《土壤原生動物監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》

ICS13.080

CCSZ10

23

黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB23/TXXXX—XXXX

土壤原生動物監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

起草單位:黑龍江省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心

聯(lián)系人:蔣本超

電話/p>

郵箱:jiangbenchaokg@163.com

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

黑龍江省市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

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土壤原生動物監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了土壤原生動物監(jiān)測技術(shù)術(shù)語定義、樣品采集、樣品保存、原生動物物種鑒定、質(zhì)量保

證和質(zhì)量控制要求的內(nèi)容。

本文件適用于土壤原生動物監(jiān)測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T36197土壤質(zhì)量土壤采樣技術(shù)指南

HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

HJ710.10生物多樣性觀測技術(shù)導(dǎo)則大中型土壤動物

NY/T395農(nóng)田土壤環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

原生動物

是最原始、最簡單、最低等的單細(xì)胞動物。

4樣品采集

野外采樣器具

4.1.1器材類工具：應(yīng)符合HJ/T166的要求，包括但不限于樣品袋、GPS定位儀、數(shù)碼相機(jī)。

4.1.2工具類：應(yīng)符合HJ/T166、HJ710.10的要求，包括但不限于鐵鏟、圓狀取土鉆。

4.1.3文具類：應(yīng)符合HJ/T166、HJ710.10的要求，包括但不限于基本情況記錄表與采樣環(huán)境調(diào)查

數(shù)據(jù)表。

4.1.4安全防護(hù)用品與采樣車輛：應(yīng)符合HJ/T166的要求。

采樣點(diǎn)位布設(shè)與觀測

4.2.1監(jiān)測點(diǎn)位的布設(shè)和確定應(yīng)符合HJ/T166的規(guī)定。實(shí)際監(jiān)測中，布點(diǎn)數(shù)量還要根據(jù)采樣目的、樣

地環(huán)境狀況等因素確定，一般每個樣方至少布設(shè)5個點(diǎn)。

4.2.2采集樣本前，應(yīng)先對現(xiàn)場環(huán)境情況進(jìn)行觀測、記錄和拍照；盡可能全面地記錄天氣情況、土壤

基本植被等其他信息（參見附錄A和附錄B）。

采樣時間

1

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監(jiān)測時間的確定包括但不限于：

a)若進(jìn)行逐季或逐月監(jiān)測，各季或各月監(jiān)測的時間間隔應(yīng)基本相同；

b)同一監(jiān)測點(diǎn)位的采樣深度、采樣范圍、采樣時間應(yīng)同步；

c)監(jiān)測時間選擇在一天內(nèi)的同一時段。

采集樣品

4.4.1樣品采集過程應(yīng)符合GB/T36197和NY/T395的要求。

4.4.2利用鐵鏟或圓狀取土鉆按照采樣點(diǎn)分布采集表層土壤，采樣深度0cm-20cm。每個采樣點(diǎn)采

集2kg土壤混合樣品，樣品重量不夠可適當(dāng)增加采樣點(diǎn)數(shù)。樣品采集過程中，應(yīng)去除礫石、植物根系

等，每個采樣點(diǎn)采集的土壤深度、重量應(yīng)一致。樣品應(yīng)充分混勻后裝入樣品袋，做好標(biāo)注。

樣品標(biāo)識和記錄

4.5.1樣品袋外側(cè)應(yīng)標(biāo)識采樣點(diǎn)信息、采樣時間以及采樣人姓名。

4.5.2采樣表應(yīng)記錄采樣時間、采樣地名稱等（參見附錄A）。

5樣品保存

采集的樣品應(yīng)室溫保存，風(fēng)干，用于土壤理化指標(biāo)分析、制備土壤浸出液、原生動物活體觀察、原

生動物活體計(jì)數(shù)和原生動物專家鑒定。

6原生動物物種鑒定

非淹沒培養(yǎng)皿法活體培養(yǎng)

取30g風(fēng)干的土壤樣品，置于燒杯中，加入100mL蒸餾水，煮沸10-15min，靜置沉淀，取懸浮

液過濾得到土壤浸出液。另取5g風(fēng)干土樣，用紗布包好放入培養(yǎng)皿中，加入土壤浸出液約60mL，浸

出液淹沒樣品2/3處為宜，對土壤中的原生動物進(jìn)行培養(yǎng)，在25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1天-7天（視原生動

物生長情況可延長培養(yǎng)天數(shù)），得到活體培養(yǎng)液。

活體觀察、鑒定單擊或點(diǎn)擊此處輸入文字。

6.2.1原生動物活體觀察流程

土壤原生動物活體觀察流程可按照以下步驟開展：

a)用玻璃毛細(xì)管吸取一滴6.1得到的活體培養(yǎng)液滴到載玻片上，以原生動物活體3-4只為宜，

液體的含量盡量少，避免液體從載玻片四邊溢出；在顯微鏡下觀察時，若原生動物運(yùn)動速度

過快可逐漸輕壓蓋玻片，使原生動物的運(yùn)動減慢，注意不要破壞原生動物活體；

b)在蓋玻片四角均勻地涂抹少量凡士林，防止蓋玻片直接壓在原生動物上使原生動物活體裂解

死亡，蓋上蓋玻片，制作原生動物活體裝片；

c)在低倍顯微鏡下查找原生動物活體；

d)在中倍顯微鏡下觀察原生動物活體；

e)在高倍顯微鏡下觀察原生動物活體；

f)于顯微鏡下進(jìn)行原生動物活體拍照記錄。

6.2.2形態(tài)學(xué)觀察

2

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觀察原生動物活體運(yùn)動方式、大小、形狀、纖毛及纖毛器（長度、分布和排列特征等），伸縮泡（部

位/數(shù)量以及形成過程、排空間歇時間、是否有收集管等）、內(nèi)質(zhì)情況（是否存在特殊的油球、空泡、

結(jié)晶體、食物泡數(shù)目/分布特征等）、色素體的存在及體色等特征。將原生動物物種信息填寫至附錄C

中。每個樣品應(yīng)觀察不少于2-3個制作的原生動物活體裝片。

活體計(jì)數(shù)

每隔24h對6.1中制備的活體培養(yǎng)液進(jìn)行原生動物計(jì)數(shù)，步驟如下：

a）每次計(jì)數(shù)前，將培養(yǎng)皿中的活體培養(yǎng)液搖勻；

b）將活體培養(yǎng)液劃分為上、中、下三層，每層按照五點(diǎn)取樣法（也可適當(dāng)增加點(diǎn)數(shù)），每點(diǎn)取液

體1mL于載玻片上；

c）在顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)，將獲得的原生動物活體數(shù)量最大值填寫至附錄C中。

單個風(fēng)干土壤樣品中原生動物數(shù)量按以下公式計(jì)算：

m

（上中下上中下）

N0n1n1n1......nmnmnmV0

i1.................（1）

NN0VlMs..........................................（2）

式中：

上中下

nm、nm、nm——上、中、下每層中第m個取樣點(diǎn)所觀察的原生動物活體的數(shù)值，單位為個；

V0——上、中、下每層所取的活體培養(yǎng)液總體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；

N0——每毫升活體培養(yǎng)液中原生動物活體的數(shù)值，單位為個；

Vl——6.1中加入的土壤浸出液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；

Ms——用于制備活體培養(yǎng)液的風(fēng)干土壤樣品重量的數(shù)值，單位為克（g）；

N——每克風(fēng)干土壤樣品中原生動物活體的數(shù)值，單位為個。

物種鑒定依據(jù)

對原生動物物種信息進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并填寫物種相關(guān)信息（參見附錄C）。

原生動物物種鑒定書目見附錄D。

無法通過鑒定書目鑒定的物種，應(yīng)從活體培養(yǎng)液中吸出單個原生動物，置于無菌孔板中，經(jīng)25℃恒

溫單克隆培養(yǎng)后由資深原生動物物種鑒定專家進(jìn)行重復(fù)鑒定。

7質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

樣品采集

3

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7.1.1及時在現(xiàn)場做好樣品保存，正確標(biāo)識樣品。

7.1.2及時清洗所有接觸過樣品的采樣器具，防止污染。

樣品運(yùn)輸

7.2.1根據(jù)采樣記錄核對清點(diǎn)樣品。

7.2.2運(yùn)輸中應(yīng)仔細(xì)保管樣品，避免強(qiáng)光照射。

樣品的交接與記錄

7.3.1樣品交接時，應(yīng)辦理正式交接手續(xù)，接收人員應(yīng)檢查樣品狀態(tài)并進(jìn)行記錄。

7.3.2樣品應(yīng)有唯一性標(biāo)識及檢測過程中的狀態(tài)標(biāo)識，確保樣品不會混淆。

物種鑒定

物種鑒定的質(zhì)量控制如下：

a）活體培養(yǎng)液的制備過程及原生動物活體計(jì)數(shù)過程應(yīng)設(shè)置平行樣，平行樣的測定結(jié)果用平均數(shù)表

示；

b）原生動物活體拍照資料應(yīng)附上詳細(xì)文字描述，包括物種形態(tài)學(xué)特征等信息；

c）原生動物新種經(jīng)單克隆培養(yǎng)后由資深原生動物物種鑒定專家進(jìn)行重復(fù)鑒定；

d）應(yīng)當(dāng)保存并更新相關(guān)的分類學(xué)文獻(xiàn)。

數(shù)據(jù)記錄

數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)有鑒定人、復(fù)核人、審核人簽字。

4

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附錄A

（資料性）

采樣地基本情況記錄表

采樣地基本情況記錄表樣式如下：

采樣地名稱：地點(diǎn)：

樣地#樣方#樣地長度：樣地寬度：樣地面積：取樣深度：

經(jīng)緯度：EN樣地序號：

采集日期：時間：

采樣人：樣品編號：

制表人：樣品采集目的：

□卵石%□樹木殘干%

土壤類型

□砂礫%□其他（）%

采樣器具

如何采樣

樣品采集采樣方法

備注

5

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附錄B

（資料性）

土壤樣品采樣環(huán)境調(diào)查數(shù)據(jù)表

土壤樣品采樣環(huán)境調(diào)查數(shù)據(jù)表樣式如下：

日期：時間：

地點(diǎn)：省市縣村

樣地所屬區(qū)域：樣地名稱：

經(jīng)緯度：EN海拔高度m

樣地#樣方#土壤類型：

起始時間：終止時間：

調(diào)查人：

當(dāng)前過去24小時過去7天有無大雨

暴雨（大雨）□□

天氣小雨（中雨）□□□是□否

情況陣雨□□氣溫℃

多云□%□%其他

晴□□

周圍土地利用優(yōu)勢類型樣地非點(diǎn)源（NPS）污染情況

環(huán)境□森林□牧場/草原□農(nóng)業(yè)□無□某些可能污染源□明顯污染源

特征□居民區(qū)當(dāng)?shù)剞r(nóng)田侵蝕情況

□商業(yè)□工業(yè)□其他□無□中等□嚴(yán)重

優(yōu)勢類型□喬木□灌木□草□藤蔓

采樣地周邊植被

優(yōu)勢物種

上方覆蓋度□半開闊□半蔭□全蔭

稻田、濕地等類型的樣地特征進(jìn)水流速m/s

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氣味

□正常/無□污物□石油□化學(xué)藥品□腥臭□其

溫度℃

他

總氮（g/kg）

采樣地周邊水表油污

土質(zhì)活性磷（g/kg）

地表水特征□平滑□閃光□油珠□斑塊□無□其他

pH

濁度（如未測量）

土壤含水量%

□清澈□輕微渾濁□渾濁□不透明□著色□其

他

C

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附錄C

（資料性）

原生動物物種信息統(tǒng)計(jì)表