《特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中氨基酸的測定 高效液相色譜法》編制說明

《特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中氨基酸的測定高效液相色譜法》

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)編制說明

（征求意見稿）

一、工作簡況

1任務(wù)來源

本項(xiàng)目是根據(jù)中國生產(chǎn)力促進(jìn)中心協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化工作委員會(huì)《關(guān)于〈特殊醫(yī)

學(xué)用途配方食品中氨基酸的測定〉團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)的通知》，項(xiàng)目名稱“特殊醫(yī)

學(xué)用途配方食品中氨基酸的測定”（中生協(xié)標(biāo)委函〔2022〕07號(hào)），項(xiàng)目編

制單位為安捷倫科技(中國)有限公司等。

2標(biāo)準(zhǔn)制定的必要性

氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，對(duì)于生物體的正常生長和發(fā)育至關(guān)重

要。通過測定蛋白質(zhì)中的氨基酸組成，可以深入了解食物或蛋白質(zhì)來源的營養(yǎng)

價(jià)值，為膳食推薦和營養(yǎng)補(bǔ)充提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，測定蛋白質(zhì)中的氨基酸含

量也可以用于評(píng)估產(chǎn)品的質(zhì)量、新鮮度或加工過程對(duì)蛋白質(zhì)的影響。例如，在

乳制品或肉類產(chǎn)品的質(zhì)量控制中，氨基酸含量的測定可以提供關(guān)于產(chǎn)品品質(zhì)和

保質(zhì)期的信息。

使用柱前衍生反向液相色譜法分析氨基酸是目前比較主流的一種氨基酸分

析檢測方案，比較其他分析方法例如電泳法，氨基酸分析儀等手段，此方法具

有低成本，通用性強(qiáng)，易于自動(dòng)化等優(yōu)勢(shì)，結(jié)合超高效液相色譜技術(shù)，還可以

顯著提升分析檢測的通量和效率。目前比較常用的竹簽衍生試劑為一級(jí)氨基酸

用鄰苯二甲醛（OPA）、二級(jí)氨基酸用9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）進(jìn)行衍生，

這類衍生試劑具有衍生速度快，實(shí)驗(yàn)操作簡單等優(yōu)勢(shì)，可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化高效率

衍生。

但氨基酸的檢測在食品相關(guān)領(lǐng)域已經(jīng)有了比較成熟的標(biāo)準(zhǔn)，但是目前仍沒

有針對(duì)特醫(yī)食品中的氨基酸檢測標(biāo)準(zhǔn)，來指導(dǎo)特醫(yī)食品中氨基酸檢測所涉及的

樣品前處理及分析檢測過程。本標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目鑒于特醫(yī)食品蛋白質(zhì)組件所涉及的基

質(zhì)情況主要為蛋白質(zhì)類成分，結(jié)合不同氨基酸所事宜的處理因素及水解條件，

對(duì)其中16種氨基酸（天冬氨酸，絲氨酸，谷氨酸，脯氨酸，羥脯氨酸，甘氨

酸，丙氨酸，纈氨酸，甲硫氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，賴

氨酸，組氨酸，色氨酸）的前處理和測定方法進(jìn)行了優(yōu)化。使用堿水解法處理

樣品后采用柱前衍反相液相色譜方法建立一種高效、靈敏、穩(wěn)定的方法，適用

于特醫(yī)食品蛋白質(zhì)組件中氨基酸的檢測和分析目前，該方法技術(shù)已十分穩(wěn)定，

可作為特醫(yī)食品蛋白質(zhì)組件中氨基酸檢測標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)展的基礎(chǔ)。

3主要工作過程

（1）起草（草案、論證）階段：

本標(biāo)準(zhǔn)在2022年6月中國生產(chǎn)力促進(jìn)中心協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化工作委員會(huì)下達(dá)了

《特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中氨基酸的測定》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)計(jì)劃后，征集了起草

成員單位，為組建標(biāo)準(zhǔn)起草工作組做好準(zhǔn)備，并進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)基本框架和具體技

術(shù)內(nèi)容的初步起草研究工作。

2022年7月7月5日，由中國生產(chǎn)力促進(jìn)中心協(xié)會(huì)特醫(yī)食品與生物活性肽

工作委員會(huì)主辦，食品行業(yè)生產(chǎn)力促進(jìn)中心承辦的《特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中

氨基酸的測定》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)啟動(dòng)會(huì)通過線上方式順利召開，來自中國生產(chǎn)力促進(jìn)

中心協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化工作委員會(huì)、全國食品工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)

產(chǎn)品營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)專家委員會(huì)、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)的專家、學(xué)者及2項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)起草單位代

表、工委會(huì)秘書長相關(guān)人員近40人參會(huì)，會(huì)議確定了總體工作方案并制定了

《特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中氨基酸的測定》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)具體的工作方案，初步明

確標(biāo)準(zhǔn)修訂的框架。

2022年7月-2024年1月，標(biāo)準(zhǔn)起草工作組開始對(duì)國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)技術(shù)資

料進(jìn)行檢索整理，并對(duì)生產(chǎn)企業(yè)征求了修訂標(biāo)準(zhǔn)的意見，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的框架結(jié)構(gòu)、適

用范圍、主要技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行了研究，并進(jìn)行了主要技術(shù)指標(biāo)樣品收集和驗(yàn)證工作。

標(biāo)準(zhǔn)起草工作組根據(jù)多次內(nèi)部研討意見，起草形成了《特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中

氨基酸的測定》團(tuán)體標(biāo)（工作組討論稿）和編制說明，之后在征集起草單位意見

基礎(chǔ)上，決議形成《特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中氨基酸的測定》團(tuán)體標(biāo)（征求意見

稿）和編制說明。

4主要參加單位和工作組成員及其所做的工作等

本標(biāo)準(zhǔn)由XXX共同起草。

主要成員：XXX、XXX......。

二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和主要內(nèi)容

1編制原則

1.1標(biāo)準(zhǔn)文本結(jié)構(gòu)制定原則

按照GB/T1.1《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)

則》的相關(guān)要求和內(nèi)容。

1.2參考國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用規(guī)格驗(yàn)方法

2標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容

2.1標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容及適用范圍

本文件規(guī)定了特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中氨基酸的高效液相色譜測定方法。

本文件適用于特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品蛋白質(zhì)組件中的16種氨基酸（天冬氨

酸，絲氨酸，谷氨酸，脯氨酸，羥脯氨酸，甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，甲硫氨

酸，亮氨酸，異亮氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，賴氨酸，組氨酸，色氨酸）的測定。

2.2標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容及依據(jù)

本文件適用于特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中氨基酸的高效液相色譜測定，依據(jù)原

理為：試樣經(jīng)氫氧化鋰溶液水解，一級(jí)氨基酸用鄰苯二甲醛（OPA）、二級(jí)氨基

酸用9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）進(jìn)行衍生，用具有紫外檢測器/二極管陣列檢測

器的高效液相色譜檢測。

三、主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）情況

特醫(yī)食品中16種氨基酸測定驗(yàn)證結(jié)果

1標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

表1線性方程

化合物線性方程R線性范圍(nmol/ml)

天冬氨酸Y=5.2509X-18.66570.999790-900

絲氨酸Y=4.4530X-5.44730.999990-900

谷氨酸Y=5.2170X-11.43320.999990-900

脯氨酸Y=8.2485X+0.80240.999790-900

羥脯氨酸Y=4.6051X-20.3140.999990-900

甘氨酸Y=4.1669X+4.23060.999990-900

丙氨酸Y=4.4065X-2.72480.999990-900

纈氨酸Y=4.6357X-9.93210.999990-900

甲硫氨酸Y=4.3234X-2.98021.000090-900

亮氨酸Y=4.4213X-5.37620.999990-900

異亮氨酸Y=4.6854X-7.63000.999990-900

酪氨酸Y=4.7431X-4.21580.999990-900

苯丙氨酸Y=4.7222X-5.53460.999990-900

賴氨酸Y=2.4797X+26.89780.999990-900

組氨酸Y=5.4753X+7.66720.999990-900

色氨酸Y=0.5101X-0.34110.999990-900

2方法的精密度實(shí)驗(yàn)

本方法以特醫(yī)食品蛋白質(zhì)組件樣品中的氨基酸，平行測定三次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)

準(zhǔn)偏差來考察方法的精密度。具體結(jié)果如下。

表2方法的密度實(shí)驗(yàn)

測定濃度1測定濃度2測定濃度2相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏

氨基酸名稱

（pmol/mL）（pmol/mL）（pmol/mL）差(%)

天冬氨酸232.48234.17219.993.38

谷氨酸578.04592.85556.493.18

甘氨酸224.99221.74215.582.17

丙氨酸264.53266.20252.502.86

纈氨酸122.51128.68121.913.01

苯丙氨酸94.5396.8089.953.72

亮氨酸255.22261.27246.552.91

脯氨酸355.16341.05352.272.13

絲氨酸260.00242.81253.053.43

組氨酸75.0771.7876.663.34

酪氨酸849.59827.87812.642.24

甲硫氨酸644.19638.57632.860.89

色氨酸23.0621.9022.352.59

異亮氨酸374.56352.12358.863.18

賴氨酸886.96895.31830.154.07

羥脯氨酸850.92741.88867.838.33

3檢出限和定量限的測定

提供標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度點(diǎn)混標(biāo)樣品溶液的信噪比圖譜，按響應(yīng)最低的脯氨酸

峰信噪比S/N=73.73,折算檢出限信噪比≥3,定量限信噪比≥10。

表3檢出限、定量限信噪比

檢出限濃度3.66nmol/mL信噪比3

定量限濃度12.2nmol/mL信噪比10

4結(jié)論

按該標(biāo)準(zhǔn)方法處理后所得方法學(xué)參數(shù)：線性范圍、準(zhǔn)確度、精密度、檢出限

和定量限均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

四、標(biāo)準(zhǔn)中涉及專利的情況

本標(biāo)準(zhǔn)不涉及專利問題。

五、預(yù)期達(dá)到的社會(huì)效益、對(duì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的作用等情況

標(biāo)準(zhǔn)起草團(tuán)隊(duì)在對(duì)特醫(yī)食品蛋白質(zhì)組件現(xiàn)狀大范圍調(diào)研的基礎(chǔ)上，摸清了目

前存在的主要檢測問題難點(diǎn)，同時(shí)結(jié)合專家經(jīng)驗(yàn)及前期試驗(yàn)結(jié)果，研究明確了特

醫(yī)食品蛋白質(zhì)組件中氨基酸含量檢測的方向，為特醫(yī)食品蛋白質(zhì)組件中氨基酸含

量的檢測技術(shù)提供理論依據(jù)。本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施，有效解決了目前特醫(yī)食品蛋白質(zhì)組

件中氨基酸含量定性、定量檢測技術(shù)，迄今在國內(nèi)外還是空白這一現(xiàn)狀，有重大

的技術(shù)必要性。

六、與國際、國外對(duì)比情況

本標(biāo)準(zhǔn)沒有