DB4403-T 125-2020 DNA檔案制作技術(shù)規(guī)范

ICS03.120

CCSC04

DB4403

深圳市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB4403/T125—2020

DNA檔案制作技術(shù)規(guī)范

TechnicalregulationfortheproductionofDNAprofile

2020-11-23發(fā)布2020-12-01實(shí)施

深圳市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB4403/T125—2020

DNA檔案制作技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了DNA檔案制作的主要儀器和試劑、DNA檔案位點(diǎn)、制作流程等內(nèi)容。

本文件適用于深圳市公共安全領(lǐng)域中的人類DNA檔案制作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T37223—2018親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范

GB/T37226—2018法庭科學(xué)人類熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑質(zhì)量基本要求

GA/T383—2014法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范

SF/ZJD0105002—2014生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定實(shí)施規(guī)范

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

DNA檔案DNAprofile

專業(yè)人員通過采集人體血液、毛囊、指甲、唾液、口腔上皮粘膜等含有DNA的樣本，通過人類熒光標(biāo)

記STR復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)，基于互聯(lián)網(wǎng)云平臺(tái)將相關(guān)個(gè)體的DNA基因分型原始數(shù)據(jù)存儲(chǔ)于數(shù)據(jù)庫中的一種身

份識(shí)別形式。

3.2

直接擴(kuò)增directamplification

無需提取樣本（血卡、血紙、毛囊、口腔脫落細(xì)胞等）的DNA，直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增的方法，簡(jiǎn)稱直擴(kuò)。

3.3

短串聯(lián)重復(fù)序列shorttandemrepeat

存在于人類基因組DNA中的一類具有長(zhǎng)度多態(tài)性的DNA序列，其核心序列一般由2～6個(gè)堿基構(gòu)成，由

于核心序列重復(fù)次數(shù)不同致個(gè)體間存在差異。

3.4

基因座locus

基因在染色體上占有的特定位置，也稱為“基因位點(diǎn)”或“位點(diǎn)”。一條染色體上含有許多基因座。

1

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注：基因座英文的復(fù)數(shù)為loci。

3.5

引物混合物primermix

一定數(shù)量的標(biāo)記和未標(biāo)記熒光的寡核苷酸引物按一定濃度比例混合而成的溶液。

3.6

等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物allelicladder

所有位點(diǎn)常見等位基因的混合物，用其來定義待檢樣本的分型。

3.7

分子量?jī)?nèi)標(biāo)internallanesizestandard

一系列已知分子量大小、標(biāo)定特定熒光的DNA片段混合物，用于計(jì)算同一泳道內(nèi)的DNA片段分子量大

小，也稱內(nèi)標(biāo)。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件。

DNA：脫氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction）

STR：短串聯(lián)重復(fù)序列（ShortTandemRepeat）

5主要儀器和試劑要求

5.1主要儀器要求

DNA檔案制作所需的儀器應(yīng)至少包括：移液器、擴(kuò)增儀、旋渦混勻儀、小型離心機(jī)、遺傳分析儀。儀器

應(yīng)符合GA/T383—2014的要求。

5.2DNA分型試劑要求

DNA分型試劑應(yīng)符合GB/T37226—2018的要求或獲取GA認(rèn)證證書，兼容DNA數(shù)據(jù)庫建設(shè)的位點(diǎn)。

6DNA檔案位點(diǎn)

DNA檔案位點(diǎn)應(yīng)符合GB/T37223—2018、SF/ZJD0105002—2014中對(duì)STR位點(diǎn)及STR數(shù)據(jù)庫信息的要

求，推薦DNA檔案位點(diǎn)信息見附錄A。

7制作流程

DNA檔案制作分7個(gè)步驟，具體流程見圖1。

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圖1DNA檔案制作流程圖

7.1簽署知情同意書

知情同意書的簽署符合以下要求：

a)知情同意書應(yīng)含有DNA檔案的基本功能、預(yù)期目的、技術(shù)方法、風(fēng)險(xiǎn)性和必要性，DNA檔案知

情同意書范本見附錄B；

b)本人、監(jiān)護(hù)人或委托人理解并同意知情內(nèi)容，簽署知情同意書；

c)核實(shí)委托人身份信息并登記，本人簽署知情同意書，可參考附錄B；

d)填寫采樣卡、樣本袋上有關(guān)個(gè)人信息（身份證號(hào)、聯(lián)系方式等個(gè)人信息必填）。

7.2樣本采集

7.2.1概述

DNA檔案常用人的血痕、口腔拭子等，但樣本不限于此，理論上只要含有DNA均可作為樣本。樣本間

單獨(dú)包裝，不能互相接觸，以免造成污染。另重復(fù)采集多個(gè)樣本，分別用于檢驗(yàn)、儲(chǔ)存和核驗(yàn)。

7.2.2血痕樣本

DNA檔案中常用的血痕樣本的采集過程如下：

a)準(zhǔn)備專用采血卡、醫(yī)用紗布、采血濾紙、醫(yī)用棉簽、采血針、樣本袋，并在樣本袋上標(biāo)明姓名、

身份證號(hào)等信息；

b)用酒精消毒手指、耳垂或足跟等采血部位，用采血針扎破，擠出血滴；

c)依次擠出2～3滴黃豆大小的血滴，依次散開摁在對(duì)應(yīng)樣本載體上，自然陰干后放入對(duì)應(yīng)的樣

本袋中；

d)將血痕自然陰干，不應(yīng)使用吹風(fēng)機(jī)吹干、暖氣烘干或太陽曬干；不同的樣本不能互相接觸，以

免造成樣本污染。為避免感染或其他意外，采樣前必須清潔雙手，采血針單人單用，采樣后注

意止血消毒；

e)記錄采樣人和被采樣人的確認(rèn)程序。

7.2.3口腔拭子樣本

DNA檔案中常用的口腔拭子樣本的采集過程如下：

a)用清水漱口，保證口腔內(nèi)無食物殘?jiān)?/p>

b)用醫(yī)用棉簽，伸進(jìn)口腔，在口腔內(nèi)側(cè)兩頰處反復(fù)擦拭至少15次（不時(shí)旋轉(zhuǎn)棉簽）；

c)取出棉簽，將棉簽放在干凈處自然陰干；

d)將陰干的棉簽放入對(duì)應(yīng)的樣本袋中，在樣本袋上標(biāo)明樣本信息；

e)記錄采樣人和被采樣人的確認(rèn)程序。

7.3PCR擴(kuò)增

7.3.1試劑準(zhǔn)備

分型試劑包括PCR反應(yīng)液、引物混合物、等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物、分子量?jī)?nèi)標(biāo)、陽性對(duì)照、分子級(jí)水、

試劑說明書等。取出試劑，室溫融化，振蕩混勻，短暫離心備用。

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7.3.2檢材準(zhǔn)備

首先應(yīng)在不損傷檢材的前提下，對(duì)檢材上的明顯污垢、灰塵等雜質(zhì)進(jìn)行清潔，再根據(jù)樣本類型的不

同使用對(duì)應(yīng)的工具，如打孔器、手術(shù)剪等取適量檢材直接放入PCR擴(kuò)增管中備用。

7.3.3PCR擴(kuò)增

PCR擴(kuò)增應(yīng)在符合GA/T383—2014要求的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，其具體步驟如下：

a)將完全融化后的PCR反應(yīng)液和引物混合物漩渦震蕩，短暫離心后使用；

b)PCR反應(yīng)體系及PCR擴(kuò)增程序按照試劑盒說明書操作；

c)擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)該避光保存在溫度低于4℃的條件下，以防熒光淬滅以及DNA片段降解。

7.4電泳檢測(cè)

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的毛細(xì)管電泳檢測(cè)應(yīng)在符合遺傳分析儀制造商要求的環(huán)境中進(jìn)行，其步驟如下：

a)預(yù)熱遺傳分析儀，使?fàn)t溫至60℃；

b)根據(jù)不同型號(hào)及試劑本身特點(diǎn)設(shè)置分析儀染料組合、上樣電壓、上樣時(shí)間等參數(shù)；

c)電泳體系按照對(duì)應(yīng)試劑盒說明書操作；

d)初次使用新試劑應(yīng)對(duì)儀器進(jìn)行光譜校正。

7.5DNA分型

對(duì)遺傳分析儀產(chǎn)生的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行DNA分型的步驟如下：

a)使用與檢測(cè)儀器配套的軟件進(jìn)行DNA分型，如為初次使用應(yīng)導(dǎo)入對(duì)應(yīng)試劑盒提供的Panel，

bins，Analysismethod，以及內(nèi)標(biāo)片段長(zhǎng)度；

b)導(dǎo)入遺傳分析儀產(chǎn)生的原始數(shù)據(jù)，對(duì)DNA進(jìn)行分型。

7.6DNA檔案數(shù)據(jù)儲(chǔ)存

DNA檔案數(shù)據(jù)儲(chǔ)存符合以下要求：

a)DNA檔案應(yīng)包含姓名、樣本編號(hào)、身份證號(hào)碼（如有）、DNA檔案生成日期及DNA分型信息等

內(nèi)容，示例見附錄C；

b)DNA檔案信息化數(shù)據(jù)應(yīng)存儲(chǔ)于有安全性保障的數(shù)據(jù)庫或存儲(chǔ)于擁有不少于3072個(gè)字節(jié)內(nèi)存的

芯片卡，以便發(fā)放給本人使用。

7.7DNA分型數(shù)據(jù)查詢

可選擇以下三種方式之一，用于DNA檔案結(jié)果告知：

a)紙質(zhì)報(bào)告；

b)電子報(bào)告；

c)建設(shè)專門網(wǎng)站，登錄查詢。

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A

附錄A

（資料性）

推薦DNA檔案位點(diǎn)

A.1常染色體STR位點(diǎn)

DNA檔案推薦使用的常染色體STR位點(diǎn)見表A.1。

表A.1常染色體STR位點(diǎn)

序號(hào)染色體位點(diǎn)序號(hào)染色體位點(diǎn)

1chr1D1S165618chr10D10S1435

2chr2D2S133819chr11D11S2368

3chr2D2S44120chr11TH01

4chr2TPOX21chr12D12S391

5chr3D3S135822chr12vWA

6chr3D3S304523chr13D13S317

7chr4FGA24chr13D13S325

8chr5D5S81825chr16D16S539

9chr5CSF1PO26chr15D15S659

10chr6D6S014327chr16PentaE

11chr6D6S47728chr18D18S51

12chr6SE3329chr18D18S1364

13chr6D6S104330chr19D19S253

14chr7D7S82031chr19D19S433

15chr8D8S117932chr21D21S11

16chr8D8S113233chr21PentaD

17chr10D10S124834chr22D22S1045

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A.2Y—STR位點(diǎn)

DNA檔案推薦使用的Y—STR位點(diǎn)見表A.2。

表A.2Y—STR位點(diǎn)

序號(hào)位點(diǎn)序號(hào)位點(diǎn)序號(hào)位點(diǎn)

1DYS19(=DYS394)21DYS45841DYS587

2DYS385a22DYS459a42DYS593

3DYS385b23DYS459b43DYS596

4DYS38824DYS46044DYS617

5DYS389I25DYS48145DYS622

6DYS389II26DYS50846DYS626

7DYS39027DYS51047DYS627

8DYS39128DYS51848DYS630

9DYS392*29DYS52049DYS635

10DYS393*30DYS52250DYS643

11DYS437*31DYS527a(=DYS401a)51DYS645

12DYS438*32DYS527b(=DYS401b)52DYS713

13DYS439*33DYS53153DYS387S1a

14DYS44334DYS53354DYS387S1b

15DYS44435DYS54955DYS404S1a

16DYS44636DYS55256DYS406S1b

17DYS44737DYS55757Y—GATA—A10

18DYS44838DYS413b58Y—GATA—H4

19DYS44939DYS57059Y—indel

20DYS45640DYS57660Amelogenin*

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A.3X—STR位點(diǎn)

DNA檔案推薦使用的X—STR位點(diǎn)見表A.3。

表A.3X—STR位點(diǎn)

序號(hào)位點(diǎn)序號(hào)位點(diǎn)

1DXS10119DXS9902

2DXS98120DXS10074

3DXS678921DXS10075

4DXS679522DXS10079

5DXS680023DXS10101

6DXS680324DXS10103

7DXS680725DXS10134

8DXS680926DXS10135

9DXS681027DXS10146

10DXS713228DXS10148

11DXS713329DXS10159

12DXS742330DXS10162

13DXS742431DXS10164

14DXS837732HPRTB

15DXS837833GATA165B12

16DXS989534GATA172D05

17DXS989835GATA31E08

18DXS990736Amelogenin

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附錄B

（資料性）

DNA檔案知情同意書示例

DNA檔案知情同意書示例見圖B.1和圖B.2。

DNA檔案知情同意書

第一部分DNA檔案須知

1.DNA檔案是通過采集含DNA的生物樣本，由有資質(zhì)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)，采用熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)和毛細(xì)管電泳分型技術(shù)

獲得STR分型，將分型電子數(shù)據(jù)保存到國(guó)家基因庫的一種身份識(shí)別的形式。

2.該DNA檔案利用DNA序列中的遺傳標(biāo)記，可以輔助個(gè)人身份識(shí)別和個(gè)體DNA特征，且此類遺傳標(biāo)記保持終身不變且具有個(gè)

體特異性。

3.DNA檔案內(nèi)容僅針對(duì)非編碼區(qū)的中立DNA信息，不含功能基因。

4.DNA檔案結(jié)果報(bào)告屬于專家提供的專業(yè)性意見，其是否被采信取決于相關(guān)機(jī)構(gòu)的審查和判斷，檢測(cè)機(jī)構(gòu)無權(quán)干涉。

5.本檢測(cè)的DNA樣本，如果由于取樣不當(dāng)、標(biāo)簽條碼脫落或模糊不清，運(yùn)輸不當(dāng)（如樣本管破裂）、樣本混淆、污染、寄送

延誤超時(shí)以及不可抗力因素所致樣品耗損或難以辨識(shí)，可能影響本次檢測(cè)結(jié)果或?qū)е卤敬螜z測(cè)無法進(jìn)行，應(yīng)進(jìn)行再次樣本采

集。

6.DNA分型結(jié)果報(bào)告僅說明個(gè)體特征，不得用于任何其他商業(yè)用途。用于司法裁判目的人類基因組分型程序，必須采用司法

檢驗(yàn)程序。結(jié)果僅對(duì)樣本負(fù)責(zé)，檢測(cè)機(jī)構(gòu)不承擔(dān)連帶責(zé)任。

7.如受檢者中途反悔退出本檢測(cè)，本檢測(cè)中所有涉及受檢者的信息及剩余樣本將被銷毀，不再退回。

8.檢測(cè)機(jī)構(gòu)將保障受檢者在樣本檢測(cè)中數(shù)據(jù)的存儲(chǔ)安全。

9.報(bào)告查詢，請(qǐng)登錄XXXXXX。

圖B.1DNA檔案知情同意書示例第一部分

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第二部分信息確認(rèn)與簽名

1.我已充分了解DNA檔案的性質(zhì)、合理的預(yù)期目的、風(fēng)險(xiǎn)性和必要性，并已知曉知情同意書的相關(guān)內(nèi)容，經(jīng)本人及家屬慎重

考慮，我愿意進(jìn)行基因分型檢測(cè)，并承擔(dān)因檢測(cè)帶來的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。

2.我知道此報(bào)告結(jié)果屬于專家提供的專業(yè)性意見，其是否被采信取決于相關(guān)機(jī)構(gòu)的審查和判斷，檢測(cè)機(jī)構(gòu)無權(quán)干涉。我已知

曉上述檢測(cè)失敗或未達(dá)預(yù)期目的等可能情形。

3.對(duì)檢測(cè)結(jié)果有疑問，可咨詢檢測(cè)機(jī)構(gòu)。

4.我承諾提供的相關(guān)信息真實(shí)可靠，并授權(quán)檢驗(yàn)人員及檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)檢測(cè)涉及的生物樣本等醫(yī)療廢棄物進(jìn)行處理。我同意授權(quán)

檢測(cè)機(jī)構(gòu)在不透露本人隱私信息的前提下，將檢測(cè)所獲取的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用于檢測(cè)技術(shù)改進(jìn)、科學(xué)成果的數(shù)據(jù)積累。

5.如檢測(cè)中途退出，本檢測(cè)中與我相關(guān)的所有信息及剩余樣本將被銷毀，不再退回。

受檢者或其監(jiān)護(hù)人簽名：___________________與受檢者關(guān)系：_________________

簽名日期：________年____月_____日

采樣人簽名：_____________________________簽名日期：________年____月_____日

圖B.2DNA檔案知情同意書示例第二部分

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附錄C