DB5133T 31-2019 牦牛梨形蟲病防治技術(shù)規(guī)范

ICS點(diǎn)擊此處添加ICS號點(diǎn)擊此處添加中國標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)分類號DB51TechnicalRegulationofPreventionandTreatmentofYakPiroplasmosis甘孜州市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB5133/T31—2019 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語與定義 4診斷 DB5133/T31—2019本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1－2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由甘孜藏族自治州農(nóng)牧農(nóng)村局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：甘孜藏族自治州畜牧業(yè)科學(xué)研究所、西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李友英湯承賀安祥郝力力任秀梅劉怡雯尼瑪央宗藍(lán)嵐張康林潘瑤。1DB5133/T31—2019牦牛梨形蟲病防治技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牦牛梨形蟲病的診斷和防治。本標(biāo)準(zhǔn)適用于甘孜州行政區(qū)域內(nèi)牦牛養(yǎng)殖戶及動物疫病診療單位對牦牛梨形蟲病的診斷和防治。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求GB16548病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程GB16567種畜禽調(diào)運(yùn)檢疫技術(shù)規(guī)范NY/T472綠色食品獸藥使用準(zhǔn)則NY/T5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則SN/T1678梨形蟲病病原鑒定方法《中華人民共和國獸藥典》3術(shù)語與定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1牦牛梨形蟲病Yakpiroplasmosis由頂復(fù)門、孢子蟲綱、梨形蟲亞綱中的巴貝斯科和泰勒科原蟲寄生于牦牛體內(nèi)引起的一類血液原蟲病，過去稱為焦蟲病或血孢子蟲病。3.2牦牛巴貝斯蟲病Yakbabesia由巴貝斯科、巴貝斯屬的梨形蟲寄生于牦牛的紅細(xì)胞內(nèi)引起的一類疾病。3.3牦牛泰勒蟲病Yaktheileriosis由泰勒科、泰勒屬的梨形蟲寄生于牦牛的巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞內(nèi)引起的一類疾病。3.4蜱tick2DB5133/T31—2019屬節(jié)肢動物門、蛛形綱、蜱螨亞綱、寄螨目、蜱總科，為專性體外吸血的節(jié)肢動物，是一類陸生脊椎動物身上的非永久性體外寄生蟲。4診斷4.1病原牦牛梨形蟲病的病原主要有巴貝斯科的牛雙芽巴貝斯蟲和牛巴貝斯蟲，以及泰勒蟲科的環(huán)形泰勒蟲、中華泰勒蟲和瑟氏泰勒蟲。牦牛梨形蟲病感染牛耳尖采血涂片,姬姆薩染色,在油鏡下對紅細(xì)胞內(nèi)的蟲體形態(tài)進(jìn)行觀察，主要病原學(xué)特征參見表1。表1牦牛梨形蟲病主要病原學(xué)特征科種蟲體大小形狀染色質(zhì)斯科雙芽巴貝斯蟲長度大于紅細(xì)胞半徑，大小約為4.0-5.0μm×2.0μm。主要有環(huán)形、梨籽形、圓形、橢圓形、不規(guī)則形等，典型蟲體形狀為成雙的梨籽形，尖端以銳角相連。蟲體大都在紅細(xì)胞的中央。多為淺藍(lán)色的兩團(tuán)，位于蟲體邊緣部，顏色較深，中部呈空泡狀的無色區(qū)。牛巴蟲長度小于紅細(xì)胞半徑，梨籽形蟲1.8-2.8μm×0.8-1.2μm。主要有梨形、圓形、橢圓形不規(guī)則形及阿米巴形等，典型蟲體形狀為成雙的梨籽形，尖端以鈍角相連。蟲體大都寄生在紅細(xì)胞邊緣或偏中呈淡藍(lán)色的一團(tuán)，位于蟲體一端或兩端，邊緣比中部著色深。泰勒科環(huán)形泰勒蟲蟲體小，大小約為0.8-1.7μm。形態(tài)多樣，有桿形、梨形、圓環(huán)形、卵圓形、逗點(diǎn)形、圓點(diǎn)形、十字架形等，以圓環(huán)形、卵圓形為主。呈淡藍(lán)色，包含許多紫紅色顆粒狀的核。圓環(huán)形蟲體原生質(zhì)位于邊緣，多呈半月形。卵圓形蟲體原生質(zhì)位于蟲體較粗一端。泰勒蟲梨子形蟲體大小為0.5-2.5um×0.4-1.2μm。圓環(huán)形蟲體大小為1.4-3.2um。有梨子形、圓環(huán)形、桿形、邊蟲樣、橢圓形、三葉形、十字架形、雙梨子形、不規(guī)則形、出芽形、逗點(diǎn)形等，以梨籽形和圓環(huán)形蟲體為主。大多數(shù)蟲體很大，有的甚至占據(jù)整個紅細(xì)胞，有的僅為核而見不到原生質(zhì)。呈淺藍(lán)色。梨子形蟲體紫紅色的核多位于鈍端。圓環(huán)形蟲體中央透明，紫紅色的核位于邊緣。東方（瑟勒蟲大小類似環(huán)形泰勒蟲。除有特別長的桿狀形外，其他形態(tài)類似環(huán)形泰勒蟲，但瑟氏泰勒蟲以桿形和梨籽形為主。呈淡藍(lán)紫色，位于蟲體一端。3DB5133/T31—20194.2流行病學(xué)特點(diǎn)4.2.1巴貝斯蟲病多發(fā)生于6-9月,呈散發(fā)。兩歲以內(nèi)的犢牛多發(fā)；本地牛癥狀輕微，引進(jìn)牛、純種牛和改良牛常表現(xiàn)明顯臨床癥狀。4.2.2泰勒蟲病環(huán)形泰勒蟲病多發(fā)于5-8月份，主要引起1-3歲的舍飼牛發(fā)病，本地牛的發(fā)病率和死亡率較低，而引入牛易感性高。東方（瑟氏）泰勒蟲和中華泰勒蟲病多發(fā)于5-10月份，主要引起2-3歲放牧牛發(fā)病，年齡越大，發(fā)病率越低。4.3典型臨床癥狀巴貝斯蟲病潛伏期為1周-2周，泰勒蟲病潛伏期在2周至數(shù)周。臨床主要可見體溫升高，呈稽留熱型；貧血，可視黏膜蒼白或黃染；出現(xiàn)血紅蛋白尿，尿由淺紅色至棕紅色、黑紅色；泰勒蟲病牛體表淋巴結(jié)腫大；巴貝斯蟲感染時，會表現(xiàn)較嚴(yán)重的神經(jīng)癥狀。4.4典型病理變化病理變化主要有血液稀薄如水，凝固不良；皮下組織、肌肉結(jié)蹄組織和脂肪呈黃色膠樣水腫狀；全身皮下、肌間、黏膜和漿膜上可見出血點(diǎn)與出血斑；實(shí)質(zhì)性臟器腫大，肺臟淤血、水腫，并有出血點(diǎn)；皺胃和腸粘膜潮紅并有點(diǎn)狀出血；泰勒蟲病牛的淋巴結(jié)腫脹，切面多汁，有暗紅色和灰白色大小不一的結(jié)節(jié)。4.5梨形蟲鑒定4.5.1血液涂片姬姆薩染色鏡檢病牛采集血液制成血液涂片后，經(jīng)姬姆薩染色后鏡檢，應(yīng)參照SN/T1678與表1所描述的病原特點(diǎn)進(jìn)行鑒定。4.5.2巢式PCR檢測4.5.2.1生物安全要求樣品采集、處理及檢測過程中涉及的實(shí)驗(yàn)操作，應(yīng)遵守GB19489的相關(guān)規(guī)定。4.5.2.2樣品處理采集牦牛靜脈血5ml－10ml于抗凝真空采血管中，編號，4℃保存，送檢。4.5.2.3DNA提取用全血DNA提取試劑盒提取全血總DNA，提取的DNA立刻進(jìn)行PCR擴(kuò)增或-20℃保存?zhèn)溆谩?.5.2.4反應(yīng)體系及反應(yīng)條件4DB5133/T31—2019外上游引物：GATAACCGTGCTAATTGTAGG，外下游引物：ATCGTCTTCGATCCCCTAACT，擴(kuò)增片段大小為843bp；內(nèi)上游引物：AATTGTAGGGCTAATACATGTTCG，內(nèi)下游引物：GAAAACATCCTTGGCAAATGCTTTCGC，擴(kuò)增片段大小為760bp，靶基因18SrRNA。反應(yīng)條件為：第一輪反應(yīng)94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，60℃退火40s，72℃延伸1min，共30個循環(huán)；72℃延伸7min；16℃反應(yīng)結(jié)束。第二輪反應(yīng)95℃預(yù)變性4min；94℃變性45s，55℃退火20s，72℃延伸30s，共35個循環(huán)；72℃延伸10min；16℃反應(yīng)結(jié)束。將第二輪PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。4.5.3蟲種鑒定PCR產(chǎn)物克隆后送基因測序公司進(jìn)行測序，序列分析后確定蟲種。5防治5.1預(yù)防5.1.1傳播媒介驅(qū)殺體內(nèi)給藥與體外給藥相結(jié)合，殺滅牦牛體表和環(huán)境中的蜱蟲，全年進(jìn)行3-4次預(yù)防，通過牛群狀態(tài)以及流行特點(diǎn)進(jìn)行酌量增減。滅蜱常用藥物及具體用法參見表2。表2滅蜱常用藥物表藥名用法與用量注意事項(xiàng)雙甲脒參照藥品使用說明書使用注意環(huán)境與畜體同時處理。21天休藥期。二嗪農(nóng)畜群均應(yīng)處理。溴氰菊酯間隔10-15d重復(fù)使用1次。氰戊菊酯配制時水溫超過50℃,藥液會失效；還應(yīng)避免使用堿性水。碘硝酚注射液劑量必須準(zhǔn)確掌握。伊維菌素注射液僅限于皮下注射，35天休藥期。5.2治療5.2.1用藥原則5DB5133/T31—2019應(yīng)依據(jù)NY/T472、NY/T5030和《中華人民共和國獸藥典》等規(guī)定，選取獸醫(yī)主管部門規(guī)定批準(zhǔn)的抗梨形蟲藥物。注意應(yīng)選取多種抗梨形蟲藥物交替使用，以免產(chǎn)生耐藥性。5.2.2治療常用治療藥物及具體用法可參見表3。表3牦牛梨形蟲病常用治療藥物表藥名用法與用量注意事項(xiàng)咪唑苯脲參照藥品使用說明書使用組織內(nèi)會產(chǎn)生長期藥殘，規(guī)定休藥期45貝尼爾嚴(yán)格掌握用藥劑量，一般用藥一次比較安全，連續(xù)使用易出現(xiàn)毒性反應(yīng)，應(yīng)對癥治療。休藥期28天。硫酸喹啉脲出現(xiàn)肌肉震顫、流涎、呼吸困難等不良反應(yīng)，嚴(yán)重者可皮下注射阿托品。鹽酸吖啶黃緩慢注射，勿漏出血管。重復(fù)使用應(yīng)間隔24-48h。青蒿琥酯本品有明顯胚胎毒作用，妊娠畜慎用。