DB51T 1097-2010 牛奶中沙丁胺醇?xì)埩魴z測方法-酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法　　

DB51/T1097—2010牛奶中沙丁胺醇?xì)埩魴z測方法一四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB51/T1097—2010 1 13制樣 1 1 3本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜牧食品局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：四川省獸藥監(jiān)察所、四川省獸藥殘留監(jiān)控中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：吳曉嵐、程江、彭莉、岳秀英、熊浩山、官艷麗、王海波。11范圍凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3制樣3.2樣品的保存4測定方法4.2試劑和材料4.2.2沙丁胺醇檢測試劑盒：2℃~8℃保存。(采用官方備案的試劑盒)。4.2.2.196孔板酶標(biāo)板8條×12孔，包被有沙丁胺醇偶聯(lián)抗原。4.2.2.2沙丁胺醇系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0μg/L、0.2μg/L、0.6μg/L、1.8μg/L、5.4μg/L、16.2μg/L。4.2.2.4抗體工作液。4.2.2.5底物溶液A。4.2.2.6底物溶液B。4.2.2.7濃縮洗滌液臨用前用水稀釋二十倍作為洗滌液。24.2.2.8濃縮復(fù)溶液臨用前用水1:1稀釋。4.3儀器和設(shè)備4.3.1酶標(biāo)儀(配備450nm濾光片)。4.3.2天平感量0.01g。4.3.3g4.3.4漩渦混合器4.3.5振蕩器4.3.6氮吹儀4.3.7冷凍離心機(jī)4.3.9微量移液器單道50μL,100μL,1000μL多道50μL-250μL4.4測定步驟4.4.1試料的制備4.4.2提取和凈化4.4.3量取2.0mL制備后的試料于離心管中，加入6mL乙腈，振搖10min,于3000r/min15℃離心4.4.4樣品測定程序(20℃~25℃條件下操作)4.4.4.1使用前將試劑盒置于室溫(20℃~25℃)平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的酶標(biāo)板微孔條插入框架中，將不用的微孔條放入自封袋，保存于2℃~8℃。將樣后倒出孔中液體，用吸水紙拍干，如此重復(fù)操作共洗板5次。如前述洗板5次。4.5結(jié)果計算和表述所獲得的標(biāo)準(zhǔn)或樣品吸光度值的平均值除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))吸光度值的平均值再乘以100%,得到以百分比給出的吸光度值，以式(1.1)表示：3DB51/T1097—2010B?—為零濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值。以X軸為標(biāo)準(zhǔn)溶液中沙丁胺醇濃度(μg/L)的自然對數(shù)，Y軸為百分吸光度值，在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。相對應(yīng)的供試樣品的濃度(μg/L)可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。也可以求出回歸曲線的方程，計算未知樣品中沙丁胺醇的濃度。如果有專業(yè)計算機(jī)軟件可直接求出供試樣中沙丁胺醇的濃度。注：檢測結(jié)果小于5.0μg/L時，可判為未檢出，大于5.0μg/L時，判為可疑，需用確證法確認(rèn)。本方法在牛奶中的最低檢測限為1.0μg/L。本方法在牛奶中