2025屆高考生物二輪復(fù)習(xí)【第1部分】大概念整合6限時(shí)規(guī)范訓(xùn)練15基因工程(新教材)

限時(shí)規(guī)范訓(xùn)練(十五)基因工程(限時(shí)：45分鐘)一、選擇題1．(2023·廣東深圳二模)如圖表示改造哺乳動(dòng)物遺傳特性的三種途徑，相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．上述動(dòng)物的獲得過程中均運(yùn)用顯微注射法B．動(dòng)物2含有目的基因的體細(xì)胞與其他體細(xì)胞的基因種類不同C．獲得動(dòng)物3的重組細(xì)胞具有全能性D．獲得動(dòng)物1的受體細(xì)胞通常是MⅡ期卵母細(xì)胞解析：D上述動(dòng)物的獲得過程中均需要將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，需要運(yùn)用顯微注射法，A正確；動(dòng)物2的其他體細(xì)胞有原本的受精卵發(fā)育而來，含有目的基因的體細(xì)胞與其他體細(xì)胞的基因種類不同，B正確；獲得動(dòng)物3的重組細(xì)胞能夠發(fā)育出完整的動(dòng)物3，表明它具有全能性，C正確；獲得動(dòng)物1轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，需將目的基因?qū)胧芫?，因?yàn)槭芫训娜苄愿?，D錯(cuò)誤。2．(2023·湖北應(yīng)城二模)乳酸乙酯是白酒中重要的呈香物質(zhì)，由乳酸脫氫酶催化產(chǎn)生，影響白酒品質(zhì)和風(fēng)格?？蒲腥藛T將釀酒酵母質(zhì)粒上的丙酮酸脫氫酶基因(PD)替換為植物乳桿菌中的乳酸脫氫酶基因(L-PG)，可獲得乳酸乙酯高產(chǎn)菌株，該過程如圖所示。下列說法不正確的是()A．可借助序列數(shù)據(jù)庫(GenBank)等查詢L-PG基因的序列和功能B．可以利用PCR技術(shù)篩選導(dǎo)入了L-PG基因的受體細(xì)胞C．酵母菌PD基因被替換為L(zhǎng)-PG基因的過程中發(fā)生了基因重組D．標(biāo)記基因AmpR可檢測(cè)是否成功構(gòu)建乳酸乙酯高產(chǎn)菌株解析：DGenBank是美國國家生物技術(shù)信息中心建立的DNA序列數(shù)據(jù)庫，從公共資源中獲取序列數(shù)據(jù)，可借助序列數(shù)據(jù)庫(GenBank)等查詢L-PG基因的序列和功能，A正確；PCR技術(shù)是一項(xiàng)體外擴(kuò)增基因的技術(shù)，依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，可以用于篩選含有L-PG基因的受體細(xì)胞，B正確；由圖可知，通過基因工程技術(shù)將釀酒酵母質(zhì)粒上的丙酮酸脫氫酶基因(PD)替換為植物乳桿菌中的乳酸脫氫酶基因(L-PG)，其原理是基因重組，C正確；標(biāo)記基因AmpR不能檢測(cè)是否成功構(gòu)建乳酸乙酯高產(chǎn)菌株，D錯(cuò)誤。3．(2023·山東泰安一中校考)白細(xì)胞介素-2(IL-2)參與移植排斥反應(yīng)，是免疫調(diào)節(jié)因子，對(duì)機(jī)體的免疫應(yīng)答和抗病毒感染等有重要作用?？蒲腥藛T將含IL-2基因的DNA片段和質(zhì)粒pPIC9K(部分結(jié)構(gòu)如圖所示)構(gòu)建成重組質(zhì)粒，并導(dǎo)入酵母菌GS115(組氨酸缺陷菌株)中，篩選到了能分泌IL-2的工程菌株。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．組氨酸合成基因可作為標(biāo)記基因篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的酵母菌細(xì)胞B．構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)可選用AvrⅡ和NotⅠ切割目的基因和pPIC9K質(zhì)粒C．重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌GS115前，需要先用Ca2＋處理酵母菌GS115細(xì)胞D．抑制IL-2基因的表達(dá)可在一定程度上減輕機(jī)體器官移植后的免疫排斥反應(yīng)解析：B酵母菌GS115是組氨酸缺陷菌株，不能合成組氨酸，可以用不含組氨酸的培養(yǎng)基篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的酵母菌GS115，A正確；據(jù)圖可知，為保證目的基因(AvrⅡ會(huì)破壞目的基因)和啟動(dòng)子(SacⅠ會(huì)破壞啟動(dòng)子)的完整性，可用EcoRⅠ和NotⅠ分別切割含有IL-2基因的DNA片段和pPIC9K質(zhì)粒，B錯(cuò)誤；導(dǎo)入重組質(zhì)粒前，需要先用Ca2＋處理酵母菌GS115細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，C正確；IL-2參與移植排斥反應(yīng)，抑制IL-2基因的表達(dá)可在一定程度上減輕器官移植后機(jī)體的免疫排斥反應(yīng)，D正確。4．(2023·遼寧實(shí)驗(yàn)中學(xué)校考)研究人員通過RNA沉默技術(shù)，特異性降低蘋果細(xì)胞內(nèi)多酚氧化酶基因的表達(dá)水平，使蘋果被切開后即使長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中也不會(huì)被氧化褐變。如圖是該過程原理的示意圖，下列有關(guān)敘述不正確的是()A．構(gòu)建基因表達(dá)載體需要的工具酶有限制酶、DNA連接酶和RNA聚合酶B．可采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因成功導(dǎo)入蘋果細(xì)胞C．目的基因與多酚氧化酶基因的表達(dá)序列互補(bǔ)，且同時(shí)在同一細(xì)胞內(nèi)表達(dá)D．“RNA沉默”的含義是mRNA不能翻譯產(chǎn)生多酚氧化酶解析：A構(gòu)建基因表達(dá)載體需要的工具酶有限制酶、DNA連接酶，不需要RNA聚合酶，A錯(cuò)誤；蘋果屬于雙子葉植物，可采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因成功導(dǎo)入蘋果細(xì)胞，B正確；要使目的基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA和多酚氧化酶基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，應(yīng)使目的基因的表達(dá)序列與多酚氧化酶基因的表達(dá)序列互補(bǔ)，且要同時(shí)在同一細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，C正確；“RNA沉默”的含義是mRNA不能指導(dǎo)相關(guān)多肽鏈的合成，即不能翻譯產(chǎn)生多酚氧化酶，D正確。5．(2023·河北衡水三模)基因工程中需使用特定的限制酶切割基因載體，以便其與目的基因連接形成基因表達(dá)載體。研究人員將相同的基因載體分組并進(jìn)行相應(yīng)酶切處理(如表所示)，其中限制酶H1和H2識(shí)別序列不同。各組基因載體經(jīng)酶切處理后，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示。下列說法錯(cuò)誤的是()分組相應(yīng)酶切處理甲限制酶H1乙限制酶H2丙限制酶H1＋H2A．該基因載體最有可能為環(huán)狀DNA分子B．限制酶H1與H2在該載體上都有識(shí)別和切割位點(diǎn)C．限制酶H1與H2在該載體上的酶切位點(diǎn)最短相距0.2kbD．限制酶作用于該載體時(shí)會(huì)直接導(dǎo)致氫鍵和磷酸二酯鍵的斷裂解析：D由圖可知，當(dāng)僅用一種限制酶切割載體時(shí)，僅產(chǎn)生一種長(zhǎng)度的DNA片段，因此該載體最有可能為環(huán)狀DNA分子，A正確；當(dāng)用一種限制酶切割載體時(shí)，產(chǎn)生的DNA片段等長(zhǎng)，而用兩種限制酶同時(shí)切割時(shí)，產(chǎn)生兩種長(zhǎng)度的DNA片段，所以兩種限制酶在該載體上都有酶切位點(diǎn)，B正確；用兩種限制酶同時(shí)切割載體時(shí)，產(chǎn)生0.6kb和0.2kb兩種長(zhǎng)度的DNA片段，所以兩種限制酶的酶切位點(diǎn)最短相距0.2kb，C正確；限制酶切割載體時(shí)直接破壞的是作用位點(diǎn)上兩個(gè)脫氧核糖核苷酸之間的磷酸二酯鍵，D錯(cuò)誤。6．(2023·北大附中?？?研究者對(duì)綠色熒光蛋白進(jìn)行改造，將其第203位蘇氨酸替換為酪氨酸，使改造后的蛋白質(zhì)在特定光激發(fā)后發(fā)射橙色光，稱為橙色熒光蛋白。關(guān)于橙色熒光蛋白的構(gòu)建，以下說法正確的是()A．用蛋白酶直接處理綠色熒光蛋白獲得目標(biāo)產(chǎn)物B．設(shè)計(jì)定點(diǎn)突變PCR獲得橙色熒光蛋白基因C．PCR擴(kuò)增獲得的產(chǎn)物激發(fā)后可以發(fā)橙色熒光D．綠色熒光蛋白基因發(fā)生的突變類型為堿基缺失解析：B用蛋白酶直接處理綠色熒光蛋白得到的是各種氨基酸，而不是第203位蘇氨酸替換為酪氨酸的橙色熒光蛋白，A錯(cuò)誤；要使綠色熒光蛋白第203位蘇氨酸替換為酪氨酸，可以通過對(duì)其基因進(jìn)行定點(diǎn)突變PCR實(shí)現(xiàn)，這樣基因中控制蘇氨酸的堿基序列替換為合成酪氨酸的堿基序列，B正確；PCR擴(kuò)增獲得的產(chǎn)物是目的基因片段，不能發(fā)橙色熒光，只有該基因片段控制合成的蛋白質(zhì)才會(huì)在特定光激發(fā)后發(fā)橙色熒光，C錯(cuò)誤；綠色熒光蛋白基因發(fā)生的突變類型為堿基替換，D錯(cuò)誤。7．(2023·安徽校聯(lián)考二模)在某些生化反應(yīng)中，積累的產(chǎn)物濃度達(dá)到一定程度時(shí)，產(chǎn)物會(huì)與酶結(jié)合，從而抑制酶促反應(yīng)的進(jìn)行。如圖是蘇氨酸脫氫酶催化蘇氨酸形成異亮氨酸的過程。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．蘇氨酸脫氫酶和蘇氨酸中可能都含有氨基和羧基B．圖示存在反饋調(diào)節(jié)，有助于維持異亮氨酸含量的相對(duì)穩(wěn)定C．增加蘇氨酸含量可以解除異亮氨酸對(duì)蘇氨酸脫氫酶的抑制D．可通過蛋白質(zhì)工程改造蘇氨酸脫氫酶的結(jié)構(gòu)來提高異亮氨酸的產(chǎn)量解析：C蘇氨酸脫氫酶的本質(zhì)為蛋白質(zhì)，由氨基酸組成，含有氨基和羧基，蘇氨酸為氨基酸，至少含有一個(gè)氨基和一個(gè)羧基，A正確；據(jù)圖可知，當(dāng)異亮氨酸濃度達(dá)到一定程度時(shí)，會(huì)與蘇氨酸脫氫酶結(jié)合，從而抑制酶促反應(yīng)的進(jìn)行，使異亮氨酸濃度不至于太高，此過程為反饋調(diào)節(jié)，有助于維持異亮氨酸含量的相對(duì)穩(wěn)定，B正確；據(jù)圖可知，當(dāng)異亮氨酸濃度達(dá)到一定程度時(shí)，會(huì)與蘇氨酸脫氫酶結(jié)合，從而使得蘇氨酸不能與蘇氨酸脫氫酶結(jié)合，則蘇氨酸也不能轉(zhuǎn)化為異亮氨酸，即使蘇氨酸濃度增大，蘇氨酸也不能與蘇氨酸脫氫酶結(jié)合，所以增加蘇氨酸含量不能解除異亮氨酸對(duì)蘇氨酸脫氫酶的抑制，C錯(cuò)誤；蛋白質(zhì)工程改造了蘇氨酸脫氫酶的空間結(jié)構(gòu)之后，可使異亮氨酸不能與蘇氨酸脫氫酶結(jié)合，即解除了反饋調(diào)節(jié)，故可通過蛋白質(zhì)工程改造蘇氨酸脫氫酶的結(jié)構(gòu)來提高異亮氨酸的產(chǎn)量，D正確。8．(2023·山東泰安二模)環(huán)境DNA(eDNA)是“在環(huán)境樣品中所有被發(fā)現(xiàn)的不同生物的基因組DNA的混合”，它涵蓋的范圍非常廣泛，無論是土壤、空氣、液體，甚至是排泄物，都可以從中找到可作為樣品的eDNA。對(duì)所得的樣品，可使用普通的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)或直接霰彈槍法(shotgunstrategy)測(cè)序，能夠方便獲得多個(gè)DNA序列。下列有關(guān)說法不正確的是()A．可分析環(huán)境樣品中的eDNA分別是屬于哪些物種，這與傳統(tǒng)的動(dòng)植物分類調(diào)查是一致的B．eDNA技術(shù)可尋找環(huán)境中是否有單一物種的DNA，用于研究和追蹤珍稀物種的分布C．使用PCR測(cè)序，能夠方便獲得DNA序列D．每個(gè)eDNA中都有一個(gè)游離的磷酸基團(tuán)解析：D由于DNA分子具有特異性，所以可分析環(huán)境樣品中的eDNA分別是屬于哪些物種，這與傳統(tǒng)的動(dòng)植物分類調(diào)查其實(shí)是一致的，A正確；環(huán)境DNA(eDNA)技術(shù)是一種新型生物資源調(diào)查手段，是指從環(huán)境中提取DNA片段，根據(jù)DNA分子的特異性，結(jié)合PCR和DNA測(cè)序等分子生物學(xué)技術(shù)來定性或定量檢測(cè)目標(biāo)生物，從而確定其分布狀況等，B正確；PCR是一項(xiàng)體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)，其原理是DNA的復(fù)制，故擴(kuò)增微量的樣品eDNA，可獲得大量的DNA序列，C正確；DNA分子是雙螺旋結(jié)構(gòu)，有兩條脫氧核苷酸鏈，若是鏈狀DNA分子，則每個(gè)eDNA中都有兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，若是環(huán)狀DNA分子，則沒有游離的磷酸基團(tuán)，D錯(cuò)誤。9．(2023·湖南長(zhǎng)沙二模)研究人員將雪花蓮凝集素(GNA)基因和尾穗莧凝集素(ACA)基因連接成融合基因后再與pBI121質(zhì)粒載體結(jié)合并導(dǎo)入玉米細(xì)胞，最終獲得了抗蚜蟲玉米新品種，部分操作過程如圖所示。下列敘述正確的是()A．過程①和過程②分別需要使用DNA聚合酶和DNA連接酶B．可將含有重組載體的溶液滴加到玉米受粉后形成的花粉管通道內(nèi)，獲得抗蚜蟲玉米新品種C．在加入了卡那霉素的培養(yǎng)基上存活下來的玉米細(xì)胞均成功導(dǎo)入了重組載體D．若用PCR技術(shù)檢測(cè)出玉米細(xì)胞含有融合基因，則該玉米為抗蚜蟲玉米解析：B過程①為獲得融合基因，過程②為構(gòu)建基因表達(dá)載體，兩過程均需要使用DNA連接酶，A錯(cuò)誤；將含有重組載體的溶液滴加到玉米受粉后形成的花粉管通道內(nèi)，重組載體可通過花粉管通道進(jìn)入卵細(xì)胞、合子或早期胚胎細(xì)胞中，這是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法之一，B正確；在加入了卡那霉素的培養(yǎng)基上存活下來的玉米細(xì)胞，可能是成功導(dǎo)入重組載體的細(xì)胞，也可能是導(dǎo)入含有卡那霉素抗性基因的非重組載體的細(xì)胞，C錯(cuò)誤；用PCR技術(shù)檢測(cè)出玉米細(xì)胞含有融合基因，不能說明該玉米為抗蚜蟲玉米，因?yàn)槿诤匣蚩赡懿荒苷１磉_(dá)，D錯(cuò)誤。10．基因定點(diǎn)突變的目的是通過定向地改變基因內(nèi)一個(gè)或少數(shù)幾個(gè)堿基來改變多肽鏈上一個(gè)或幾個(gè)氨基酸。該技術(shù)是蛋白質(zhì)工程的重要技術(shù)。如圖為利用PCR技術(shù)進(jìn)行定點(diǎn)突變的流程，下列相關(guān)敘述不正確的是()注：引物1和引物3的突起處代表與模板不能互補(bǔ)的突變位點(diǎn)，而這兩條引物有部分堿基(包括突變位點(diǎn))是可以互補(bǔ)的。A．由于基因決定蛋白質(zhì)，因此要對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，最終還必須通過改造或合成基因來完成B．酶①應(yīng)為耐高溫的DNA聚合酶，引物X和Y應(yīng)該為引物2和4C．可以將引物1、引物2、引物3和引物4置于同一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中同時(shí)進(jìn)行第一個(gè)階段的反應(yīng)，進(jìn)而縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間D．利用圖示流程技術(shù)可以將兩個(gè)不同的基因拼接到一起解析：C基因控制蛋白質(zhì)的合成，因此要對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，最終還必須通過改造或合成基因來完成，A正確；酶①要在高溫條件下延伸DNA，所以酶①為耐高溫的DNA聚合酶，由圖可知，要得到兩條鏈一樣長(zhǎng)的DNA單鏈，應(yīng)選擇引物2和引物4，所以引物X和Y應(yīng)該為引物2和4，B正確；由圖可知，引物1和引物3存在互補(bǔ)配對(duì)片段，置于同一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)時(shí)它們會(huì)發(fā)生結(jié)合而失去作用，C錯(cuò)誤；圖示的過程為重疊延伸PCR技術(shù)，利用重疊互補(bǔ)引物將兩個(gè)不同的基因拼接到一起，D正確。二、非選擇題11．(2023·云南昆明二模)科學(xué)家將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫押嘶蚪M中，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因克隆牛分泌的乳汁，乳汁中乳糖含量大大降低。這有利于解決我國約有1/3的成年人因?qū)θ樘遣荒褪苁秤门Ｄ毯蟪霈F(xiàn)腹瀉等不適癥狀的問題。分析回答下列問題：(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增腸乳糖酶基因時(shí)，PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性和________________三步，其中使反應(yīng)體系中的模板DNA解聚為單鏈的條件是________________，解聚為單鏈過程破壞了DNA雙鏈分子中的________________，復(fù)性的結(jié)果是_______________________。(2)科學(xué)家將腸乳糖酶基因與____________細(xì)胞中特異表達(dá)的基因的啟動(dòng)子等調(diào)控元件重組在一起，以使乳汁中的乳糖含量降低。構(gòu)成啟動(dòng)子的基本單位是_____________________________________________________________。(3)為了促進(jìn)轉(zhuǎn)腸乳糖酶基因牛的繁育，將含腸乳糖酶基因的胚胎細(xì)胞的細(xì)胞核移入牛的________________。然后用物理或化學(xué)方法激活重構(gòu)胚，激活重構(gòu)胚的目的是________________________________________________________。解析：(1)PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性和延伸三步，其中使反應(yīng)體系中的模板DNA解聚為單鏈的條件是90℃以上高溫，解聚為單鏈過程破壞了DNA雙鏈分子中的氫鍵，復(fù)性的結(jié)果是兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合。(2)科學(xué)家將腸乳糖酶基因與乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因的啟動(dòng)子等調(diào)控元件重組在一起，以使乳汁中的乳糖含量降低。構(gòu)成啟動(dòng)子的是DNA，其基本單位是脫氧核苷酸。(3)將含腸乳糖酶基因的胚胎細(xì)胞的細(xì)胞核移入牛的去核卵母細(xì)胞，為了促進(jìn)轉(zhuǎn)腸乳糖酶基因牛的繁育，然后用物理或化學(xué)方法激活重構(gòu)胚，激活重構(gòu)胚的目的是使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。答案：(1)延伸90℃以上高溫氫鍵兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合(2)乳腺脫氧核苷酸(3)去核卵母細(xì)胞使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程12．(2023·江蘇鹽城二模)黨的二十大對(duì)保障糧食安全提出了更高要求，馬鈴薯是我國重要的糧食作物之一。致病疫霉導(dǎo)致的晚疫病及干旱、高低溫和鹽脅迫等是導(dǎo)致馬鈴薯減產(chǎn)的重要原因。研究人員為探究StNPR4和StproNPR4基因在馬鈴薯應(yīng)對(duì)致病疫霉和高鹽脅迫中的功能進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，基因表達(dá)載體構(gòu)建示意圖如圖。基因表達(dá)載體構(gòu)建示意圖(1)用SacⅡ等限制酶切割含目的基因的DNA片段，與經(jīng)相同酶切割后的pENTR-L16質(zhì)粒用________________酶連接，構(gòu)建重組pENTR-L16。(2)經(jīng)________________酶將含目的基因的片段切出并連接到載體pORE04上構(gòu)建重組pORE04。(3)將重組pORE04導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞常用的方法是__________法，它利用了T-DNA的________特性，最終使目的基因整合到馬鈴薯細(xì)胞______________上。經(jīng)轉(zhuǎn)化后得到5個(gè)品系，命名為1、2、3、4和5。如圖A表示馬鈴薯基因相對(duì)表達(dá)量分析，B表示馬鈴薯接種致病疫霉后病原菌相對(duì)生物量分析，C表示150mmol·L－1的NaCl處理對(duì)馬鈴薯快繁生根率的影響，**表示組別間差異達(dá)到極顯著水平。①據(jù)圖A分析，只有轉(zhuǎn)基因品系________________的表達(dá)量顯著低于野生型(WT)和其余4個(gè)轉(zhuǎn)化品系，因此后續(xù)試驗(yàn)不再檢測(cè)此品系。②據(jù)圖B和圖C分析，與野生型馬鈴薯比較，轉(zhuǎn)基因馬鈴薯品系的優(yōu)勢(shì)是具有__________，致病疫霉相對(duì)生物量低；生根率高，__________________。(4)為研究轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株的分子機(jī)理，研究人員利用TaqMan探針和反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，對(duì)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯StproNPR4和StNPR4基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)：①StproNPR4基因的兩端堿基序列如下：采用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增StproNPR4基因，需要使用的引物2序列為5′－CTTGGATGAT－3′，則引物1的序列為________(標(biāo)出5′和3′端，寫出前6個(gè)堿基即可)。②TaqMan探針的結(jié)構(gòu)如圖所示，由于探針有________________的片段，導(dǎo)致游離探針上的熒光素會(huì)與淬滅劑結(jié)合無法發(fā)出熒光。③經(jīng)檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因馬鈴薯水楊酸(SA)信號(hào)通路相關(guān)蛋白基因表達(dá)量顯著上升，SA是一種植物抗病有關(guān)的調(diào)節(jié)物質(zhì)。研究人員推測(cè)L儀器檢測(cè)通過激活SA途徑提升抗病能力，欲驗(yàn)證這一假設(shè)，需要進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)是___________________。解析：(1)用SacⅡ等限制酶切割含目的基因的DNA片段，與經(jīng)相同酶切割后的pENTR-L16質(zhì)粒具有相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接，構(gòu)建重組pENTR-L16。(2)分析題圖可知，兩個(gè)質(zhì)粒都有SacⅡ和KpnⅠ的酶切位點(diǎn)，故經(jīng)SacⅡ和KpnⅠ酶將含目的基因的片段切出并連接到載體pORE04上構(gòu)建重組pORE04。(3)將重組pORE04導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，T-DNA是可轉(zhuǎn)移DNA，能夠最終使目的基因整合到馬鈴薯細(xì)胞染色體的DNA上。經(jīng)轉(zhuǎn)化后得到5個(gè)品系，命名為1、2、3、4和5。①A表示馬鈴薯基因相對(duì)表達(dá)量分析，據(jù)圖A分析，只有轉(zhuǎn)基因品系5的表達(dá)量顯著低于野生型(WT)和其余4個(gè)轉(zhuǎn)化品系，因此后續(xù)試驗(yàn)不再檢測(cè)此品系。②B表示馬鈴薯接種致病疫霉后病原菌相對(duì)生物量分析，C表示150mmol·L－1的NaCl處理對(duì)馬鈴薯快繁生根率的影響，圖中的**表示組別間差異達(dá)到極顯著水平。據(jù)圖B和圖C分析，與野生型馬鈴薯比較，轉(zhuǎn)基因馬鈴薯品系的致病疫霉相對(duì)生物量低，說明具有抗病性；而生根率高，故存活能力強(qiáng)。(4)引物需要與模板鏈的3′端互補(bǔ)配對(duì)，即—OH端，故根據(jù)StproNPR4基因兩端堿基序列可知，采用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增StproNPR4基因，需要使用的引物2序列為5′－CTTGGATGAT－3′，則引物1的序列為5′－TCTGTT－3′。②依據(jù)TaqMan探針的結(jié)構(gòu)圖可知，由于探針有堿基互補(bǔ)配對(duì)的片段，導(dǎo)致游離探針上的熒光素會(huì)與淬滅劑結(jié)合無法發(fā)出熒光。③分析題意，實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑轵?yàn)證L儀器檢測(cè)通過激活SA途徑提升抗病能力，自變量為有無SA途徑，故欲驗(yàn)證這一假設(shè)，需要進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)是敲除SA受體基因或抑制SA信號(hào)途徑，檢測(cè)馬鈴薯的抗病情況。答案：(1)DNA連接(2)SacⅡ和KpnⅠ(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化可轉(zhuǎn)移染色體的DNA①5②抗病性存活能力強(qiáng)(4)①5′－TCTGTT－3′②堿基互補(bǔ)配對(duì)③敲除SA受體基因或抑制SA信號(hào)途徑，檢測(cè)馬鈴薯的抗病情況。13．(2023·廣東深圳二模)人體細(xì)胞中的ICF45蛋白與細(xì)胞周期調(diào)控、腫瘤發(fā)生過程有關(guān)。為探究ICF45蛋白的相關(guān)作用機(jī)制，某研究人員進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉栴}：(1)研究人員先通過基因工程技術(shù)構(gòu)建了可表達(dá)ICF45蛋白的工程菌大腸桿菌，再通過培養(yǎng)大腸桿菌獲得ICF45蛋白。在構(gòu)建過程中，研究人員從宮頸癌細(xì)胞系細(xì)胞中提取mRNA，然后以mRNA為模板，在________________酶的作用下合成cDNA。再依據(jù)一段________________的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR技術(shù)的一個(gè)循環(huán)包括的環(huán)節(jié)是________________。將含有目的基因的表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌前，一般先用____________處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。(2)研究人員將獲得的ICF45蛋白注射到若干只健康小鼠體內(nèi)，一段適宜時(shí)間后從小鼠的脾臟中提取出小鼠B淋巴細(xì)胞，將其與________________細(xì)胞誘導(dǎo)融合。然后經(jīng)特定的選擇性培養(yǎng)基篩選，對(duì)篩選出的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選，最終選擇出________________細(xì)胞在體外條件下進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，這樣就可以從培養(yǎng)液中獲得大量的ICF45單克隆抗體。(3)該研究人員利用獲得的ICF45單克隆抗體，通過免疫共沉淀技術(shù)進(jìn)一步