葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)解決方案

葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)解決方案原理葡萄糖（C6H12O6,FW:180.16）是一種主要的生物燃料源，用于產(chǎn)生通用的能量分子ATP。由于葡萄糖在代謝中的重要性，葡萄糖水平是許多代謝紊亂的關(guān)鍵診斷參數(shù)。葡萄糖水平異常與幾種代謝功能異常有關(guān)，如低血糖、高血糖和糖尿病。組織和體液（如血液和尿液）中葡萄糖水平的測(cè)量通常用于診斷葡萄糖相關(guān)疾病。還監(jiān)測(cè)血糖水平，以檢查胰島素和磺酰脲類藥物在2型糖尿病中的療效。CheKine?葡萄糖檢測(cè)試劑盒（微量法）可檢測(cè)血清、血漿、尿液、其他體液、食物、生長(zhǎng)培養(yǎng)基等，其原理是改進(jìn)的鄰甲苯胺法，利用與葡萄糖的特定顏色反應(yīng)，630nm處的吸光度與樣品中的葡萄糖濃度成正比。自備耗材·酶標(biāo)儀或可見光分光光度計(jì)（能測(cè)630nm處的吸光度）及水浴鍋·96孔板或微量玻璃比色皿·低溫離心機(jī)、水浴鍋·可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭·去離子水、PBS·勻漿器（如果是組織樣本）試劑準(zhǔn)備o-ToluidineReagent:即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。注意：o-ToluidineReagent有毒性，實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)佩戴口罩手套等防護(hù)措施。GlucoseStandard(300mg/dL):即用型；使用前，平衡到室溫；-20℃保存。Standard設(shè)置：按下表所示，用去離子水將GlucoseStandard300mg/dL稀釋為300、200、100、50、20、10、4mg/dL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。序號(hào)300mg/dL標(biāo)準(zhǔn)品體積（μL）去離子水體積（μL）標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/dL）Std.11500300Std.210050200Std.350100100Std.42512550Std.51014020Std.6514510Std.721484注意：每次實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)使用新配制的標(biāo)準(zhǔn)品；配制好的標(biāo)準(zhǔn)品需要在4h之內(nèi)使用。樣本制備注意：建議使用新鮮樣本。如果不能馬上進(jìn)行該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，樣本可在儲(chǔ)存-80℃一個(gè)月。動(dòng)物組織：稱取約0.1g樣本，加入1mLPBS，冰浴勻漿，12,000g，4℃離心5min，取上清液，置冰上待測(cè)。植物組織：稱取約0.1g樣本，加入1mLPBS搗碎，冰浴超聲波破碎5min（功率20％或200W，超聲3s，間隔7s，重復(fù)30次），12,000g，4℃離心5min，取上清液，置冰上待測(cè)。細(xì)胞或細(xì)菌：收集500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，用冷PBS清洗細(xì)胞，離心后棄上清，加入1mLPBS，冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌5min（功率20%或200W，超聲3s，間隔7s，重復(fù)30次），然后12,000g，4℃離心5min，取上清液，置冰上待測(cè)。血漿，血清和尿液（和其他生物液體）：直接檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)步驟酶標(biāo)儀或可見光分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到630nm，可見光分光光度計(jì)用去離子水調(diào)零。操作表（下述操作在EP管中操作）：試劑空白管（μL）標(biāo)準(zhǔn)管（μL）測(cè)定管（μL）上清液0025Standard0250去離子水2500o-ToluidineReagent500500500混勻，在沸水浴中加熱8min，冷水?。?℃）中冷卻4min。取200μL到96孔板或微量玻璃玻璃比色皿，檢測(cè)630nm處吸光值。空白孔記為A空，標(biāo)準(zhǔn)孔記為A標(biāo)、測(cè)定孔記為A測(cè)。計(jì)算ΔA測(cè)=A測(cè)-A空，ΔA標(biāo)=A標(biāo)-A空。注意：空白孔只需測(cè)定1次。實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本的ΔA測(cè)高于300mg/dL標(biāo)準(zhǔn)品值，將樣本用去離子水進(jìn)行稀釋后，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果需乘以稀釋系數(shù)(n)。如果樣本的ΔA測(cè)低于4mg/dL標(biāo)準(zhǔn)品值，可提高樣本量。結(jié)果計(jì)算注意：我們?yōu)槟峁┑挠?jì)算公式，包括推導(dǎo)過程計(jì)算公式和簡(jiǎn)潔計(jì)算公式。兩者完全相等。建議以加粗的簡(jiǎn)潔計(jì)算公式為最終計(jì)算公式。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為y軸，ΔA標(biāo)為x軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。Glucose濃度的計(jì)算將樣本的ΔA測(cè)代入方程得到y(tǒng)值（mg/dL）。按樣本鮮重計(jì)算Glucose含量(mg/g鮮重)=y÷100×V樣÷(W×V樣÷V樣總)×n=y÷100÷W×n按樣本體積計(jì)算Glucose含量(mg/dL)=y×V樣÷V樣×n=y×n按細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算Glucose含量(mg/104)=y÷100×V樣÷(500×V樣÷V樣總)×n=y÷50,000×nV樣：加入樣本體積，0.025mL；100：1dL=100mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入PBS體積，1mL；n：樣本稀釋倍數(shù)；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。換算：1mg/dL葡萄糖等于55.5μM，0.001%或10ppm。典型的血清/血漿葡萄糖值：70-110mg/dL。結(jié)果展示典型標(biāo)準(zhǔn)曲線[Glucose[Glucose](mg/dL)ΔA630Figure1.葡萄糖檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。相關(guān)產(chǎn)品CatalogNo.ProductNameKTB1350CheKine