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袋鼠皰疹病毒感染檢疫技術(shù)規(guī)范26.16質(zhì)控物質(zhì):陽性質(zhì)控品為含MaHV目的基因的質(zhì)粒(序列參考信息見附錄C);陰性質(zhì)控品為不6.17PCR引物序列:上游引物UL27-F2.3:5'-TGTTTCGCATGTTTG下游引物UL27-R2.3:5'-AAMCCCACAGTGTTCCACCC-s引物用ddH?O溶解至10gmol/L后,保存于-20℃?zhèn)溆?。上游引物UL27-F1:5'-GGGAYTGGGTTCCCA下游引物UL27-R1:5'-TGGTMGTGAAGGTGGTRGATA-3':探針序列UL27-probe:FAM-TGGCAAGAAGTCGATGAGATGCTCC引物和探針分別用ddH?O溶解至10pimol/L后,保存于-20℃?zhèn)溆谩?.4分析天平(感量0.001g)。8.1根據(jù)GB/T18088確定采樣動物數(shù)量。3圈并蘸取少量糞便,放人盛有2mL滅菌生理鹽水的采樣管中。3000r/min4℃離心10min,取上清20%懸液(質(zhì)量濃度),凍融2次~3次,4000r/min4℃離心10min.取上清備用。9.1.2加200μL三氯甲烷,蓋9.1.5加入1000gL預(yù)冷的75%乙醇緩慢倒轉(zhuǎn)洗滌沉淀。9.1.64℃12000r/min離心15min,棄上清,將離心管倒置于吸水紙上,室溫干燥沉淀5min~9.1.7加入40pL.去離子水,4000r/min離心5s,室溫溶解10min,立即使用或-70℃保存?zhèn)溆谩?.1.8應(yīng)設(shè)立陽性和陰性對照樣品,同步進行核酸提取。包含的成分見表1。充分混勻,向每個反應(yīng)管中各分裝22gL,最后加入核酸提取液3μL。試驗應(yīng)設(shè)立陽性、陰性和空白對照。以MaHV陽性樣品或含有MaHV目的基因的質(zhì)粒提取的核將PCR反應(yīng)管瞬時離心后,置于PCR儀,按以下程序進行擴增:95℃預(yù)變性10min:95℃變性

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