GB-T生物產(chǎn)品降解酚類污染物功效評價技術(shù)規(guī)范征求意見稿

ICS07.080

A21

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—201X

生物產(chǎn)品降解酚類污染物功效評價

技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationofevaluationfordegradationofphenol

pollutantsinbiologicproducts

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實施

發(fā)布

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中國國家標(biāo)準(zhǔn)1化管理委員會

GB/T××××—201×

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生物產(chǎn)品降解酚類污染物功效評價技術(shù)規(guī)范

警告——本標(biāo)準(zhǔn)的使用可能涉及某些有危險的材料、操作和設(shè)備,但并未對與此有關(guān)的所有安全問題都

提出建議。使用者在應(yīng)用本標(biāo)準(zhǔn)之前有責(zé)任制定相應(yīng)的安全和保護(hù)措施,并確定相關(guān)規(guī)章限制的適用性。

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了生物產(chǎn)品降解酚類污染物效果評價試驗原理、儀器設(shè)備及器具、試劑與材料、試驗步驟、

結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物和酶生物產(chǎn)品降解酚類污染物效果評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T2601酚類產(chǎn)品組成的氣相色譜測定方法

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。

3術(shù)語和定義

3.1

生物產(chǎn)品biologicalproducts

利用生物技術(shù)獲得的產(chǎn)品。

3.2

酚類化合物phenoliccompound

芳香烴中苯環(huán)上的氫原子被羥基取代所生成的化合物，是芳烴的含羥基衍生物，根據(jù)其分子所含的羥

基數(shù)目可分為一元酚和多元酚。

警告：此類化合物可以吸入、食入或透過皮膚吸收而致中毒，低劑量攝入就嚴(yán)重中毒，也是引致惡性

腫瘤的物質(zhì)。

4原理

一定條件下生物產(chǎn)品使表面活性劑發(fā)生降解后，剩余酚類物質(zhì)經(jīng)離心，過濾后，用氣相色譜法測定，

通過比較降解前后酚類化合物濃度變化，來判定該生物產(chǎn)品的功效。

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5儀器與設(shè)備

5.1分析天平：精確到0.0001g。

5.3pH計：精度±0.01pH。

5.4高速冷凍離心機。

6試劑與材料

除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，實驗用水均為GB/T6882規(guī)定的二級水。

6.1酚類化合物

純度應(yīng)大于等于95%。

6.2100g/L酚類化合物儲備溶液

分別稱取各種酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)品1.000g，用丙酮或無水乙醇溶解并定容至10mL容量瓶中，配制成濃

度為100g/L的儲備溶液，于冰箱冷凍室中保存。

6.3基礎(chǔ)營養(yǎng)基溶液

按照GB/T15818要求進(jìn)行配制。

7試驗步驟

7.1試驗設(shè)計

不同類型生物產(chǎn)品降解酚類污染物效果試驗設(shè)計應(yīng)符合表1要求。

表1生物產(chǎn)品降解酚類污染物效果試驗設(shè)計

產(chǎn)品種類

項目

微生物產(chǎn)品酶產(chǎn)品

1.供試樣品

處理設(shè)計2.失活樣品

3.空白對照

重復(fù)次數(shù)不少于3次

反應(yīng)條件按正交試驗結(jié)果確定

7.2待測微生物試驗實施

7.2.1供試樣品處理

固體產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行研磨處理，制成粉末狀供試樣品。

7.2.2失活樣品處理

取供試的固體或液體微生物樣品進(jìn)行121oC，30min殺菌處理。

7.2.3最佳反應(yīng)體系確定

250ml三角瓶中加入100ml基礎(chǔ)營養(yǎng)基溶液，121℃，20min滅菌，冷卻。設(shè)計正交實驗，按照供

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試樣品的影響因素宜選取反應(yīng)溫度、反應(yīng)轉(zhuǎn)速、底物濃度、反應(yīng)時間等，確定最佳反應(yīng)體系條件。

7.2.4降解處理試驗

取250mL三角瓶9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。分別向9個瓶中加入100mL基礎(chǔ)

營養(yǎng)基溶液，進(jìn)行滅菌處理后備用。按照最佳反應(yīng)體系條件進(jìn)行降解試驗。

7.3待測酶試驗實施

7.3.1供試樣品處理

固體產(chǎn)品應(yīng)用緩沖溶液溶解。

7.3.2失活樣品處理

用緩沖溶液溶解后的固體樣品或液體酶樣品在100oC環(huán)境下進(jìn)行15min去酶活處理。

7.3.3最佳反應(yīng)體系確定

250ml三角瓶中加入100ml緩沖溶液，設(shè)計正交實驗，影響因素宜選取酶量、底物濃度、pH值、反

應(yīng)時間等，確定最佳反應(yīng)體系條件。

7.3.4降解處理試驗

取250mL三角瓶9個，空白樣品瓶3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。分別向9個瓶中加入

100mL緩沖溶液。按照最佳反應(yīng)體系進(jìn)行降解試驗。

7.4濃度測定

正交實驗結(jié)束后，將菌液在12000r/min，離心10min，取上清液，真空冷凍干燥后，用丙酮或無水乙

醇溶解，經(jīng)0.45μm膜過濾后，按照GB/T2601中的方法測定酚類化合物濃度。

8結(jié)果分析

8.1結(jié)果計算

降解率按照式（1）計算：

（）

'…………..1

?0??1??0??2??0??

式中：?=?0×100%

D——底物的降解率（%）；

ρ0——為反應(yīng)開始時的起始底物濃度（mg/L）；

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ρ1——為供試樣品反應(yīng)后的殘留底物濃度（mg/L）；

ρ2——為失活樣品反應(yīng)后的殘留底物濃度（mg/L）；

ρ′——為空白樣品反應(yīng)后的殘留底物濃度（mg/L）。

以平行樣的平均值為最終的降解率值，計算結(jié)果保留到小數(shù)點后兩位。

8.2結(jié)果判定

以降解率的大小評價被測試生物產(chǎn)品的降解功效：降解率大于等于80%，小于100%時，降解效果為

好；降解率大于等于60%，小于80%時，降解效果為良好；降解率大于等于40%，小于60%時，降解效果

為較好；降解率大于等于20%，小于40%時，降解效果為一般；降解率小于20%時，降解