全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范2009年修訂版

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

NationalGuidelineforDetectionofHIV/AIDS

（2009年修訂版）

中國(guó)疾病預(yù)防控制中心

二OO九年九月

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

NationalGuidelineforDetectionofHIV/AIDS

（2009年修訂版）

中國(guó)疾病預(yù)防控制中心

二OO九年九月

II

、乙、?

刖S

艾滋病在我國(guó)的流行已有二十余年，隨著感染者不斷增加、感染人群的變化和臨

床病人的日益增多，艾滋病檢測(cè)工作量逐漸加大，新的監(jiān)測(cè)和檢測(cè)需求也不斷增加，

艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室已遍及全國(guó)各級(jí)醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、采供血、婦幼保健機(jī)構(gòu)，出

入境檢驗(yàn)檢疫、軍隊(duì)等各個(gè)系統(tǒng)。近幾年，為了適應(yīng)基層艾滋病檢測(cè)的需要，一些沒(méi)

有條件建立規(guī)范的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院，也陸續(xù)建起了艾滋病檢測(cè)點(diǎn)。遍

布全國(guó)的實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)為艾滋病防治工作提供了重要而堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。在新的形勢(shì)下，為

了更加有效地支持艾滋病監(jiān)測(cè)、咨詢檢測(cè)（包括VCT和PITC）、新生兒感染早期診斷

和抗病毒治療工作，根據(jù)《關(guān)于艾滋病抗病毒治療管理工作的意見(jiàn)》、《中國(guó)預(yù)防與控

制艾滋病中長(zhǎng)期規(guī)劃（1998—2010年）》和“四免一關(guān)懷”等重要方針政策，在向各

省、市征求意見(jiàn)基礎(chǔ)上，在“全國(guó)艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室審評(píng)和技術(shù)指導(dǎo)專家組”的參與

下，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性艾滋病預(yù)防控制中心對(duì)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2004

年版）》進(jìn)行修改、增補(bǔ)和完善后，制定出《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年版）》，

使其既能滿足目前艾滋病檢測(cè)工作的實(shí)際需要，又能體現(xiàn)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展。

本次主要對(duì)以下兒個(gè)方面內(nèi)容進(jìn)行了修改、增補(bǔ)和完善：（1）在樣品的采集和處

理中，增加了濾紙干血斑樣品、快速檢測(cè)樣品的采集和處理，用于CD4+/CD8+T淋巴

細(xì)胞測(cè)定樣品、尿液和唾液樣品的采集和處理；（2）在HIV抗體檢測(cè)中，增加了免疫

熒光法和化學(xué)發(fā)光法，進(jìn)一步明確了不同情況下的檢測(cè)策略;（3）在HIV核酸檢測(cè)中，

增加了HIV感染產(chǎn)婦所生嬰兒HIV感染早期診斷檢測(cè)流程和適用于窗口期的集合核酸

檢測(cè)方法；（4）根據(jù)臨床治療需求，增加了HIVT的耐藥檢測(cè)；（5）進(jìn)一步完善了艾

滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)和艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理，使其更加符合目前艾滋病

防治工作的需求，更加具有可操作性；（6）考慮到技術(shù)發(fā)展和新的需求，增加了HIV-1

新近感染檢測(cè)和HIVT的分離培養(yǎng)技術(shù)。

修訂后的《規(guī)范》共九章，包括：樣品的采集和處理、HIV抗體檢測(cè)、HIVT抗

原檢測(cè)、HIV核酸檢測(cè)、HIV-1耐藥檢測(cè)、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)、HIV-1的

分離培養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)室生物安全、艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理。

本《規(guī)范》上報(bào)衛(wèi)生部，經(jīng)獲準(zhǔn)由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心發(fā)至全國(guó)艾滋病檢測(cè)實(shí)

in

驗(yàn)室及有關(guān)單位。本《規(guī)范》將為國(guó)家、衛(wèi)生部與財(cái)政部等部委下發(fā)的關(guān)于艾滋病防

治工作的各項(xiàng)政策法規(guī)的有效實(shí)施提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持，并具體指導(dǎo)艾滋病檢測(cè)實(shí)

驗(yàn)室技術(shù)人員開展日常工作。

本《規(guī)范》起草單位：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心。

本《規(guī)范》參加編寫單位：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院、上海市疾病預(yù)防控

制中心、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)、北京出入境檢驗(yàn)檢疫局、北京市疾病預(yù)防控制中心、四川省

疾病預(yù)防控制中心、浙江省疾病預(yù)防控制中心、中國(guó)生物制品檢定所、衛(wèi)生部臨床檢

驗(yàn)中心、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院、天津市疾病預(yù)防控制中心、河南省疾病預(yù)防控制中心、福

建省疾病預(yù)防控制中心。

本《規(guī)范》編寫組人員：蔣巖、汪寧、李敬云、鐘平、康來(lái)儀、尚紅、邵一鳴、

肖瑤、朱紅、邢文革、姚均、潘品良、邱茂峰、邢玉蘭、秦光明、郭志宏、王佑春、

申子瑜、季陽(yáng)、強(qiáng)來(lái)英、朱效科、王哲、嚴(yán)延生、朱關(guān)福。

本《規(guī)范》主要國(guó)際咨詢專家：世界衛(wèi)生組織OsborneConnie,張嵐。美國(guó)疾病

預(yù)防控制中心GAP項(xiàng)目BulteryMarc,Chin-YihOu?？肆诸D基金中國(guó)艾滋病項(xiàng)目

TrevorPetero

本《規(guī)范》編寫工作聯(lián)系人：肖瑤

本《規(guī)范》自發(fā)布之日起實(shí)施，同時(shí)終止《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2004年版）》。

本《規(guī)范》適用于全國(guó)所有的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。

本《規(guī)范》解釋權(quán)屬于中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。

IV

目錄

第一章樣品的采集和處理.............................................................1

1范圍...........................................................................1

2規(guī)范性引用文件................................................................1

3樣品種類及相應(yīng)的用途..........................................................1

4操作步驟.......................................................................1

4.1采樣前準(zhǔn)備.............................................................1

4.2采集和處理樣品.........................................................2

4.3樣品的保存..............................................................3

4.4樣品的運(yùn)送..............................................................3

4.5樣品的接收..............................................................3

第二章HIV抗體檢測(cè)..................................................................5

1范圍...........................................................................5

2規(guī)范性引用文件................................................................5

3HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求.......................................................5

4HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn).....................................................5

4.1HIV抗體檢測(cè)的目的....................................................5

4.2HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn).....................................................5

5以診斷為目的的檢測(cè)策略.......................................................6

5.1常規(guī)HIV抗體檢測(cè)的方法和程序.........................................6

5.2其它HIV抗體檢測(cè)的方法和程序.........................................9

6以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)策略.......................................................13

6.1適用范圍..............................................................13

6.2檢測(cè)程序及結(jié)果報(bào)告.....................................................13

7以血液篩查為目的的檢測(cè)策略..................................................14

8艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)信息上報(bào)................................................14

9質(zhì)量控制......................................................................15

V

9.1抗體檢測(cè)的統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制.........................................15

9.2快速檢測(cè)質(zhì)控...........................................................18

第三章HIV-1抗原檢測(cè)..............................................................19

1范圍.........................................................................19

2規(guī)范性引用文件...............................................................19

3HIV-1P24抗原檢測(cè)的意義....................................................19

4實(shí)驗(yàn)室要求...................................................................19

5檢測(cè)方法及程序..............................................................19

5.1試劑...................................................................19

5.2樣品...................................................................19

5.3定性檢測(cè)...............................................................19

5.4定量檢測(cè)...............................................................19

5.5結(jié)果報(bào)告和解釋........................................................20

6質(zhì)量保證和質(zhì)量控制...........................................................20

第四章HIV核酸檢測(cè)................................................................21

1范圍.........................................................................21

2規(guī)范性引用文件..............................................................21

3核酸檢測(cè)的意義..............................................................21

3.1早期診斷.............................................................21

3.2疑難樣本的輔助診斷...................................................21

3.3遺傳變異監(jiān)測(cè)..........................................................21

3.4耐藥性監(jiān)測(cè)............................................................22

3.5病程監(jiān)控及預(yù)測(cè)........................................................22

3.6指導(dǎo)抗病毒治療及療效判定.............................................22

4HIV核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求......................................................22

4.1實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和功能.....................................................22

4.2實(shí)驗(yàn)室人員和要求......................................................23

4.3實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和設(shè)備......................................................23

4.4實(shí)驗(yàn)室生物安全........................................................23

4.5防止實(shí)驗(yàn)室核酸殘余(Carry-over)污染措施............................23

4.6廢棄物處理制度........................................................24

5HIV核酸檢測(cè)方法及程序.......................................................24

5.1HIV核酸定性檢測(cè)......................................................24

5.2HIV核酸定量檢測(cè)......................................................25

5.3集合核酸定性檢測(cè)(PoolingPCR)....................................27

5.4嬰幼兒HIV感染核酸檢測(cè)...............................................28

6質(zhì)量保證和質(zhì)量控制..........................................................29

6.1實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和環(huán)境......................................................29

6.2儀器設(shè)備質(zhì)量控制......................................................30

6.3檢測(cè)過(guò)程質(zhì)量控制......................................................30

6.4外部質(zhì)量控制.........................................................30

第五章HIV-1耐藥檢測(cè).............................................................31

1范圍..........................................................................31

2規(guī)范性引用文件..............................................................31

3HIV-1耐藥檢測(cè)的意義.........................................................31

3.1耐藥監(jiān)測(cè).............................................................31

3.2耐藥檢測(cè)..............................................................31

4HIV-1耐藥檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求.....................................................31

4.1實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū)........................................................31

4.2人員...................................................................31

4.3設(shè)施和設(shè)備............................................................31

5HIV-1耐藥檢測(cè)方法及程序....................................................32

5.1方法....................................................................32

5.2試劑............................................................32

5.3擴(kuò)增目的基因片段及測(cè)序...............................................32

5.4耐藥分析和結(jié)果報(bào)告....................................................33

6質(zhì)量保證與質(zhì)量控制..........................................................33

VII

6.1室內(nèi)質(zhì)控................................................................33

6.2實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證..........................................................34

第六章CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè).................................................35

1范圍.........................................................................35

2規(guī)范性引用文件...............................................................35

3CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的意義............................................35

4CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求........................................36

4.1人員...................................................................36

4.2設(shè)施和設(shè)備.............................................................36

4.3功能分區(qū)...............................................................36

5常規(guī)CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的方法和程序................................36

5.1樣品采集、運(yùn)輸和接收..................................................36

5.2方法...................................................................37

5.3實(shí)驗(yàn)資料的記錄........................................................37

5.4結(jié)果報(bào)告...............................................................37

6質(zhì)量控制.....................................................................38

第七章HIV-1的分離培養(yǎng)...........................................................39

1范圍..........................................................................39

2規(guī)范性引用文件..............................................................39

3HIV-1分離的意義.............................................................39

4實(shí)驗(yàn)室要求...................................................................39

4.1實(shí)驗(yàn)室.................................................................39

4.2設(shè)備...................................................................39

4.3材料...................................................................39

5HIV-1分離的方法及程序.......................................................39

6質(zhì)量保證和質(zhì)量控制...........................................................40

第八章實(shí)驗(yàn)室生物安全..............................................................41

VIII

1范圍..........................................................................41

2規(guī)范性引用文件..............................................................41

3HIV的生物危害...............................................................41

4HIV相關(guān)檢測(cè)的生物安全級(jí)別..................................................41

5生物安全保證措施............................................................41

5.1建立安全制度..........................................................41

5.2培訓(xùn)和管理............................................................42

5.3個(gè)人保健和防護(hù).......................................................42

5.4安全操作..............................................................43

5.5使用利器注意事項(xiàng).....................................................44

6污染物處理...................................................................44

7意外事故處理.................................................................44

8職業(yè)暴露后預(yù)防..............................................................45

8.1局部急救處理.........................................................46

8.2對(duì)暴露感染的危險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估.............................................46

8.3確定是否需要藥物預(yù)防及其方案........................................46

8.4暴露后預(yù)防方案........................................................48

8.5暴露后預(yù)防的時(shí)間.....................................................48

8.6暴露后預(yù)防的監(jiān)測(cè).....................................................48

8.7藥品儲(chǔ)備點(diǎn)的建立及管理...............................................49

第九章艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理...................................................50

1范圍.........................................................................50

2規(guī)范性引用文件...............................................................50

3質(zhì)量保證.....................................................................50

3.1行政支持...............................................................50

3.2人員培訓(xùn)...............................................................50

3.3環(huán)境條件...............................................................50

3.4樣品采集、運(yùn)送和處理..................................................51

3.5檢測(cè)方法和試劑的選擇.................................................51

IX

3.6設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)........................................................51

3.7實(shí)驗(yàn)耗材...............................................................52

3.8文件和文件管理........................................................52

4質(zhì)量控制.....................................................................53

5質(zhì)量評(píng)價(jià).....................................................................53

5.1內(nèi)部質(zhì)量評(píng)價(jià)..........................................................54

5.2外部質(zhì)量評(píng)價(jià)...........................................................54

6診斷試劑臨床質(zhì)量評(píng)估........................................................56

6.1評(píng)估目的...............................................................57

6.2參考試劑的選擇........................................................57

6.3考評(píng)盤的制備..........................................................57

6.4考評(píng)程序...............................................................57

附表1HIV抗體篩查報(bào)告...........................................................59

附表2HIV抗體復(fù)檢檢測(cè)單.........................................................60

附表3HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告單.....................................................61

附表4HIV抗體替代策略檢測(cè)報(bào)告單................................................62

附表5流行病學(xué)監(jiān)測(cè)HIV抗體檢測(cè)報(bào)告單............................................63

附表6艾滋病病毒抗體檢測(cè)數(shù)及陽(yáng)性人數(shù)統(tǒng)計(jì)報(bào)表....................................64

附表7CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果報(bào)告................................................65

附表8HIV-1耐藥基因型檢測(cè)報(bào)告..................................................66

附表9艾滋病職業(yè)暴露個(gè)案登記表...................................................68

附表10艾滋病防治工作人員職業(yè)暴露事故匯總表.....................................71

X

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

第一章樣品的采集和處理

1范圍

本章規(guī)定了用于人免疫缺陷病毒（HIV）檢測(cè)的全血、血清、血漿、細(xì)胞、唾液、尿液以及

濾紙干血斑（DBS）樣品的采集利處理方法，適用于HIV抗體檢測(cè)、抗原檢測(cè)、核酸檢測(cè)、耐藥

檢測(cè),CD4+和CD8+T淋巳細(xì)胞測(cè)定和HIV分離培養(yǎng)。

2規(guī)范性引用文件

《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS293-2008

《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)質(zhì)量保證指南（試行）》（中國(guó)疾病預(yù)

防控制中心，2006年2月）

《HIV-1病毒載量測(cè)定及質(zhì)量保證指南（試行）》（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2008年2月）

GuidelinesforUsingHIVTestingTechnologiesinSurveillanceWHO/CDS/CSR/EDC/2008

《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》，衛(wèi)生部第45號(hào)令2006

年2月1日

3樣品種類及相應(yīng)的用途

3.1全血、血清、血漿、唾液、尿液以及DBS樣品可用于HIV抗體檢測(cè)。

3.2抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定。

3.3血漿可用于H1VT病毒我量、基因型及耐藥檢測(cè)。DBS樣品可用于H1V-1基因型及耐藥檢測(cè)。

3.4全血、血漿、淋巴細(xì)胞富集液、外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）及DBS樣品可用于HIV核酸的定

性檢測(cè)。

3.5PBMC、全血、淋巴細(xì)胞富集液等可用于HIVT分離培養(yǎng)。

4操作步驟

4.1采樣前準(zhǔn)備

根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的具體要求，確定采集樣品的種類、處理、保存及運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和方法，按照臨

床采血技術(shù)規(guī)范的要求操作，遵守生物安全要求（參見(jiàn)本規(guī)范第八章實(shí)驗(yàn)室生物安全）。

要檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無(wú)破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信

息與樣品容器表面的標(biāo)記是否一致，并注明樣品采集時(shí)間。選擇合適的室內(nèi)（外）采血空間，受

檢者坐（臥）于合適的位置，準(zhǔn)備采血用具、皮膚消毒用品、采血管及試管架、硬質(zhì)廢棄物容器

等。

4.1.1樣品的編碼和記錄

4.1.2應(yīng)制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）,規(guī)定樣品編碼的原則和方法，為樣品制定唯一

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

性編碼（編號(hào)），保證其唯一性。

4.1.3采血前，先對(duì)裝有樣品的離心管或?yàn)V紙進(jìn)行標(biāo)記，核對(duì)后編碼。要將標(biāo)簽貼在試管的側(cè)

面，最好使用預(yù)先印制好的、專門用于冷凍儲(chǔ)存的耐低溫標(biāo)簽。

4.1.4應(yīng)使用專門的樣品記錄本或登記表記錄樣品，同時(shí)錄入電腦保存。

4.2采集和處理樣品

4.2.1血液

4.2.1.1抗凝全血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸橡酸鈉、肝素鈉）的

真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕

顛倒混勻6?8次，備用。

4.2.1.2末梢全血：消毒局部皮膚（成人和1歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無(wú)名指或食指。1

歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無(wú)菌紗布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備

用。

4.2.1.3血漿：將采集的抗凝全血1500?3000r/min離心15min,上層即為血漿，吸出置于合適

的容器中，備用。

4.2.1.4血清：根據(jù)需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5?10ml靜脈血，室溫下自

然放置1?2h,待血液凝固、血塊收縮后再用1500?3000r/min離心15min,吸出血清，置于合

適的容器中，備用。

4.2.1.5淋巴細(xì)胞富集液：將采集的抗凝全血1500?3000r/min離心15min,吸取血漿層下的

淋巴細(xì)胞富集液，置于合適的容器中，備用。

4.2.1.6PBMC：使用淋巴細(xì)胞分離液，進(jìn)行密度梯度離心，吸出PBMC層，備用。

4.2.1.7根據(jù)檢測(cè)要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?，如CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定可選用EDTA鈉鹽或鉀

鹽、枸檬酸鈉、肝素鈉，HIV病毒分離、核酸定性/定量檢測(cè)可選用EDTA鈉鹽或鉀鹽或枸椽酸鈉。

4.2.1.8樣品采集后處理、保存、運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和條件，因不同的檢測(cè)項(xiàng)目而異，應(yīng)參見(jiàn)不同檢

測(cè)項(xiàng)目要求。

4.2.1.9采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于尖銳危險(xiǎn)品容器里，妥善處理，防止發(fā)生職業(yè)暴露。

4.2.2濾紙干血斑

4.2.2.1根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，保存、運(yùn)輸及檢測(cè)。最常用

的是用抗凝全血、末梢全血和血漿制備濾紙干血斑。

4.2.2.2用移液器從樣品管中吸取lOO^L抗凝全血（或血漿）樣品，對(duì)準(zhǔn)濾紙印圈的中心處，

將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處。

4.2.2.3根據(jù)需要，連續(xù)在數(shù)個(gè)印圈上滴加樣品。

4.2.2.4于室溫下自然干燥至少4小時(shí)（潮濕氣候下至少干燥24小時(shí)），不要加熱或堆疊血斑，

勿與其它界面接觸。

4.2.2.5血斑充分干燥后，將其放入密封袋中，避免血斑之間的相互污染，同時(shí)放入干燥劑及

濕度指示卡，密封包裝，保存?zhèn)溆谩?/p>

4.2.3尿液和唾液

2

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

4.2.3.1尿液：使用清潔的容器收集尿液。女性應(yīng)避開月經(jīng)期。尿液樣品可以在2?8℃下存放。

存放時(shí)間、是否凍存以及是否添加防腐劑以試劑盒說(shuō)明書為準(zhǔn)。

4.2.3.2唾液：使用I試劑盒提供的容器收集唾液樣品。存放時(shí)間和是否凍存以試劑盒說(shuō)明書為

準(zhǔn)。

4.3樣品的保存

4.3.1用于抗體和抗原檢測(cè)的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于2?8℃,一

周以上應(yīng)存放于-20℃以下。

4.3.2用于核酸檢測(cè)的血漿和血細(xì)胞樣品4天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于4℃,3個(gè)月以內(nèi)應(yīng)存放于

-20C以下。3個(gè)月以上應(yīng)置于-700C以下。

4.3.3艾滋病檢測(cè)篩查實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的篩查陽(yáng)性樣品應(yīng)及時(shí)送確證實(shí)驗(yàn)室，篩查陰性樣品，可根

據(jù)具體需要決定保存時(shí)間，建議至少保存1?2個(gè)月。特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求

確定保存時(shí)間。

4.3.4艾滋病檢測(cè)確證實(shí)驗(yàn)室收到的篩查陽(yáng)性樣品，無(wú)論確證結(jié)果如何，均應(yīng)將剩余的樣品保

存至少10年，特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間。

4.4樣品的運(yùn)送

4.4.1應(yīng)符合生物安全要求；要獲得相應(yīng)部門批準(zhǔn)并由具有資質(zhì)的人員專程護(hù)送。

4.4.2應(yīng)采用三層容器對(duì)樣品進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對(duì)應(yīng)的送檢單。送

檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。

4.4.2.1第一層容器：直接裝樣品，應(yīng)防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的

標(biāo)記，標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時(shí)間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材

料，以免碰碎。

4.4.2.2第二層容器：容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。要求不易破碎、帶

蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。

4.4.2.3第三層容器：容納并保護(hù)第二層容器的運(yùn)輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽，

注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時(shí)要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓”

等字樣，還應(yīng)易于消毒。

4.4.2.4用于抗體檢測(cè)的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送。用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)

定的樣品應(yīng)在室溫下（18?25℃）或40c（特殊要求時(shí)）運(yùn)送。用于病毒載量檢測(cè)的樣品應(yīng)在-20℃

以下運(yùn)輸。DBS樣品應(yīng)在室溫下（18?25℃）運(yùn)送。每一件包裝的體積以不超過(guò)50mL為宜。

4.4.2.5運(yùn)送樣品必須有記錄。

4.4.2.6特殊情況下經(jīng)有關(guān)部門批準(zhǔn)可以用特快專遞郵寄樣品，但必須按三層包裝，將樣品管

包扎好，嚴(yán)禁使用玻璃容器。

4.5樣品的接收

4.5.1樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的、穿戴防護(hù)衣、戴

口罩、防護(hù)眼鏡的工作人員在生物安全柜中打開，用后的包裹應(yīng)及時(shí)進(jìn)行消毒。

4.5.2核對(duì)樣品與送檢單，檢查樣品管有無(wú)破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移

3

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

出，對(duì)樣品管和盛器消毒，同時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。

4.5.3檢查樣品的狀況，記錄有無(wú)嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過(guò)多以及黃疸等情況。如果污

染過(guò)重或者認(rèn)為樣品不能被接受，應(yīng)將樣品安全廢棄。并將樣品情況立即通知送樣人。

4.5.4接收樣品時(shí)應(yīng)填寫樣品接收單。

4

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

第二章HIV抗體檢測(cè)

1范圍

本章規(guī)定了HIV抗體的檢測(cè)方法、程序、結(jié)果報(bào)告、檢測(cè)策略及質(zhì)量控制。適用于各級(jí)各類

醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)、采供血機(jī)構(gòu)及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)。可作為對(duì)HIV感染

者診斷和監(jiān)測(cè)的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

2規(guī)范性引用文件

《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，WS293-2008）

GuidanceforHIVtestingintheWesternPacificRegion.WHODraft19July2008.

StatementfromtheSurveiHanceandSurveyWorkingGroupandtheLaboratoryWorkingGroup

totheOfficeoftheGlobalAIDSCoordinator.26Nov.2006.

GuidelinesfortheuseoftheBEDassayforincidenceestimationandsurveillance

inresource-limitedcountries.Atlanta,5June2006.

RevisedGuidelinesforHIVCounseling,Testing,andReferral.U.S.CDC2001.

CurrentHIV-2diagnosticstrategyoverestimatesHIV-2prevalenceinChina.Journal

ofMedicalVirology,2009,81:790-797.

3HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求

應(yīng)符合《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法（2006）》中對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員、建筑設(shè)施和設(shè)備等條件

的要求。

實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證和實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。

4HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn)

4.1HIV抗體檢測(cè)的目的

4.1.1HIV抗體檢測(cè)可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測(cè)等。

4.1.2以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測(cè)、自愿咨詢檢測(cè)、根

據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。

4.1.3以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV,包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。

4.1.4以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)，包括各類高危人群、

重點(diǎn)人群和一般人群。

4.2HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn)

4.2.1根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。

4.2.2嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室SOP。

5

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

4.2.3篩查試驗(yàn)陽(yáng)性，須作確證試驗(yàn)。

4.2.4篩查試驗(yàn)陰性，不應(yīng)做確證試驗(yàn)。

4.2.5篩查及確證試驗(yàn)陽(yáng)性均應(yīng)做好咨詢工作。

5以診斷為目的的檢測(cè)策略

5.1常規(guī)HIV抗體檢測(cè)的方法和程序

HIV抗體檢測(cè)分為篩查試驗(yàn)（包括初篩和復(fù)檢）和確證試驗(yàn)。

5.1.1篩查試驗(yàn)

5.1.1.1篩查試劑

必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑，其中酶聯(lián)免疫試劑應(yīng)批批

檢合格。推薦使用臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的試劑。

5.1.1.2篩查樣品

HIV抗體篩查可采用血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液樣品。

5.1.1.3篩查方法

（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

可使用血液、唾液、尿液樣品，ELISA多為單純HIV抗體檢測(cè)試劑。HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)

試劑可同時(shí)檢測(cè)血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體。HTV抗原或抗體包被于固相載體，加入待

檢樣品和酶標(biāo)記的HIV抗原或抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)

照必須符合試劑盒規(guī)定。

（2）化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)

這類試劑采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測(cè)抗體，也可聯(lián)合檢測(cè)抗原抗體。HIV抗原或抗體包

被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標(biāo)記的HIV抗原或抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或

熒光儀測(cè)定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照必須符合試劑盒規(guī)定。

（3）快速檢測(cè)（RT）及其它檢測(cè)試驗(yàn)

這類試驗(yàn)簡(jiǎn)便快速，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診檢測(cè)。?般可在10?30分鐘內(nèi)得出結(jié)果。

明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）：是HIV血清抗體檢測(cè)的一種簡(jiǎn)便方法。將HIV抗原致敏明膠顆粒

作為載體，與待檢樣品作用。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，根據(jù)

凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種：同時(shí)檢測(cè)HIV-1和HIV-2抗體以及分別檢測(cè)HIV-1和HIV-2

抗體。有效試驗(yàn)必須有陰性和陽(yáng)性質(zhì)控。

免疫滲濾試驗(yàn)：斑點(diǎn)ELISA和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)：均以硝酸纖維膜為載

體，HIV抗原點(diǎn)狀固定在膜上，加待檢樣品。陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)。反應(yīng)時(shí)

間在10分鐘以內(nèi)。有效試驗(yàn)的質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。

免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品（血液或唾液）

沿著固相載體遷移，陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。

5.1.1.4篩查程序

（1）初篩試驗(yàn)

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根據(jù)檢測(cè)目的選用符合要求的篩查試劑對(duì)樣品進(jìn)行初篩檢測(cè)，對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具

HIV抗體陰性（-）報(bào)告；對(duì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，需要進(jìn)一步做復(fù)檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。

（2）復(fù)檢試驗(yàn)

對(duì)初篩呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外

兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。如果初篩檢測(cè)使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復(fù)檢必

須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。如兩種試劑復(fù)檢均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性"）；如均

呈陽(yáng)性反應(yīng)，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)（圖1）。如果抗原抗體聯(lián)合試劑

檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，而抗體試劑檢測(cè)為陰性反應(yīng)，則應(yīng)考慮進(jìn)行HIV-1p24抗原或核酸檢測(cè)，必要

時(shí)進(jìn)行隨訪。

艾滋病檢測(cè)篩查實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢判定為陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，確證實(shí)驗(yàn)室可以直接進(jìn)行確證試驗(yàn)。

（3）初篩和復(fù)檢流程（圖1）

圖1HIV抗體篩杳檢測(cè)流程

（4）篩查試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告

HIV抗體篩查試驗(yàn)用附表1進(jìn)行報(bào)告，陰性反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性（-）”；陽(yáng)性反應(yīng)報(bào)告

為“HIV抗體待復(fù)檢”。

（5）篩查試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送

如需送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)檢，需要核對(duì)身份，補(bǔ)充個(gè)人信息（如姓名和身份證號(hào)碼），必要

時(shí)采集第二份血樣，持H1V抗體篩查報(bào)告，送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實(shí)驗(yàn)室，或直接送確證實(shí)驗(yàn)室

7

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

復(fù)檢。HIV抗體復(fù)檢試驗(yàn)用附表2進(jìn)行報(bào)告，兩次檢測(cè)均陽(yáng)性或?陰?陽(yáng)報(bào)告為“HIV抗體待確

證”；兩次檢測(cè)均陰性報(bào)告為“HIV抗體陰性（-）”。HIV抗體復(fù)檢報(bào)告需由1名檢驗(yàn)人員和1名

審核人員簽字。

5.1.2確證試驗(yàn)

5.1.2.1確證試劑

必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。

5.1.2.2確證樣品

可采用血清、血漿、濾紙干血斑樣品。

5.1.2.3確證方法

包括免疫印跡試驗(yàn)（福）、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）

等。

5.1.2.4確證流程（圖2）

使用HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測(cè)，如果呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性（一）；如果呈

陽(yáng)性反應(yīng)，則報(bào)告HIV-1抗體陽(yáng)性（+）；如果不是陰性反應(yīng)，但又不滿足陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，貝時(shí)艮

告HIV抗體不確定（土）。結(jié)合流行病學(xué)資料，可以在4周后隨訪檢測(cè)，如帶型沒(méi)有進(jìn)展或呈陰

性反應(yīng)，則報(bào)告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，則報(bào)告陽(yáng)性；如隨訪期間帶型有進(jìn)展，但不滿

足陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒(méi)有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)則報(bào)告陰性；滿足HIV抗體陽(yáng)性

診斷標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告陽(yáng)性，不滿足陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)可視情況決定是否繼續(xù)隨訪。隨訪期間可根據(jù)需要,

檢測(cè)病毒核酸或P24抗原作為輔助診斷。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，根據(jù)實(shí)際情況需

用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確證試驗(yàn)或HIV-2核酸檢測(cè)，