DB32T-傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急處置技術規(guī)范 第8部分：標本的采集、保存和運輸

Q/LB.□XXXXX-XXXXDB32/TXXXX—XXXX目次TOC\o"1-1"\h前言 II引言 III1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術語和定義 14生物安全要求 15采集前準備 26標本采集 37標本保存、運輸和交接 3附錄A（資料性）各癥候群對應病原體及標本類型 5附錄B（資料性）標本采集方法 7前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是DB32/TXXX《傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急處置技術規(guī)范》的第8部分。DB32/TXXX已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第1部分：監(jiān)測預警；——第2部分：事件報告和管理；——第3部分：風險評估；——第4部分：現(xiàn)場流行病學調(diào)查；——第5部分：恢復評估；——第6部分：應急消毒處置及應急人員個人防護；——第7部分：媒介生物應急監(jiān)測、評估與控制；——第8部分：標本的采集、保存和運輸；——第9部分：應急檢測流程；——第10部分：病毒類應急檢測技術；——第11部分：細菌類應急檢測技術。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由江蘇省衛(wèi)生健康委員會提出并組織實施。本文件由江蘇省衛(wèi)生健康標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：江蘇省疾病預防控制中心、東部戰(zhàn)區(qū)疾病預防控制中心。本文件主要起草人：王慎驕、張錦海、樊歡、呂恒、朱寶立、談忠鳴、付建光、鄧斐、孔筱筱、田華、彭杰夫、崔侖標。引言傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件是公共衛(wèi)生安全的主要威脅，對社會、經(jīng)濟和人群健康存在巨大影響。本文件為貫徹落實《中華人民共和國傳染病防治法》《中華人民共和國突發(fā)事件應對法》《突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急條例》等法律法規(guī)對傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件的應急處置要求，提升江蘇省傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件的應急處置能力，保障人民群眾的生命安全和社會穩(wěn)定而制定。DB32/TXXX《傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急處置技術規(guī)范》擬由十一個部分構成：——第1部分：監(jiān)測預警；——第2部分：事件報告和管理；——第3部分：風險評估；——第4部分：現(xiàn)場流行病學調(diào)查；——第5部分：恢復評估；——第6部分：應急消毒處置及應急人員個人防護；——第7部分：媒介生物應急監(jiān)測、評估與控制；——第8部分：標本的采集、保存和運輸；——第9部分：應急檢測流程；——第10部分：病毒類應急檢測技術；——第11部分：細菌類應急檢測技術。DB32/TXXX的制定是對傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件處置工作相關國家標準、行業(yè)標準的有力補充，為開展傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件的監(jiān)測預警、報告和管理、風險評估、現(xiàn)場流行病學調(diào)查、恢復評估、應急消毒處置和個人防護、媒介生物的應急監(jiān)測評估與控制、標本的采集和檢測等應急處置工作提供有力的科學依據(jù)和技術支撐，對保障公眾健康和公共衛(wèi)生安全具有重要意義。傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急處置技術規(guī)范第8部分：標本的采集、保存和運輸范圍本文件規(guī)定了傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急處置中微生物學檢驗標本的生物安全要求、標本采集前準備、標本采集、標本的保存、運輸和交接的技術要求。本文件適用于各級疾控機構和醫(yī)療機構在傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件中開展標本的采集、保存和運輸。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實驗室生物安全通用標準GB/T5750-2023生活飲用水標準檢測方法WS233-2017病原微生物實驗室生物安全通用準則WS/T640-2018臨床微生物學檢驗標本的采集和轉(zhuǎn)運WS/T799-2022污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測方法標準Doc9284危險物品航空安全運輸技術細則術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。生物安全要求個人防護4.1.1實驗人員應根據(jù)GB19489和風險評估的要求，配備不同類型傳染病感染的個人防護裝備，包括但不限于防護服、手套、外科口罩或醫(yī)用防護口罩、防護面屏、防護帽。4.1.2個人防護裝備宜每隔4h更換一次。在發(fā)生意外暴露時，根據(jù)應急處置預案采取必要措施。4.1.3采樣人員、采樣場所、感染性標本處置及消毒滅菌應符合WS233-2017中的實驗室生物安全管理要求。廢棄物處理4.2.1標本采集過程中產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，包括且不限于一次性使用后廢棄的醫(yī)療器械、個人防護用品和被患者血液、體液、排泄物污染的廢棄物，將上述醫(yī)療廢棄物除銳器外密封收集于醫(yī)療廢物包裝袋中，銳器需置于銳器桶中，再放入另一層醫(yī)療廢物包裝袋進行雙層包裝。4.2.2廢棄物密閉后用含有效氯2000mg/L的消毒液對醫(yī)療廢棄物包裝袋外表面噴灑消毒，消毒后移交醫(yī)療衛(wèi)生機構或醫(yī)療廢物集中處置單位進行集中處置。4.2.3工作人員全程做好防護，在處理完醫(yī)療廢棄物后應立即采用75%酒精或速干型手消毒劑進行手消毒，并采用含有效氯2000mg/L的消毒液對采樣場所進行噴灑消毒。廢棄物處理應有書面記錄并存檔。標本包裝參考《人間傳染的病原微生物目錄》、WS233-2017和Doc9284的要求選擇合適的標本包裝容器。航空運輸標本，應視情況粘貼Doc9284中6.2項危險品標簽。陸路運輸標本包裝標簽和標記可參照航空運檢要求。采集前準備標本采集方案制定標本采集機構應有用于處理標本采集請求的程序，該程序包括書面和口頭采樣要求，根據(jù)現(xiàn)場流行病學調(diào)查納入疑似病例，篩選符合五大癥候群采樣要求的對象進行采樣，標本采樣方案流程圖見圖1。圖1標本采樣方案流程圖標本采集前應該明確以下內(nèi)容：a)根據(jù)流行病學特征初步懷疑病原方向，擬定檢測項目。b)標本類型。c)采集方法。d)標本采集轉(zhuǎn)運所需要的耗材、裝置/容器和轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基。e)轉(zhuǎn)運時限、儲存條件。根據(jù)初步檢測結(jié)果，如有需要可根據(jù)病原體種類對病毒或者細菌采用特殊培養(yǎng)基或采樣液進行針對性采樣，以進一步明確病原體。對采樣信息進行收集整理，包括不限于：標本名稱、標本類型、標本采集日期和時間、病例姓名、病例性別、病例年齡或出生日期、臨床診斷及主要臨床表現(xiàn)、采樣單位、采樣單位聯(lián)系人及聯(lián)系方式、檢驗項目和病例聯(lián)系電話(適用時)。采樣機構應有標本采集方法、采樣信息填報、預防和控制感染、記錄任何偏差的程序，有發(fā)生生物安全意外事故（如采集咽拭子時發(fā)生受檢者嘔吐、采集標本時發(fā)生噴濺）的應急處置程序和應急演練；采樣機構應按照程序要求備齊標本采集材料。標本采集一般要求從事標本采集的技術人員應具備相應的采樣技能并經(jīng)過生物安全培訓。宜在發(fā)病早期和抗生素/抗病毒藥物使用前采集標本。針對不同病原體采用相應標本的保存液。對已使用了抗生素/抗病毒藥物的患者，采集后的標本宜使用相關的中和液進行處理。根據(jù)癥候群和檢測項目結(jié)合患者病程的不同階段采集不同標本。對于血液、腦脊液、胸腔積液、腹水、組織活檢和尸檢標本的采集,應無菌操作。標本采集時應對標本信息進行登記并填寫樣品送檢單。應使用可靠的標記方法，包括但不限于耐凍記號筆、耐凍標簽。標識內(nèi)容具有唯一性并與采樣記錄表格一一對應。標本類型基于癥候群的病原體快速篩查方法確定采集標本類型。各癥候群主要病原體及需要采集的標本見附錄A中表A.1。標本采集方法各標本采集方法注意事項見附錄中表B.1。標本保存、運輸和交接保存運輸根據(jù)病例流行病學特征進行標本采集前，應當明確某些特殊病原體的保存和轉(zhuǎn)運方法，以保證采樣人員和標本運送人員能獲得有關標本的準確信息。標本的保存和運輸應由經(jīng)過培訓的專人負責。提前評估劇烈震蕩和溫度對檢驗結(jié)果產(chǎn)生的影響，并采取干預措施。標本采集后，在規(guī)定時間內(nèi)運達實驗室，并盡可能縮短轉(zhuǎn)運時間。用于細菌學檢驗的標本：a)用于普通細菌學檢驗的標本宜在2h內(nèi)送至實驗室。若轉(zhuǎn)運時間超過2h，宜使用轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基轉(zhuǎn)運；用于細菌培養(yǎng)的標本室溫下保存不能超過24h；用于血培養(yǎng)的標本不能冷藏轉(zhuǎn)運；僅用于分子診斷的標本，宜冷藏或冷凍保存（-70℃以下最佳，避免反復凍融）。b)對環(huán)境敏感的細菌標本采集后立即送檢。對周圍環(huán)境敏感的細菌包括但不限于百日咳鮑特菌、志賀菌屬、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和厭氧菌。c)對低溫敏感的細菌標本采集后不宜冷藏。對低溫敏感的細菌包括但不限于腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌。標本應注意立即保溫運送（不可超過8h）。d)用于厭氧菌培養(yǎng)的標本在常溫下轉(zhuǎn)運，宜在采集后30min內(nèi)送至實驗室，轉(zhuǎn)運過程中標本隔絕空氣。用于病毒學檢驗的標本：a)用于病毒核酸檢驗的標本：采集后在2h～4h內(nèi)送至實驗室。血液標本室溫運送，其他標本在2℃～8℃下轉(zhuǎn)運；若運送時間超過24h，標本宜在-70℃或更低的溫度下保存和轉(zhuǎn)運。b)用于病毒培養(yǎng)和抗原檢驗的標本在運送過程中宜保存在適當?shù)牟《巨D(zhuǎn)運液或其他相應的緩沖液中。c)液體標本包括但不限于血液、腦脊液、尿液和支氣管肺泡灌洗液可直接送檢，不需使用轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基。用于真菌培養(yǎng)的標本（除頭發(fā)、皮膚和指甲宜干燥送檢外），宜濕潤條件下送檢。根據(jù)WS/T640-2018當標本需要進行多種微生物學檢驗（包括但不限于病毒檢測、細菌檢測和真菌檢測）時，選擇合適的采樣拭子、轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基、培養(yǎng)液，分別采樣并將標本保存于合適的保存液及容器中。疑似高致病性標本運輸由專人專車護送。任何單位及個人不得通過公共交通工具運輸。運輸過程應保留完整的文件記錄，保證可回顧、可溯源。運輸過程中應保護被采樣者個人信息不被泄露。運送者至少為兩人，應接受培訓，經(jīng)考核合格后方可上崗。用于分子診斷的樣本或分離的毒株宜于-70℃以下長期保存，避免反復凍融。對樣本中分離到菌株短期采用甘油凍存，長期宜進行凍干保存。所有采集到的傳染性樣本應保存于規(guī)范的樣本庫中，雙人雙鎖管理。交接標本在運輸送達后包裝的開啟，應當在符合生物安全規(guī)定的場所中進行。標本交接的質(zhì)量控制要做到以下幾點：a)核查標本質(zhì)量：標本的基本性狀需符合要求，記錄有無嚴重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況；對照病人發(fā)病時間,檢查標本種類應與病程相符合、送樣是否及時；判斷標本取材是否正確、是否采用合適容器、送樣過程是否提供標本適宜條件。b)核對標本信息：觀察標本上是否有標識，字跡是否能辦認,標本信息與送檢單是否一致。c)保留紙質(zhì)記錄：填寫標本接收單與回執(zhí)單，并注明交接時間、雙方姓名和聯(lián)系方式。d)妥善處置不合格標本：如樣品污染或其他原因認為樣品不合格,應安全廢棄；與送樣人交接時填寫標本拒收單，寫明標本拒收原因，并及時補充采集標本。

（資料性）

各癥候群對應病原體及標本類型各癥候群對應病原體及標本類型見表A.1表A.1各癥候群對應病原體及標本類型癥候群病毒類細菌類其他病原體標本類型發(fā)熱伴呼吸道癥候群流行性感冒病毒、冠狀病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、?？刹《尽⑵尾《?、博卡病毒、腺病毒、鼻病毒、柯薩奇病毒等金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、A組鏈球菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、嗜肺軍團菌、百日咳鮑特菌、肺炎支原體、肺炎衣原體和鸚鵡熱衣原體等鼻/咽拭子、痰液、鼻咽抽吸物、支氣管肺泡灌洗液、胸腔穿刺液、抗凝血、急性期/恢復期血清、尿液發(fā)熱伴出疹癥候群水痘-帶狀皰疹病毒、人類細小病毒B19、腸道病毒、風疹病毒、麻疹病毒、EB病毒、人皰疹病毒6型、登革病毒、埃博拉病毒、猴痘病毒等鏈球菌、傷寒沙門菌、副傷寒沙門菌、立克次體和布氏疏螺旋體等抗凝血、急性期/恢復期血清、鼻/咽拭子、皰疹液、皮膚化膿性病灶膿液、糞便、尿液發(fā)熱伴出血癥候群漢坦病毒、登革病毒、出血熱病毒、大別班達病毒、埃博拉病毒等鼠疫耶爾森菌、腦膜炎奈瑟菌、鉤端螺旋體、豬鏈球菌、立克次體、查菲埃立克體、人嗜吞噬細胞無形體等抗凝血、急性期/恢復期血清、腦脊液、尿液、淋巴液、分泌物腹瀉癥候群輪狀病毒、腸道腺病毒、諾如病毒、札如病毒、星狀病毒等致瀉性大腸埃希菌、致病性弧菌(霍亂弧菌、副溶血弧菌、擬態(tài)弧菌、河弧菌）、致病性耶爾森菌（小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、假結(jié)核耶爾森菌）、彎曲菌（空腸彎曲菌、結(jié)腸彎曲菌）、非傷寒沙門菌、志賀菌、嗜水氣單胞菌、類志賀鄰單胞菌、艱難梭菌、阪崎克羅諾桿菌等溶組織內(nèi)阿米巴蟲、藍氏賈第鞭毛蟲、隱孢子蟲、環(huán)孢子蟲、微孢子蟲等糞便、肛拭子、抗凝血、嘔吐物腦炎腦膜炎癥候群腸道病毒、乙腦病毒、西尼羅病毒、蜱傳腦炎病毒、尼帕病毒、單純皰疹病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等腦膜炎奈瑟菌、B型流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、豬鏈球菌、大腸桿菌、B族鏈球菌、單增李斯特菌、克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）、結(jié)核分支桿菌等新型隱球菌、惡性瘧原蟲、弓形蟲、豬囊尾蚴、帶絳蟲、肺吸蟲、旋毛蟲、廣州管圓線蟲、裂頭蚴等腦脊液、抗凝血、急性期/恢復期血清、鼻/咽拭子、糞便標本注：可根據(jù)流行病學調(diào)查結(jié)果，按照需要，采集相應的環(huán)境的涂抹樣、水樣、空氣樣、嚙齒類及節(jié)肢動物等

（資料性）

標本采集方法表B.1標本采集方法序號采集種類采集方法采集要求1咽拭子1.核對患者信息。2.手部消毒。3.取出采樣拭子，囑被采集者頭稍后仰，張口充分暴露咽部。4.采集順序：用拭子輕柔快速地在被采集者咽后壁及扁桃體隱窩、側(cè)壁等處反復旋轉(zhuǎn)擦拭3次～5次，收集粘膜細胞。5.將咽拭子插入采集管中，折斷棄去尾部，旋緊管蓋。6.再次核對患者信息無誤。嚴格規(guī)范手部衛(wèi)生，認真核對患者信息，采樣輕柔快速，避免觸及舌、口腔粘膜和唾液。2鼻拭子1.核對患者信息。2.手部消毒。3.取出采樣拭子，囑被采集者頭部自然放松微仰，將采樣拭子貼鼻孔壁平行于上顎插入鼻孔觸及鼻腭處，停留片刻吸收分泌物后邊擦拭邊緩慢轉(zhuǎn)動退出，另取一個拭子以同樣方法采集另一側(cè)鼻孔。4.將咽拭子插入采集管中，折斷棄去尾部，旋緊管蓋。5.再次核對患者信息無誤。嚴格執(zhí)行個人防護，核對患者信息，同一病人的鼻拭子和咽拭子可以分別保存，也可以放入同一采樣管中作為鼻咽拭子管。3肛拭子1.核對患者信息。2.被采集者通常采用側(cè)臥屈膝姿勢或雙手支撐桌椅站立前屈姿勢或膝胸位（跪趴），暴露肛門。3.將采樣拭子輕輕插入肛門3cm～5cm（小兒2cm～3cm），輕輕旋轉(zhuǎn)3圈～5圈后旋轉(zhuǎn)拔出。4.立即插入采集管中，折斷棄去尾部，旋緊管蓋。采樣拭子前端可先濕潤，即蘸取生理鹽水或采集管內(nèi)非刺激性保存液，擠去多余液體后插入，保證進入肛門內(nèi)部，旋轉(zhuǎn)時輕柔，盡量帶有部分糞便，增加檢出率。4血液1.核對檢驗項目、檢驗時間、試管、姓名、年齡。2.根據(jù)醫(yī)囑采集血標本，根據(jù)檢驗目的與要求確定采集時間、方法和試管，并通知患者準備。3皮膚消毒程序：按常規(guī)方法進行。4采血操作程序：（1）通常采血部位為肘靜脈，將止血帶扎在靜脈取血部位的上方，采血部位的局部皮膚用消毒液由采血部位向外周嚴格消毒，消毒后不可接觸采血部位，待消毒液揮發(fā)后，進行取血操作。（2）采用商品化的一次性注射器或真空采血管采血標本。（3）拿下止血帶，用無菌棉壓迫止血。（4）用過的采血針不要回蓋針帽，直接將其放在銳器盒內(nèi)。5.采血后指導患者按壓穿刺點5min～10min，勿揉，凝血機制差的患者適當延長按壓時間。必須核對患者信息。應嚴格執(zhí)行無菌操作，嚴禁在正在輸液或輸血的肢體或針頭、輸液或輸血穿刺點上方、皮管內(nèi)采血標本，應在對側(cè)肢體采血。如同時采多個項目的標本，采血順序：血培養(yǎng)→不含添加劑的試管→凝血標本管→其他標本管，需抗凝的試管拔出后按要求輕輕搖勻。注意標本溶血問題，采樣后盡快送檢，用于血清學檢測的標本保存在4℃～8℃。5糞便采集糞便應使用無菌容器（如痰盂內(nèi)套無菌塑料袋），自然排出新鮮糞便后，迅速挑取糞便盛入無菌的便盒或采樣杯。挑取的糞便標本，應該選擇具有明顯性狀改變的部分，如有膿血或黏液應挑取膿血、黏液部分；液體糞便則應取絮狀物的部分。固體形態(tài)的糞便可用滅菌的壓舌板或棉簽挑?。灰后w糞便則需要使用吸管。建議多點采集以提高檢出率，便盒中糞便量不少于5g（5mL），由于癥候群病原學檢測要求同時進行多種病原體的檢測，因此采集的標本量大于一般進行單個病種檢測的量。在整個采集過程中注意不能有尿液混入。6尿液可選擇下述方法中任一種，取約10mL~15mL尿標本于無菌容器中：（一）清潔中段尿：不中止排尿，在排去數(shù)毫升尿液后用無菌寬口容器收集第二段尿，即為所需中段尿。（二）恥骨上膀胱穿刺：使用無菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮穿入膀胱吸取尿液。（三）直接導尿：按常規(guī)方法對會陰部進行清洗消毒后，用導尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液。（四）小兒收集包：對于無控制能力的小兒可應用收集包收集尿液。（五）留置導尿管收集尿液?；颊吣驑吮静杉瘯r盡量選擇晨尿。女性患者經(jīng)期應避免尿標本采集。尿標本收集后應及時送檢，及時接種，室溫下保存時間不得超過2h（夏季保存時間應適當縮短或冷藏保存），4℃冷藏保存時間不得超過8h。7嘔吐物在患者嘔吐時或中毒患者洗胃時，用彎盤或痰杯接取新鮮嘔吐物。用無菌壓舌板或拭子挑取少量嘔吐物（3g～5g）放入滅菌螺口塑料管中，密封。同時采集可疑食物和中毒病人的嘔吐物。8痰液（一）自然咳痰法：晨痰最佳，患者清晨起床后，用清水或冷開水漱口數(shù)次，用力深咳出呼吸道深部的痰，直接吐入無菌采集容器中，標本量應≥1mL，立即送檢。（二）誘導咳痰法：對于痰量少、無痰或咳痰困難者可霧化吸入，使痰液易于排出。于超聲霧化器霧化杯中加入4％的NaCl溶液40mL，吸入高滲鹽溶液15min～25min，囑病人漱口，用力咳出深部痰，收集入無菌采集容器中送檢。（三）支氣管鏡采集法：按常規(guī)支氣管鏡檢的的方法進行，在有痰和病變部位用導管吸引直接取得標本，置于無菌采集容器中。（四）小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時，可噴出肺部或氣管分泌物，將粘在拭子上的分泌物置于無菌采集容器中。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。痰標本應進行合格痰液的判定：采用痰涂片觀察法，選取5個低倍鏡視野，計白細胞（WBC）數(shù)和鱗狀上皮細胞（SC）平均數(shù)，鱗狀上皮細胞<10個/低倍視野、白細胞>25個/低倍視野，或二者比例<12.5的痰標本為合格標本。凡不符合上述合格標準的痰標本應重新采集。9肺泡灌洗液支氣管肺泡灌洗液標本的采集的操作規(guī)程如下：于局部麻醉后將纖維支氣管鏡插入右肺中葉或左肺舌段的支氣管，將其項端契入支氣管分支開口，經(jīng)氣管活檢孔緩緩注入37℃滅菌生理鹽水，每次30mL～50mL，總量100mL～250mL，不應超過300mL。每次注液后以-13.3kpa~-19.95kpa負壓吸出回收灌洗液，要防止負壓過大，過猛。分別收集于用硅化處理過的容器中，容器周圍宜用冰塊包圍，并及時送檢。灌洗液回收率>30%為宜。采集標本置入無菌采集容器中，標本量應≥5mL，立即送檢，必須注意采集標本時盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。10腦脊液1.患者側(cè)臥于硬板床上，背部與床面垂直，頭向前胸部屈曲，兩手抱膝緊貼腹部，使軀干呈弓形,或由助手立于術者對面，用一手摟住患者頭部，另一手摟住雙下肢腘窩處并用力抱緊，使脊柱盡量后突，以增加椎間隙寬度，便于進針。2.以髂后上棘連線與后正中線交會處為穿刺點，通常取第3～4腰椎棘突間隙，也可在上一個或下一個椎間隙進行。3.常規(guī)消毒皮膚，戴無菌手套、鋪消毒濕巾，以2%利多卡因自皮膚至椎間韌帶作局部浸潤麻醉。4.術者以左手拇、食二指固定穿刺點皮膚，右手持穿刺針以垂直背部方向緩慢刺入，當針頭穿過韌帶與硬脊膜時，可感到阻力突然消失（成人進針深度為4cm～6cm，兒童為2cm～4cm），此時將針芯緩慢拔出，即可見無色透明腦脊液流出。5.當見到腦脊液即將流出時，接上測壓管測量壓力，準確讀數(shù)，亦可計數(shù)腦脊液滴數(shù)估計壓力（正常為70mmH2O～180mmH2O或40滴/min～50滴/min）。若壓力不高，可令助手壓迫一側(cè)頸靜脈約10s，然后再壓另一側(cè)，最后同時按壓雙側(cè)頸靜脈，若腦脊液壓力迅速升高一倍左右，解除壓迫后10s～20s，又迅速降至原來水平，表示蛛網(wǎng)膜下腔通暢，若壓迫靜脈后壓力不升高，表示蛛網(wǎng)膜下腔完全阻塞，若壓迫后壓力緩慢上升，放松后又緩慢下降，表示不完全阻塞。6.撤除測壓管，收集腦脊液，成人3mL，兒童1mL；送驗常規(guī)、生化及細菌培養(yǎng)等。7.術畢將針芯插入后一起拔出穿刺針，覆蓋消毒紗布，膠布固定。8.術后去枕仰臥4h～6h，可避免術后低顱壓性頭痛。9.采樣分裝：每份樣品分裝成250μl每管。1.嚴格無菌操作，穿刺時避免引起微血管損傷。2.穿刺時如患者出現(xiàn)呼吸、脈搏、面色蒼白等異常改變時，應立即停止操作。3.如患者出現(xiàn)顱內(nèi)壓升高現(xiàn)象，需對患者先進行脫水處理后再進行采樣。11環(huán)境涂抹樣可選取地漏、養(yǎng)殖區(qū)域、食品加工工具、人體接觸物品