DB45T-奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程編制說明

廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》（征求意見稿）編制說明一、任務來源、起草單位、主要起草人根據(jù)廣西壯族自治區(qū)市場監(jiān)督管理局《關于下達2023年廣西地方標準制修訂項目計劃的通知》（桂市監(jiān)函〔2023〕2257號）文件精神，由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出，廣西壯族自治區(qū)水牛研究所、廣西皇氏賽爾生物技術有限公司等單位共同起草的廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》（項目編號：2023-1201）已獲批立項。為高質量編制廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》，由起草單位成立標準編制工作組并進行如下分工：姓名職稱/職位工作單位主要負責工作譚正準畜牧師廣西水牛研究所統(tǒng)籌主持標準編制工作黃榮春畜牧師廣西水牛研究所參與標準編制工作，組織人員進行標準發(fā)布后的宣貫培訓。李輝畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明編寫，質量控制。黃健畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。陳明棠正高級畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。楊春艷正高級畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。鄭海英高級畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。覃廣勝研究員廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。李兆和技術主管皇氏賽爾生物科技（廣西）有限公司參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。鄢勝飛畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。韋亮源技術主管皇氏賽爾生物科技（廣西）有限公司參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。尚江華研究員廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。黃加祥正高級畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。梁淦助理畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。羅華畜牧師廣西水牛研究所參與標準文本及編制說明的編寫；組織開展標準征求意見會；對標準實施情況進行總結分析，不斷對地方標準提出修正意見。二、制定標準的必要性和意義廣西奶水牛存欄量及水牛奶產(chǎn)量均居全國第一，“十五”以來，廣西水牛雜交改良和奶業(yè)開發(fā)取得了跨越性的效果。至2009年底，全區(qū)建立了11個地級市牛凍精液氮中轉站，在廣西水牛雜交改良已擴大發(fā)展到100多個市縣，并在靈山、北流、興賓和武宣等36個示范縣建立了100多個水牛養(yǎng)殖小區(qū)。全區(qū)水牛存欄225萬頭，居全國之首，其中奶水牛存欄達5.13萬頭，能繁母牛3.14萬頭，水牛奶產(chǎn)量3.03萬噸，產(chǎn)奶總量居全國第一，帶動皇氏、壯牛、百菲酪、桂牛、南國、石埠、西江、左江和雅維等十多家水牛奶加工企業(yè)，但種源生產(chǎn)與供應明顯無法滿足可繁母牛雜交改良對種源的需要，嚴重制約了奶水牛的雜交改良的進程；且隨著時間推移，產(chǎn)奶性能逐漸下降，難有更高產(chǎn)量的突破。如引進良種胚胎，進行胚胎移植可以快速高效的獲得良種水牛，以提高國內(nèi)水牛平均生長速度、產(chǎn)奶量和成年體重等經(jīng)濟性狀。胚胎移植技術是胚胎生物工程的基本技術，是將優(yōu)良供體生產(chǎn)的體內(nèi)胚胎或通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到生理機能發(fā)育相似、發(fā)情周期階段基本相同、體況良好、繁殖機能正常、無遺傳和傳染性疾病的受體生殖道的適當部位，使其著床生長發(fā)育的家畜繁殖新方法。該技術可顯著提高遺傳改良速度，縮短世代間隔，提高育種效率，充分挖掘優(yōu)秀母牛的遺傳和繁殖潛力，快速擴繁優(yōu)良母牛后代，培育出更多優(yōu)良品種牛。奶水牛胚胎移植技術可充分利用我們國家豐富的水牛種質資源，以國外高產(chǎn)、優(yōu)質的摩拉水牛、尼里/拉菲水牛和地中海水牛三大河流型水牛作為供體，結合體外生產(chǎn)胚胎技術，胚胎移植到我國本地低產(chǎn)水牛中，可以在短期內(nèi)復制生產(chǎn)大量的優(yōu)秀的河流型水牛個體，是擴大良種牲畜數(shù)量的一種最好手段。然而，目前廣西乃至全國奶水牛產(chǎn)業(yè)面臨種源缺乏、存欄量少且養(yǎng)殖規(guī)模小、產(chǎn)犢間隔長、繁殖效率低、產(chǎn)奶潛能挖掘不足、奶源供應不足等問題。同時，奶水牛育種工作基礎薄弱，生產(chǎn)性能測定參測比例低、數(shù)據(jù)質量不高，繁殖、健康等性狀數(shù)據(jù)收集不完善；基因組選擇參考群體規(guī)模小，性別控制和胚胎擴繁等現(xiàn)代繁育技術研發(fā)與應用力度不足；種牛自主選育體系不完善，育種核心群規(guī)模小，聯(lián)合育種機制相對松散，凍精質量低等問題長期存在。因此，引進良種奶水牛種質資源，擴大繁育培育優(yōu)質種群，助推產(chǎn)業(yè)升級已迫在眉睫。通過制定廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》，以標準為抓手，指導廣西奶水牛胚胎移植技術的操作內(nèi)容和步驟，快速擴繁大量優(yōu)質良種奶水牛，對促進高產(chǎn)、高效、優(yōu)質的奶水牛業(yè)生產(chǎn)，加快我區(qū)乃至全國水牛雜交改良進程，推進廣西水牛奶優(yōu)勢特色產(chǎn)業(yè)及自治區(qū)“十四五”規(guī)劃發(fā)展具有極其重要的意義。三、主要起草過程（一）成立標準編制工作組廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》項目任務下達后，廣西壯族自治區(qū)水牛研究所成立了標準編制工作組，起草單位制定了起草編寫方案與進度安排，明確任務職責，確定工作技術路線，開展標準研制工作。具體標準編制工作由廣西壯族自治區(qū)水牛研究所、廣西皇氏賽爾生物技術有限公司組成標準編制工作組完成。編制工作組下設二個組分別是資料收集組、草案編寫組。資料收集組負責國內(nèi)有關奶水牛胚胎移植操作技術的文獻資料的查詢、收集和整理工作。草案編寫組負責起草標準草案、征求意見稿和標準編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作，包括后期召開征求意見會、網(wǎng)上征求意見，以及標準的不斷修改和完善。（二）收集整理文獻資料標準編制工作組收集了國內(nèi)與胚胎移植操作技術相關文獻資料。主要有：NY/T1445-2007《奶牛胚胎移植技術規(guī)程》、NY/T1572-2007《牛胚胎移植技術規(guī)程》、NY/T1571-2007《羊胚胎移植技術規(guī)程》、DB53/T447.4-2012《BMY牛第4部分：胚胎移植技術規(guī)范》、DB61/T367.4-2022《荷斯坦牛生產(chǎn)技術規(guī)范第4部分：胚胎移植》、DB61/T1521.8-2021等。（三）研討確定標準主體內(nèi)容標準編制工作組在對收集的資料進行整理研究之后，標準編制工作組召開了標準編制會議，對標準的整體框架結構進行了研究，并對標準的關鍵性內(nèi)容進行了初步探討。經(jīng)過研究，標準的主體內(nèi)容確定為術語和定義、縮略語、供體牛的選擇和飼養(yǎng)、受體牛的選擇和飼養(yǎng)、受體牛的同期發(fā)情處理和發(fā)情鑒定、胚胎生產(chǎn)、受體牛的胚胎移植、受體牛的妊娠診斷、檔案記錄。（四）立項、形成草案、征求意見稿標準起草工作小組在前期查閱了大量的國內(nèi)外文獻資料，進行了廣泛試驗驗證工作，對奶水牛胚胎移植操作技術的前人研究成果進行系統(tǒng)總結。同時召集起草單位開展了標準研討會，對奶水牛胚胎移植操作技術相關文件進行系統(tǒng)總結。形成了標準的基本構架，對主要內(nèi)容進行了討論并對項目的工作進行了部署和安排。2023年1月～3月，在前期工作的基礎之上，通過理清邏輯脈絡，整合已有的參考資料中有奶水牛胚胎移植操作技術要求，在充分試驗及查閱資料的基礎上，按照簡化、統(tǒng)一等原則編制完成廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》（草案），并提出申請立項。2023年8月22日，根據(jù)《廣西壯族自治區(qū)市場監(jiān)督管理局關于下達2023年廣西地方標準制修訂項目計劃的通知》（桂市監(jiān)函〔2023〕2257號）文件精神，廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》（項目編號：2023-1201）獲批立項。2023年8月～10月，標準起草工作組再次深入廣西各奶水牛胚胎移植基地進行調研。通過實地調研，掌握各基地關于奶水牛胚胎移植操作技術的具體技術要求。以草案為基礎，提煉核心技術細節(jié)，在廣西內(nèi)廣泛開展技術對比和總結，并實際征求意見，通過收集反饋了大量意見，標準編制工作組多次召開會議，對標準草案進行了反復修改和研究討論。進一步討論完善標準草案，形成廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》（征求意見稿）和（征求意見稿）編制說明。四、制定標準的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律、法規(guī)的關系，與有關國家標準、行業(yè)標準的協(xié)調情況（一）編制原則1、實用性原則本文件是在充分收集相關資料和文獻，分析奶水牛胚胎移植操作技術當前現(xiàn)狀，調研廣西內(nèi)個基地/實驗室奶水牛胚胎移植技術情況，在現(xiàn)有奶水牛胚胎移植相關技術要求的基礎上，結合廣西奶水牛胚胎移植經(jīng)驗、實驗而總結起草的，符合當前奶水牛胚胎移植操作技術要求發(fā)展的方向與市場需求，有利于快速擴繁大量優(yōu)質良種奶水牛，促進高產(chǎn)、高效、優(yōu)質的奶水牛業(yè)生產(chǎn)，加快我區(qū)乃至全國水牛雜交改良進程，有利于實現(xiàn)將水牛奶業(yè)打造成為廣西具有競爭力的地方優(yōu)勢特色農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)，具有較強的實用性和可操作性。2、協(xié)調性原則本文件編寫過程中注意了與奶水牛胚胎移植操作技術相關法律法規(guī)的協(xié)調問題，在內(nèi)容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、標準協(xié)調一致。3、規(guī)范性原則本文件嚴格按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》編寫本標準的內(nèi)容，保證標準的編寫質量。4、前瞻性原則本文件在充分考慮當前奶水牛胚胎移植操作技術實際情況、技術水平、行業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀以及經(jīng)濟發(fā)展狀況的基礎上，還考慮到了產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的趨勢和需要，文件條款規(guī)定的主要技術內(nèi)容盡可能與我國現(xiàn)有水平相一致，避免起點、要求過低，在文件中體現(xiàn)了個別特色性和先進性條款，作為對奶水牛胚胎移植操作技術推廣應用的依據(jù)，支撐和指導廣西奶水牛產(chǎn)業(yè)高質量發(fā)展。（二）編制依據(jù)本標準嚴格按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)則起草，標準主要內(nèi)容參考相關標準文件并結合起草單位多年的奶水牛胚胎移植技術經(jīng)驗和試驗驗證情況總結進行起草。（三）與現(xiàn)行法律、法規(guī)的關系，與有關國家標準、行業(yè)標準的協(xié)調情況本編制工作組承諾本標準內(nèi)容與各項指標不違反相關法律法規(guī)要求，且不低于國家強制性標準、推薦性國家標準和行業(yè)標準要求。經(jīng)查閱，目前國內(nèi)與“胚胎移植技術”相關的標準有：（1）《NY/T1445—2007奶牛胚胎移植技術規(guī)程》規(guī)定了供體牛的選擇、超數(shù)排卵、人工授精、胚胎采集、胚胎質量鑒定、胚胎冷凍保存與解凍受體牛的選擇與同期發(fā)情處理、胚胎移植等技術操作的基本原則、要求和方法，適用于奶牛胚胎移植技術。本標準針對奶水牛胚胎移植進行技術指導，而奶水牛與奶牛的生理特性存在差異，故上述標準無法準確指導奶水牛胚胎移植。（2）《NY/T1572—2007奶牛胚胎移植技術規(guī)程》規(guī)定了規(guī)定了牛胚胎移植技術規(guī)程，適用于牛胚胎生產(chǎn)和移植技術操作。本標準針對奶水牛胚胎移植進行技術指導，而奶水牛與奶牛的生理特性存在差異，故上述標準無法準確指導奶水牛胚胎移植。（3）《DB53/T447.4-2012BMY牛第4部分：胚胎移植技術規(guī)范》規(guī)定了胚胎移植的基本原則、供受體牛同期發(fā)情處理、供體牛的超數(shù)排卵與輸精、胚胎回收、胚胎質量鑒定、胚胎的冷凍保存與解凍、胚胎移植、受體牛的妊娠診斷等技術要求，適用于BMY牛的超數(shù)排卵及胚胎移植（MOET）的各個環(huán)節(jié)。本標準針對奶水牛胚胎移植進行技術指導，而不同牛品種的生理特性存在差異，在牛胚胎移植中需要根據(jù)不同品種牛的特點進行技術操作，故上述標準無法準確指導奶水牛胚胎移植。（4）《DB61/T367.4-2022荷斯坦牛生產(chǎn)技術規(guī)范第4部分：胚胎移植》規(guī)定了荷斯坦牛在胚胎移植操作過程中的技術要求，適用于荷斯坦牛的胚胎移植。本標準針對奶水牛胚胎移植進行技術指導，而不同牛品種的生理特性存在差異，在牛胚胎移植中需要根據(jù)不同品種牛的特點進行技術操作，故上述標準無法準確指導奶水牛胚胎移植。（5）《DB61/T1521.8-2021奶山羊養(yǎng)殖技術規(guī)范第8部分：奶山羊胚胎移植》規(guī)定了奶山羊胚胎移植供體羊選擇與飼養(yǎng)管理，供體羊超數(shù)排卵和人工授精，胚胎的采集、冷凍保存及解凍，受體羊選擇與飼養(yǎng)管理，奶山羊胚胎移植，妊辰羊飼養(yǎng)與管理的要求和方法，適應于奶山羊胚胎移植、胚胎冷凍保存等。本標準針對奶水牛胚胎移植進行技術指導，而牛與羊在品種和生理特性等方面均無可比性，因此上述標準不能指導奶水牛胚胎移植。綜上，國內(nèi)暫未制定有奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程相關的標準，因此有必要根據(jù)廣西的實際情況研制廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》，填補奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程的標準空白，運用標準化手段指導、規(guī)范廣西奶水牛行業(yè)的發(fā)展。主要條款的說明廣西地方標準《奶水牛胚胎移植操作技術規(guī)程》主要內(nèi)容包括：術語和定義、縮略語、供體牛的選擇和飼養(yǎng)、受體牛的選擇和飼養(yǎng)、受體牛的同期發(fā)情處理和發(fā)情鑒定、胚胎生產(chǎn)、受體牛的胚胎移植、受體牛的妊娠診斷、檔案記錄。前期研究成果廣西水牛研究所先后與意大利和巴基斯坦合作成立了中-意水牛聯(lián)合研究中心和中-巴水牛聯(lián)合研究中心，近五年來，與巴基斯坦、埃及、美國、英國、意大利、印度、巴西、老撾等十多個國家開展了水牛研究與合作，經(jīng)過長期的科技攻關，形成一套穩(wěn)定、高效、實用的具有自主知識產(chǎn)權的水?；铙w采卵-體外胚胎生產(chǎn)-移植技術體系，建立了良種水牛胚胎體外生產(chǎn)與胚胎移植產(chǎn)業(yè)化中心；在國內(nèi)首次進行良種水牛胚胎體外生產(chǎn)與胚胎移植研究與應用，繁殖良種試管水牛犢300多頭，是目前世界上數(shù)量最多的試管水牛群，并獲得了世界首例冷凍胚胎試管水牛、首例應用活體采卵-體外受精技術以沼澤型水牛為受體繁殖的純種摩拉水牛。各項主要技術指標達到國際領先水平，其中具有指導性的實驗數(shù)據(jù)有：1.受體牛的選擇（1）選擇健康無病，特別是無生殖器疾病，有繁殖能力的青壯年母牛，體型應與移植的胚胎品種相適應的母牛進行同期發(fā)情處理。（2）選擇確認有黃體并與胚齡相一致的同期發(fā)情母牛(自然發(fā)情更好)。2.胚胎質量選擇胚齡為6d～8d的早期囊胚、囊胚、擴展囊胚。3.胚胎移植時間（1）受體母牛出現(xiàn)站立發(fā)情后第4d～6d，經(jīng)檢查確認有黃體存在即可進行胚移。（2）移植操作時應對受體母牛進行嚴格的外陰消毒，有必要可進行硬膜外麻醉。4.移植的部位移植槍頭必須到達黃體側子宮大彎曲部，最好能到達小彎部。5.移植數(shù)量原則上一頭受體牛移植一枚胚胎，若一頭受體移植兩枚胚胎，可提高受孕率，同時流產(chǎn)率也高，但可以提高雙胎率。6.影響胚胎移植成功的因素（1）胚胎移植的受胎率本研究利用水牛體外雜種胚胎移植受體母牛106頭次，其中鮮胚移植81頭次，受胎36頭次，受胎率44.4%；凍胚移植25頭次，受胎8頭次，受胎率32%，詳見表1。表1水牛體外胚胎移植受胎率受體母牛/頭移植/頭次受胎/頭受胎率/%平均移胚/次本地母牛20501938.02.50鮮胚、摩拉、尼里23311754.81.35小計43813644.41.88本地母牛715320.02.14鮮胚、摩拉、尼里810550.01.23小計1525832.01.67合計581064239.61.83從表1看出，受體為本地母牛移植受胎率，鮮胚為38.0%(19/50)，凍胚為20.0%（3/15)，均顯著低于受體為摩拉和尼里母牛的54.8%(17/31)和50.0%(5/10)。（2）不同移胚時間受胎結果表2不同移胚時間受胎結果發(fā)情至移胚的間隔時間3d4d5d6d合計鮮胚移植頭次532271781受胎頭數(shù)01710936受胎率053.1%37.0%52.9%44.4%凍胚移植頭次/513725受胎頭數(shù)/0628受胎率/046.2%28.6%32.0%從表2看出，移胚結果，鮮胚的受胎率分別是:4d為53.1%(17/32)，5d為37.0%(10/27)，6d為52.9%(9/17)。而凍胚在3d的時候移植為0，因為在此時，胚胎的發(fā)育還處在8～16細胞左右，而在4～8d的體外胚胎與發(fā)情母牛子宮環(huán)境同期化有關。（3）鮮胚移植受體母牛的繁殖狀況表3鮮胚移植受體母牛繁殖狀況組別受體母牛/頭受胎母牛/頭懷雙胞胎母牛/頭（%）流產(chǎn)母牛/頭（%）產(chǎn)犢母牛/頭出生/頭繁殖率/%育成/頭育成率/%本地母牛20194（21.1）6（31.6）131470.014100摩拉、尼里23173（17.6）0（0）172086.920100合計43367（19.4）6（16.7）303479.134100從表3可以看出，本地母牛的繁殖率和育成率為70.0%(14/20)和100%(14/14)；摩拉、尼里水牛的繁殖率和育成率為86.9%(20/23)和100%(20/20)。本地母牛繁殖率低于摩拉和尼里水牛。究其原因為本地母牛野性尚存，在懷孕初期奔跑以及部分母牛懷雙胎，又未能滿足其雙胎發(fā)育對營養(yǎng)的供給而造成流產(chǎn)。19頭受胎本地母牛中有6頭流產(chǎn)，流產(chǎn)率為31.6%，其中有3頭為流產(chǎn)雙胎。17頭本所長期飼養(yǎng)的摩拉和尼里水牛，無論懷雙胎或單胎，均未發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)率為0，其原因為摩拉和尼里水牛經(jīng)過長期的圈養(yǎng)馴化，野性得到了改變，懷孕初期奔跑減少。另外，摩拉和尼里水牛個體比本地水牛個體壯大，能承受雙胎對子宮和腹腔的壓力。（4）不同水牛后代的發(fā)育情況表4本地水牛與胚胎移植摩雜、里雜1代水牛初生至12月齡體重比較品種性別頭數(shù)初生重6月齡12月齡體重/kg日增重/kg體重/kg日增重/kg本地水牛公622.80±0.85119.40±16.460.57±0.10172.93±7.650.45±16.46母627.76±3.96134.56±8.200.60±0.04157.76±4.420.38±0.20摩雜一代公635.10±5.24164.80±13.600.70±0.16264.20±27.260.62±0.08母635.70±4.80165.10±11.620.74±0.42238.96±9.480.58±0.02尼雜一代公636.08±4.30165.60±14.580.56±0.25256.18±28.230.71±0.06母635.70±4.72168.07±12.620.83±0.46239.97±7.470.66±0.11本地水牛與胚胎移植摩雜、尼雜一代水牛從初生至12月齡體重、初生重的比較。從表4可以看出，利用摩拉水牛和尼里水牛的凍精分別和本地水牛卵母細胞進行體外受精成胚，并行胚胎移植后，其后代在保持母牛原有優(yōu)勢的基礎上，生長發(fā)育速度顯著地高于本地同齡牛。表4表明，摩雜一代公、母牛周歲的平均體重為264.2kg和238.96kg；尼雜一代公、母周歲的平均體重為256.18kg和239.97kg，均較本地公、母牛周歲的平均體重172.93kg和157.76kg有顯著提高。根據(jù)前期研究發(fā)表了“水牛胚胎移植技術在其繁殖生產(chǎn)中的應用”、“影響水牛體細胞克隆胚胎移植的因素”、“摩拉、尼里水牛與本地水牛成胚后的胚胎移植研究”、“水牛同期發(fā)情及胚胎移植技術及其應用”等12篇相關論文。取得水牛胚胎體外生產(chǎn)與胚胎移植技術研究、奶水牛繁殖技術的應用示范、廣西水牛繁殖工程技術研究中心建設與創(chuàng)新示范、提高河流型良種水?；铙w采卵回收率和體外胚胎生產(chǎn)關鍵技術的研究、意大利地中海水牛凍精引進及其雜交選育的研究等科技成果。術語和定義奶水牛主要根據(jù)牛的種類及其農(nóng)業(yè)和經(jīng)濟功能進行定義。胚胎移植主要根據(jù)《動物學名詞》(第二版)中對“胚胎移植”的定義“將雌性動物的早期胚胎，或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術?！辈⒔Y合奶水牛的特點進行定義。供體牛和受體牛主要參考《GB/T26938-2023牛體內(nèi)胚胎生產(chǎn)與移植技術規(guī)程》中3.1.1“用于生產(chǎn)胚胎的母?！焙?.1.2“用于移植胚胎的母牛”的相關定義并結合供體牛和受體牛的特點進行定義。同期發(fā)情主要依據(jù)《畜牧學名詞》中的相關定義“通過人為調控，使一群母畜在預定時間內(nèi)集中發(fā)情的技術?！辈⒖枷嚓P文獻標準資料進行定義。基本原則和操作流程基本原則和操作流程主要根據(jù)編制單位多年的水牛胚胎移植經(jīng)驗確定。操作流程如圖1所示。供體水牛的選擇和飼養(yǎng)供體水牛的選擇和飼養(yǎng)（見6.2）胚胎生產(chǎn)（見6.5）受體水牛的胚胎移植（見6.6）受體水牛的妊娠診斷（見6.7）受體水牛的選擇和飼養(yǎng)（見6.3）受體水牛的同期發(fā)情處理和發(fā)情鑒定（見6.4）胚胎冷凍（見6.5.3）胚胎檢測（見6.5.2）胚胎制作（見6.5.1）胚胎解凍（見6.5.5）胚胎貯存和運輸（見6.5.4）圖1奶水牛胚胎移植技術流程圖編制單位在歷年的研究項目基礎上，已經(jīng)攻克了奶水牛胚胎移植技術難點，建立了一套穩(wěn)定高效的奶水牛胚胎移植技術方法和體系，擁有一支技術嫻熟、效果穩(wěn)定的胚胎移植團隊，通過該團隊制定奶水牛胚胎移植的技術操作規(guī)程，起到引導示范和輻射推廣作用，有助于標準化技術高效快速推動良種奶水牛產(chǎn)業(yè)規(guī)模的發(fā)展。供體牛的選擇和飼養(yǎng)主要參照《GB/T26938-2023牛體內(nèi)胚胎生產(chǎn)與移植技術規(guī)程》的相關要求（圖2）和編制單位多年的供體牛的選擇和飼養(yǎng)管理經(jīng)驗確定。圖2摘自GB/T26938-2023，5受體牛的選擇和飼養(yǎng)主要參照《GB/T26938-2023牛體內(nèi)胚胎生產(chǎn)與移植技術規(guī)程》的相關要求（圖3）和編制單位多年的受體牛的選擇和飼養(yǎng)管理經(jīng)驗及相關論文成果（表1）確定。圖3摘自GB/T26938-2023，5受體牛的同期發(fā)情處理和發(fā)情鑒定同期發(fā)情處理主要參照《GB/T26938-2023牛體內(nèi)胚胎生產(chǎn)與移植技術規(guī)程》的相關要求（圖4）和編制單位多年的水牛同期發(fā)情處理經(jīng)驗確定。圖4摘自GB/T26938-2023，9.2.2發(fā)情鑒定主要參照《NY/T1335-2022牛人工授精技術規(guī)程》的相關要求（圖5）和編制單位多年的水牛發(fā)情鑒定經(jīng)驗確定。圖5摘自NY/T1335-2022，6胚胎生產(chǎn)卵母細胞體外成熟、體外受精和體外培養(yǎng)主要根據(jù)編制單位多年的水牛同期發(fā)情處理經(jīng)驗確定。首先在體視顯微鏡下，將可用的卵母細胞放人預平衡的成熟培養(yǎng)液的平皿中浸泡，用35mm直徑的培養(yǎng)皿制作以TCM-199為基礎液的培養(yǎng)液小滴，然后將平衡好的輕質滅菌礦物油倒人平皿，將小滴覆蓋。然后吸取可用卵母細胞，每頭牛放人一個小滴中，置于38.5℃，5％CO2，相對飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中成熟培養(yǎng)22h～24h。精液用TALI獲能液采用上游法處理，獲能精液與成熟培養(yǎng)后的卵子混合，在微滴內(nèi)進行體外受精。在精卵共同孵育6h～24h后，將卵子移入預平衡的培養(yǎng)液(TCM-199)，每48h～72h換液，受精48