食品微生物 食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)3學(xué)習(xí)資料

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準(zhǔn)備上課了弘德明志博學(xué)篤行同學(xué)們好準(zhǔn)備上課了食品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)第三章

食品微生物

檢驗(yàn)樣品的采集與處理

山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院李世國(guó)lishiguo2004@126.co章的主要內(nèi)容食品微生物檢驗(yàn)的一般步驟檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備樣品的采集樣品的送檢樣品的處理方法致病菌檢驗(yàn)參考菌群的選擇樣品的檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告一.食品微生物檢驗(yàn)的一般步驟樣品采集樣品處理樣品保存選擇參考菌群檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備菌落總數(shù)大腸菌群致病菌分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)增菌純化染色鏡檢生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告二.檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備準(zhǔn)備好所需的各種儀器。按技術(shù)要求將各種玻璃儀器進(jìn)行清洗、烘干、包扎、滅菌，冷卻后送無菌室備用。準(zhǔn)備好所用的各種試劑，做好普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂或其他選擇必培養(yǎng)基。做好無菌室或超凈工作臺(tái)的滅菌工作，提前1h滅菌30~60min.工作衣、鞋、帽、等滅菌后備用。工作人員進(jìn)入無菌室后，實(shí)驗(yàn)沒有完成之前不得隨便出入無菌室。1.食物中毒一般急救處理原則2.食物中毒調(diào)查3.食物中毒現(xiàn)場(chǎng)處理4.采樣技術(shù)5.食物中毒的診斷與鑒別6.食物中毒總結(jié)和報(bào)告的書寫（一）、人員培訓(xùn)采樣用具：長(zhǎng)柄勺、長(zhǎng)柄鑷子、剪刀、消毒棉簽、注射器、75%酒精、油性筆、酒精燈等。樣品容器：滅菌廣口瓶、滅菌試管、采樣箱等。防護(hù)用品：隔離衣、口罩、白帽子、手套等。（二）、事發(fā)前的準(zhǔn)備工作調(diào)查用表：食物中毒事故報(bào)告登記表、食物中毒事故個(gè)案調(diào)查登記表、樣品采集（送檢）記錄單、衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法文書等。取證工具：照相機(jī)、錄音機(jī)、攝像機(jī)等。相關(guān)文書：各種食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則、食品衛(wèi)生相關(guān)法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等。培養(yǎng)基：C-B保存液：保存病原菌亞硒酸鹽增菌液：培養(yǎng)沙門菌普通肉湯：培養(yǎng)金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌1%葡萄糖肉湯：培養(yǎng)鏈球菌7.5%NaCl肉湯：培養(yǎng)金黃色葡萄球菌嗜鹽增菌液：培養(yǎng)副溶血性弧菌堿性蛋白胨水：培養(yǎng)霍亂弧菌腸道增菌液：培養(yǎng)致瀉大腸埃希菌GN增菌液；培養(yǎng)志賀菌、變形桿菌LB1增菌液：培養(yǎng)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌硫乙醇酸鹽培養(yǎng)液：培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌布氏肉湯：培養(yǎng)空腸彎曲菌培養(yǎng)基：1.代表性原則：所采的樣本能真正反映被采樣的總體水平。2.典型性原則:應(yīng)根據(jù)中毒癥狀，可疑中毒物性質(zhì)采集可能含毒量最多的樣本，如中毒者吃剩的食物、餐具（未洗刷）。3.適時(shí)性原則：及時(shí)采樣，盡快送檢。4.適量性原則：采樣數(shù)量應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目和目的而定，但每份樣本不少于檢驗(yàn)需要量的三倍，以便供檢驗(yàn)、復(fù)檢和留樣備用。5.程序性原則：采樣、送檢、留樣和出具報(bào)告必須按規(guī)定的程序進(jìn)行，各階段都要有完整的手續(xù)，責(zé)任分明。（三）、采樣原則糞便：2ml(g)嘔吐物或洗胃液：50-100ml(g)食品：200-500ml(g)涂抹樣本：炊具、容器等血液：3-5ml尿液：不少于50ml其它樣本：接觸食品人員和廚師的肛拭和手拭等。（四）、樣本種類和數(shù)量1.各種樣本的采集，要注意無菌操作，防止污染，以免影響檢驗(yàn)結(jié)果。2.采集肛拭人數(shù)，中毒事件規(guī)模較小，患者人數(shù)10人以下的，全部采樣；中毒事件規(guī)模較大，患者人數(shù)較多，至少應(yīng)對(duì)30%-50%臨床癥狀典型的患者進(jìn)行采集。3.采集樣本后，最好立即送檢，如條件不許可時(shí)，最好也不超過4小時(shí)。（五）、采樣及送檢注意事項(xiàng)4.氣溫較高的季節(jié)，樣本應(yīng)注意冷藏。5.送檢樣本必須有牢固的標(biāo)簽，標(biāo)明編號(hào)、采樣日期等，并嚴(yán)密封閉包裝。6.應(yīng)附詳細(xì)送檢單，填明樣本的名稱、來源、件數(shù)、重量、采樣時(shí)間、送檢時(shí)間、檢驗(yàn)項(xiàng)目、受理編號(hào)、送樣人等。并向檢驗(yàn)人員說明中毒表現(xiàn)。7.采樣記錄確保被采樣單位負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)。三.樣品的采集（一）采樣的目的和意義便于食品衛(wèi)生質(zhì)量監(jiān)督管理鑒別食品中是否存在有毒有害物質(zhì)。為新產(chǎn)品、新資源利用、新食品化工產(chǎn)品、新工藝投產(chǎn)前進(jìn)行衛(wèi)生鑒定。（二）樣品的種類大樣，就是一整批；中樣，是從樣品中各部分取得的混合樣品，一般為200g；小樣，也稱檢樣，做分析用的，一般為25g。（三）采樣的步驟采樣前調(diào)查→現(xiàn)場(chǎng)觀察→確定采樣方案→采樣→樣品封存→開具采樣證明（四）采樣的要求1、嚴(yán)格遵守樣品采集的操作規(guī)程。2、所采樣品必須具有代表性。3、采樣操作要防止污染，防止變質(zhì)、損壞、丟失。4、不得加入防腐劑、固定劑等。5、樣品采集和現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定必須有二人以上參加。（五）食品微生物檢驗(yàn)的采樣方案1、食品衛(wèi)生學(xué)微生物檢驗(yàn)的取樣方案檢驗(yàn)?zāi)康模簷z驗(yàn)食品的微生物衛(wèi)生指標(biāo)是否合格。取樣方案有：ICMSF取樣方案；美國(guó)FDA的取樣方案；世界糧農(nóng)組織（FAO）取樣方案；我國(guó)的食品取樣方案。23(1)ICMSF的取樣方案國(guó)際食品微生物規(guī)范委員會(huì)(簡(jiǎn)稱ICMSF)的取樣方案ICMSF提出的采樣基本原則，是根據(jù)（1）各種微生物本身對(duì)人的危害程度各有不同。（2）食品經(jīng)不同條件處理后，其危害度變化情況：①降低危害度；②危害度未變；③增加危害度，來設(shè)定抽樣方案并規(guī)定其不同采樣數(shù)。目前，加拿大、以色列等很多國(guó)家已采用此法作為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。在進(jìn)行詳細(xì)敘述之前，先解釋四個(gè)代號(hào)：

n：系指一批產(chǎn)品采樣個(gè)數(shù)。

c：系指該批產(chǎn)品的檢樣菌數(shù)中，超過限量的檢樣數(shù)，即結(jié)果超過合格菌數(shù)限量的最大允許數(shù)。

m：系指合格菌數(shù)限量，將可接受與不可接受的數(shù)量區(qū)別開。

M：系指附加條件，判定為合格的菌數(shù)限量，表示邊緣的可接受數(shù)與邊緣的不可接受數(shù)之間的界限。

24(1)ICMSF的取樣方案ICMSF的采樣方法

有些實(shí)驗(yàn)室在每批產(chǎn)品中，僅采一個(gè)檢樣進(jìn)行檢驗(yàn)，該批產(chǎn)品是否合格，全憑這個(gè)檢樣來決定。ICMSF方法與此不同，它是從統(tǒng)計(jì)學(xué)原理來考慮，對(duì)一批產(chǎn)品，檢查多少檢樣，才能夠有代表性，才能客觀地反映出該產(chǎn)品的質(zhì)量而設(shè)定的。ICMSF方法中包括二級(jí)法及三級(jí)法兩種。二級(jí)法只設(shè)有n、с及m值，三級(jí)法則有n、c、m及M值。M即附加條件后判定合格的菌數(shù)限量。

25(1)ICMSF的取樣方案（1）二級(jí)抽樣方案。自然界中材料的分布曲線一般是正態(tài)分布，以其一點(diǎn)作為食品微生物的限量值，只設(shè)合格判定標(biāo)準(zhǔn)m值，超過m值的，則為不合格品。檢查在檢樣是否有超過m值的，來判定該批是否合格。以生食海產(chǎn)品魚為例n=5，c=0，m=100，n=5即抽樣5個(gè)，c=0即意味著在該批檢樣中，未見到有超過m值的檢樣，此批貨物為合格品。

（2）三級(jí)抽樣方案。設(shè)有微生物標(biāo)準(zhǔn)m及M值兩個(gè)限量如同二級(jí)法，超過m值的檢樣，即算為不合格品。其中以m值到M值的范圍內(nèi)的檢樣數(shù)，作為c值，如果在此范圍內(nèi)，即為附加條件合格，超過M值者，則為不合格。例如：冷凍生蝦的細(xì)菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)n=5，c=3，m=10，M=100，其意義是從一批產(chǎn)品中，取5個(gè)檢樣，經(jīng)檢樣結(jié)果，允許≤3個(gè)檢樣的菌數(shù)是在m、M值之間，如果有3個(gè)以上檢樣的菌數(shù)是在m、M值之間或一個(gè)檢樣菌數(shù)超過M值者，則判定該批產(chǎn)品為不合格品。

（3）．ICMSF對(duì)食品中微生物的危害度分類與抽樣方案說明

為了強(qiáng)調(diào)抽樣與檢樣之間的關(guān)系，ICMSF已經(jīng)闡述了把嚴(yán)格的抽樣計(jì)劃與食品危害程度相聯(lián)系的概念（ICMSF，1986）。在中等或嚴(yán)重危害的情況下使用二級(jí)抽樣方案，對(duì)健康危害低的則建議使用三級(jí)抽樣方案。26(2)美國(guó)FDA的取樣方案

食品藥品管理局(FDA)的取樣方案與ICMSF的取樣方案基本一致，所不同的是嚴(yán)重指標(biāo)苗所取的15、30、60個(gè)樣可以分別混合，混合的樣品量最大不超過375g。也就是說所取的樣品每個(gè)為100g，從中取出25g，然后將15個(gè)25g混合成一個(gè)375g樣品，混勻后再取258作為試樣檢驗(yàn)，剩余樣品妥善保存?zhèn)溆谩?/p>

27(3)世界糧農(nóng)組織(AFO)規(guī)定的食品微生物質(zhì)量1979年版AFO食品與營(yíng)養(yǎng)報(bào)告中的食品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的微生物學(xué)分析中列舉了各

種食品的微生物限量標(biāo)準(zhǔn)，由于是按ICMSF的取樣方案判定的，所以在此引用28我國(guó)食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)時(shí)食品取樣方案和數(shù)量，具體查閱國(guó)家食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)總則（GB4789.1-1994）。2、食物中毒微生物檢驗(yàn)的取樣檢驗(yàn)?zāi)康模翰檎沂澄镏杏泻尾≡?、人畜共患病病原菌檢驗(yàn)的取樣檢驗(yàn)?zāi)康模鸿b定畜禽及其產(chǎn)品是否帶有人獸共患的病原菌。（六）食品微生物檢驗(yàn)采樣方法采樣原則：能采取完整包裝的樣品就不拆開取樣，必須拆開包裝取樣的應(yīng)按無菌操作進(jìn)行取樣.1、液體樣品采樣方法

充分混勻后，無菌操作打開包裝，用100mL無菌注射器抽取,注入無菌盛樣容器.2、半固體樣品采樣方法無菌操作打開包裝，用無菌勺子從幾個(gè)部位挖取樣品，放入無菌容器。

3、固體樣品采樣方法大塊整體食品用無菌刀具和鑷子從不同的部位割取，并注意其代表性；小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品，放入無菌容器。若為檢驗(yàn)食品的污染情況，可取表層樣品；若為檢驗(yàn)食品品質(zhì)的情況，應(yīng)從深部取樣。

4、冷凍食品采樣方法大包裝小塊冷凍食品按小塊個(gè)體采??；大塊冷凍食品可用無菌刀從不同部位削取或用無菌手鋸從凍塊上鋸取樣品，放入無菌容器。若為檢驗(yàn)食品污染情況，可取表層樣品；若為檢驗(yàn)食品品質(zhì)情況，應(yīng)從深部取樣。5、生產(chǎn)工序監(jiān)測(cè)采樣車間用水：從車間各龍頭采樣；車間臺(tái)面、用具、及加工售貨員手的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)：用5cm2孔無菌采樣板和5支無菌棉簽擦拭25cm2面積，擦拭后立即用無菌剪刀將棉簽頭剪入無菌容器中。車間空氣采樣：將5個(gè)直徑90mm的普通瓊脂平板分別置于車間的四角和中部，打開平皿蓋5min，然后蓋蓋送檢。平皿（七）采樣標(biāo)簽的填寫標(biāo)簽內(nèi)容主要：

編號(hào)、樣品名稱、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)日期、產(chǎn)品批號(hào)、產(chǎn)品數(shù)量、存放條件、采樣時(shí)間、采樣人姓名，現(xiàn)場(chǎng)情況?！痢痢痢痢敛蓸訂螛悠肪幪?hào)：━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━產(chǎn)品名稱（商品名）______規(guī)格型號(hào)__________注冊(cè)商標(biāo)_____________生產(chǎn)廠家_______________通訊地址__________郵政編碼□□□□□□受檢地點(diǎn)_______________通訊地址__________郵政編碼□□□□□□采樣地點(diǎn)_______________采樣日期__________采樣基數(shù)______________生產(chǎn)日期_______________批號(hào)__________產(chǎn)品依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)__________有效成分及含量____________________________________________________________檢驗(yàn)?zāi)康豞_______________檢測(cè)項(xiàng)目_____________________________

采樣人仔細(xì)閱讀以下句子，然后簽字我認(rèn)真負(fù)責(zé)地填寫了該樣品采樣單，承認(rèn)以上填寫的合法性，被該采親單位所證實(shí)的樣品系按照采樣方法取得的，該樣品具有代表性、真實(shí)性和公正性。代表單位（章）代表單位（章）簽字簽字日期年月日日期年月日

備注

四.樣品的送檢要求1、要快速運(yùn)送：不要超過3小時(shí)；2、若路途遙遠(yuǎn)，可在1~5℃低溫下運(yùn)送；3、要注意防污染、防散漏、防變質(zhì)；4、要填寫檢驗(yàn)申請(qǐng)單。五.樣品的處理方法（一）液體樣品（二）固體樣品（三）冷凍樣品(一)液體樣品的處理瓶裝液體樣品的處理盒裝或軟塑料包裝樣品的處理1.瓶裝液體樣品的處理

用點(diǎn)燃的酒精棉球灼燒瓶口滅菌，接著用石炭酸或來蘇爾消毒后的紗布蓋好，再用滅菌開瓶器將蓋啟開；含有二氧化碳的樣品可倒入500mL磨口瓶?jī)?nèi)，口勿蓋緊，覆蓋一滅菌紗布，輕輕搖蕩，待氣體全部逸出后，取樣25mL檢驗(yàn)。2.盒裝或軟塑料包裝樣品的處理

將其開口處用75%酒精棉擦拭消毒，用滅菌剪子剪開包裝，覆蓋上滅菌紗布或浸有消毒液的紗布在剪開部分，直接吸取樣品25mL，或傾入另一滅菌容器中再取樣25mL檢驗(yàn)。（二）固體樣品的處理搗碎均質(zhì)法剪碎振搖法研磨法整粒振搖法胃蠕動(dòng)均質(zhì)法1.搗碎均質(zhì)法將中樣(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g放入帶225mL稀釋液的無菌均質(zhì)杯中，8000~10000r/min均質(zhì)1~2min即可。2.剪碎振搖法將中樣(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g檢樣進(jìn)一步剪碎，放入帶225mL稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅要大于40cm。3.研磨法

將中樣(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g檢樣放入無菌乳缽中充分研磨后，再放入帶有225mL無菌稀釋液的稀釋瓶中，蓋緊蓋后充分搖勻。4.整粒振搖法直接稱取25g整粒樣品置于帶有225mL稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅要大于40cm。（三）冷凍樣品冷凍樣品，先將中樣在0~4℃下解凍，時(shí)間不能超過18h，或在45℃下解凍，時(shí)間不能超過15min。再取檢樣25g做稀釋處理。各類食品微生物檢樣樣品的采集與制備實(shí)例1、肉與肉制品樣品的采集與制備（一）樣品的采取a、生肉及臟器檢樣如是屠宰場(chǎng)后的畜肉，可于開腔后，用無菌刀采取兩腿內(nèi)側(cè)肌肉各50g（或劈半后采取兩側(cè)背最長(zhǎng)肌肉各50g）；如是冷藏或銷售的生肉，可用無菌刀取腿肉或其他部位的肌肉100g。檢樣采取后放入無菌容器內(nèi)，立即送檢；如條件不許可時(shí)，最好不超過3h。送檢時(shí)應(yīng)注意冷藏，不得加入任何防腐劑。檢樣送往化驗(yàn)室應(yīng)立即檢驗(yàn)或放置冰箱暫存。

b、禽類（包括家禽和野禽）鮮、凍家禽采取整只，放無菌容器內(nèi)；帶毛野禽可放清潔容器內(nèi)，立即送檢，以下處理要求同上述生肉。c、各類熟肉制品包括醬鹵肉、肴肉、方圓腿、熟灌腸、熏烤肉、肉松、肉脯、肉干等，一般采取200g，熟禽采取整只，均放無菌容器內(nèi)，立即送檢，以下處理要求同上述生肉。d、臘腸、香肚等生灌腸采取整根、整只，小型的可采數(shù)根、數(shù)只，其總量不少于250g。

（二）檢樣的處理a、生肉及臟器檢樣的處理先將檢樣進(jìn)行表面消毒（在沸水內(nèi)燙3s~5s，或灼燒消毒），再用無菌剪子剪取檢樣深層肌肉25g，放入無菌乳缽內(nèi)用滅菌剪子剪碎后，加滅菌海砂或玻璃砂或玻璃砂研磨，磨碎后加入滅菌水225mL，混勻后即為1：10稀釋液。b、鮮、凍家禽檢樣的處理先將檢樣進(jìn)行表面消毒，用滅菌剪子或刀去皮后，剪取肌肉25g（一般可從胸部或腿部剪?。?，以下處理同生肉。帶毛野禽去毛后，同家禽檢樣處理。

c、各類熟肉制品檢樣的處理直接切取或稱取25g，以下處理同生肉。d、臘腸、香腸等生灌腸檢樣處理先對(duì)生灌腸表面進(jìn)行消毒，用滅菌剪子取內(nèi)容物25g，以下處理同生肉。注：以上樣品的采集和送檢及檢樣的處理均以檢驗(yàn)肉禽及其制品內(nèi)的細(xì)菌含量從而判斷其質(zhì)量鮮度為目的。如須檢驗(yàn)肉禽及其制品受外界環(huán)境污染的程度或檢索其是否帶有某種致病菌，應(yīng)用棉拭采樣法。

（三）棉拭采樣法和檢樣處理檢驗(yàn)肉禽及其制品受污染的程度，一般可用板孔5cm2的金屬制規(guī)板，壓在受檢物上，將來菌棉拭稍沾濕，在板孔5cm2的范圍內(nèi)揩抹多次，然后將板孔規(guī)板移壓另一點(diǎn)，用另一棉拭揩抹，如此共移壓揩抹10次，總面積50cm2，共用10只棉拭。每支棉拭在揩抹去完畢后應(yīng)立即剪斷或燒斷后投入盛有50ml滅菌水的三角燒瓶或大試管中，立即送檢。檢驗(yàn)時(shí)先充分振搖吸取瓶、管中的液體，作為原液，再按要求作10倍遞增稀釋。檢驗(yàn)致病菌，不必用規(guī)板，在可疑部位用棉拭揩抹即可。（四）檢驗(yàn)方法見菌落總數(shù)、大腸菌群測(cè)定及各有關(guān)致病菌和霉菌的檢驗(yàn)。

2、乳與乳制品樣品的采集與制備（一）樣品的采取和送檢a、散裝或大型包裝的乳品用滅菌刀、勺取樣，在移采另一件樣品前，刀、勺先清洗滅菌。采樣時(shí)應(yīng)注意部位等代表性。每件樣品數(shù)量不少于200g，放入滅菌容器內(nèi)及時(shí)送檢。鮮乳一般不應(yīng)超過3h，在氣溫較高或路途較遠(yuǎn)的情況下應(yīng)進(jìn)行冷藏，不得使用任何防腐劑。

b、小型包裝的乳品應(yīng)采取整件包裝，采樣時(shí)應(yīng)注意包裝的完整。各種小型包裝和乳與乳制品，每件樣品量為：生奶1瓶或1包；消毒奶1瓶或1包；奶粉1瓶或1包（大包裝者200g）；奶油1塊（113g）；酸奶1瓶或1罐；煉乳1瓶或1罐；奶酪（干酪）1個(gè)。c、成批產(chǎn)品對(duì)成批產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量鑒定時(shí)，其采樣數(shù)量每批以千分之一計(jì)算，不足千件者抽取1件。

（二）檢樣的處理a、鮮奶、酸奶以無菌操作去掉瓶口的紙罩紙蓋，瓶口經(jīng)火焰消毒后以無菌操作吸取25ml檢樣，放入裝有225ml滅菌生理鹽水的三角燒瓶?jī)?nèi)，振搖均勻（酸乳如有水分析出于表層，應(yīng)先去除）。b、煉乳將瓶或罐先用溫水洗凈表面，再用點(diǎn)燃酒精棉球消毒瓶或罐的上表面，然后用滅菌的開罐器打開罐（瓶），以無菌操作稱取25g（ml）檢樣，放入裝有225ml滅菌生理鹽水的三角燒瓶?jī)?nèi)，振搖均勻。

c、奶油以無菌操作打開包裝，取適量檢樣置于滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)，在450C水浴或溫箱中加溫，溶解后立即將燒瓶取出，用滅菌吸管吸取25mL奶油放入另一含225ml滅菌生理鹽水或滅菌奶油稀釋液的燒瓶?jī)?nèi)（瓶裝稀釋液應(yīng)預(yù)置于450C水浴中保溫，作10倍遞增稀釋時(shí)所用的稀釋液亦同），振搖均勻，從檢樣融化到接種完畢的時(shí)間不應(yīng)超過30min。注：奶油稀釋液：格林氏液（配法：氯化鈉9g、氯化鉀0.12g、氯化鈣0.24g、碳酸氫鈉0.2g、蒸餾水1000ml）250mL、蒸餾水750ml、瓊脂1g、加熱溶解，分裝每瓶225ml，1210C滅菌15min。

d、奶粉罐裝奶粉的開罐取樣法同煉乳處理，袋裝奶粉應(yīng)用蘸有75%酒精的棉球涂擦消毒袋口，以無菌操作開封取樣，稱取檢樣25g，放入裝有適量玻璃珠的滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)，將225ml溫?zé)岬臏缇睇}水徐徐加入（先用少量生理鹽水將奶粉調(diào)成糊狀，再全部加入，以免奶粉結(jié)塊），振搖使充分溶解和混勻。

e、奶酪先用滅菌刀削去部分表面封蠟，用點(diǎn)燃的酒精棉球消毒表面，然后用滅菌刀切開奶酪，以無菌操作切取表層和深層檢樣各少許，置于滅菌乳缽內(nèi)切碎，加入少量生理鹽水研成糊狀。（三）檢驗(yàn)方法見落總數(shù)、大腸菌群測(cè)定及各有關(guān)致病菌和霉菌的檢驗(yàn)。

六.致病菌檢驗(yàn)參考菌群的選擇蛋及蛋制品：沙門氏菌、葡萄球菌、變形桿菌等水產(chǎn)品海產(chǎn)品：鏈球菌、副溶血性弧菌乳制品：沙門氏菌、志賀氏菌、葡萄球菌、鏈球菌、蠟樣芽胞桿菌畜禽肉類：腸道致病菌和致病性球菌米面類：蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌、酵母霉菌等罐頭：耐熱性芽胞桿菌、嗜熱脂肪桿菌、大芽胞桿菌、凝結(jié)芽胞桿菌七.樣品的檢驗(yàn)（一）、收樣：1、收到樣品后逐一核對(duì)驗(yàn)收，登記編號(hào)；如2004年收到的50號(hào)樣品，編號(hào)可寫成：200400502、立即將樣品放在冰箱或冰盒中，并積極做好準(zhǔn)備工作。（二）、檢驗(yàn)