醫(yī)學甾體激素類藥物的分析專題課件

甾體激素類藥物的分析甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素Contents結(jié)構與分類1鑒別2檢查3含量測定4第一節(jié)基本結(jié)構與性質(zhì)DABC123456789101112131415161718192021環(huán)戊烷并多氫菲母核1.Δ4-3-酮，C20酮基2.C11：或4.A環(huán)上的酚羥基5.鹵素(-F)，酯基3.C17：，，，，以下主要基團可供分析：第一節(jié)基本結(jié)構與性質(zhì)一、腎上腺皮質(zhì)激素311172021氫化可的松(hydrocortisone)醋酸地塞米松(dexamethasoneacetate)16α-甲基21-酯化17α-羥基9α-氟3-酮1,2-雙鍵11β-羥基20-酮二、雄性激素及蛋白同化激素第一節(jié)基本結(jié)構與性質(zhì)甲睪酮(methyltestosterone)丙酸睪酮(testosteronepropionate)苯丙酸諾龍(nandrolonephenylpropionate)17β-羥基第一節(jié)基本結(jié)構與性質(zhì)三、孕激素黃體酮(progesterone)醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)米非司酮(mifepristone)第一節(jié)基本結(jié)構與性質(zhì)四、雌性激素雌二醇(estradiol)(炔雌醇)炔諾酮(norethisterone)第一節(jié)基本結(jié)構與性質(zhì)第二節(jié)Identification

物理常數(shù)的測定化學鑒別法制備衍生物測定熔點UVIRTLCHPLC第二節(jié)Identification一、物理常數(shù)的測定1.熔點炔雌醇m.p.201℃黃體酮雙肟m.p.238℃苯丙酸諾龍縮氨基脲m.p.178~185℃分解丙酸睪丸素m.p.150~156℃第二節(jié)Identification第二節(jié)Identification二、化學鑒別法2.比旋度3.吸收系數(shù)與強酸的呈色反應官能團的反應1.與強酸的呈色反應甾體激素類藥物硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸呈色第二節(jié)Identification2.官能團的反應①C17-α-醇酮基——還原性A.呈色反應C17-α-醇酮基四氮唑鹽OH-呈色B.沉淀反應C17-α-醇酮基氨制硝酸銀銀鏡反應C17-α-醇酮基堿性酒石酸銅Cu2O↓第二節(jié)Identification②C3–酮基和C20–酮基甾酮類2,4-二硝基苯肼呈色異煙肼、硫酸苯肼異煙腙（黃色）睪酮異煙雙腙（黃色）黃體酮③甲酮基或活潑亞甲基第二節(jié)Identification亞硝基鐵氰化鈉間二硝基酚/芳香醛呈色藍紫色黃體酮④鹵素⑤酚羥基雌激素類重氮苯磺酸紅色偶氮染料⑥乙炔基第二節(jié)Identification↓炔雌醇白⑦酯基黃體酮三、UV四、IR第二節(jié)Identification酚羥基醇羥基炔鍵羰基苯環(huán)骨架振動第二節(jié)Identification五、TLC制劑分析對照品法炔諾酮六、HPLC第三節(jié)PurityTest一、TLC地塞米松磷酸鈉中雜質(zhì)檢查第三節(jié)PurityTest氫化可的松中其他甾體檢查對照品60μg/ml供試品3.0mg/mlCHCl3-MeOH(9:1)溶劑硅膠GF254二氯甲烷-乙醚-甲醇-水

385:60:15:2展開后晾干105℃干燥10min堿性四氮唑藍顯色對照溶液——0.02mg/ml供試液——1mg/ml二、HPLC第三節(jié)PurityTest黃體酮中有關物質(zhì)檢查供試品溶液的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過1個，其面積不得大于對照液的主峰面積的3/4第三節(jié)PurityTest三、硒的檢查來源

合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫四、溶劑殘留甲醇和丙酮(GC)0.3%0.5%第三節(jié)PurityTest五、游離磷酸鹽檢查鉬酸銨磷鉬酸740nm，UV第四節(jié)Assay

HPLC

UV比色法

非水溶液滴定法四氮唑比色法異煙肼比色法柯柏反應比色法第四節(jié)Assay一、HPLC對照液供試液己烯雌酚黃體酮第四節(jié)Assay二、UV醋酸地塞米松第四節(jié)Assay三、比色法

腎上腺皮質(zhì)激素類OH-[還原]2,3,5-TriphenyltatrazoliumchlorideTTC(RedtatrazolineRT)甲潛(Formazan)深紅色

λmax480~490nm氫化可的松軟膏的含量測定第四節(jié)Assay精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻，各再精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25℃的暗處放置40min～45min，在485nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得影響因素基團溶劑與水分堿空氣中氧與光線溫度與時間第四節(jié)Assay（1）基團對反應速度的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16無論何種取代基ν↓（2）溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→幾無反應—

無水乙醇(無醛)第四節(jié)Assay（3）O2與光線的影響（4）堿的種類及加入順序反應應在強堿性（pH13.75）條件下進行以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳（5）溫度與時間t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑→%↓(二)異煙肼法(Isonicotinicacidhydrazide)第四節(jié)AssayINH△4-3-酮IsonicotinicacidHydrazide第四節(jié)Assay影響因素（1）反應速度C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反應專屬性強（2）溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇無水（3）水分、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時→O2與光線無影響第四節(jié)Assay(4)酸、異煙肼的量鹽酸:異煙肼=2:1酸度↑→異煙肼鹽↓酸度↓→A↓樣品:異煙肼=1:8→ν↑

(5)溫度t℃↑→ν↑第四節(jié)Assay(三)Kober反應比色法第二步反應515465450500550nmAKober反應吸收光譜第一步反應第四節(jié)Assay采用本法測定炔雌醇片及復方炔諾酮片、復方炔諾孕酮滴丸、復方左炔諾孕酮片中的炔雌醇的含量第四節(jié)Assay四、非水滴定——米非司酮五、生物樣品中的甾體激素的分析Dopingcontrol濫用藥物檢測刺激劑麻醉劑β-阻斷劑利尿劑遮蔽劑合成類固醇及β2激動劑肽類激素外源性內(nèi)源性興奮劑檢測特點色譜方法是理想的檢測手段。1976年使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用手段檢測甾體，1980年開始用毛細管氣相色譜法檢測，至1984年大體基本定型。藥物及其代謝物的種類多，變化大，禁用的百余種藥物以原體或一個或多個代謝產(chǎn)物的形式存在與人體體液中，因此，需要檢測和確證的化合物多達幾百種。除此以外，用藥后的不同時間，這些化合物的濃度不斷的發(fā)生變化，直到排出體外。藥物在人體體液中的濃度很低，藥物在人體體液中的濃度常常是ng級或更低的水平，因此對檢測的靈敏度要求很高。要求準確的定性和定量，不能有絲毫的疏漏和差錯。檢測者要對每一種藥的藥物代謝動力學及光譜分析有全面嫻熟的了解及足夠的分析參考資料檢測基質(zhì)1.尿液尿樣檢測是興奮劑檢測的理想樣本。其優(yōu)點在于：取樣方便；對人無損害；尿液中的藥物濃度高于血液中的藥物濃度；尿液中的其他干擾少。2.血樣補充尿樣分析方法的不足，目前尚處于研究探索階段，目前僅用于血液回輸，紅細胞生成素，生長激素，絨毛膜促性腺激素，睪酮等的測量。3.頭發(fā)在法醫(yī)，毒性分析中已有較長歷史，但在興奮劑研究中是才興起研究方向。有采樣容易，無損傷，不易作弊的特點，備受關注。皮質(zhì)類固醇在體內(nèi)消除很快，如果賽前停藥，尿液分析就檢測不到，而發(fā)樣分析仍可檢出。4.體液檢測步驟一、篩選方法（1）揮發(fā)性含氮化合物組：主要檢測刺激劑。這類藥物多以游離形式排出。（2）難揮發(fā)含氮化合物組：主要檢測麻醉陣痛劑和β-阻斷劑。這兩類藥物多以結(jié)合形式排出，因此需先水解，使之游離，再進行衍生化后檢測。（3）利尿劑組：藥物經(jīng)提取后用高效液相色譜法分析檢測，此組同時檢測2種興奮劑、咖啡因和匹莫林。（4）甾體同化激素組：此類藥物有的以游離形式，有的以結(jié)合形式排出，我們所用的方法為同時檢測。二、確證方法經(jīng)篩選判為陽性的尿樣，需進一步加以確證，根據(jù)規(guī)定，確證結(jié)果須給出藥物或其代謝物的質(zhì)譜圖，因此在確證方法中均使用氣相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用儀，確證時的分組同篩選方法中所述。（1）揮發(fā)性含氮化合物組方法同篩選，最后之提取物濃縮后進樣于GC/MSD。（2）難揮發(fā)含氮化合物組方法同篩選，最后之衍生化產(chǎn)物取小量進樣于GC/MSD。（3）利尿劑組此組藥物需衍生化，然后進樣于GC/MS（4）甾體同化激素組方法同篩選，唯最后得出全質(zhì)譜圖作為確證。檢測步驟中國興奮劑檢測中心座落在北京國際奧林匹克體育中心內(nèi),自1989年得到國際反興奮劑機構(WADA)的承認后，連續(xù)15年通過資格考試。該中心掌握了目前最先進的檢測技術，包括高分辯率質(zhì)譜、同位素質(zhì)譜、EPO血檢、尿檢等方法，同時承擔WADA賽外檢測任務和周邊國家的抽樣檢測任務，檢測數(shù)量達到每年8000份.ThankYou!合成類固醇及β2激動劑共27種。合成類固醇又稱為甾體同化激素，是雄性激素衍生物。這類藥物有增長肌肉的作用，為很多運動員口服或注射使用，但副作用也很嚴重，會干擾人體的自然激素平衡，男人服用后會發(fā)生抑制雄性激素分泌，睪丸縮小，胸部擴大