《水產(chǎn)品中13 種鄰苯二甲酸酯單酯的液相色譜-質(zhì)譜 質(zhì)譜檢測(cè)方法》

ICS

CCS

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CIXXX-2024

T

/CIXXX-2023

水產(chǎn)品中13種鄰苯二甲酸酯單酯的

液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測(cè)方法

Determinationof13phthalatemonoestersinaquaticproductsbyliquid

chromatography-Massspectrometryassspectrometry

（征求意見稿）

2024-X-X發(fā)布2024-X-X實(shí)施

中國(guó)國(guó)際科技促進(jìn)會(huì)發(fā)布

T/CIXXX—2024

水產(chǎn)品中13種鄰苯二甲酸酯單酯的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜

檢測(cè)方法

1范圍

本文件規(guī)定了測(cè)定水產(chǎn)養(yǎng)殖生物中鄰苯二甲酸單酯的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。

本文件適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖生物中鄰苯二甲酸單甲酯（MMP）、鄰苯二甲酸單乙酯（MEP）、

鄰苯二甲酸單異丁酯（MiBP）、鄰苯二甲酸單正丁酯（MnBP）、鄰苯二甲酸單環(huán)己酯（MCHP）、

鄰苯二甲酸單芐基酯（MBZP）、鄰苯二甲酸單辛酯（MOP）、鄰苯二甲酸單異壬酯（MiNP）、

鄰苯二甲酸單（2-乙基己基）酯、鄰苯二甲酸單（3-羧基丙基）酯（MCPP）、鄰苯二甲酸單

（2-乙基-5-酮基己基）酯（MEOHP）、鄰苯二甲酸單（2-乙基-5-羥基己基）酯（MEHHP）、

鄰苯二甲酸單（2-乙基-5-羧基戊基）酯（MECCP）等13種鄰苯二甲酸單酯的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，僅所注日期的版

本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)

準(zhǔn)。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

原理

水產(chǎn)養(yǎng)殖生物中鄰苯二甲酸單酯經(jīng)固相萃取柱富集、凈化后，采用高效液相色譜-串聯(lián)

質(zhì)譜法測(cè)定。根據(jù)化合物的保留時(shí)間和特征離子峰定性，內(nèi)標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?/p>

4.1甲醇（CH3OH）：色譜純。

4.2乙腈（CH3CN）：色譜純。

4.3甲酸（HCOOH）：色譜純。

4.4乙酸胺（NH4CH3COOH）。

4.50.1%甲酸乙腈溶液：量取1mL甲酸（4.3）,用乙腈稀釋并定容至1000mL。

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4.60.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸（4.3）,用水稀釋至1000mL。

4.750%甲醇乙腈：量取50mL甲醇與50mL乙腈混合。

4.8標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：鄰苯二甲酸單甲酯（MMP）、鄰苯二甲酸單乙酯（MEP）、鄰苯二甲酸單異丁

酯（MiBP）、鄰苯二甲酸單正丁酯（MnBP）、鄰苯二甲酸單環(huán)己酯（MCHP）、鄰苯二甲酸單

芐基酯（MBZP）、鄰苯二甲酸單辛酯（MOP）、鄰苯二甲酸單異壬酯（MiNP）、鄰苯二甲酸

單（2-乙基己基）酯、鄰苯二甲酸單（3-羧基丙基）酯（MCPP）、鄰苯二甲酸單（2-乙基-5-

酮基己基）酯（MEOHP）、鄰苯二甲酸單（2-乙基-5-羥基己基）酯（MEHHP）、鄰苯二甲酸

單（2-乙基-5-羧基戊基）酯（MECCP），純度≥97.0%。

4.9內(nèi)標(biāo)物質(zhì)：氘代鄰苯二甲酸單甲酯（MMP）、鄰苯二甲酸單乙酯（MEP）、鄰苯二甲酸單

異丁酯（MiBP）、鄰苯二甲酸單正丁酯（MnBP）、鄰苯二甲酸單環(huán)己酯（MCHP）、鄰苯二甲

酸單芐基酯（MBZP）、鄰苯二甲酸單辛酯（MOP）、鄰苯二甲酸單異壬酯（MiNP）、鄰苯二

甲酸單（2-乙基己基）酯、鄰苯二甲酸單（3-羧基丙基）酯（MCPP）、鄰苯二甲酸單（2-

乙基-5-酮基己基）酯（MEOHP）、鄰苯二甲酸單（2-乙基-5-羥基己基）酯（MEHHP）、鄰苯

二甲酸單（2-乙基-5-羧基戊基）酯（MECCP），純度≥97.0%。

4.1013種鄰苯二甲酸單酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取適量鄰苯二甲酸單酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶

解并定容至10mL，使各種磺胺和喹諾酮的濃度均為1000μg/mL，-18℃以下避光保存，有

效期6個(gè)月。

4.1113種鄰苯二甲酸單酯混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別量取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100mL棕色容量

瓶中，用甲醇稀釋配制成濃度為1.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，-18℃以下避光保存，有效

期3個(gè)月。

4.12內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液：分別稱取適量?jī)?nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至50mL，使各種氘代內(nèi)

標(biāo)的濃度均為200μg/mL，-18℃以下避光保存，有效期6個(gè)月。

4.13內(nèi)標(biāo)使用液：分別量取適量?jī)?nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液于100mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋配制成濃

度為1.0μg/mL的內(nèi)標(biāo)使用液，4℃下避光保存，有效期1個(gè)月。

5儀器和設(shè)備

5.1高效液相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子源（ESI）。

5.2電子天平：感量0.00001g和0.01g。

5.3固相萃取裝置。

5.4可控溫氮吹濃縮儀。

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5.5pH計(jì)：測(cè)量精度±0.2。

5.6渦旋混合器。

5.7固相萃取柱:PolySeryMAXSPE固相萃取柱，規(guī)格為6mL/500mg。

6樣品制備與保存

采集的水產(chǎn)品樣經(jīng)預(yù)研磨處理后于-20℃密封保存，24h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

——取預(yù)處理后的供試樣品，作為供試試樣。

——取預(yù)處理的空白樣品，作為空白試樣。

——取預(yù)處理的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為空白添加試樣。

7樣品處理

精確稱量2.50g（濕重，ww）水產(chǎn)品樣品，并轉(zhuǎn)移至50mLPTFE離心管中。將2mL1

M乙酸銨緩沖液（AA，pH6.5）、80μLβ-葡萄糖醛酸酶和內(nèi)標(biāo)（200.0μg/L）加入管

中，將混合物渦旋3min，在37℃和300r/min的黑暗條件下孵育90min。此過程結(jié)束后

立即加入10mLACN：甲醇（MeOH）（5:5，v/v），然后超聲萃取20min，并在9.0×103g

離心力的條件下離心4min，收集上清液，重復(fù)上述步驟兩次，合并上清液。將其與5mLACN

飽和正己烷混合，并將樣品管快速搖晃，渦旋3min以除去上清液中的脂肪并再次以相同離

心力離心6min。然后吸取20mL下層溶液至試管中，并于45°C下，氮吹至近干，然后

用5mL水：（ACN:MeOH）（95:5，v/v）復(fù)溶。PolySeryMAXSPE小柱（500mg，6mL）

依次用10mLMeOH和5mL超純水活化，然后將5mL復(fù)溶液（pH，10.5）上樣，通過加入

氫氧化鈉（NaOH）（10M）來調(diào)節(jié)復(fù)溶液的pH，上樣完成后，再用5mL超純水淋洗并用真

空泵泵吸以除去水分。用10mLMeOH：乙酸乙酯（EA）（2%FA，5:5，v/v）洗脫小柱，并

于45°C下，使用氮?dú)鉂饪s至近干。最后用1.0mLMeOH復(fù)溶，并用0.22μmPTFE膜過

濾，轉(zhuǎn)移至棕色進(jìn)樣小瓶中，儲(chǔ)存在?20°C，待UHPLC-MS/MS分析。

8分析測(cè)定

8.1標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制備

取一定量鄰苯二甲酸單酯混合標(biāo)準(zhǔn)使用液、內(nèi)標(biāo)使用液于2mL進(jìn)樣瓶中，制備至少5

個(gè)點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)系列，鄰苯二甲酸單酯在各點(diǎn)的質(zhì)量濃度分別為1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μ

g/L、50.0μg/L、100.0μg/L和200.0μg/L（參考濃度），內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度均為40.0μ

g/L。

由低濃度到高濃度依次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)組分的質(zhì)量濃度為

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橫坐標(biāo)，其對(duì)應(yīng)的峰面積（或峰高）與內(nèi)標(biāo)物峰面積（或峰面積）的比值乘以內(nèi)標(biāo)物濃度的

乘積為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。

8.2色譜參考條件

色譜柱：WatersACQUITYUPLC?BEHPhenyl（2.1id×100mm，1.7μm）柱，或其他等

效色譜柱。

流動(dòng)相：流動(dòng)相A為0.1%甲酸，流動(dòng)相B為0.1%甲酸乙腈。

柱溫：40℃。

流速：0.35mL/min。

進(jìn)樣體積：10μL。

梯度洗脫程序見表1。

表1流動(dòng)相梯度洗脫程序

流速

時(shí)間（min）流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B（%）

（mL/min）

00.359010

0.30.359010

10.352080

20.351090

3.50.35595

40.359010

60.359010

8.3質(zhì)譜參考條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）。

掃描方式：正離子掃描。

離子噴霧電：5500V。

離子源溫度：500℃。

多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式（MRM），掃描參數(shù)見附錄C。

9結(jié)果計(jì)算

9.1定性分析

按照附錄C中確定的母離子和子離子進(jìn)行檢測(cè)，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中的鄰苯二

甲酸單酯的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中鄰苯二甲酸單酯的保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.5%，且

在樣品中譜圖中的定性離子的相對(duì)豐度（Ksam）與濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖中對(duì)應(yīng)的定性離

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子相對(duì)豐度（Ksam）偏差不超過表2的范圍，則可判定樣品中存在鄰苯二甲酸單酯。

Ksam=100%..................(1)

?2

1

式中：?×

Ksam—樣品中鄰苯二甲酸單酯定性離子的相對(duì)豐度，%；

A2--樣品中鄰苯二甲酸單酯定性離子對(duì)的峰面積（或峰高）；

A1--樣品中鄰苯二甲酸單酯定量離子對(duì)的峰面積（或峰高）。

Kstd=100%..................(2)

????2

???1

式中：?×

Kstd—標(biāo)準(zhǔn)溶液中鄰苯二甲酸單酯定性離子的相對(duì)豐度，%；

Astd2—標(biāo)準(zhǔn)溶液中鄰苯二甲酸單酯定性離子對(duì)的峰面積（或峰高）；

Astd1—標(biāo)準(zhǔn)溶液中鄰苯二甲酸單酯定量離子對(duì)的峰面積（或峰高）。

表2定性確認(rèn)時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

KstdKstd＞5020＜10＜Kstd≤10

Kstd≤50Kstd≤20

Ksam相對(duì)于

Kstd的最大允許±20%±25%±30%±50%

偏差

9.2定量分析

該方法中標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中藥物殘留的響應(yīng)值均應(yīng)在y儀器的檢測(cè)線性范圍內(nèi)。

按下列公式（3）計(jì)算出水產(chǎn)品樣品中鄰苯二甲酸單酯的含量：

X=..................(3)

??×?

0

式中：?

X—樣品中鄰苯二甲酸單酯的含量（μg/kg）；

Ci—樣品制備液中鄰苯二甲酸單酯的含量（μg/kg）；

V—最終定容體積（mL）；

V0—測(cè)定樣品質(zhì)量（mg）。

9.3結(jié)果表示

當(dāng)測(cè)定結(jié)果小于1.0μg/kg時(shí)，保留至小數(shù)點(diǎn)后三位；當(dāng)測(cè)定結(jié)果大于或等于1.0μg/kg

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時(shí)，保留三位有效數(shù)字。

10方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度

10.1靈敏度

本方法鄰苯二甲酸單酯的檢出限為0.07-0.88μg/kg,定量限為0.24~2.93μg/kg

（ww）。

10.2準(zhǔn)確度

本方法回收率范圍為60%～130%。

10.3精密度

本方法的批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤15%。

11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

11.1空白試驗(yàn)

每批樣品（≤20個(gè)/批）至少做一個(gè)空白實(shí)驗(yàn)，空白試樣中目標(biāo)化合物的濃度應(yīng)低于方

法檢出限。

11.2校準(zhǔn)

校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.990；每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣品/批）應(yīng)分析測(cè)

定1個(gè)曲線中間校準(zhǔn)點(diǎn)，其測(cè)定結(jié)果與校準(zhǔn)曲線相應(yīng)點(diǎn)濃度的相對(duì)誤差應(yīng)在±20%以內(nèi)。

11.3精密度控制

每批樣品應(yīng)至少測(cè)定10%的平行雙樣，樣品數(shù)量少于10個(gè)時(shí)，應(yīng)至少測(cè)定一個(gè)平行雙

樣，平行雙樣測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)在±20%以內(nèi)。

11.4準(zhǔn)確度控制

每批樣品應(yīng)至少測(cè)定5%的基體加標(biāo)樣品，樣品數(shù)量少于20個(gè)時(shí)，應(yīng)至少測(cè)定一個(gè)基體

加標(biāo)樣品，加標(biāo)回收率應(yīng)在60%～130%之間。

12廢物處理

實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的廢液和廢物應(yīng)分類收集和保管，委托有資質(zhì)的單位進(jìn)行處理。

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附錄A

（規(guī)范性）

方法的檢出限和定量限

表A.1方法的檢出限和定量限

檢出限定量限

MAPEs相關(guān)系數(shù)基質(zhì)效應(yīng)

（μg/kg）（μg/kg）

MMP0.99790.990.882.93

MEP0.99921.060.812.70

MOP0.99970.930.230.78

MiBP0.99901.030.120.41

MnBP0.99940.990.311.04

MiNP0.99981.070.210.69

MCPP0.99951.020.531.77

MCHP0.99951.000.180.62

MBZP0.99700.930.511.70

MEHP0.99960.990.170.58

MECPP0.99871.040.070.24

MEHHP0.99991.020.140.48

MEOHP0.99991.040.080.27

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附錄B

（規(guī)范性）

方法的精密度和準(zhǔn)確度

表B.1方法的精密度和準(zhǔn)確度（n=6）

加標(biāo)

實(shí)際樣加標(biāo)濃批批

化合物名平均回收

樣品品濃度度內(nèi)差異間差異

稱率

（μg/L）（μg/L）%%

%

ND597.42.43.2

MMPND2099.41.41.7

ND8095.59.95.3

ND5100.72.94.2

MEPND2098.13.42.3

ND80101.85.79.0

ND596.98.45.5

MOPND2097.52.64.3

ND8095.08.74.7

水產(chǎn)ND598.61.74.4

養(yǎng)殖生物MiBPND2097.25.42.6

ND8097.23.62.8

ND598.63.31.4

MnBPND2098.51.82.3

ND8090.98.21.2

ND598.27.82.6

MiNPND2099.82.72.4

ND8090.46.10.9

ND598.95.92.8

MCPP

ND2098.02.52.8

8

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表B.1（續(xù)）

ND8096.34.41.9

ND598.33.41.7

MCHPND20100.66.51.6

ND8098.05.74.7

ND596.86.95.4

MBZPND2097.53.54.1

ND8094.68.81.3

ND5100.03.10.7

MEHPND2099.96.62.3

ND8092.75.22.1

ND599.46.91.5

MECCPND2097.73.32.0

ND8093.25.51.9

ND598.23.22.8

MEHHPND2098.22.81.9

ND8093.18.96.6

ND5101.24.02.7

MEOHPND20101.33.42.0

ND8098.68.34.7

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附錄C

（規(guī)范性）

質(zhì)譜參考條件

表C.1方法的精密度和準(zhǔn)確度（n=6）

目標(biāo)化合物及內(nèi)標(biāo)物的多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件見表C.1。

表C.1目標(biāo)化合物及內(nèi)標(biāo)物的多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件

化合物母離子錐孔電壓子離子(m/z)碰撞電壓

(m/z)(V)(V)

MMP179.11077,107*27,10

MMP-D4183.14281*,111.116,10

MEP193.13877.1*,121.118,14

MEP-D4197.14081.1*,150.118,12

MOP277.1277,127.1*18,16

MOP-D4281.14681.1,127.1*20,16

MiBP221.14077*,134.120,12

MiBP-D4225.15280.9*,138.122,18

MnBP221.11577*,149.115,10

MnBP-D4225.14671,81*12,20

MiNP291.24877,141.1*20,18

MiNP-D4295.2