家禽種蛋(胚胎)注射的研究進(jìn)展

家禽種蛋（胚胎）注射技術(shù)的研究進(jìn)展西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物科學(xué)系13級(jí)動(dòng)科4班盧燕梅222013602022163摘要：家禽種蛋注射技術(shù)，是指對(duì)一定胚齡的家禽胚胎進(jìn)行疫苗接種注射，將一些外源物質(zhì)注射到家禽種蛋中，使雛禽在出殼時(shí)至出殼后幾天就具有特異性主動(dòng)免疫力。這一項(xiàng)技術(shù)因能避免雛禽早期感染特定傳染病，已經(jīng)被越來(lái)越多的應(yīng)用到了實(shí)際生產(chǎn)中。關(guān)鍵詞：種蛋免疫注射免疫力注射操作家禽種蛋（胚胎）注射免疫與孵化出雛后預(yù)防免疫相比較，其優(yōu)點(diǎn)在于：提早免疫，應(yīng)激反應(yīng)低，注射精確且一致，勞動(dòng)力成本低，注射用途廣，疫苗污染少等。一．家禽種蛋注射的常規(guī)方法1卵白注射在雞胚10d時(shí)，尿囊絨毛膜已將卵白完全覆蓋，找不準(zhǔn)卵白注射位點(diǎn)，故卵白注射一般在2～9d進(jìn)行。且因卵白離胚胎較遠(yuǎn)，不會(huì)對(duì)胚胎產(chǎn)生太大的應(yīng)激作用，可用于較精確的定量研究，加之操作方便，應(yīng)用比較廣泛。但外源物質(zhì)注射到卵白后，會(huì)與卵白內(nèi)的其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)混合，可能不會(huì)立即被胚胎吸收、利用，因而可能無(wú)法立即反映注射液的作用效果，所以一般取樣的時(shí)間是在注射后3～7d開(kāi)始，而且最好盡可能多地在不同發(fā)育時(shí)點(diǎn)取樣，或者在某一時(shí)段連續(xù)取樣。注射操作時(shí)要注意避開(kāi)血管，針頭插入0.5mm即可，以降低可能造成的損傷和應(yīng)激，注射液體積一般在0.1～1.5mL左右，不宜過(guò)高。2卵黃囊內(nèi)注射卵黃是胚胎發(fā)育的重要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，卵黃囊內(nèi)注射的外源物質(zhì)能較好地被胚胎吸收。雞胚發(fā)育到18～21d時(shí)，卵黃囊被收入腹腔，因此卵黃囊內(nèi)注射應(yīng)在18d前進(jìn)行。注射液一般配制成體積為1.0mL左右的鹽溶液，注射前溶液要預(yù)熱至孵化溫度，在注射操作上要盡可能地熟練、細(xì)致，降低系統(tǒng)誤差。3羊膜腔注射羊膜腔是離胚胎最近的腔室，注射到羊膜腔的外源物質(zhì)，利用效率高；而且羊膜腔內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可提供給整個(gè)發(fā)育期的胚胎，沒(méi)有注射時(shí)間的限制。但羊膜腔處于胚蛋內(nèi)部的中心，注射操作上有一定難度；而且腔內(nèi)液體直接與胚胎相連，注射后對(duì)胚胎發(fā)育會(huì)產(chǎn)生較大干擾，阻礙了它的應(yīng)用。采用該注射方法時(shí)，要先選擇大小、形狀相似的胚蛋，再根據(jù)蛋形指數(shù)、胚蛋結(jié)構(gòu)特點(diǎn)確定注射角度和深度，注射液體積一般不高于1.5mL，注射前溶液要預(yù)熱等。4尿囊注射尿囊注射運(yùn)用得最早、最成熟，但尿囊內(nèi)營(yíng)養(yǎng)成分較少，且利用效率有限。故尿囊注射在外源性營(yíng)養(yǎng)因子、生長(zhǎng)因子對(duì)胚胎生長(zhǎng)發(fā)育的研究中運(yùn)用較少。雞胚在19d開(kāi)始肺呼吸，尿囊絨毛膜開(kāi)始萎縮，因此尿囊注射應(yīng)該在19d前進(jìn)行。尿囊絨毛膜血液循環(huán)可以供給胚胎發(fā)育的部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（如吸收蛋殼中的鈣和磷），但胚胎發(fā)育的主要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源是卵黃和卵白，所以，用尿囊接種法培養(yǎng)病毒，在供給病毒繁育所需營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)，不會(huì)出現(xiàn)因過(guò)多消耗胚胎營(yíng)養(yǎng)，導(dǎo)致胚胎的過(guò)早死亡。這樣就可以達(dá)到在一定時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)病毒的目的。后來(lái)的弱毒疫苗的制備、胚胎早期免疫都是根據(jù)此原理進(jìn)行的。5尿囊血管注射一般胚蛋注射，都會(huì)力求避開(kāi)血管，以降低對(duì)胚胎的直接應(yīng)激。所以，采用血管注射時(shí)，溶液理化條件的控制要更加精細(xì)，包括前文提到液體體積、溫度、滲透壓等。同時(shí)，注射操作要熟練、謹(jǐn)慎，不可過(guò)多的刺破血管。尿囊血管在10～17d較為粗大、清晰，因此注射操作多集中在這段時(shí)間。尿囊血管注射后的物質(zhì)胚胎吸收快、利用率高，可以快速的檢測(cè)到外源因子對(duì)部分敏感指標(biāo)（如能量水平、激素水平等）的變化，從而及時(shí)衡量注射因子的作用效果，這是在該位點(diǎn)注射的最大優(yōu)點(diǎn)。該法尤其適合注射多肽類(lèi)外源物質(zhì)，因注射到血管后被分解、轉(zhuǎn)化的少。有研究者將50μL不同含量水平的抗脂肪細(xì)胞單克隆抗體（Mab）溶液注射到15d的尿囊血管中，發(fā)現(xiàn)0.2mg的Mab注射組的個(gè)體在6周齡腹脂重降低了28%，且出殼后體重和生長(zhǎng)水平不受影響。該研究為降低家禽腹脂提供了一條新途徑。6氣室注射氣室注射的外源物質(zhì)能通過(guò)滲透作用被胚胎吸收利用，3～18d是適宜的注射時(shí)間。因?yàn)殡u胚在19d后尿囊絨毛膜開(kāi)始萎縮，滲透作用開(kāi)始減弱。氣室注射可最大限度地降低因注射液體和操作對(duì)胚胎產(chǎn)生的應(yīng)激，且操作更為簡(jiǎn)單、方便。但是，氣室內(nèi)物質(zhì)的吸收效率較其它注射方式差，吸收利用量不易被衡定，易受環(huán)境條件影響，故只能做出定性的判斷，無(wú)法滿(mǎn)足精確、定量的研究需要。二．種蛋注射技術(shù)與傳統(tǒng)免疫的比較對(duì)于雞胚而言，有研究認(rèn)為，在雞胚發(fā)育到第18天，其免疫系統(tǒng)已經(jīng)基本建立，能夠?qū)δ承┛乖a(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答。家禽胚胎注射技術(shù)的成功周瑤因素有：第一，在雞胚發(fā)育過(guò)程中，可以接受注射的最早時(shí)間點(diǎn)，注射具有生物活性的疫苗和其他可以注射的物質(zhì)，因此可以在雛雞出殼之前備妥其生長(zhǎng)過(guò)程中所需要的免疫力。第二，一群體免疫的方式對(duì)每一個(gè)單一個(gè)體做全劑量的注射可以在很快的速度下完成整齊的接種?；谶@兩個(gè)原則，此技術(shù)能快速的發(fā)展運(yùn)用。以下為胚胎注射的優(yōu)點(diǎn)：免疫效果好胚胎免疫可以使雛雞更早的產(chǎn)生自動(dòng)免疫力，一出殼就具有較強(qiáng)的免疫力。而出殼后接種免疫，雛雞要1至2周才能產(chǎn)生有效的免疫力，仍可受到外源入侵而發(fā)病。胚胎注射，避免了免疫空白帶，可明顯降低雛雞發(fā)病率，提高其存活率。提高工作效率每臺(tái)種蛋注射機(jī)每小時(shí)可以接種30000個(gè)種蛋，比人工接種雛雞提高工效100倍以上，當(dāng)出雛時(shí)，雛雞已經(jīng)有接種過(guò)疫苗，就可以直接運(yùn)往飼養(yǎng)場(chǎng)飼養(yǎng)。應(yīng)激反應(yīng)低常家禽免疫接種，不但需要耗費(fèi)人力和時(shí)間，而且對(duì)家禽帶來(lái)較強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)，造成生長(zhǎng)速度減慢，死淘率增加，飼料報(bào)酬低等不良影響，而胚胎注射就可以避免這些損失。免疫精確一致種蛋注射機(jī)可一致性的，精確的，溫和的百分百的接種于種蛋，排出了人工接種的疏漏和接種不完全的困擾，因而可得到更高比例的健康雞，大大的降低了死亡率。注射用途廣胚胎注射，不僅可以用于早期疫苗免疫，還可以用于某些生物活性物質(zhì)與病毒疫苗的聯(lián)合接種，大大的提高了對(duì)疾病的免疫能力和抗體效價(jià)。三.種蛋注射操作要點(diǎn)1.疫苗的無(wú)菌配制對(duì)種蛋注射的效果影響非常關(guān)鍵，在配制過(guò)程中必須嚴(yán)格以避免被污染的可能。2.種蛋大頭朝上，全部注射過(guò)程都要經(jīng)過(guò)嚴(yán)密的電腦控制，確保注射迅速準(zhǔn)確，溫和無(wú)污染及高效率。小結(jié)：在以往研究中，對(duì)家禽種蛋（胚胎）研究的研究方向逐漸趨于四個(gè)方向：1，蛋內(nèi)給予疫苗和藥物。2.預(yù)防疾病。3.免疫促進(jìn)。4.提高生產(chǎn)性能。各個(gè)研究方向目前研究還不夠深入，全面性也不夠高。種蛋注射才發(fā)展起來(lái)，在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中效果好，但是同時(shí)投資成本也較高，。在未來(lái)畜牧業(yè)發(fā)展過(guò)程中，還具有教的的發(fā)展空間和發(fā)展價(jià)值。參考文獻(xiàn)：[1].孫研研，鄭江霞，徐桂云，等，外源基因?qū)腚u胚的兩種顯微注射方法的比較[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2010,18（5）：938-943[2].樂(lè)牧，種蛋內(nèi)注射技術(shù)的前景［J］青海畜牧獸醫(yī)雜志，1991（2）：28[3].IPEKA,SAHANU.YILMAZB,etal.theeffectofinovoascorbicacidandglucoseinjectioninbroilerbrecdereggsonhatehabilityandchickweight［J］.ArchivFurGeflugelkunde,2004,68(3):132-135[4]劉梅英，陳偉，彭鵬，等.胚蛋注射在家禽營(yíng)養(yǎng)中的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)家禽，2007，29（21）：40-42.[5].師昆景，吳靈英，譚榮炳.胚胎注射L-精氨酸和L-鳥(niǎo)氨酸對(duì)肉仔雞早期生長(zhǎng)、免疫器官及血漿激素T3、T4的影響［J］.中國(guó)家禽，2008，30（17）：25-28.[6]黃小春，吳靈芝，雞胚給養(yǎng)氨基酸對(duì)肉仔雞孵化率和胚胎生長(zhǎng)的影響［J］.中國(guó)飼料.2005,23:19-20[7]王延新.種蛋免疫注射的研究進(jìn)展[J]養(yǎng)禽與禽病防治2003（3）,14-15[8]HYLDINGSMOSTRUPOVEJLSTEDMCTAL.changesofDNAmethyfationlevelandspatialarrgementofprimordialgermcellsinembryonicday[J]plosbiology,2010,8(11);e1000506[9]趙冬梅，金帆，黃荷鳳，表遺傳修飾與配子形成和胚胎早期發(fā)育[J]國(guó)外醫(yī)學(xué)：遺傳學(xué)分冊(cè)，2004,27（3）；159-162.[10][1]OhtaY,TsushimaN,KoideK.Effectofaminoacidinjectioninbroilerbreed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