第二章儀器檢測技術色譜法講解

第二章儀器檢測技術色譜法一、概述1、色譜法：利用不同物質在不同的兩相中所表現的物理化學性質上的差異來進行分離、分析的方法。（1）相：指一個均勻的體系（2）固定相：固定在一定支持物上的相。在色譜分析中固定不動，對化學成分產生保留的相。（3）流動相：色譜過程中與固定相處于平衡狀態(tài)，攜帶待測組分向前移動的物質。又稱洗脫劑或展開劑2、色譜法分類（1）根據分離方法分類1）紙色譜PC2）薄層色譜TLC3）柱色譜CC4）氣相色譜法GC5）高效液相色譜法HPLC（2）根據兩相所處的狀態(tài)分類1）液—固色譜2）液—液色譜3）氣—液色譜（3）根據色譜過程的機制分類1）吸附色譜2）分配色譜3）離子交換色譜4）凝膠色譜二、薄層色譜法1、薄層色譜法：系指將供試品溶液點于薄層板上，經展開、檢視所得的色譜圖，與適宜的對照物質按同法所得的色譜圖作對比，用于藥物的鑒別、雜質檢查和含量測定。2、常用的吸附劑：硅膠、氧化鋁、聚酰胺目數：150-200目3、展開劑的選擇應具有良好的化學穩(wěn)定性，不與展開系統(tǒng)內所有的物質發(fā)生化學反應。Rf值：0.2-0.8各Rf值之差＞0.054、操作（1）薄層板制備鋪板：1份固定相+3份水（或0.5%CMC-Na）在研缽中向一個方向研磨混勻、鋪板，在空氣中自然干燥，110℃活化30分鐘，置于干燥器中備用。（2）點樣在距離薄板的一端2cm處用鉛筆輕輕地劃一條直線，作為起始線，在線上做點樣位置的記號，用毛細管0.5mm或微量注射器點樣，點樣斑點＜3mm，各點間距離1-2cm（以不影響斑點檢出），反復點樣時應吹干后再點第二次。（3）展開展開劑浸入薄層板下端的高度不宜超過0.5-1.0cm（注意：點樣點不得浸入展開劑中），展距一般約15cm。（4）顯色、檢視5、應用（1）定性西咪替丁片的薄層色譜法鑒別。鑒別方法：取本品的細粉適量（約相當于西咪替丁0.1g），加甲醇10ml，振搖使西咪替丁溶解，濾過，作為供試品溶液；另取西咪替丁對照品，加甲醇制成每1ml中含西咪替丁10mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（5∶1）為展開劑，展開后，晾干，置飽和的碘蒸氣中顯色，供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置應與對照品溶液的主斑點相同。CompanyLogo（2）雜質檢查枸櫞酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的檢查方法。方法：取本品，加甲醇制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液；另取N-甲基哌嗪對照品，加甲醇制成每1ml中含50μg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，用三氯甲烷-甲醇-氨溶液（13:5:1）為展開劑，展開后，晾干，置碘蒸氣中顯色。供試品溶液如顯與對照品溶液相應的雜質斑點，其顏色與對照品溶液的主斑點比較，不得更深。（3）定量1）目視定量法2）洗脫定量法3）薄層掃描法三、高效液相色譜法1、常用術語（1）理論塔板數（n）柱效指標（2）保留時間（t）定性依據（3）峰面積（A）定量依據（4）分離度

R應≥1.52、液相色譜儀的基本組成（1）輸液系統(tǒng)（2）進樣系統(tǒng)（3）分離系統(tǒng)常用固定相：C18柱（十八烷基硅烷鍵合硅膠）（4）檢測系統(tǒng)（5）記錄系統(tǒng)貯液器和吸濾器：貯液器:1-2L的玻璃瓶溶劑吸濾器:Ni合金，孔約0.45

m，防止顆粒物進行泵內。

用來連續(xù)監(jiān)測經色譜柱分離后的流出物的組成和含量變化的裝置。常用檢測器：紫外檢測器（最常用的通用型檢測器）、蒸發(fā)光散射檢測器（適于無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測）、熒光檢測器等色譜工作站在線顯示自動采集處理儲存自動控制

HPLC儀器3、應用（1）定性1）與純物質比較例：在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照溶液主峰的保留時間一致。2）加入純物質增加峰高（2）雜質檢查例：…..各雜質峰面積的和不得大于對照對照溶液的主峰面積。（3）定量四、氣相色譜法1、