母液的配制教學(xué)內(nèi)容

理論知識(shí)：培養(yǎng)基：是植物組織培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是組織培養(yǎng)能否成功的重要因素之一。培養(yǎng)基的主要成分是植物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的各種營(yíng)養(yǎng)元素。成分：水分（主要成分）無(wú)機(jī)鹽類：大量元素、微量元素、鐵鹽有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分：維生素、肌醇、氨基酸等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：細(xì)胞分裂素類、生長(zhǎng)素類：IAA（吲哚乙酸）、

萘乙酸（NAA）

培養(yǎng)基類型：MS培養(yǎng)基、B5培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基

MS培養(yǎng)基是由Marashige和Skoog為培養(yǎng)煙草組織而設(shè)計(jì)的，是應(yīng)用最為廣泛的培養(yǎng)基。

根據(jù)培養(yǎng)材料的種類、有針對(duì)性地選擇適宜的培養(yǎng)基，沒(méi)有任何一種培養(yǎng)基可適合所有情況下的組織培養(yǎng)。儲(chǔ)備液（母液）

母液是將培養(yǎng)基成分?jǐn)U大若干倍，一般為10倍、20倍、100倍甚至更高倍數(shù)的濃縮溶液。按試劑種類和性質(zhì)將其分別稱量、分別溶解、分別配制、單獨(dú)保存或幾種混合保存，配制培養(yǎng)基時(shí)在按比列吸取即可。配制母液及培養(yǎng)基時(shí)要選用蒸餾水，以免帶入雜物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料產(chǎn)生不利影響。

實(shí)驗(yàn)一

MS培養(yǎng)基貯備液（母液）的配制一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜S培養(yǎng)基的組成，掌握貯備液（母液）的配制方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：配制培養(yǎng)基時(shí)，為了使用方便和用量準(zhǔn)確，通常采用母液法進(jìn)行配制，即將所選培養(yǎng)基配方中各試劑的用量，擴(kuò)大若干倍后再準(zhǔn)確稱量，分別先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用時(shí)按比例吸取母液進(jìn)行稀釋配制即可。以MS培養(yǎng)基為例，所需配制的母液可分為：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS鐵鹽母液和MS有機(jī)化合物母液等。另外，還要配制生長(zhǎng)物質(zhì)母液，在不同類型的培養(yǎng)基中使用。三、實(shí)驗(yàn)器具與藥品電子分析天平、托盤天平、燒杯（50ml,100ml,500ml,1000ml）、量筒（1000ml,100ml,25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、藥勺、稱量紙、玻璃棒、滴管、電爐、冰箱。四、母液配制流程圖按照擴(kuò)大倍數(shù)稱量

母液分裝確定培養(yǎng)基

溶解

定容

貼標(biāo)簽保存于冰箱

按順序混合五、實(shí)驗(yàn)方法及步驟

1.大量元素母液的配制

即含N、P、K、Ca、Mg、S六種元素的混合溶液，一般配成濃度為10倍或20倍的母液。藥品名稱規(guī)定用量mg/L擴(kuò)大倍數(shù)稱取量mg

母液定容體積mlKNO3190010190001000NH4NO316501016500MgSO4·7H2O370103700KH2PO4170101700CaCl2·2H2O440104400注意：

(1)配制是各化合物應(yīng)分別稱量、分別溶解，經(jīng)充分溶解后才能混合。

（2）某些無(wú)機(jī)成分如Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等在一起可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀物。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，各種化學(xué)藥品必須先以少量蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時(shí)應(yīng)注意先后順序。速度宜慢，邊攪拌邊混合。待第一種化合物溶解后再加入第二種化合物，當(dāng)最后一種化合物完全溶解后，將溶液倒入容1000ml的量瓶中，再加水定容1000ml。

（3）CaCl2·2H2O要在最后單獨(dú)加入（因?yàn)槁然}易與磷酸二氫鉀形成磷酸三鈣、磷酸鈣之類不溶于水的沉淀）。（4）然后，倒入細(xì)口磨砂試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，注明配制日期、擴(kuò)大倍數(shù)、配制人姓名、置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.微量元素母液的配制將MS培養(yǎng)基配方中微量元素的無(wú)機(jī)鹽用量分別擴(kuò)大1000倍，用電子天平分別依次稱取MnSO4·4H2O22.3g，ZnSO4·7H2O8.6g,H3BO36.2g，KI0.83g，Na2MoO4·2H2O0.25g，CuSO4·5H2O0.025g，CoCl2·6H2O0.025g，并用重蒸水逐個(gè)溶解，待全部溶解再依次混合后用容量瓶定容至1000ml，后倒入細(xì)口磨砂試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，注明配制日期、擴(kuò)大倍數(shù)、配制人姓名、置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｋ幤访Q規(guī)定用量ml/L擴(kuò)大倍數(shù)稱取量mg

母液定容體積mlMnSO4·4H2O22.31000223001000ZnSO4·7H2O8.610008600H3BO36.210006200KI0.831000830Na2MoO4·2H2O0.251000250CuSO4·5H2O

0.025100025CoCl2·6H2O0.0251000252、微量元素母液的配制3.鐵鹽母液的配制

Fe是用量較多的一種微量元素，因鐵離子在水溶液中不穩(wěn)定，易與氫氧根離子結(jié)合二發(fā)生沉淀，必須單獨(dú)配制。只有其螯合物才容易被植物吸收和利用，因此需要單獨(dú)配制成鐵鹽螯合物母液。

目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨(dú)配成母液。這種螯合物使用起來(lái)方便，比較穩(wěn)定，且不易發(fā)生沉淀。藥品名稱規(guī)定用量mg/L擴(kuò)大倍數(shù)稱取量mg母液定容體積mlFeSO4.7H2O27.81001390500Na2-EDTA37.310018653、MS鐵鹽母液的配制鐵鹽母液的配制方法是：用電子天平稱取硫酸亞（FeSO4.7H2O）和乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA），分別用蒸餾水加熱溶解，煮沸，使之全部溶解，溶解后混合后繼續(xù)煮沸幾分鐘（約加熱5min至溶液呈金黃色)，冷卻后定容至500ml的容量瓶中，倒入棕色磨口試劑瓶中，經(jīng)室溫放置一段時(shí)間令其充分反應(yīng)后，貼上標(biāo)簽，注明配制日期、擴(kuò)大倍數(shù)、配制人姓名、置于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。如果將新配制的鐵鹽母液立即放入冰箱中。則會(huì)容易形成沉淀。

4、有機(jī)母液的配制

MS培養(yǎng)基的有機(jī)成分包括維生素、肌醇、氨基

酸等，由于用量小，也應(yīng)配成母液。培養(yǎng)基中的有

機(jī)成分原則上應(yīng)分別單獨(dú)配制。

藥品名稱規(guī)定用量mg/L擴(kuò)大倍數(shù)稱取量mg母液定容體積ml煙酸（維生素B5）510050100鹽酸吡哆醇(維生素B6)510050鹽酸硫胺素(維生素B1)510050甘氨酸20100200（1）維生素母液的配制按培養(yǎng)基配方用量的100倍，用電子分析天平分別稱取后放入l燒杯中，加蒸餾水直接溶解，然后混合定容于100ml容量瓶中，轉(zhuǎn)移到儲(chǔ)液瓶中保存于4℃冰箱。藥品名稱規(guī)定用量ml/L擴(kuò)大倍數(shù)稱取量mg母液定容體積ml肌醇1001001000100（2）肌醇母液的配制按培養(yǎng)基配方用量的100倍，用電子分析天平分別稱取后放入l燒杯中，加蒸餾水直接溶解，然后定容于100ml容量瓶中，轉(zhuǎn)移到儲(chǔ)液瓶中保存于4℃冰箱。5.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的配制

常用的激素如生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等配制成母液使用起來(lái)方便、準(zhǔn)確。

配制前需先用相應(yīng)的少量有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解，然后再定容。貼好標(biāo)簽，寫(xiě)明配制激素的濃度，存放于冰箱中。

激素的使用比較靈活，要根據(jù)培養(yǎng)的植物種類和目的而定。

該培養(yǎng)基的生長(zhǎng)素選擇配制IAA（吲哚乙酸）、NAA（萘乙酸），母液的配制的終濃度為1mg/ml：

（１）配制生長(zhǎng)素類，稱取NAA（萘乙酸）物質(zhì)500mg，應(yīng)先用少量1mol/LNaOH，然后加水約100ml后用1mol/L的HCI調(diào)PH值（當(dāng)出現(xiàn)白色沉淀時(shí)表明HCL已經(jīng)過(guò)量），然后分別用蒸餾水定容到500ml，即得質(zhì)量濃度為1mg/mL的母液。（2）配制生長(zhǎng)素類IAA（吲哚乙酸）物質(zhì)，方法同上

注意：

所有母液都要貼上標(biāo)簽，注明名稱、配制倍數(shù)、日期，所有的母液都應(yīng)保存在0~4