TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)培訓(xùn)課件

EGFR突變型肺癌生物學(xué)和靶向治療認(rèn)知時(shí)間表TanCS,etal.LancetOncol.2015Sep;16(9):e447-59.1TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025基因檢測改變了我們的臨床實(shí)踐EGFR突變和ALK檢測不被常規(guī)推薦，除非不吸煙和小標(biāo)本2TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025觀念改變：檢測已經(jīng)成為必須腺癌、大細(xì)胞癌和組織學(xué)類型不明確型NSCLC：應(yīng)進(jìn)行EGFR突變、ALK、ROS1、廣泛分子分析(BRAFV600E、MET擴(kuò)增和外顯子14點(diǎn)突變、RET重排、HER2突變)、PD-L1檢測麟癌應(yīng)該進(jìn)行EGFR突變和ALK檢測尤其在非吸煙人群或小標(biāo)本或混合病理類型的標(biāo)本中，其它檢測包括廣泛分子分析(BRAFV600E、MET擴(kuò)增和外顯子14點(diǎn)突變、RET重排、HER2突變)和PD-L1檢測3TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025分子檢測技術(shù)也隨之不斷發(fā)展金標(biāo)準(zhǔn)手術(shù)標(biāo)本補(bǔ)充補(bǔ)充細(xì)胞學(xué)標(biāo)本血液標(biāo)本一、從組織檢測發(fā)展到血液檢測二、從定性檢測到未來定量檢測三、從單基因檢測到多基因檢測平臺已知位點(diǎn)定性檢測已知位點(diǎn)定量檢測4TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025T790M突變檢測的標(biāo)本類型PirkerR,etal.JThoracOncol.2010;5(10):1706-1713.SavicS,etal.BrJCancer.2008;98(1):154-60.中國非小細(xì)胞肺癌血液EGFR基因突變中國專家共識.中華醫(yī)學(xué)雜志.2015;95(45):3721-3725.組織活檢(腫瘤蠟片)

細(xì)胞學(xué)標(biāo)本(惡性胸水)血液標(biāo)本(ctDNA)檢測結(jié)果可靠樣本品質(zhì)和腫瘤細(xì)胞含量與組織樣本接近組織和胸水都取不到的患者，推薦使用血液樣本侵入性，部分病人無法取樣不是每個(gè)病人都有胸水無創(chuàng)，易采樣標(biāo)本獲得分子檢測金標(biāo)準(zhǔn)檢測結(jié)果可靠，無法獲得組織時(shí)可作補(bǔ)充DNA片段化/假陰性較多，需高敏感度技術(shù)質(zhì)量控制可以使用ARMS方法進(jìn)行檢測可以使用ARMS方法進(jìn)行檢測可以使用dPCR或NGS等高靈敏度方法技術(shù)平臺5TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025T790M突變檢測的標(biāo)本類型—血液檢測組織活檢(腫瘤蠟片)

細(xì)胞學(xué)標(biāo)本(惡性胸水)血液標(biāo)本(ctDNA)檢測結(jié)果可靠樣本品質(zhì)和腫瘤細(xì)胞含量與組織樣本接近組織和胸水都取不到的患者，推薦使用血液樣本侵入性，部分病人無法取樣不是每個(gè)病人都有胸水無創(chuàng)，易采樣標(biāo)本獲得分子檢測金標(biāo)準(zhǔn)檢測結(jié)果可靠，無法獲得組織時(shí)可作補(bǔ)充DNA片段化/假陰性較多，需高敏感度技術(shù)質(zhì)量控制可以使用ARMS方法進(jìn)行檢測可以使用ARMS方法進(jìn)行檢測可以使用dPCR或NGS等高靈敏度方法技術(shù)平臺PirkerR,etal.JThoracOncol.2010;5(10):1706-1713.SavicS,etal.BrJCancer.2008;98(1):154-60.中國非小細(xì)胞肺癌血液EGFR基因突變中國專家共識.中華醫(yī)學(xué)雜志.2015;95(45):3721-3725.6TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025“液體活檢”入圍2015年度MIT“十大突破技術(shù)”MagicLeapNano-ArchitectureCar-to-CarProjectLoonLiquidBiopsyMegascaleDesalinationApplePayBrainorganoidsSuperchargedPhotosynthesisInternetofDNA7TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025概要T790M血液檢測：機(jī)遇Biomarker類型臨床應(yīng)用T790M血液檢測：挑戰(zhàn)T790M血液檢測：優(yōu)化8TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025血液檢測Biomarker-ctDNA&CTC&Exosome循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)：存在于外周血中各類腫瘤細(xì)胞統(tǒng)稱，因自發(fā)或診療操作從實(shí)體瘤病灶脫落，進(jìn)入外周血循環(huán)系統(tǒng)循環(huán)腫瘤DNA

(ctDNA)：由腫瘤細(xì)胞釋放到外周血中的DNA片段，來源于所有荷瘤部位，具有含量低，半衰期短，均質(zhì)性等特點(diǎn)外泌體(Exosomes)：由細(xì)胞分泌或者脫落的囊狀小泡，直徑約30-100nm，攜帶腫瘤細(xì)胞DNA，RNA和蛋白質(zhì)等信息WangJYetal.,FrontMed,2017,2095-0225JiaSYetal.,Oncotarget,2017,8,339TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)的來源與功能ctDNA來源:1.凋亡／壞死腫瘤細(xì)胞;2.正常生長腫瘤細(xì)胞;3.循環(huán)腫瘤細(xì)胞ctDNA功能:基于Oncogenictransformation方式在腫瘤轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用ctDNA分布:廣泛存在于血漿，腦脊液，唾液，尿液等，均已得到相關(guān)研究證實(shí)ChengFFetal.,Oncotarget,2016,7,30DiMeoetal.,MolecularCancer,2017,16,8010TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)的特性總量少–

<500

DNA拷貝數(shù)/200uL血漿

ctDNA豐度低-0.01%-1%比例較多片段小–集中在170bp左右FractionofEGFRmutantintotalcfDNANumberofEGFRM+plasmasamples61376353activatingmutations,T790MNewman

etal.,Nat

Med(2014)Taniguchietal.,ClinCancerRes(2011)Frank

Detal.,Nat

Med(2008)半衰期短–約為114min，<2小時(shí)Half-Life11TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025來源于血液ctDNA的信息分類：定量分析和序列分析JonothanC.M.WanetalNatureReviewCancer(2017)12TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025血液ctDNA檢測可用于腫瘤早期診斷PhallenJetal.,SciTranslMed,2017,9本研究新建立一種超敏感，低出錯的血液ctDNA檢測方法-TEC-Seq入組對象：健康人群(44例)，乳腺癌(45例)，結(jié)直腸癌(42例)，肺癌(65例)，卵巢癌(42例)覆蓋范圍：58種常見驅(qū)動基因7ng29

ng21

ng66

ng與傳統(tǒng)NGS比較，TEC-Seq測序出錯率降低至<3×10-7

false-positive

mutation

calls/base(P<0.0001)BCCCP<0.000113TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025血液ctDNA檢測可用于臨床療效評估Xue.Y,Jie.W,etal,Oncotarget,2016,7,15.ddPCR定量監(jiān)測血漿中ctDNA顯示，EGFR突變高豐度預(yù)示應(yīng)用TKI療效好會有較長PFS精準(zhǔn)定量檢測，能夠預(yù)測療效！血液中的突變狀態(tài)與療效的關(guān)系.原始血液突變定量分析與療效關(guān)系(vs.),P=0.167(vs.),P=0.020(vs.),P=0.454EGFR中位OS(月)血漿WT23.8月(19.9-27.4)(n=19)血漿MT35.6月(26.9-44.1)(N=54)EGFR中位PFS(月)血漿WT6.7月(5.0-8.4)(n=19)血漿MT12.5月(11.0-14.3)(N=54)1.00.80.60.40.20.001230241861.00.80.60.40.20.0024726036121.00.80.60.40.20.001230241861.00.80.60.40.20.0048247260361248P＜0.001P=0.0280%(n=19)0-5.15%(n=27)＞5.15%(n=27)0%(n=19)0-5.15%(n=27)＞5.15%(n=27)PFSPFSOSOS(vs.),P<0.001

(vs.),P<0.001(vs.),P=0.021月月月月14TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025血液ctDNA檢測可用于治療動態(tài)監(jiān)測T790M和L858R在泰瑞沙治療后1個(gè)月內(nèi)已無法檢測到；影像學(xué)證實(shí)泰瑞沙耐藥時(shí)，T790M和原發(fā)L858R重新出現(xiàn)EGFRT790M在影像學(xué)證實(shí)泰瑞沙耐藥時(shí)檢測不到，但原發(fā)19del的水平升高；進(jìn)展期活檢發(fā)現(xiàn)MET擴(kuò)增ChiaPLetal.,LungCancer.2016,98:29-32.15TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025概要T790M血液檢測：機(jī)遇Biomarker類型臨床應(yīng)用T790M血液檢測：挑戰(zhàn)T790M血液檢測：優(yōu)化16TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025挑戰(zhàn)1：血液標(biāo)本相對脆弱，

非常容易受到外界干擾，造成假陰性123451-3號標(biāo)本可用，4-5號嚴(yán)重溶血不可用采血管選用不當(dāng)，或溫度過高或過低、或運(yùn)輸過程劇烈搖晃，造成溶血或輕微溶血。重度的圖示為脂血+溶血現(xiàn)象患者身體原因，造成脂血，影響cfDNA提取效率17TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025挑戰(zhàn)2：不同試劑盒對cfDNA提取效率

及cfDNA片段捕獲能力不同，影響檢出率SoberLetal.,JMolDiag,2016NormannoNetal.,Oncotarget,2017,8,76種不同試劑盒對于cfDNA提取效率影響6種不同試劑盒對于KRAS檢出率的影響6種不同試劑盒對于cfDNA片段捕獲能力比較18TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025挑戰(zhàn)3：AURA回顧性研究顯示血檢敏感性和特異性僅70%

提示TKI耐藥患者僅做血檢不足以判斷T790M突變狀態(tài)Plasma(BEAming)Tumor(ARMS)Exon19del+Exon19del-Exon19del+112(82.3%)2Exon19del-2478(97.5%)L858R+L858R-L858R+63(86.3%)5L858R-10138(96.5%)T790M+T790M-T790M+111(70.3%)18T790M-4740(69.0%)OxnardGR,etal.JClinOncol.2016Oct1;34(28):3375-82.19TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025較Cobas組織T790M檢測，Cobas血液T790M檢測存在一定比例假陰性ChengYing,etal.2017CSCO局部晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLCEGFR突變陽性EGFRTKI治療后進(jìn)展PS:0-2EGFRT790M+veAZD929180mgqd(≥2線)PDN=2000-3000ASTRIS研究：中國晚期NSCLCEGFRTKI耐藥后T790M突變率主要終點(diǎn)：OS次要終點(diǎn)：PFS，安全性T790M檢測標(biāo)本：組織或血液標(biāo)本(PD后獲取的標(biāo)本,標(biāo)本獲取至標(biāo)本檢測最好不要超過60天)T790M檢測方法：中心實(shí)驗(yàn)室檢測，cobas?EGFRMutationTestv2393(27.5%)1034(72.5%)795(62.8%)471(37.2%)T790M血液檢測突變率27.5%組織檢測突變率62.8%20TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025挑戰(zhàn)4：ctDNA檢測平臺難以兼顧檢測敏感性和基因檢測范圍21TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025Zhang,etal.2017WCLC,abs:JCES01.25ADELOS研究：對比4中血漿ctDNA檢測T790M的檢測平臺Osimertinib80mg/天口服第一次采血收集第N次血液收集CobasSuper-ARMSDigitalPCRNGST790M+（n=181）2次進(jìn)展收集組織樣本并進(jìn)行NGS檢測(n=56)收集組織或細(xì)胞學(xué)樣本(NGS)T790M-（n=75）收集組織樣本并進(jìn)行cobas檢測(n=22)晚期/轉(zhuǎn)移性NSCLC既往EGFR-TKI治療進(jìn)展N=2568家醫(yī)院3次4次5次6次EGFRT790M占EGFR-TKI獲得性耐藥的50~60%血漿ctDNA代表一種有前景的T790M供選擇的檢測方法奧希替尼是一種具有CNS活性的第3代EGFR-TKI，可有效地并選擇性地抑制EGFR突變和EGFRT790M耐藥突變ADELOS研究(NCT02997501)目的是評估4種利用血漿ctDNA檢測T790M的檢測平臺，從而驗(yàn)證它們在中國人群的臨床應(yīng)用22TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025挑戰(zhàn)5：血液檢測難以發(fā)現(xiàn)的一些耐藥突變METamplification3%Smallcell+MET1%Smallcell1%Smallcell+T790M2%MET+T790M3%Unknown18%HER28%T790M60%HER2+T790M4%11例c-Met過表達(dá)患者接受TKI+c-Met抑制劑治療緩解率(RECIST)：45.5%疾病控制率：54.5%疾病進(jìn)展：45.5%其中5例c-Met過表達(dá)且不伴T790M的患者，疾病控制率為100%患者性別年齡(歲)PS病理EGFR狀態(tài)c-MET狀態(tài)治療臨床獲益初始緩解PFS(月)患者1女322ADCL858R25%+++;30%++阿昔替尼是PR6.1患者2女571ADCDEL60%++吉非替尼+克唑替尼是PR6.7患者3女541ADCDEL100%+++吉非替尼+克唑替尼是PR患者4男421ADCDEL100%++*吉非替尼+克唑替尼是SD4.0患者5女500ADCDEL60%++吉非替尼+克唑替尼是SD治療中患者6男611ADCL858R+T790M(肝)15%+++50%++(肺)阿法替尼+克唑替尼否PD51.0患者7女761ADCL858R+T790M100%+++吉非替尼+c-MET抑制劑否PD患者8男664ADCDEL+T790M20%+++;50%++吉非替尼+c-MET抑制劑否PD患者9男631ADCL858R+T790M80%++吉非替尼+c-MET抑制劑否PD患者10男361ADCDEL+T790M70%+++;20%++吉非替尼+c-MET抑制劑否SD5.7患者11男551ADCDEL+T790MMET100%+++吉非替尼+c-MET抑制劑否PD免疫組化/FISH用于MET過表達(dá)/擴(kuò)增檢測GouLY,etal.2015ASCOAbstract8091.23TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025挑戰(zhàn)6：血液ctDNA檢測對SCLC診斷束手無策Camidge,D.R.etal.Naturereview,ClinicalOncologyAugest,2014不可忽視的SCLC轉(zhuǎn)化24TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025概要T790M血液檢測：機(jī)遇Biomarker類型臨床應(yīng)用T790M血液檢測：挑戰(zhàn)T790M血液檢測：優(yōu)化25TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025T790M血液檢測平臺有優(yōu)化關(guān)鍵問題1：

建立嚴(yán)格的SOP，以實(shí)現(xiàn)T790M血液檢測全流程質(zhì)量管理Camidge,D.R.etal.Naturereview,ClinicalOncologyAugest,2014臨床醫(yī)生放射科/外科/護(hù)士/臨床醫(yī)生轉(zhuǎn)運(yùn)人員病理科/中心實(shí)驗(yàn)室/分子室病理醫(yī)師/遺傳分析師病理醫(yī)生/臨床醫(yī)生送檢申請樣品采集樣品轉(zhuǎn)運(yùn)分子檢測結(jié)果判讀報(bào)告解讀目標(biāo)申請單填寫規(guī)范：信息準(zhǔn)確、全面，為后續(xù)分子檢測及患者治療提供參考明確可開展分子檢測的樣品類型，規(guī)范樣品的采集及預(yù)處理流程強(qiáng)化樣品轉(zhuǎn)運(yùn)的時(shí)效性，保障樣品質(zhì)量，縮短檢測周期保證檢測平臺資質(zhì)(軟硬件)，強(qiáng)化檢測質(zhì)量，優(yōu)化檢測方法確保結(jié)果分析的專業(yè)性與準(zhǔn)確性及時(shí)發(fā)出檢測報(bào)告，為臨床與患者提供一定的結(jié)果解釋與參考建議醫(yī)生關(guān)鍵流程臨床端病理端26TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025血液標(biāo)本采集和處理過程標(biāo)準(zhǔn)化采血時(shí)機(jī)采血管分離時(shí)間分離過程儲存溫度MalentacchiFetal.,ClinChemLabMed,2015,MarchNormannoNetal.,Oncotarget,2017,8,727TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025分子檢測申請單設(shè)計(jì)與填寫規(guī)范化有效區(qū)別初治患者和耐藥患者，區(qū)隔檢測結(jié)果；排除不良影響因素，提供更準(zhǔn)確檢測結(jié)果；了解臨床影響因素，更好解釋初治/耐藥檢測結(jié)果；探索某些臨床因素對于耐藥檢測結(jié)果影響；完善患者信息管理，推動肺癌多學(xué)科治療；28TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025血液檢測報(bào)告信息全面化規(guī)范化的分子檢測報(bào)告信息的5項(xiàng)要素患者基本信息與樣本信息檢測項(xiàng)目與方法學(xué)描述突變位點(diǎn)命名標(biāo)準(zhǔn)化(HGVS)檢測結(jié)果的正確臨床解讀檢測報(bào)告簽名與日期√√√√√中國非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家共識(2016版)EMQNExternalQualityAssessmentSchemeforlungcaner(2015)29TM血液檢測機(jī)遇與挑戰(zhàn)1/22/2025T790M血液檢測平臺優(yōu)化關(guān)鍵問題2：

T790M血液檢測需要使用NGS等更高靈敏度檢測方法中國非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家共識(2016版)EMQNE