外泌體研究進(jìn)展課程02外泌體的提取與純化

?第二課外泌體的提取與純化解螺旋|

知識(shí)金牌《外泌體研究進(jìn)展》課程外泌體提取的方法外泌體提取的原理

商品化的提取試劑盒不同提取方法的比較內(nèi)容常見(jiàn)問(wèn)題外泌體提取方法01解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)知識(shí)金牌外泌體提取方法超速離心法密度梯度超速離心法超濾法磁珠捕獲法多聚物沉淀法柱子純化法微流控芯片法商用化試劑盒外泌體提取原理02知識(shí)金牌超速離心法細(xì)胞上清液離心去細(xì)胞離心去碎片沉淀外泌體重懸外泌體解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)通過(guò)10萬(wàn)g的離心力而獲得外泌體的方法知識(shí)金牌密度梯度超速離心法細(xì)胞上清液離心去細(xì)胞離心去碎片沉淀外泌體純化外泌體解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)通過(guò)密度梯度介質(zhì)及10萬(wàn)g的離心力而獲得外泌體的方法磁珠捕獲法

知

識(shí)

金牌PS親和磁珠法：該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。免疫磁珠法：該方法將CD63/CD81/CD9等抗體與磁珠結(jié)合，利用抗原-抗體原理捕獲外泌體囊泡外的膜蛋白。解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌超濾原理超濾法細(xì)胞上清液0.22um過(guò)濾去除大顆粒3~10Kd超濾去除小蛋白解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)多聚物沉淀法

知

識(shí)

金牌聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀。細(xì)胞上清液離心去細(xì)胞離心去碎片

多聚物共孵育沉淀外泌體解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌柱子純化法細(xì)胞上清液樣品預(yù)處理上柱洗柱洗脫解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌微流控芯片法解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌ExoQuickMagCapture?Exosome

Isolation

KitUmibio商用化試劑盒解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)商品化的提取試劑盒03知識(shí)金牌ExoQuickSBI外泌體提取試劑盒多聚物沉淀法解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)上市最早的產(chǎn)品文獻(xiàn)支持最多的產(chǎn)品知識(shí)金牌多聚物沉淀法針對(duì)不同樣品Life

Tech外泌體提取試劑盒解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌Qiagen外泌體提取試劑盒柱子純化原理外泌體提取和RNA提取外泌體提取RNA提取樣品預(yù)處理解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌Wako外泌體提取試劑盒MagCapture? Exosome

Isolation

Kit磁珠捕獲法解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌柱子純化原理解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)101Bio外泌體提取試劑盒知識(shí)金牌Umibio外泌體提取試劑盒多聚物沉淀法+柱子純化法外泌體沉淀外泌體純化樣品預(yù)處理解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌其他提取試劑盒EVSecond柱子純化原理qEV

Exosome

Isolation柱子純化原理ExoCap

?

Streptavidin

Kit磁珠捕獲原理解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)不同提取方法的比較04解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)知識(shí)金牌不同提取方法的比較解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)知識(shí)金牌不同提取方法的比較J

Extracell

Vesicles.

2014

Sep

18;3.超速離心密度離心SBI產(chǎn)品Life產(chǎn)品解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)知識(shí)金牌不同提取方法的比較TCL:總細(xì)胞裂解液UC： 超速離心

ODG：超速密度梯度離心EQ：

SBI試劑盒提取TEI：

Life

Tech試劑盒提取Characterization

of

exosome

preparations

by

Western

blotJ

Extracell

Vesicles.

2014

Sep

18;3.不同提取方法的比較

知

識(shí)

金牌UC： 超速離心；ODG：超速密度梯度解離螺

心旋

；|

E陪Q伴：醫(yī)

生S科BI研試成劑長(zhǎng)盒提??；TEI：

Life

Tech試劑盒提取Morphological

characterization

and

quantification

of

exosome

preparations解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)知識(shí)金牌PLoS

One.2017

Jan23;12(1)Microscopic

analysis

of

the

morphology

of

isolated

exosomesUC：

超速離心Exoquick：

SBI試劑盒提取TEIR：

Life

Tech試劑盒提取解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)知識(shí)金牌不同提取方法的比較Analysis

of

the

protein

content

of

exosome

preparationsTCL:總細(xì)胞裂解液UC： 超速離心

ODG：超速密度梯度離心EQ：

SBI試劑盒提取TEI：

Life

Tech試劑盒提取J

Extracell

Vesicles.

2014

Sep

18;3.解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)知識(shí)金牌UC： 超速離心；ODG：超速密度梯度離心；EQ：

SBI試劑盒提取；TEI：

Life

Tech試劑盒提取Identification

of

the

RNA

content

in

exosome

preparations不同提取方法的比較J

Extracell

Vesicles.

2014

Sep

18;3.解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)知識(shí)金牌UC： 超速離心

ODG：超速密度梯度離心EQ：

SBI試劑盒提取Agilent

microarray-based

RNA

profiling

of

exosome

samples.J

Extracell

Vesicles.

2014

Sep

18;3.常見(jiàn)問(wèn)題05知識(shí)金牌培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，如何去除血清來(lái)源的外泌體？多數(shù)情況下，細(xì)胞在體外培時(shí)養(yǎng)需要血清，而血清中一般都含有外泌體，為避免血清對(duì)細(xì)胞外泌體的污染，可采用以下幾種方法：將細(xì)胞培養(yǎng)用的血清通過(guò)1×105g超速離心10h以去除血清外泌體；選擇無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；選擇去外泌體血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌無(wú)外泌體血清培養(yǎng)基（或者無(wú)血清培養(yǎng)基）在什么時(shí)候使用？解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)細(xì)胞在正常含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定的時(shí)間后，細(xì)胞融合度約為60%-70%時(shí)，移去原有含血清的培養(yǎng)基，換成新鮮的無(wú)外泌體血清培養(yǎng)基（或者無(wú)血清培養(yǎng)基），繼續(xù)培養(yǎng)24-48h，細(xì)胞融合度達(dá)