：初篩試驗(yàn)的陽性血清需經(jīng)Westernblot確認(rèn)（二）靶細(xì)胞中HTLV前病毒DNA檢測1.采用PCR檢測外周血單個(gè)核細(xì)胞中的HTLV前病毒DNA2.敏感性高，可協(xié)助確定診斷五、防治原則（一）預(yù)防1.非特異性預(yù)防：及時(shí)發(fā)現(xiàn)感染者、切斷傳播途徑2.疫苗：尚無特異性疫苗（二）治療采用逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、IFN-α、聯(lián)合化療等綜合方案對(duì)人致病的逆轉(zhuǎn)錄病毒主要有人類免疫缺陷病毒（HIV）和人類嗜T細(xì)胞病毒（HTLV）兩種，前者主要引起獲得性免疫缺陷綜合征，俗稱艾滋病（AIDS），后者主要引起成人T淋巴細(xì)胞白血?。ˋTL）。HIV為球形胞膜病毒，胞膜上含兩種糖蛋白刺突（gp120和gp41），與HIV病毒的吸附和穿入密切相關(guān)，病毒內(nèi)層主要由p24組成衣殼蛋白，核心含兩條相同的+ssRNA及各種功能蛋白（逆轉(zhuǎn)錄酶及整合酶等）。HIV的主要受體是CD4分子，通過破壞表達(dá)CD4分子的細(xì)胞（主要是T淋巴細(xì)胞）導(dǎo)致機(jī)體免疫力低下（以細(xì)胞免疫損傷為主），引起以機(jī)會(huì)性感染和腫瘤為主要表現(xiàn)的臨床綜合征（艾滋?。?，臨床表現(xiàn)與體內(nèi)T細(xì)胞的數(shù)量直接相關(guān)。HIV的傳播途徑主要包括性接觸傳播、血液傳播及母嬰傳播。臨床診斷HIV感染常用ELISA法進(jìn)行初篩，陽性者需進(jìn)一步采用蛋白印記法（WB）確診，窗口期常