GB/T 45221-2025化學品EASZY試驗利用轉基因tg(cyp19a1b:GFP)斑馬魚胚胎通過雌激素受體檢測內分泌活性物質

ICS13300

CCSA8.0

中華人民共和國國家標準

GB/T45221—2025

化學品EASZY試驗利用轉基因tg

c19a1bGFP斑馬魚胚胎通過

(yp:)

雌激素受體檢測內分泌活性物質

Chemicals—EASZYassa—Detectionofendorineactivesubstancesactin

y,g

throuhestroenrecetorsusintanseictc19a1bGFPzebrafish

ggp,ggg(yp:)

embryos

2025-01-24發(fā)布2025-05-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標準化管理委員會

GB/T45221—2025

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

術語和定義縮略語

3、………………………1

試驗原理

4…………………2

受試物信息

5………………3

能力驗證化學品

6…………………………3

試驗準備

7…………………4

試驗程序

8…………………6

數據分析和結果評價

9……………………7

質量保證與質量控制

10……………………8

結果報告

11…………………8

附錄資料性基因構造

A()tg(cyp19a1b:GFP)………10

附錄資料性通過誘導表達來測定化學品產生雌激素活性的途徑

B()GFP………11

附錄資料性試驗流程

C()EASZY……………………13

附錄資料性試驗成像分析

D()EASZY………………15

附錄資料性后轉基因斑馬魚體內熒光成像

E()96h…………………16

附錄資料性轉基因斑馬魚的體內成像廣角熒光顯微鏡

F():………18

附錄資料性轉基因斑馬魚的體內成像中圖像分析宏的使用示例

G():ImageJ……19

附錄資料性數據報告和分析

H()………………………24

附錄資料性數據統(tǒng)計分析的流程圖

I()………………31

附錄資料性試驗中的濃度反應關系示例

J()EASZY-………………32

參考文獻

……………………38

Ⅰ

GB/T45221—2025

前言

本文件按照標準化工作導則第部分標準化文件的結構和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任

。。

本文件由全國危險化學品管理標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC251)。

本文件起草單位廣東省科學院微生物研究所廣東省微生物分析檢測中心生態(tài)環(huán)境部固體廢物

:()、

與化學品管理技術中心廣東省生物技術研究院廣東省實驗動物監(jiān)測中心中檢科健天津檢驗檢測

、()、()

有限責任公司清華大學完美廣東日用品有限公司

、、()。

本文件主要起草人梅承芳許玫英許玉潔李建軍竇從從周小紅豐時運王鵬高亮劉洪英

:、、、、、、、、、、

曾國驅劉超武周麗麗劉純新肖億金高彩霞袁藝

、、、、、、。

Ⅲ

GB/T45221—2025

引言

利用轉基因斑馬魚胚胎通過雌激素受體檢測內分泌活性物質試驗

EASZY[tg(cyp19a1b:GFP)]

是一種基于機制的體內篩選試驗旨在通過誘導啟動子驅動的綠色熒光蛋白的表

,cyp19a1b(GFP)

達檢測作為雌激素受體激動劑的內分泌活性物質試驗可用于檢測化學物質對轉基因tg

,。EASZY

斑馬魚胚胎暴露的雌激素活性附錄描述了用于建立轉基因品系的基因

(cyp19a1b:GFP)96h。A

結構

。

基因編碼的腦芳香化酶是一種負責從雄激素中合成雌激素的酶在魚類中

cyp19a1b,。,cyp19a1b

基因的表達僅限于放射狀膠質細胞它是從胚胎期到成年期產生新神經元的祖代細胞基因

,。cyp19a1b

的轉錄需要被激活的雌激素受體結合于雌激素反應元件的配體復合物以及位于

(ERs)、(EREs)-ER

基因啟動子區(qū)域的半個共同參與調控還需要與膠質細胞反應元件

cyp19a1bEREs。cyp19a1bx

結合的膠質細胞特異性因子與序列的協同作用在基因的細胞特異性

(GxRE)ERE。GxREcyp19a1b

調控及其受雌激素的調控中發(fā)揮著重要作用

。

除雌激素外類固醇雄激素也可調控基因的轉錄活性對于可芳構化的雄激素如睪

,cyp19a1b。(

酮這種調控預示著它們可被芳構化為雌激素隨后與結合并誘導的表達而不可芳構

),,ERscyp19a1b。

化的雄激素中酮睪酮無法誘導的表達二氫睪酮則已被證實具有雌激素樣活

,11cyp19a1b;5α-(DHT)

性它通過依賴性途徑誘導的表達這可能是由于通過羥基類固醇脫氫酶的作

,ERcyp19a1b。DHT3β-

用轉化為一種已知的雌激素類固醇二醇見附錄

———β-(B)。

在斑馬魚胚胎的端腦視前區(qū)和下丘腦中可檢測到和的表達但對于本文件中

、ERβ1ERβ2mRNA,

所處發(fā)育階段的斑馬魚胚胎在其大腦中未檢測到的轉錄體這表明和或可驅動芳

,ERα。ERβ1/ERβ2

香化酶的表達其中斑馬魚比對天然和合成雌激素具有更高的親和力這與已報道的人

B,ERβ2ERα,

亞型對這些物質的親和力不同

ERs。

在轉基因tg斑馬魚中完美地模擬了斑馬魚大腦中內源性的表

(cyp19a1b:GFP),GFPcyp19a1b

達因此測量tg胚胎中的報告基因可用于評估化學品誘導基因表

。,(cyp19a1b:GFP)GFP,cyp19a1b

達的能力

。

試驗技術已成功應用于測試一批化合物包括天然和合成激素藥物農藥工業(yè)化學

EASZY,、、、

品用于評估它們在tg斑馬魚胚胎中誘導的能力

,(cyp19a1b:GFP)GFP。

經濟合作與發(fā)展組織修訂后的指南文件已將試驗確定為內分泌

(OECD)No.150EASZYOECD

評估概念框架中的級魚類篩選試驗即一種提供關于特定內分泌干擾機制通路數據的體內試驗作

3,/。

為級篩選試驗試驗可通過是否誘導由調控的啟動子驅動的來識別

3,EASZYERcyp19a1bGFP,ER

信號通路上的活性和非活性受試物質試驗數據不宜用于化學品的風險評估

。。

Ⅳ

GB/T45221—2025

化學品EASZY試驗利用轉基因tg

c19a1bGFP斑馬魚胚胎通過

(yp:)

雌激素受體檢測內分泌活性物質

1范圍

本文件描述了利用轉基因tg斑馬魚胚胎通過雌激素受體檢測內分泌活性物質的

(cyp19a1b:GFP)

試驗方法包括試驗原理受試物信息能力驗證化學品試驗準備試驗程序數據分析和結果

EASZY,、、、、、

評價質量保證與質量控制結果報告

、、。

本文件適用于篩選和評估化學品中的內分泌活性物質

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文

。,

件僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于

,;,()

本文件

。

水質物質對蚤類大型蚤急性毒性測定方法

GB/T13266()

3術語和定義縮略語

、

31術語和定義

.

下列術語和定義適用于本文件

。

311

..

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