2019屆水滴系列浙江省高考生物第10單元現(xiàn)代生物科技專題第36講基因工程講義

第36講基因工程第十單元現(xiàn)代生物科技專題1.工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生[加試(a)]。2.基因工程的原理和技術(shù)[加試(b)]。3.基因工程的應(yīng)用[加試(a)]。4.活動(dòng)：提出生活中的疑難問(wèn)題，設(shè)計(jì)用基因工程技術(shù)解決的方案[加試(c)]。考綱要求內(nèi)容索引考點(diǎn)一基因工程的誕生、操作工具考點(diǎn)二基因工程的操作步驟、應(yīng)用及相關(guān)的設(shè)計(jì)方案課時(shí)訓(xùn)練做模擬練預(yù)測(cè)考點(diǎn)一基因工程的誕生、操作工具知識(shí)梳理答案1.基因工程的含義(1)概念：把一種生物的

(細(xì)胞核、染色體脫氧核糖核酸等)移到另外一種生物的細(xì)胞中去，并使這種遺傳物質(zhì)所帶的遺傳信息在受體細(xì)胞中

。(2)核心：構(gòu)建

。遺傳物質(zhì)重組DNA分子表達(dá)2.基因工程的基本工具答案特定的核苷酸序列磷酸二酯鍵粘性末端質(zhì)粒[思考診斷]答案1.已知限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ和SmaⅠ識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為G↓AATTC和CCC↓GGG，兩種限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生的末端如下。EcoRⅠ限制性核酸內(nèi)切酶和SmaⅠ限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別的

不同，切割位點(diǎn)

(相同/不同)，說(shuō)明限制性核酸內(nèi)切酶具有

。堿基序列不同專一性2.觀察下圖所示過(guò)程，回答需要的工具酶及相關(guān)問(wèn)題：答案(1)①是

；②是

；二者的作用部位都是

。(2)限制性核酸內(nèi)切酶不切割自身DNA的原因：原核生物中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾。限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶磷酸二酯鍵3.載體須具備的條件及其作用(連線)答案4.限制性核酸內(nèi)切酶MunI和限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如圖表示四種質(zhì)粒和目的基因，其中，箭頭所指部位為限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)，質(zhì)粒的陰影部分表示標(biāo)記基因。適于作為圖示目的基因載體的質(zhì)粒是下列①～④中的哪一個(gè)？答案提示

由圖可知，質(zhì)粒②上無(wú)標(biāo)記基因，不適合作為載體；質(zhì)粒③和④的標(biāo)記基因上都有限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)。只有質(zhì)粒①上既有標(biāo)記基因，且MunⅠ的切割點(diǎn)不在標(biāo)記基因上。題型一基因工程的原理、操作工具1.下列關(guān)于載體的敘述中，錯(cuò)誤的是(

)A.載體與目的基因結(jié)合后，實(shí)質(zhì)上就是一個(gè)重組DNA分子B.對(duì)某種限制性核酸內(nèi)切酶而言，載體最好只有一個(gè)切點(diǎn)，但還要有其他

多種酶的切點(diǎn)C.目前常用的載體有質(zhì)粒、λ噬菌體和動(dòng)植物病毒D.載體具有某些標(biāo)記基因，便于對(duì)其進(jìn)行切割解題探究解析123√解析載體必須具備的條件有：①對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，不影響受體細(xì)胞正常的生命活動(dòng)；②具有自我復(fù)制能力，或能整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上，隨染色體DNA的復(fù)制而同步復(fù)制；③具有一個(gè)至多個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶切點(diǎn)，以便目的基因可以插入到載體中；④帶有特殊的標(biāo)記基因，如抗生素抗性基因，以便于對(duì)外源基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測(cè)；⑤載體DNA分子大小適合，以便于提取和進(jìn)行體外操作。1232.若要利用某目的基因(見(jiàn)圖甲)和P1噬菌體載體(見(jiàn)圖乙)構(gòu)建重組DNA(見(jiàn)圖丙)，限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)分別是Bgl

Ⅱ(A↓GATCT)、EcoR

Ⅰ(G↓AATTC)和Sau3AⅠ(↓GATC)。下列分析合理的是(

)123A.用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體B.用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體C.用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體D.用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體解析√解析解答本題的關(guān)鍵是要看清切割后目的基因插入的方向，只有用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌體載體，構(gòu)建的重組DNA中RNA聚合酶在插入的目的基因上的移動(dòng)方向才一定與圖丙相同。123幾種易混淆酶的比較前掛后連名稱功能應(yīng)用限制性核酸內(nèi)切酶特異性地切斷DNA鏈中的磷酸二酯鍵重組DNA技術(shù)和基因診斷DNA連接酶連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵基因工程DNA聚合酶連接DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵DNA復(fù)制123RNA聚合酶連接RNA片段與單個(gè)核糖核苷酸之間的磷酸二酯鍵RNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶作用于磷酸二酯鍵以RNA為模板獲得DNADNA解旋酶使堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂DNA復(fù)制DNA水解酶使DNA分子所有磷酸二酯鍵斷裂水解DNA123題型二基因工程的技術(shù)3.大腸桿菌pUC18質(zhì)粒是基因工程中常用的載體。某限制性核酸內(nèi)切酶在此質(zhì)粒上的唯一酶切位點(diǎn)位于LacZ基因中，如果沒(méi)有插入外源基因，LacZ基因便可表達(dá)出β-半乳糖苷酶。當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和Xgal時(shí)，Xgal便會(huì)被β-半乳糖苷酶水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落。反之，則形成白色菌落。下圖表示利用此質(zhì)粒實(shí)施基因工程的主要流程。請(qǐng)分析并回答問(wèn)題。123(1)對(duì)已獲得的目的基因可利用____技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。(2)目的基因插入質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中，需要DNA連接酶恢復(fù)________鍵。(3)將試管Ⅰ中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管Ⅱ的目的是________；大腸桿菌需事先用Ca2＋進(jìn)行處理，目的是________________________。PCR磷酸二酯進(jìn)行轉(zhuǎn)化使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)(4)將試管Ⅱ中的菌液接種于選擇培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素的作用是篩選出________________________。導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌答案123(5)若觀察到培養(yǎng)基上出現(xiàn)__色菌落，則說(shuō)明大腸桿菌中已成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。如果作為受體細(xì)胞的大腸桿菌也含有LacZ基因，則不利于重組質(zhì)粒的篩選，原因是_________________________________________________白無(wú)論大腸桿菌中是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，均會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色菌落答案返回123考點(diǎn)二

基因工程的操作步驟、應(yīng)用及相關(guān)的設(shè)計(jì)方案知識(shí)梳理答案1.基因工程的操作步驟(1)獲得目的基因獲取目的基因序列已知：化學(xué)合成或

；基因序列未知：從基因文庫(kù)中獲取。(2)形成重組DNA分子(基因工程的核心)：通常用

分別切割

和

DNA，然后用

將目的基因和載體DNA連接在一起，形成重組DNA分子。PCR擴(kuò)增相同的限制性核酸內(nèi)切酶目的基因載體DNA連接酶(3)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞①常用的受體細(xì)胞：大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。②導(dǎo)入方法：用

處理大腸桿菌，可以增加大腸桿菌

的通透性，使重組質(zhì)粒容易進(jìn)入。(4)篩選含有目的基因的受體細(xì)胞①篩選原因：并不是所有的細(xì)胞都接納了

，因此，需篩選含

的受體細(xì)胞。②篩選方法：用含

的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細(xì)胞，選擇含

的受體細(xì)胞。(5)目的基因的表達(dá)目的基因在

中表達(dá)，產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)。答案氯化鈣細(xì)胞壁重組DNA分子目的基因抗生素重組質(zhì)粒宿主細(xì)胞2.基因工程的應(yīng)用(1)基因工程與遺傳育種①轉(zhuǎn)基因植物答案培育優(yōu)點(diǎn)②轉(zhuǎn)基因動(dòng)物所需時(shí)間較短克服

的缺陷含義：轉(zhuǎn)入了

的動(dòng)物。培育優(yōu)點(diǎn)：省時(shí)、省力。遠(yuǎn)緣親本難以雜交外源基因(2)基因工程與疾病治療①基因工程藥物：如通過(guò)

生產(chǎn)胰島素治療糖尿病，通過(guò)酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗等。②基因治療指的是向目標(biāo)細(xì)胞中引入正常功能的基因，以

基因的缺陷，達(dá)到治療的目的。(3)基因工程與生態(tài)環(huán)境保護(hù)①利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)聚羥基烷酯，用于合成

的新型塑料。②改造分解石油的細(xì)菌，提高其分解石油的能力。③利用轉(zhuǎn)基因微生物吸收環(huán)境中的

，降解有毒化合物和處理工業(yè)廢水。答案大腸桿菌糾正或補(bǔ)償可降解重金屬[思考診斷]答案1.基因表達(dá)載體的組成及各部分的作用(連線)2.據(jù)圖選擇相關(guān)的限制性核酸內(nèi)切酶基因工程中，需使用特定的限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是－G↓GATCC－；限制性核酸內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是－↓GATC－。答案請(qǐng)據(jù)圖分析：切割目的基因應(yīng)選擇

，切割質(zhì)粒應(yīng)選擇

。限制性核酸內(nèi)切酶Ⅱ限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ3.完成下列填充(1)原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：

；多為單細(xì)胞；遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。(2)轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)是把

整合到受體細(xì)胞

中。答案繁殖快目的基因基因組4.補(bǔ)充目的基因檢測(cè)與鑒定的方法示意圖答案DNA分子雜交抗原—抗體雜交是否出現(xiàn)雜交帶5.如圖為抗蟲(chóng)棉的培育過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：答案(1)該基因工程中的目的基因和載體分別是什么？一般情況下，為什么要用同一種限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體？提示

目的基因是Bt毒蛋白基因，載體是Ti質(zhì)粒。用同一種限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體，可以獲得相同的粘性末端，便于形成重組DNA分子。(2)該實(shí)例中為什么目的基因可以整合到染色體的DNA上？答案提示

由于Ti質(zhì)粒上的T－DNA可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞且能整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上，而目的基因又插入到了T－DNA上，所以目的基因可以整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上。(3)該實(shí)例中，檢測(cè)目的基因是否表達(dá)常見(jiàn)的方法是什么？提示

用棉葉飼喂棉鈴蟲(chóng)。題型一基因工程的操作程序1.下面為大腸桿菌及質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)模式圖，據(jù)圖回答下列問(wèn)題：解題探究(1)a代表的物質(zhì)和質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)都是_____，二者還具有其他共同點(diǎn)，如①____________，②_____________(寫出兩條即可)。DNA能夠自主復(fù)制具有遺傳特性解析

a代表的物質(zhì)是擬核DNA分子，質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核之外的小型環(huán)狀DNA分子，兩者都能自主復(fù)制，并蘊(yùn)含遺傳信息。解析答案123(2)若質(zhì)粒DNA分子的切割末端為

，則與之連接的目的基因切割末端應(yīng)為_(kāi)_________；可使用___________把質(zhì)粒和目的基因連接在一起。(3)氨芐青霉素抗性基因在質(zhì)粒DNA上稱為_(kāi)_______，其作用是______________________。DNA連接酶標(biāo)記基因供重組DNA的鑒定和選擇解析質(zhì)粒DNA分子的切割末端能夠與目的基因切割末端發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，可使用DNA連接酶將它們連接在一起。解析質(zhì)粒DNA分子上的氨芐青霉素抗性基因可以作為標(biāo)記基因，便于對(duì)重組DNA進(jìn)行鑒定和篩選。解析答案123(4)下列常在基因工程中用作載體的是(

)A.蘇云金芽孢桿菌抗蟲(chóng)基因B.土壤農(nóng)桿菌環(huán)狀RNA分子C.大腸桿菌的質(zhì)粒D.動(dòng)物細(xì)胞的染色體解析√123解析作為載體必須具備的條件：①在宿主細(xì)胞中能保存下來(lái)并能大量復(fù)制；②有多個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶切點(diǎn)；③有一定的標(biāo)記基因，便于篩選。常用的載體有質(zhì)粒、λ噬菌體、動(dòng)植物病毒等。蘇云金芽孢桿菌抗蟲(chóng)基因一般作為目的基因；土壤農(nóng)桿菌環(huán)狀RNA分子不容易在宿主細(xì)胞內(nèi)保存；動(dòng)物細(xì)胞染色體的主要成分是DNA和蛋白質(zhì)，不能被限制性核酸內(nèi)切酶切割，因此不能用作載體。1232.(2015·諸暨中學(xué)統(tǒng)考)科學(xué)家將外源目的基因與大腸桿菌的質(zhì)粒進(jìn)行重組，并在大腸桿菌中成功表達(dá)。下圖表示構(gòu)建重組質(zhì)粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過(guò)程。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題：解析(1)步驟①和②中常用的工具酶是________________和__________。限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶答案123解析步驟①和②是將目的基因和質(zhì)粒用同種限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行切割，得到相同的粘性末端，然后用DNA連接酶將二者連接起來(lái)，形成重組質(zhì)粒。123(2)經(jīng)過(guò)①和②步驟后，有些質(zhì)粒上的______________基因內(nèi)插入了外源目的基因，形成重組質(zhì)粒。氨芐青霉素抗性解析質(zhì)粒上有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，根據(jù)步驟①和②構(gòu)建的重組質(zhì)粒的圖像可知，部分質(zhì)粒的氨芐青霉素抗性基因中插入了目的基因。解析答案123(3)步驟③是________________

的過(guò)程。為了促進(jìn)該過(guò)程，應(yīng)該用______處理大腸桿菌。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌氯化鈣解析據(jù)題圖可知，步驟③是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞大腸桿菌中的過(guò)程；氯化鈣處理可增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，增強(qiáng)其對(duì)重組質(zhì)粒的吸收能力。解析答案123(4)步驟④是將三角瓶?jī)?nèi)的大腸桿菌接種到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基A上培養(yǎng)，目的是篩選__________________________。能在A中生長(zhǎng)的大腸桿菌有__種。解析含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌2答案123解析由于質(zhì)粒上具有四環(huán)素抗性基因，且未被目的基因插入，因此，凡是導(dǎo)入質(zhì)粒的大腸桿菌均對(duì)四環(huán)素具有抗性，可以存活，沒(méi)有導(dǎo)入質(zhì)粒的不能存活，于是可以篩選出含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌；能夠在A上生長(zhǎng)的大腸桿菌有2種，分別是導(dǎo)入空白質(zhì)粒的大腸桿菌和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌。123(5)步驟⑤是用無(wú)菌牙簽挑取A上的單個(gè)菌落，分別接種到B(含氨芐青霉素和四環(huán)素)和C(含四環(huán)素)兩個(gè)培養(yǎng)基的相同位置上。一段時(shí)間后，菌落的生長(zhǎng)狀況如上圖所示。含有目的基因的菌落位于(填“B”或“C”)__上，請(qǐng)?jiān)趫D中相應(yīng)位置上圈出來(lái)。C123答案

如下圖所示解析答案解析目的基因的插入破壞了氨芐青霉素抗性基因，因此含有目的基因的大腸桿菌無(wú)法在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基B上存活，但能在C上存活，其所在位置即為B中未長(zhǎng)出而C中長(zhǎng)出菌落的位置。123題型二設(shè)計(jì)用基因工程技術(shù)解決的方案3.(2015·浙江名校聯(lián)考)我們?nèi)粘３缘拇竺字需F含量極低，科研人員通過(guò)基因工程等技術(shù)，培育出了鐵含量比普通大米高60%的轉(zhuǎn)基因水稻，改良了大米的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。下圖為培育轉(zhuǎn)基因水稻的過(guò)程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：123(1)上述過(guò)程中，鐵結(jié)合蛋白基因?yàn)開(kāi)_______，獲取該基因后常用____技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。解析本題中培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是獲得鐵含量比普通大米高60%的轉(zhuǎn)基因大米，因此目的基因?yàn)殍F結(jié)合蛋白基因；要大量獲得目的基因，一般采用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。目的基因PCR解析答案123(2)構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，通常要用同種限制性核酸內(nèi)切酶分別切割____________________和______。將重組Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌時(shí)，可以用_____處理農(nóng)桿菌，使重組Ti質(zhì)粒易于導(dǎo)入農(nóng)桿菌。解析構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，要用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割含目的基因的DNA片段和Ti質(zhì)粒，使二者產(chǎn)生相同的粘性末端，從而便于拼接；CaCl2處理農(nóng)桿菌可以增大其細(xì)胞壁的通透性，從而利于重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入。含目的基因的DNA片段Ti質(zhì)粒CaCl2解析答案123(3)將含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與水稻愈傷組織共同培養(yǎng)時(shí)，通過(guò)培養(yǎng)基2的篩選培養(yǎng)，可以獲得成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞，該篩選過(guò)程是通過(guò)在培養(yǎng)基2中加入______實(shí)現(xiàn)的。解析重組Ti質(zhì)粒含有抗生素抗性基因，導(dǎo)入重組Ti質(zhì)粒的愈傷組織細(xì)胞在含有抗生素的培養(yǎng)基上可以存活，而未導(dǎo)入的則無(wú)法存活，故可加入抗生素來(lái)篩選成功導(dǎo)入的受體細(xì)胞。抗生素解析答案(4)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻的培育是否成功，需要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻____________。解析轉(zhuǎn)基因的目的是提高大米中鐵含量，因此可通過(guò)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻種子中鐵的含量來(lái)判斷轉(zhuǎn)基因水稻的培育是否成功。種子中鐵含量返回123做模擬練預(yù)測(cè)1.(2015·臺(tái)州中學(xué)統(tǒng)考)下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是(

)A.目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)物、植物或微生物B.限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C.人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素?zé)o生物活性D.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)解析√1234解析目的基因來(lái)源于含有人們所需要性狀的一切生物，可以是動(dòng)物、植物，也可以是真菌、細(xì)菌等；基因工程中一般要使用同種限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行切割，以獲得具有相同粘性末端的目的基因和載體，在DNA連接酶的作用下，將目的基因和載體連接，形成重組DNA分子；人的胰島素原基因可以在大腸桿菌內(nèi)表達(dá)，但是由于大腸桿菌是原核生物，沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，合成的胰島素不具有胰島素的功能，即沒(méi)有生物活性；標(biāo)記基因是為了檢測(cè)并篩選含重組DNA的細(xì)胞，但對(duì)于目的基因的表達(dá)沒(méi)有影響。12342.1997年，科學(xué)家將動(dòng)物體內(nèi)的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的DNA分子重組，并且在大腸桿菌中表達(dá)成功。請(qǐng)據(jù)圖回答：解析(1)首先根據(jù)胰島素的氨基酸序列，推測(cè)出原胰島素mRNA上的堿基序列，再根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，用人工方法合成⑧DNA，通過(guò)這一過(guò)程獲得了____基因。目的答案1234解析人工獲取目的基因(胰島素基因)的方法是：首先根據(jù)胰島素的氨基酸序列，推測(cè)出原胰島素mRNA上的堿基序列，再根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，用人工方法合成目的基因。1234(2)圖中①表示從大腸桿菌的細(xì)胞中提取____。(3)圖中⑤表示的是________________的過(guò)程，圖中③表示的是____________。(4)④過(guò)程表示__________________________。質(zhì)粒形成重組DNA分子重組DNA分子將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞解析圖中①過(guò)程為從大腸桿菌的細(xì)胞中提取質(zhì)粒的過(guò)程，過(guò)程②為重組質(zhì)粒的過(guò)程，須用限制性核酸內(nèi)切酶切割。解析圖中⑤表示的是形成重組DNA分子的過(guò)程，圖中③表示重組DNA(重組質(zhì)粒)分子。解析

④過(guò)程表示將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞。解析答案1234(5)若用兩種識(shí)別切割序列完全不同的限制性核酸內(nèi)切酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb,1kb＝1000對(duì)堿基)上相應(yīng)的E～F區(qū)域(0.2kb)，操作過(guò)程見(jiàn)下圖，那么所形成的重組質(zhì)粒pZHZ2_____。解析A.既能被E也能被F切開(kāi)B.能被E但不能被F切開(kāi)C.既不能被E也不能被F切開(kāi)D.能被F但不能被E切開(kāi)√1234解析若用兩種識(shí)別切割序列完全不同的限制性核酸內(nèi)切酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb,1kb＝1000對(duì)堿基)上相應(yīng)的E～F區(qū)域(0.2kb)，那么所形成的重組質(zhì)粒pZHZ2既能被E也能被F切開(kāi)，故A正確。12343.(2016·浙江4月選考)兔肝細(xì)胞中的基因E編碼代謝甲醛的酶，擬利用基因工程技術(shù)將基因E轉(zhuǎn)入矮牽牛中，以提高矮牽牛對(duì)甲醛的代謝能力。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)從兔肝細(xì)胞中提取mRNA，在______酶的作用下形成互補(bǔ)的DNA，然后以此DNA為模板擴(kuò)增得到基因E。在相關(guān)酶的作用下，將基因E與Ti質(zhì)粒連接在一起，形成____________，再導(dǎo)入用氯化鈣處理的______，逆轉(zhuǎn)錄重組DNA分子農(nóng)桿菌1234答案侵染矮牽牛葉片。將被侵染的葉片除菌后進(jìn)行培養(yǎng)，最終得到轉(zhuǎn)基因矮牽牛。其中培養(yǎng)過(guò)程正確的是____。A.葉片在含合適濃度生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上分化形成愈傷組織B.愈傷組織在含細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配比較高的培養(yǎng)基上形成芽C.再生的芽在細(xì)胞分裂素含量高的培養(yǎng)基上生根D.愈傷組織在含合適濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上脫分化形成再生植株解析√1234解析以mRNA為模板合成DNA的過(guò)程為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，這一過(guò)程需要在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下進(jìn)行。獲得目的基因后，需在限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的作用下，將目的基因與載體(Ti質(zhì)粒)連接形成重組質(zhì)粒(重組DNA分子)，再將其導(dǎo)入受體細(xì)胞。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，先將重組DNA分子導(dǎo)入經(jīng)氯化鈣處理的農(nóng)桿菌中，再用導(dǎo)入目的基因的農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，最終實(shí)現(xiàn)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞內(nèi)的目的。導(dǎo)入目的基因的植物細(xì)胞經(jīng)組織培養(yǎng)過(guò)程形成轉(zhuǎn)基因植株。組織培養(yǎng)過(guò)程中，葉片在含適宜濃度的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)基上脫分化形成愈傷組織，然后在含細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配比較高的培養(yǎng)基上形成芽，繼而在生長(zhǎng)素含量高的培養(yǎng)基上生根，最后形成完整的植株，愈傷組織形成植株的過(guò)程中發(fā)生細(xì)胞的分化。1234(2)取轉(zhuǎn)基因矮牽牛葉片，放入含MS液體培養(yǎng)基和適量濃度甲醛且密封的試管中。將試管置于____上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)。一段時(shí)間后測(cè)定培養(yǎng)基中甲醛的含量，以判斷基因E是否在轉(zhuǎn)基因矮牽牛中正常表達(dá)。培養(yǎng)過(guò)程中液體培養(yǎng)的作用：一是提供營(yíng)養(yǎng)；二是__________，從而使葉片保持正常的形態(tài)。解析植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，將愈傷組織等細(xì)胞置于搖床上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)，形成多個(gè)分散的細(xì)胞。培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液一方面為植物細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，另一面維持一定的滲透壓，從而使葉片保持正常的形態(tài)。搖床維持滲透壓解析答案12344.(2016·福州三模)1978年，人類首次利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)人胰島素，其過(guò)程大致如圖所示：1234(1)人胰島素由A、B兩條肽鏈組成，可根據(jù)組成肽鏈的氨基酸序列，確定編碼胰島素基因的堿基序列，因此可通過(guò)________方法獲得目的基因。解析人工合成該目的基因的方法有兩種：逆轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法，題中根據(jù)人胰島素由A、B兩條肽鏈的氨基酸序列，確定編碼胰島素基因的堿基序列，再通過(guò)人工合成方法獲得目的基因?qū)儆诨瘜W(xué)合成法。人工合成解析答案1234(2)β--半乳糖苷酶能將無(wú)色ONPG分解，產(chǎn)物呈黃色，本生產(chǎn)流程中β--半乳糖苷酶基因作為_(kāi)_______，通過(guò)①和②，完成基因表達(dá)載體的構(gòu)建，寫出該過(guò)程處理DNA分子所需要的酶：____________________________。解析根據(jù)題意分析，胰島素基因?yàn)槟康幕?，?-半乳糖苷酶基因?yàn)闃?biāo)記基因，通過(guò)①和②過(guò)程構(gòu)建重組DNA分子時(shí)，需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的參與。標(biāo)記基因限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶解析答案1234(3)③表示將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，用Ca2＋處理大腸桿菌，目的是使之變?yōu)開(kāi)______細(xì)胞，利于外源DNA侵染，④表示利用化學(xué)方法催化二硫鍵的形成，合成具有生物活性的胰島素，人體內(nèi)該過(guò)程在胰島β細(xì)胞的______中進(jìn)行。解析基因工程中若將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中，則通常采用CaCl2溶液處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，利于外源DNA侵染。胰島素的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，在核糖體合成后需要內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的加工，才具有生物活性。感受態(tài)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)解析答案返回1234課時(shí)訓(xùn)練一、選擇題1.(2015·浙江五校聯(lián)考)通過(guò)基因工程生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠，其核心是構(gòu)建重組DNA分子，所需工具除了載體、限制性核酸內(nèi)切酶外，還需要(

)A.DNA聚合酶 B.DNA連接酶C.RNA聚合酶 D.解旋酶解析限制性核酸內(nèi)切酶將目的基因和載體切出相同的粘性末端后，需要DNA連接酶將二者的末端進(jìn)行拼接。解析√1234567892.(2015·金華模擬)下列選項(xiàng)中，能正確表示基因工程操作“五步曲”的是(

)A.獲得目的基因→將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞→形成重組DNA分子→篩選含

有目的基因的受體細(xì)胞→目的基因的表達(dá)B.目的基因的表達(dá)→獲得目的基因→形成重組DNA分子→將重組DNA分子導(dǎo)入

受體細(xì)胞→篩選含有目的基因的受體細(xì)胞C.獲得目的基因→形成重組DNA分子→將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞→篩選含

有目的基因的受體細(xì)胞→目的基因的表達(dá)D.形成重組DNA分子→獲得目的基因→將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞→篩選含

有目的基因的受體細(xì)胞→目的基因的表達(dá)解析√123467895解析基因工程的操作中，首先需要獲得目的基因，然后將目的基因與載體拼接形成重組DNA分子，再導(dǎo)入受體細(xì)胞，由于部分細(xì)胞可能未導(dǎo)入成功，因此需要篩選含有目的基因的受體細(xì)胞，而導(dǎo)入的目的基因能否表達(dá)是基因工程最終是否成功的標(biāo)志，故最后需要對(duì)目的基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，因此正確順序如C選項(xiàng)。1234678953.北極比目魚中有抗凍基因，其編碼的抗凍蛋白具有11個(gè)氨基酸的重復(fù)序列，該序列重復(fù)次數(shù)越多，抗凍能力越強(qiáng)。如圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過(guò)程示意圖，有關(guān)敘述正確的是(

)123467895解析A.過(guò)程①獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測(cè)序B.將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因，不能得到抗凍性增

強(qiáng)的抗凍蛋白C.過(guò)程②構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D.應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及

其完全表達(dá)√123467895解析將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連形成能表達(dá)的新基因，合成的蛋白質(zhì)為新的蛋白質(zhì)，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白，故選項(xiàng)B正確；過(guò)程①是利用逆轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，由于沒(méi)有非編碼區(qū)和編碼區(qū)中的內(nèi)含子，所以不能用于比目魚基因組測(cè)序；用作載體的質(zhì)粒，必須具有標(biāo)記基因才能便于檢測(cè)和篩選；應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄中目的基因的存在和轉(zhuǎn)錄，但不能檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)，故選項(xiàng)A、C、D錯(cuò)誤。1234678954.天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列操作正確的是(

)A.提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再對(duì)其進(jìn)行

擴(kuò)增B.利用限制性核酸內(nèi)切酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞中D.將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞解析√123467895解析如果所需要的目的基因的序列是完全未知的，往往就需要構(gòu)建基因文庫(kù)，然后從基因文庫(kù)中獲取目的基因，而在基因序列已知的情況下，獲取目的基因通常用逆轉(zhuǎn)錄法或利用化學(xué)方法直接人工合成，因此，A項(xiàng)正確、B項(xiàng)錯(cuò)誤；將目的基因與質(zhì)粒連接的酶是DNA連接酶，而非DNA聚合酶，C項(xiàng)錯(cuò)誤；目的基因必須與載體結(jié)合后導(dǎo)入受體細(xì)胞才能夠自我復(fù)制和表達(dá)，且導(dǎo)入植物細(xì)胞常用的載體是農(nóng)桿菌，而不是大腸桿菌，D項(xiàng)錯(cuò)誤。123467895二、非選擇題5.(2015·浙江10月學(xué)考暨選考)科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉(zhuǎn)入矮牽牛的核基因組中，培育具有新花色的矮牽牛。請(qǐng)回答：(1)為了獲得大量的目的基因，可將目的基因與含有抗生素抗性基因的質(zhì)粒DNA連接形成重組DNA，再與經(jīng)__(A.氯化鈣B.氯化鈉C.蔗糖D.葡萄糖)處理的大腸桿菌液混合，使重組DNA進(jìn)入大腸桿菌，用____處理過(guò)的玻璃刮刀將稀釋后的大腸桿菌液____接種到含有抗生素的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)形成____，并進(jìn)行鑒定和擴(kuò)大培養(yǎng)。解析A滅菌涂布菌落答案123467895解析氯化鈣處理大腸桿菌可增加其細(xì)胞壁的通透性，有利于大腸桿菌對(duì)重組DNA分子的吸收；為防止雜菌污染，玻璃刮刀等實(shí)驗(yàn)器具都應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的滅菌處理，微生物分離接種常用的兩種方法是劃線分離法和涂布分離法，劃線分離法使用的是接種環(huán)，而涂布分離法使用的是玻璃刮刀；微生物在固體培養(yǎng)基表面繁殖，會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體，即菌落。123467895(2)從擴(kuò)大培養(yǎng)的大腸桿菌中提取含有目的基因的DNA后，用__________

分別切割含目的基因的DNA和農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，然后用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子。解析限制性核酸內(nèi)切酶能夠識(shí)別DNA分子中特定的核苷酸序列，并在其中的特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，使DNA分子斷裂形成粘性末端，用相同的限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)含目的基因的DNA和Ti質(zhì)粒進(jìn)行切割，可得到相同的末端，然后用DNA連接酶連接，即形成重組DNA分子。限制性核酸內(nèi)切酶解析答案123467895(3)取田間矮牽牛的幼嫩葉片，經(jīng)自來(lái)水沖洗后，先用70%_____浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最后用______清洗，作為轉(zhuǎn)基因的受體材料。解析利用酒精和次氯酸鈉浸泡葉片是為了消除雜菌的干擾，而無(wú)菌水是用來(lái)洗凈表面殘留的消毒液，避免影響實(shí)驗(yàn)。酒精無(wú)菌水解析答案123467895(4)將消毒后的矮牽牛葉片剪成小片，在含有目的基因的農(nóng)桿菌溶液中浸泡后，取出并轉(zhuǎn)移至加有適當(dāng)配比生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基(含蔗糖、瓊脂和抗生素，下同)上，使葉小片先經(jīng)脫分化形成________，再將其轉(zhuǎn)移至另一培養(yǎng)基中誘導(dǎo)形成芽，芽切割后轉(zhuǎn)移到__(A.LB培養(yǎng)基B.MS培養(yǎng)基＋適宜濃度NAA

C.MS培養(yǎng)基＋適宜濃度BA

D.NAA/BA小于1的MS培養(yǎng)基)上生根，形成完整植株。解析離體培養(yǎng)的植物組織經(jīng)適宜條件誘導(dǎo)會(huì)脫分化形成愈傷組織，然后在相應(yīng)條件的誘導(dǎo)下會(huì)再分化，生出莖、根，長(zhǎng)成試管苗；LB培養(yǎng)基是培養(yǎng)細(xì)菌的，MS培養(yǎng)基才是植物組織培養(yǎng)使用的，NAA為生長(zhǎng)素類似物，BA為細(xì)胞分裂素類似物，當(dāng)生長(zhǎng)素濃度大于細(xì)胞分裂素濃度時(shí)，促進(jìn)生根。愈傷組織B解析答案123467895(5)取出試管苗，在適宜的光照、溫度和80%以上的____等條件下進(jìn)行煉苗。提取葉片組織的DNA，采用PCR技術(shù)____目的基因，鑒定目的基因是否成功導(dǎo)入。解析在適宜的光照、溫度和80%以上的濕度等條件下進(jìn)行煉苗，之后逐步降低濕度，直至達(dá)到自然濕度再進(jìn)行定植，這樣有利于提高存活率；PCR技術(shù)是一種細(xì)胞外DNA復(fù)制技術(shù)，利用葉片組織的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若能夠擴(kuò)增目的基因，則說(shuō)明成功導(dǎo)入，反之則不成功。濕度擴(kuò)增解析答案123467895(6)為判斷本研究是否達(dá)到預(yù)期目的，可比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)基因植株的____性狀?；ㄉ馕鲛D(zhuǎn)入花色基因是為了讓矮牽牛產(chǎn)生新的花色，因此比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)基因植株的花色，即可知實(shí)驗(yàn)是否達(dá)到目的。解析答案1234678956.浙江大學(xué)農(nóng)學(xué)院喻景權(quán)教授課題組研究發(fā)現(xiàn)，一種植物激素——油菜素內(nèi)酯能促進(jìn)農(nóng)藥在植物體內(nèi)的降解和代謝。用油菜素內(nèi)酯處理后，許多參與農(nóng)藥降解的基因(如P450基因和紅霉素抗性基因)的表達(dá)和酶活性都得到提高，在這些基因“指導(dǎo)”下合成的蛋白酶能把農(nóng)藥逐漸轉(zhuǎn)化為水溶性物質(zhì)或低毒甚至無(wú)毒物質(zhì)，有的則被直接排出體外。某課題組進(jìn)一步進(jìn)行了如下的實(shí)驗(yàn)操作，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：123467895(1)獲得油菜素內(nèi)酯合成酶基因的方法有_________________

、__________

。步驟①用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時(shí)用到的耐高溫酶通常是指______________；步驟②用到的酶有____________________________。解析進(jìn)行基因工程操作時(shí)，首先要獲取目的基因，其方法有多種：從cDNA文庫(kù)中獲取、從基因組文庫(kù)中獲取、人工合成目的基因或PCR擴(kuò)增技術(shù)等。在構(gòu)建重組DNA分子的過(guò)程中，用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。圖中的受體細(xì)胞是細(xì)菌，故用感受態(tài)細(xì)胞法導(dǎo)入重組DNA分子，導(dǎo)入后，需檢測(cè)和篩選。從圖中可以看出，最終是通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因細(xì)菌對(duì)土壤中殘留農(nóng)藥的分解能力。從cDNA文庫(kù)中獲取限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶TaqDNA聚合酶解析答案12346789從基因組文庫(kù)中獲取、人工合成目的基因或PCR擴(kuò)增技術(shù)(任選其中兩項(xiàng)即可)5(2)圖中導(dǎo)入重組質(zhì)粒的方法是____________，在導(dǎo)入之前應(yīng)用一定濃度的__________處理受體細(xì)菌。(3)導(dǎo)入重組質(zhì)粒2以后，往往還需要進(jìn)行檢測(cè)和篩選，可用______________制成探針，檢測(cè)是否導(dǎo)入了重組基因，在培養(yǎng)基中加入_______可將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。(4)請(qǐng)你為該課題命名：______________________________________。感受態(tài)細(xì)胞法氯化鈣溶液紅霉素抗性基因紅霉素探究油菜素內(nèi)酯能否促進(jìn)土壤中農(nóng)藥的分解答案1234678957.(2015·湖州八校聯(lián)考)我國(guó)科學(xué)家成功克隆了控制水稻理想株型的關(guān)鍵多效基因IPAl。研究發(fā)現(xiàn)，IPAl發(fā)生突變后，會(huì)使水稻穗粒數(shù)和千粒重(以克表示一千粒種子的質(zhì)量)增加，同時(shí)莖稈變得粗壯，增強(qiáng)了抗倒伏能力。實(shí)驗(yàn)顯示，將突變后的IPAl導(dǎo)入常規(guī)水稻品種，可以使其產(chǎn)量增加10%以上。下圖表示該水稻新品種的簡(jiǎn)易培育流程，據(jù)圖回答：123467895(1)步驟①是實(shí)驗(yàn)所用技術(shù)的核心步驟，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要用到的工具酶有_____________________________。限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶解析構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要先用限制性核酸內(nèi)切酶將目的基因和載體切出相同的粘性末端，然后用DNA連接酶將二者連接。(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌之前，常用______處理該細(xì)菌，以增加該細(xì)菌______的通透性。氯化鈣細(xì)胞壁解析氯化鈣處理可增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性，讓其成為感受態(tài)細(xì)胞，以利于重組質(zhì)粒導(dǎo)入。解析答案123467895(3)土壤農(nóng)桿菌的質(zhì)粒上應(yīng)該具備________，以便篩選。標(biāo)記基因解析質(zhì)粒上具有標(biāo)記基因，目的基因成功導(dǎo)入的受體細(xì)胞可表達(dá)出標(biāo)記基因所對(duì)應(yīng)的產(chǎn)物或表現(xiàn)出相應(yīng)性狀，據(jù)此可篩選出目的基因成功導(dǎo)入的受體細(xì)胞。(4)④過(guò)程應(yīng)用的主要生物技術(shù)是____________，原理是________________。在該技術(shù)過(guò)程中，以適當(dāng)配比的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)脫分化，形成________，經(jīng)再分化培養(yǎng)才能得到水稻新品種植株。植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞的全能性愈傷組織解析植物細(xì)胞培養(yǎng)成植株的過(guò)程中，其技術(shù)手段是植物組織培養(yǎng)，原理是植物細(xì)胞的全能性；該技術(shù)過(guò)程中，細(xì)胞經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化形成植物。解析答案123467895(5)從變異類型來(lái)分析，該水稻新性狀的出現(xiàn)應(yīng)該屬于可遺傳變異中的________?；蛑亟M答案1234678958.(2016·寧波3月選考測(cè)試)下圖表示利用生物技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因豬和轉(zhuǎn)基因煙草的過(guò)程(圖中數(shù)字表示過(guò)程或技術(shù)，字母表示物質(zhì)或結(jié)構(gòu))。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：解析(1)為分離、提純蘇云金芽孢桿菌，先用_______培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，再用_________________法進(jìn)行分離，獲得一個(gè)個(gè)單獨(dú)的____。LB液體劃線分離(涂布分離)菌落答案123467895解析

LB培養(yǎng)基是培養(yǎng)細(xì)菌常用的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基有利于微生物細(xì)胞與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，利于增殖，故擴(kuò)大培養(yǎng)應(yīng)用LB液體培養(yǎng)基；涂布分離法和劃線分離法是兩種常用的微生物分離方法，前者效果更佳，后者操作相對(duì)簡(jiǎn)便；細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)增殖會(huì)形成細(xì)胞集合體，即菌落。123467895(2)研究過(guò)程中，采用___________________技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，然后將目的基因與質(zhì)粒等載體結(jié)合形成了重組質(zhì)粒。在重組質(zhì)粒的構(gòu)建過(guò)程中需要的工具酶有____________________________。解析

PCR是一種人工控制的細(xì)胞外DNA復(fù)制技術(shù)，可用于目的基因的擴(kuò)增；重組質(zhì)粒形成時(shí)需先用同種限制性核酸內(nèi)切酶將質(zhì)粒和含目的基因的DNA進(jìn)行切割，然后用DNA連接酶將二者拼接。PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶解析答案123467895(3)圖中②代表____________技術(shù)。培養(yǎng)C中的ES細(xì)胞時(shí)，一般要在培養(yǎng)皿底部制備一層胚胎成纖維細(xì)胞，目的是__________________________。解析將目的基因?qū)胴i的受體細(xì)胞(受精卵)中，需先利用胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)將轉(zhuǎn)基因受精卵培育成早期胚胎，然后移植到代孕母豬體內(nèi)孕育，最后分娩產(chǎn)出轉(zhuǎn)基因豬；培養(yǎng)ES細(xì)胞時(shí)，在培養(yǎng)皿底部制備一層胚胎成纖維細(xì)胞(飼養(yǎng)層)，目的是促進(jìn)ES細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制其分化、保證其可以順利增殖。胚胎體外培養(yǎng)促進(jìn)ES細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制其分化解析答案123467895(4)若在0.5～0.6mol/L的______溶液中用特定的酶處理D，可獲得原生質(zhì)體。若將含有D的培養(yǎng)物放在搖床上，通過(guò)________培養(yǎng)可以分散成單細(xì)胞，這些單細(xì)胞具有____細(xì)胞的特征。解析甘露醇可維持溶液較高滲透壓，防止原生質(zhì)體吸水脹破；搖床上進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)可使細(xì)胞在液體中分散，避免彼此接觸，保持單細(xì)胞的存在狀態(tài)；這些單細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小、細(xì)胞核大，具有胚性細(xì)胞的特征。甘露醇