《光學(xué)比濁法血小板聚集檢測》

ICS號

中國標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)分類號

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/ZHCAXXX—XXXX

光學(xué)比濁法血小板聚集檢測

Detectionofplateletaggregationwithlighttransmissionaggregometry

（征求意見稿）

××××-××-××發(fā)布××××-××-××實施

xxxxxxxxxxxxxx發(fā)布

T/ZHCAXXX—XXXX

光學(xué)比濁法血小板聚集檢測

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了光學(xué)比濁法檢測血小板聚集的檢驗全過程。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于臨床醫(yī)學(xué)實驗室使用光學(xué)比濁法檢測血小板聚集的應(yīng)用。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本

適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文

件。

GB/T22576.1-2018/ISO15189：2012醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的要求第1部分：通用

要求

WS/T402-2012臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定

WS/T406-2012臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求

WS/T661-2020靜脈血液標(biāo)本采集指南

3術(shù)語、定義和縮略詞

GB/T22576.1-2018以及下列界定的術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1術(shù)語和定義

3.1.1血小板聚集（plateletaggregation）

通過纖維蛋白原或血管性血友病因子（vonWillebrandfactor,vWF）等的介導(dǎo)，血

小板與血小板之間的相互聯(lián)結(jié)。

3.1.2光學(xué)比濁法血小板聚集測定（lighttransmissionaggregometry）

一種測定加入血小板激動劑后攪拌的富血小板血漿透光性變化的體外試驗。

3.1.3富血小板血漿（plateletrichplasma）

全血經(jīng)低速離心后得到的高濃度血小板血漿。

3.1.4乏血小板血漿（plateletpoorplasma）

全血經(jīng)高速離心后得到的血小板含量較低的血漿。

3.1.5誘導(dǎo)劑（agonist）

能夠刺激血小板活化的試劑。

3.1.6精密度（precision）

1

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在規(guī)定的條件下，對同一或相似被測對象重復(fù)測量得到測量示值或測得量值間的一致

程度。

3.2縮略語

下列略縮語適用于本文件。

3.2.1血管性血友病因子（vonWillebrandfactor,vWF）

3.2.2富血小板血漿（Plateletrichplasma,PRP）

3.2.3乏血小板血漿（Plateletpoorplasma,PPP）

3.2.4光學(xué)比濁法血小板聚集測定（lighttransmissionaggregometry,LTA）

3.2.5血細(xì)胞比容（hematocrit,Hct）

4檢驗前過程

檢驗前過程主要包括實驗室與臨床交流和培訓(xùn)、檢驗申請、患者準(zhǔn)備、血液標(biāo)本采集

與抗凝、標(biāo)本保存和轉(zhuǎn)運。

4.1實驗室與臨床交流和培訓(xùn)

4.1.1實驗室應(yīng)與臨床醫(yī)生交流，輔助醫(yī)生熟悉檢測結(jié)果的臨床意義，合理選擇檢驗

項目并準(zhǔn)確解釋結(jié)果。

4.1.2實驗室應(yīng)對標(biāo)本采集人員、標(biāo)本運送人員培訓(xùn)“患者準(zhǔn)備”“血液標(biāo)本采集與

抗凝”“標(biāo)本保存和轉(zhuǎn)運”相關(guān)內(nèi)容，保證檢驗前的標(biāo)本質(zhì)量。

4.2申請單信息

申請單信息應(yīng)符合GB/T22576.1-2018中5.4.3規(guī)定。

申請單或電子申請單應(yīng)包含以下（但不限于）內(nèi)容：

患者身份識別，醫(yī)師、醫(yī)療服務(wù)提供者識別，原始樣品的類型，申請的檢驗項目，與

患者和申請項目相關(guān)的臨床資料，原始樣品采集日期和時間，樣品接收日期和時間。

4.3患者準(zhǔn)備

4.3.1采血前準(zhǔn)備

受試者應(yīng)空腹，采血前一餐宜避免進(jìn)食高脂食物；采血前2h內(nèi)禁飲咖啡或含咖啡因

飲料，采血前30min內(nèi)禁止吸煙；同時，建議患者采血前2h內(nèi)避免劇烈運動。

4.3.2藥物或膳食的影響

4.3.2.1應(yīng)在采血前完成由護(hù)士或患者所在科室記錄受試者服用的所有藥物，在解釋

血小板聚集結(jié)果時，臨床檢驗實驗室應(yīng)考慮這些藥物對血小板功能的影響。

2

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4.3.2.2可能影響血小板聚集率的藥物：如阿托品、氫化可的松、阿司匹林、西洛他

唑、噻氯匹定、氯比格雷、普拉格雷、替格瑞洛、沙格雷酯、阿昔單抗、替羅非班、雙嘧

達(dá)莫、肝素、雙香豆素、普萘洛爾、呋塞米、β內(nèi)酰胺類抗生素等藥物，以及丹參、紅

花、三七、銀杏葉、水蛭類等中藥制劑。

4.3.3生理因素的影響

應(yīng)注意年齡和經(jīng)期、妊娠等生理因素對血小板功能的影響。

4.3.4其他要求

采血時間、采血體位、輸液應(yīng)符合GB/T22576.1-2018中5.4.4.2和WS/T661-2020

中4規(guī)定。

4.4血液標(biāo)本采集與抗凝

4.4.1血液標(biāo)本采集

4.4.1.1血標(biāo)本采集應(yīng)由經(jīng)過培訓(xùn)的醫(yī)護(hù)人員操作，肘前靜脈采集，不得拍打采血部

位；不宜使用止血帶，如需使用止血帶，在針插入血管見回血后應(yīng)立即釋放止血帶。

4.4.1.2采血過程不超過1min。

4.4.1.3血標(biāo)本采集應(yīng)使用19~21G針頭。

4.4.1.4血標(biāo)本采集應(yīng)使用塑料或硅化玻璃管,可使用真空管或注射器。

4.4.2血液標(biāo)本抗凝

4.4.2.1血標(biāo)本使用105~109mmol/L枸櫞酸鈉緩沖液抗凝，使得在處理和檢測期間保

持pH值穩(wěn)定（正常范圍6.8~8.5）。

4.4.2.2Hct在25%~55%時，109mmol/L枸櫞酸鈉與血液比例為1:9，Hct過高或過低

者應(yīng)調(diào)整血液和抗凝劑比例，以保證血漿Ca2+與正常Hct一致。

抗凝劑校正方法見附錄A。

4.4.2.3血小板功能檢測血樣宜選擇收集的第2管血，如患者本次采血只行此項檢測

則建議棄去第1管血，不建議采用血管通路采血以免外源肝素影響。

4.4.2.4使用不同抗凝管采血時，先采集枸櫞酸鈉管，然后采集EDTA或肝素管。

4.4.2.5在采集血標(biāo)本之后，立即將抗凝管輕輕顛倒混勻，至少6次；不應(yīng)過度混合

或攪拌。

4.4.3其他要求

采血物品的準(zhǔn)備、患者身份與準(zhǔn)備情況確認(rèn)、采血管信息標(biāo)記、穿刺靜脈的選擇、拔

針與穿刺點止血應(yīng)符合GB/T22576.1-2018中5.4.4.3和WS/T661-2020中5規(guī)定。

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4.5標(biāo)本保存和轉(zhuǎn)運

4.5.1血標(biāo)本管應(yīng)保持直立、加蓋置于室溫(20~25℃)保存，不應(yīng)置于冰上、冰箱或水

浴箱內(nèi)。

4.5.2血標(biāo)本不應(yīng)通過氣動管道系統(tǒng)運輸。

4.5.3血標(biāo)本在采血后4h內(nèi)完成測試。

4.5.4實驗室應(yīng)拒收存在凝血、嚴(yán)重溶血和采集超過4h的血標(biāo)本，并記錄；如有脂

血等，最終報告應(yīng)備注。

5檢驗過程

檢驗過程主要包括樣本制備、檢測系統(tǒng)要求和參考區(qū)間。

5.1人員培訓(xùn)

應(yīng)對操作人員培訓(xùn)“樣本制備”相關(guān)注意事項，經(jīng)考核合格后上崗。

人員培訓(xùn)應(yīng)符合GB/T22576.1-2018中5.1.6規(guī)定。

5.2樣本制備

5.2.1離心機(jī)

應(yīng)采用水平式低速離心機(jī)，運行穩(wěn)定無震動，制動平穩(wěn)。

5.2.2PRP制備

采用低速水平離心機(jī)在200g的相對離心力下離心10min得到PRP。建議PRP中血小

板濃度至少應(yīng)>150×109/L。

5.2.3PPP制備

在1500g的相對離心力下繼續(xù)離心15min得到PPP，建議PPP中血小板濃度低于10

×109/L。

5.2.4PRP和PPP的轉(zhuǎn)移

取樣針或移液器應(yīng)在血漿高度的1/2以下位置，吸取足夠本次測試所需的PRP和PPP

血漿，不要觸及白膜層及紅細(xì)胞。

5.2.5PRP和PPP存放

PRP和PPP應(yīng)存放在塑料或硅化的玻璃材質(zhì)的樣本管中。

5.2.6樣本質(zhì)量

確認(rèn)離心后的血漿不應(yīng)有溶血、黃疸及乳糜等渾濁物質(zhì)，否則將影響檢測結(jié)果。

5.3檢測系統(tǒng)

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檢測系統(tǒng)主要包括試劑使用和保存、樣品杯和比濁反應(yīng)杯、攪拌子、攪拌速度、溫度

控制、加樣精度和光學(xué)檢測系統(tǒng)。

5.3.1檢驗程序驗證

檢驗程序驗證應(yīng)符合GB/T22576.1-2018中5.5.1.2規(guī)定。

性能驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括攜帶污染率、精密度、可報告范圍、實驗室內(nèi)的結(jié)果可比性

等，宜參考WS/T406-2012。

5.3.2試劑使用

凍干粉試劑應(yīng)使用配套的復(fù)融液，將其充分混勻并穩(wěn)定10~15min。

5.3.3試劑保存

5.3.3.1開蓋復(fù)融后的試劑，建議一次性使用完，也可根據(jù)廠家說明書要求進(jìn)行分裝

保存，但需采用帶蓋容器分裝保存。

5.3.3.2應(yīng)按照說明書根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的保存方法進(jìn)行保存。

5.3.3.3使用低溫凍存的試劑，需在室溫下充分解凍后使用，但不可反復(fù)凍融。

5.3.3.4花生四烯酸應(yīng)避光保存，防止光學(xué)催化；如試劑變黃，應(yīng)考慮變質(zhì)的可能。

5.3.4樣品杯和比濁反應(yīng)杯

應(yīng)采用透光度良好的一次性塑料或經(jīng)硅化的玻璃材質(zhì)的樣品杯及比濁反應(yīng)杯，盡量避

免反復(fù)使用；比濁反應(yīng)杯應(yīng)采用內(nèi)圓無死角的結(jié)構(gòu)，防止血小板剪切激活。

5.3.5攪拌子

攪拌子材料應(yīng)選取合適的惰性金屬，防止與樣本發(fā)生反應(yīng)，攪拌子的形狀應(yīng)為兩頭半

圓光滑無死角的圓柱體；攪拌子的形狀和攪拌條件與血小板聚集結(jié)果直接相關(guān)，是檢測系

統(tǒng)的重要組成部分。

5.3.6攪拌速度

攪拌子轉(zhuǎn)速控制和轉(zhuǎn)動速度誤差應(yīng)符合制造商的要求。

5.3.7溫度控制

儀器設(shè)備的反應(yīng)檢測區(qū)域能夠?qū)崿F(xiàn)恒溫控制，溫度控制應(yīng)符合制造商的要求。

5.3.8加樣精度

使用全自動儀器時，應(yīng)注意吸樣泵的精度，以及管路密閉性；使用半自動儀器時，應(yīng)

注意移液器的精度和質(zhì)量，同時應(yīng)避免人為加樣造成的誤差。加樣精度應(yīng)符合制造商要

求。

5.3.9光學(xué)檢測系統(tǒng)

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測量值相對偏差和測量值的不精密度應(yīng)符合制造商的要求。

5.4參考區(qū)間

建議各實驗室應(yīng)根據(jù)本實驗室檢測體系建立本實驗室的參考區(qū)間。

如使用經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化的全自動檢測設(shè)備，可參考廠家說明書提供的參考區(qū)間，但實驗前需

根據(jù)本實驗室檢測體系進(jìn)行驗證。

制定相應(yīng)參考區(qū)間應(yīng)符合GB/T22576.1-2018中5.5.2和WS/T402-2012規(guī)定。

6檢驗后過程

檢驗后過程主要包括結(jié)果報告和結(jié)果解讀。

6.1結(jié)果報告

6.1.1總體要求

每一項檢驗結(jié)果均應(yīng)準(zhǔn)確、清晰、明確并依據(jù)檢驗程序的特定說明報告。

實驗室硬規(guī)定報告的格式和介質(zhì)（即電子或紙質(zhì)）及其從實驗室發(fā)出的方式。

實驗室應(yīng)制定程序以保證檢驗結(jié)果正確轉(zhuǎn)錄。

報告中應(yīng)包括解釋檢驗結(jié)果所必須的信息。

當(dāng)檢驗延誤可能影響患者醫(yī)療時，實驗室應(yīng)有通知檢驗申請者的方法。

6.1.2報告內(nèi)容

檢驗報告內(nèi)容應(yīng)包括但不限于以下內(nèi)容：

檢驗項目、發(fā)布報告的實驗室、患者的識別、檢驗申請者識別、原始樣品采集的日期

和采集時間、誘導(dǎo)劑種類、誘導(dǎo)劑的終濃度、參考區(qū)間、檢驗結(jié)果、結(jié)果解釋（適當(dāng)

時）、復(fù)合結(jié)果和授權(quán)發(fā)布報告者識別和報告及發(fā)布的日期和時間。

如特殊病例，臨床醫(yī)生注明需要血小板聚集波形圖時，應(yīng)予提供（見附錄B）。

6.2結(jié)果解讀

6.2.1解讀檢驗結(jié)果醫(yī)師必須具有相應(yīng)專業(yè)的上崗資質(zhì)。

6.2.2血小板功能結(jié)果易受檢驗前、中后等多種因素影響，對異常結(jié)果，應(yīng)予復(fù)查，

不能根據(jù)1次檢測結(jié)果，即行診斷。

6.2.3血小板聚集用于檢測誘導(dǎo)劑引起體外血小板活化和血小板結(jié)合的能力。

6.2.4血小板聚集檢測常用的誘導(dǎo)劑包括ADP、膠原、花生四烯酸和腎上腺素。誘導(dǎo)

劑選擇和使用見附錄C。

6.2.5ADP和腎上腺素誘導(dǎo)呈雙向聚集模式：糖蛋白IIb/IIIa血小板膜受體激活形成

初級聚集，血小板脫顆粒和血小板聚集增加形成第二波聚集。

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6.2.6其他激動劑如花生四烯酸、凝血酶受體激動劑和膠原，通常只顯示一波聚集。

6.2.7瑞斯托霉素誘導(dǎo)的血小板聚集是篩查血管性血友?。╒onWillebrand

disease,VWD）和一些血小板功能缺陷（如Bernard-Soulier綜合征）的檢測方法。應(yīng)用

不同濃度的瑞斯托霉素誘導(dǎo)，有助評價血小板聚集的敏感性。

6.2.8血小板聚集檢測結(jié)果臨床意義見附錄D。

6.2.9常見血小板功能缺陷的血小板聚集試驗示例見附錄E。

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附錄A

（規(guī)范性附錄）

抗凝劑的校正

可使用如下兩種方法確定在收集高Hct血液標(biāo)本時所用109mmol/L枸櫞酸鈉的體積。

1、使用公式計算用量：

抗凝劑用量=0.00185×血量(ml)×(100-Hct）；

2、對表法：根據(jù)血液不同的Hct，按照下表調(diào)整調(diào)整抗凝劑比例，以保障鈣離子濃度。

血量2mL5mL10mL

Hct(%)抗凝劑用量(mL)

200.2960.741.48

300.2590.64751.295

400.2220.5551.11

500.1850.46250.925

600.1480.370.74

700.1110.27750.555

800.0740.1850.37

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附錄B

（資料性附錄）

血小板聚集報告方式示例

姓名：ID：性別：年齡：標(biāo)本類型：

病區(qū)：床號：診斷：申請醫(yī)生：采樣時間：

血小板聚集誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)劑濃度結(jié)果參考范圍

接收時間：報告時間：檢驗者：審核者：

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附錄C

（資料性附錄）

誘導(dǎo)劑的選擇

不同的誘導(dǎo)劑檢測不同種類的血小板異常，初始檢測時不必使用全部的誘導(dǎo)劑，可應(yīng)用

常規(guī)誘導(dǎo)劑在標(biāo)準(zhǔn)劑量下檢測血小板聚集情況，有異常時再進(jìn)一步檢測（附表）。一般情況

下，如果低濃度的誘導(dǎo)劑不聚集，再進(jìn)行高濃度的誘導(dǎo)劑檢測；而對于懷疑2B型或血小板

型血管性血友?。╲onWillebranddisease，vWD）的患者在常規(guī)1.2mg/ml瑞斯托霉素聚集正

常時，需進(jìn)行低濃度（0.5~0.7mg/ml）瑞斯托霉素檢測；如果花生四烯酸聚集降低，需采用

血栓素A2類似物U46619來區(qū)分阿司匹林樣缺陷還是血栓烷受體缺陷。

LTA法檢測血小板聚集時誘導(dǎo)劑及其濃度

誘導(dǎo)劑

起始濃度濃度范圍靶點

篩選檢測

ADP2~2.5μmol/L0.5~20μmol/LP2Y1和P2Y12

腎上腺素5μmol/L0.5~10μmol/L腎上腺素受體

I型膠原1~2μg/L1.0~5.0μg/LGPⅥ和α2β2

花生四烯酸1mmol/L0.5~2.0mmol/LTXA2合成

瑞斯托霉素1.2mg/ml1.0~1.5mg/ml

（高濃度）

vWF/GPIb

0.5mg/ml0.5~0.7mg/ml

（低濃度）

特殊檢測

U466191μmol/L1~5μmol/LTXA2受體

TRAP10μmol/L10~100μmol/LPAR~1

CRP10ng/ml10~1000ng/mlGPⅥ

A23187Lμmol/L1~10μmol/L鈣動員

注：TXA2為血栓烷A2，TRAP為凝血酶受體激活肽，CRP為膠原相關(guān)肽，PAR-1為蛋

白酶激活受體-1

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附錄D

（資料性附錄）

血小板聚集檢測結(jié)果臨床意義解讀

（一）血小板聚集率減低

1.輔助診斷先天性及獲得性血小板功能障礙：先天及獲得性血小板功能障礙是臨床常見

的出血性疾病，伴有血小板聚集功能減低，主要實驗室表現(xiàn)為對一種或多種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的血

小板聚集率減低。巨大血小板癥對瑞斯托霉素聚集率降低，對其他誘導(dǎo)劑反應(yīng)正常。血小板

無力癥對瑞斯托霉素外所有的誘導(dǎo)劑均不聚集。低濃度瑞斯托霉素誘導(dǎo)的血小板聚集增高對

2B型血管性血友?。╲onWillebranddisease,vWD,vWD）和血小板型vWD的診斷具有特異

性。儲存池病或顆粒缺失(δ顆粒缺失等)表現(xiàn)為二相聚集缺失甚至發(fā)生解聚。

2.監(jiān)測抗血小板治療的效果：抗血小板藥物是一組能抑制血小板活化、聚集和阻止血小

板參與血栓形成的藥物，多用于心腦血管疾病、微血管病變、病理產(chǎn)科（先兆子癇、復(fù)發(fā)性

流產(chǎn)等）等血栓相關(guān)性疾病的預(yù)防和治療。

阿司匹林抑制血栓素A2合成，可選擇花生四烯酸作為誘導(dǎo)劑。P2Y12受體拮抗劑

（氯吡格雷、噻氯吡啶、普拉格雷、替格瑞洛），可選擇二磷酸腺苷（adenosine

diphosphate,ADP）作為誘導(dǎo)劑。血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受體拮抗劑（替羅非班、拉米非

班）抑制血小板聚集最終通路，導(dǎo)致除瑞斯托霉素外的誘導(dǎo)劑聚集率降低。丹參類、紅花

類、銀杏葉類、三七類等中成藥也可抑制血小板聚集。

3.評價膳食及營養(yǎng)補(bǔ)充劑對血小板聚集功能的影響：水溶性番茄濃縮物可抑制ADP和

膠原誘導(dǎo)的血小板聚集，可可黃烷醇可抑制腎上腺素誘導(dǎo)的血小板聚集，魚油可抑制膠原誘

導(dǎo)的血小板聚集。

4.抗血小板治療患者手術(shù)風(fēng)險評估：抗血小板治療可導(dǎo)致出血并發(fā)癥，進(jìn)行抗血小板

治療的患者在手術(shù)前，使用LTA法監(jiān)測血小板功能，防范術(shù)中和術(shù)后的出血風(fēng)險。對擇期

手術(shù)患者，血小板功能恢復(fù)正常有助于減少手術(shù)相關(guān)的出血。急診手術(shù)根據(jù)患者用藥史選

擇相應(yīng)處理措施。

（二）血小板聚集率增高

僅有臨床參考價值，多見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病，如冠心病、急性心肌梗死、人工瓣

膜置換后、經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)后、先天性心臟病、腦梗死、深靜脈血栓形成、糖尿病、胰

島素抵抗、高同型半胱氨酸血癥、高β脂蛋白血癥、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、先兆子癇、抗磷脂綜合征、

特魯索綜合征、口服避孕藥、吸煙、缺乏運動等情況，顯示對ADP、花生四烯酸、膠原、凝

血酶等誘導(dǎo)劑作用下的血小板聚集率增高。

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附錄E

（資料性附錄）

常見血小板功能缺陷的血小板聚集試驗示例圖

ADP膠原腎上腺素花生四烯酸瑞斯托霉素（低劑量）瑞斯托霉素（高劑量）

正常血