《基因擴(kuò)增領(lǐng)域檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可指南》（CNAS-GL42 2016）

CNAS-GL42

基因擴(kuò)增領(lǐng)域檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可指南

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中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)

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基因擴(kuò)增領(lǐng)域檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可指南

1適用范圍

本指南旨在促進(jìn)基因擴(kuò)增領(lǐng)域檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)認(rèn)可技術(shù)的理解與執(zhí)行。適用于

申請(qǐng)認(rèn)可的基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室建立質(zhì)量管理體系，已經(jīng)認(rèn)可的基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)

驗(yàn)室規(guī)范其質(zhì)量和技術(shù)活動(dòng)，也可供CNAS評(píng)審員在基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可評(píng)

審過程中參考使用。

2引用文件

GB/T6682《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》

GB/T20001.4《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)》

4管理要求

4.1組織

4.1.2實(shí)驗(yàn)室有責(zé)任和義務(wù)保護(hù)本國的物種信息資源和基因資源，包括動(dòng)物、植

物和微生物等物種資源。

4.1.5c）適用時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在保護(hù)客戶的機(jī)密信息和所有權(quán)的政策和程序中體現(xiàn)

醫(yī)學(xué)倫理，在采集、接受樣本及結(jié)果報(bào)告期間均應(yīng)充分保護(hù)客戶隱私。

4.4要求、標(biāo)書和合同的評(píng)審

4.4.3評(píng)審的內(nèi)容應(yīng)包括被實(shí)驗(yàn)室分包出去的任何工作，如基因測(cè)序工作等。

4.4.5當(dāng)核酸提取或基因擴(kuò)增無法完時(shí)，應(yīng)向客戶做出說明。

注：測(cè)試樣品過度加工、測(cè)試核酸樣品含量不足或降解等原因，可能導(dǎo)致基因擴(kuò)增無法進(jìn)行。

4.6服務(wù)和供應(yīng)品的采購

4.6.2分析過程所有實(shí)驗(yàn)僅用不含DNA酶和RNA酶的分析純或生化試劑，所用的

水應(yīng)符合GB6682一級(jí)水的要求。適用時(shí)，自制試劑使用前應(yīng)高壓滅菌，不宜高

壓滅菌的試劑應(yīng)使用超濾設(shè)備（孔徑0.22μm）除菌。

4.13記錄的控制

4.13.2適用時(shí)，基因擴(kuò)增檢測(cè)中應(yīng)包括以下技術(shù)記錄信息：

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a)樣品的性狀描述；

b)樣品制備方法和使用的設(shè)備；

c)中間樣品的標(biāo)識(shí)；

d)檢測(cè)方法的選擇和驗(yàn)證；

e)檢測(cè)對(duì)照的設(shè)置；

f)統(tǒng)計(jì)分析方法。

5技術(shù)要求

5.3設(shè)施和環(huán)境條件

5.3.3實(shí)驗(yàn)室總體布局和各部位的安排應(yīng)減少潛在的對(duì)樣本的污染和對(duì)人員的危

害，原則上應(yīng)設(shè)分隔開的工作區(qū)域，包括（但不限于）:

a)試劑配制與貯存區(qū)

用于試劑的配制和貯存（包括商業(yè)化的試劑），所有試劑的配制與分裝。

b)核酸提取區(qū)

用于樣品的前處理，核酸的提取、純化與貯存，核酸提取質(zhì)量檢查等。樣品

前處理所用器皿應(yīng)經(jīng)過徹底清洗和高壓消毒處理，并單獨(dú)使用。用過的器皿應(yīng)采

取措施消除核酸的污染，否則不可重復(fù)使用。

進(jìn)行RNA檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室，在此區(qū)域內(nèi)應(yīng)有專門的RNA操作區(qū)。

c)核酸擴(kuò)增區(qū)

用于擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和模板的加入，核酸擴(kuò)增。

d)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

用于擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)和確認(rèn)。若實(shí)驗(yàn)室僅采用全自動(dòng)擴(kuò)增檢測(cè)儀（如實(shí)時(shí)熒

光定量PCR儀），可將核酸擴(kuò)增區(qū)與擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)合并為一個(gè)區(qū)。

適用時(shí)，各分隔的工作區(qū)域設(shè)置緩沖間，緩沖間的壓力為負(fù)壓，與其相連的

工作間為正壓，工作間與緩沖間之間宜安裝磁性連鎖裝置。未設(shè)置緩沖間的工作

區(qū)域的壓力設(shè)計(jì)一般遵循試劑配制與貯存區(qū)為正壓，其它三個(gè)工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或

減壓的原則。

5.3.5實(shí)驗(yàn)室管理者應(yīng)確保由經(jīng)過培訓(xùn)合格的人員使用適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備和設(shè)

備處理危險(xiǎn)廢棄物或委托具有資質(zhì)的專業(yè)機(jī)構(gòu)統(tǒng)一處理。污染物的最終棄置應(yīng)符

合國家（國際）環(huán)境或健康安全規(guī)則。

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5.4檢測(cè)和校準(zhǔn)方法及方法的確認(rèn)

5.4.4當(dāng)實(shí)驗(yàn)室采用從知名的技術(shù)組織或有關(guān)科學(xué)書籍和期刊公布的，或由設(shè)備

制造商指定的方法，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定相應(yīng)的非標(biāo)方法，并進(jìn)行方法確認(rèn)。

非標(biāo)方法的制定應(yīng)滿足GB/T20001.4的要求，方法中至少應(yīng)包含下列信息：

a)方法的適用范圍；

b)被檢測(cè)樣品類型的描述和處理；

c)所需基因擴(kuò)增的儀器和設(shè)備，包括技術(shù)性要求；

d)試劑和材料，包括所需的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

e)基因擴(kuò)增方法的描述（包括引物、探針的序列信息）；

f)質(zhì)量控制方法的描述（如檢測(cè)對(duì)照的設(shè)置及結(jié)果分析）；

g)結(jié)果判定和表述；

h)方法的檢測(cè)限。

5.4.5方法的確認(rèn)

實(shí)驗(yàn)室制定的非標(biāo)準(zhǔn)方法在引入檢測(cè)前應(yīng)進(jìn)行方法確認(rèn)。確認(rèn)方法可采用實(shí)

驗(yàn)室內(nèi)及實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)試驗(yàn)?；驍U(kuò)增非標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn)技術(shù)指標(biāo)至少應(yīng)包括

以下幾個(gè)方面：

a)靈敏度?？赏ㄟ^量化樣品中被分析物的最小檢測(cè)量來評(píng)估；

b)特異性?？赏ㄟ^分析相關(guān)基因進(jìn)行評(píng)估，主要考慮方法的選擇性、排他

性和涵蓋性；

c)重復(fù)性?？赏ㄟ^同一實(shí)驗(yàn)室在相同條件下的組內(nèi)重復(fù)和組間重復(fù)來評(píng)估。

d)再現(xiàn)性。至少需要3個(gè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試同一組樣品來評(píng)估。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)記錄確認(rèn)過程中所使用的程序、所獲得的結(jié)果，并對(duì)該方法是否適

合預(yù)期用途作出評(píng)價(jià)。

5.4.6測(cè)量不確定度的評(píng)定

5.4.6.2必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)基因擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行測(cè)量不確定度評(píng)定，找出不

確定度的所有分量且做出合理評(píng)定（如，樣品質(zhì)量、引物及探針的質(zhì)量、目標(biāo)序

列長(zhǎng)度、檢測(cè)方法及儀器等）。

5.4.7數(shù)據(jù)控制

5.5設(shè)備

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5.5.6基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室每個(gè)工作區(qū)域都應(yīng)配備專用的儀器設(shè)備，并有明確標(biāo)

識(shí)，避免不同區(qū)域內(nèi)的設(shè)備物品（如微量移液器）發(fā)生混淆或誤用。建議各工作

區(qū)內(nèi)配備可移動(dòng)紫外燈對(duì)工作臺(tái)面、地面等進(jìn)行消毒。

5.6測(cè)量溯源性

5.6.3當(dāng)使用無證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（包括克隆目的基因的陽性質(zhì)粒、陽性核酸參考物質(zhì)）

不能進(jìn)行溯源時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡量利用生產(chǎn)廠商提供的有效證明，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)或

比對(duì)試驗(yàn)，以確認(rèn)其有效濃度。

5.8測(cè)試和校準(zhǔn)物品的處置

可采取（但不限于）以下措施降低實(shí)驗(yàn)樣品對(duì)結(jié)果的影響：

a)器材專用，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)樣品在試驗(yàn)室工作區(qū)間的單向流動(dòng)；

b)做好技術(shù)人員的自身防護(hù)，如使用個(gè)人防護(hù)裝備，包括作業(yè)服、鞋套、

手套、口罩和發(fā)罩，盡可能一次性使用，并根據(jù)具體情況及時(shí)更換；

c)做好設(shè)備、設(shè)施的定期清理和消毒；

d)具備實(shí)驗(yàn)區(qū)的外部屏障，能有效阻止無關(guān)人員未經(jīng)許可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)；

e)各功能區(qū)的空調(diào)、換氣系統(tǒng)獨(dú)立，進(jìn)氣與排氣通道不混用。

5.9檢測(cè)和校準(zhǔn)結(jié)果質(zhì)量的保證

5.9.1基于基因擴(kuò)增檢測(cè)方法結(jié)果的可靠性，每個(gè)基因擴(kuò)增檢測(cè)步驟均應(yīng)設(shè)置陽

性質(zhì)控對(duì)照、陰性質(zhì)控對(duì)照和空白質(zhì)控對(duì)照，當(dāng)一種對(duì)照達(dá)不到預(yù)期結(jié)果時(shí)，以

一定的時(shí)間間隔加入其它對(duì)照方法。

適用時(shí)，陽性對(duì)照可包括陽性提取對(duì)照、陽性目標(biāo)序列對(duì)照、弱陽性目標(biāo)序

列對(duì)照、抑制反應(yīng)陽性對(duì)照、方法陽性對(duì)照和基質(zhì)添加；陰性對(duì)照可包括實(shí)驗(yàn)室

環(huán)境對(duì)照、核酸提取空白對(duì)照、基因擴(kuò)增試劑對(duì)照、陰性目標(biāo)序列對(duì)照和方法空

白對(duì)照。

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附錄A（資料性附錄）

基因擴(kuò)增領(lǐng)域檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（部分）列表

標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)名稱

GB19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB/T27025-2008檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求

GB/T19495.1-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)通用要求和定義

GB/T19495.2-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

GB/T19495.3-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法

GB/T19495.4-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定性PCR檢測(cè)方法

GB/T19495.5-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定量PCR檢測(cè)方法

GB/T19495.6-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)基因芯片檢測(cè)方法

GB/T19495.7-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)抽樣和制樣方法

GB/T19495.8-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)蛋白質(zhì)檢測(cè)方法

GB/T27403-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測(cè)

SN/T2102.1-2008食源性病原體PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)范第1部分：通用要求和定義

SN/T2102.2-2008食源性病原體PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)范第2部分：PCR儀性能試驗(yàn)要求

食源性病原體PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)范第3部分：定性檢測(cè)方法樣品制備

SN/T2102.3-2008

要求

食源性病原體PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)范第4部分：定性檢測(cè)方法擴(kuò)增和檢

SN/T2102.4-2008

測(cè)要求

SN/T2965-2011植物病原真菌分子生物學(xué)檢測(cè)規(guī)范

SN/T2964-2011植物病毒檢測(cè)規(guī)范

出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）檢測(cè)方法第1部

SN/T3767.1-2014