2024-2025學(xué)年高二生物人教版選擇性必修3教學(xué)課件 第1章- 第2節(jié)

第節(jié)2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用高中生物選擇性必修3第1章簡(jiǎn)述培養(yǎng)基的配方和微生物培養(yǎng)的基本操作要求，進(jìn)行酵母菌的純培養(yǎng)。闡明微生物選擇培養(yǎng)的原理。進(jìn)行土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)。學(xué)習(xí)目標(biāo)微生物原核:真核非細(xì)胞類：細(xì)菌、放線菌、支原體、藍(lán)藻等酵母菌、霉菌等真菌：原生生物病毒、類病毒、朊病毒等①種類多；②分布廣；③易培養(yǎng)；④個(gè)體微??；⑤結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單；⑥繁殖快；⑦代謝強(qiáng)；⑧易變異。微生物的類群顯微藻類：衣藻、小球藻等原生動(dòng)物：草履蟲、變形蟲等微生物的特性（一）球菌（二）桿菌（三）螺旋菌肺炎雙球菌金黃色葡萄球菌乳酸鏈球菌大腸桿菌蘇云金芽孢桿菌枯草芽孢桿菌霍亂弧菌幽門螺旋菌齒垢密螺旋體細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌的芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體（不是繁殖體），叫做芽孢。

芽孢的壁很厚，含水量極低，抗逆性極強(qiáng)（對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力）。細(xì)菌芽孢的結(jié)構(gòu)模式圖環(huán)境適宜時(shí)，芽孢可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌。

菌落具有大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等基本特征。

菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落

菌落由單個(gè)細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或少數(shù)同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細(xì)胞群落。病毒的繁殖吸附注入合成釋放組裝

噬菌斑即噬菌體侵染細(xì)菌細(xì)胞，導(dǎo)致寄主細(xì)胞溶解死亡，因而在瓊脂培養(yǎng)基表面形成的肉眼可見的透明小圓斑（“負(fù)菌落”）。

在適當(dāng)條件下，一個(gè)噬菌體形成一個(gè)噬菌斑。

一

微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.接種工具：①接種針：直線狀，多用于固體培養(yǎng)基穿刺接種。②接種環(huán)：環(huán)狀，常用于細(xì)菌和酵母菌的斜面、平板接種。斜面平板接種針、鉤、環(huán)③接種鉤：直角狀，多用于霉菌和放線菌的接種。2.涂布器：多用于菌種的分離或微生物平板活菌計(jì)數(shù)時(shí)涂布。3.吸管：0.1、0.2、0.5、1、5、10mL等移液管，常用于液體接種及菌懸液系列稀釋。4.試管、培養(yǎng)皿、錐形瓶等5.消毒、滅菌設(shè)備：酒精燈、干熱滅菌箱、高壓蒸汽滅菌鍋等。6.無菌實(shí)驗(yàn)室、超凈工作臺(tái)等二、基本成分（一）碳源①無機(jī)碳源：②有機(jī)碳源：CO2、HCO3-等，適于自養(yǎng)生物。葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等，適于異養(yǎng)生物。（二）氮源①無機(jī)氮源：②有機(jī)氮源：N2、NH4＋、NH3、NO3-等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等培養(yǎng)基

人們按照微生物對(duì)__________的不同需求，配制出供其

的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)叫培養(yǎng)基（三）無機(jī)鹽1.種類：KH2PO4、K2HPO4、（NH4）2SO4、MgSO4、CaCl2、Ca(NO3)2、NaCl、FeSO4等。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖2.功能（1）參與酶的組成；（2）調(diào)節(jié)并維持細(xì)胞的滲透壓；（3）調(diào)節(jié)pH的平衡。（四）水（1）良好溶劑，參與物質(zhì)運(yùn)輸；（2）參與細(xì)胞內(nèi)一系列化學(xué)反應(yīng)；（3）酶催化的介質(zhì)。

注一：最常用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖。注二：最常用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。注三：含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的

碳源、氮源、能源注四：在提供幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及O2

的需求。例如，在培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，需要在培養(yǎng)基中添加維生素；在培養(yǎng)霉菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至酸性；在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性；在培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)，需要提供無氧的條件。三、種類種類是否含凝固劑用途固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基（一）按物理性質(zhì)分1.5%-2.5%0.2%-0.7%否分離、計(jì)數(shù)、鑒定觀察運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基：菌落半固體培養(yǎng)基：運(yùn)動(dòng)液體培養(yǎng)基：生長(zhǎng)（二）按化學(xué)成分種類化學(xué)成分用途天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基不明確明確工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)分類、鑒定（三）按培養(yǎng)基的功能（用途）1.基礎(chǔ)培養(yǎng)基（1）成分：一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的基本物質(zhì)（2）常用類型：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（20.0g瓊脂）種類制備方法原理用途舉例2.選擇培養(yǎng)基3.鑒別培養(yǎng)基加入相應(yīng)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)加入某種特殊的化學(xué)物質(zhì)依據(jù)某些微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)需求或?qū)δ承┪镔|(zhì)的敏感性依據(jù)微生物的代謝產(chǎn)物與特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定的反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化。從眾多微生物中分離所需的微生物鑒別不同種類微生物①加入青霉素分離酵母菌和霉菌②缺氮培養(yǎng)基分離固氮菌③高濃度食鹽的培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌④無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物①伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌②剛果紅培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌一、含義

泛指在分離、接種和培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止其他微生物污染的方法。是成功地培養(yǎng)微生物的關(guān)鍵。

無菌技術(shù)二、范圍1.對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。2.對(duì)培養(yǎng)器皿、接種用具、培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。3.在酒精燈旁操作4.已滅菌的材料與周圍的物品分開。三、消毒、滅菌（一）消毒：是指較為溫和物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。（不包括芽孢、孢子）1.巴氏消毒法

70℃～75℃煮30min或在85℃煮15min；殺滅非芽孢致病菌，不破壞物料原風(fēng)味；適用于對(duì)牛奶、啤酒等消毒。

2.煮沸消毒法在100℃煮沸5～6min可以殺死微生物細(xì)胞和部分芽孢。

3.化學(xué)藥物消毒法①酒精消毒：使細(xì)胞脫水、蛋白質(zhì)變性。

②氯氣消毒：氯氣溶于水形成鹽酸和次氯酸，次氯酸

可放出新生態(tài)的氧，從而殺死細(xì)胞。③其他：升汞、高錳酸鉀、臭氧、甲酚皂、醋酸等等。4.紫外線消毒法例如，接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)在使用前，可以用紫外線照射30min，以殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果。（二）滅菌：強(qiáng)烈的理化方法，殺死物體內(nèi)外所有微生物（包括芽孢、孢子）1.濕熱滅菌這是一種利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。其中高壓蒸汽滅菌的效果最好。實(shí)驗(yàn)室常用的高壓蒸汽滅菌鍋（見左下圖）就是以水蒸氣為介質(zhì)，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，維持15～30min來滅菌的。（二）滅菌：強(qiáng)烈的理化方法，殺死物體內(nèi)外所有微生物（包括芽孢、孢子）將微生物的接種工具，如涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇ㄒ娤聢D）。此外，在接種過程中，試管口、瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰灼燒來滅菌。3.灼燒滅菌討論:1．在高壓蒸汽滅菌開始以前，為什么要將滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排盡？

在高壓蒸汽滅菌以前，如果高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的冷空氣沒有排盡，當(dāng)壓力上升到100kPa時(shí)，鍋內(nèi)的溫度就不會(huì)上升到應(yīng)有的高度，導(dǎo)致滅菌不徹底。2．滅菌完畢以后，如果壓力未降到0就打開排氣閥，會(huì)出現(xiàn)什么現(xiàn)象？為什么？

如果壓力未降到零就打開排氣閥，試管內(nèi)的培養(yǎng)基就會(huì)沖出管口。這是因?yàn)楦邏赫羝麥缇亙?nèi)外壓力不平衡的緣故。3．接種操作為什么一定要在火焰旁邊進(jìn)行？

空氣中存在有大量的微生物，而接種燈的火焰旁能形成一個(gè)無菌區(qū)域，在這里操作，可以避免雜菌污染。一、培養(yǎng)物與純培養(yǎng)

在微生物在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物。

由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。微生物的純培養(yǎng)二、純培養(yǎng)的過程配置培養(yǎng)基→滅菌→接種→分離和培養(yǎng)三、酵母菌的純培養(yǎng)1.制備培養(yǎng)基（1）配置培養(yǎng)基稱取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向?yàn)V液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15～20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000mL。

（2）滅菌：將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15～30min。

將5～8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃滅菌2h。防止污染和揮發(fā)滅菌時(shí)避免水蒸氣浸濕棉塞，取出培養(yǎng)基時(shí)，也起到隔絕空氣中雜菌的作用（3）倒平板培養(yǎng)基冷卻至約50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板：②將瓶口迅速通過火焰，灼燒滅菌①左手拔出棉塞③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋。④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置。①加瓊脂的目的是什么?②在滅菌前,用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？③培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？作為凝固劑。在滅菌時(shí)能避免水蒸汽凝結(jié)時(shí)浸濕棉塞,在取出培養(yǎng)基錐形瓶時(shí)也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,因?yàn)榕囵B(yǎng)皿要保持干燥,應(yīng)該用干熱滅菌.問題討論答：用手觸摸錐形瓶，感覺剛剛不燙手時(shí)。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。問題討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：既可以防止培養(yǎng)基表面的水分過快揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，影響微生物的生長(zhǎng)。4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：最好不要用。因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诖俗躺?.接種和分離酵母菌通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。平板劃線的具體操作見下面的流程圖：3.培養(yǎng)酵母菌通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。平板劃線的具體操作見下面的流程圖：?jiǎn)栴}討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？①操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物②殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。③及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。問題討論3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。

一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。4.平板劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基的原因？二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)1.選擇培養(yǎng)基（1）概念：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。（2）選擇培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì)尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥。尿素施入土壤后，會(huì)被土壤中的某些細(xì)菌分解成NH3，NH3

再轉(zhuǎn)化為NO3-、NH4+等被植物吸收。而這些細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕福迕复呋蛩胤纸猱a(chǎn)生NH3，NH3可作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。討論如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？提示：培養(yǎng)基的配方中應(yīng)含有微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)要素——碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等。由于絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，分解尿素的細(xì)菌也能利用葡萄糖，可以用葡萄糖作為碳源，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，在培養(yǎng)基中加入尿素提供氮源，使培養(yǎng)基具有了選擇作用。該培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，只允許能以尿素作為氮源的微生物生長(zhǎng)。討論2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比較，共同點(diǎn)是都以有機(jī)碳（如葡萄糖）作為碳源，都有水和無機(jī)鹽；不同點(diǎn)是該培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，使只有能以尿素作為氮源的微生物生長(zhǎng)。6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106（1）梯度稀釋菌液：菌液微量移液器2.微生物的選擇培養(yǎng)浸不超過0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍（2）涂布平板：（1）梯度稀釋菌液：2.微生物的選擇培養(yǎng)稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍（2）涂布平板：（1）梯度稀釋菌液：2.微生物的選擇培養(yǎng)1.涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第（2）步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？

應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論2.培養(yǎng)基的制作是否合格？

如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。3.接種操作是否符合無菌要求？

如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。例、平板劃線法和稀釋涂布平板法接種大腸桿菌的操作中，相同的是（）

①可以用相同的培養(yǎng)基

②都需要使用接種針進(jìn)行接種③菌液均需稀釋后再接種④都可以用來計(jì)數(shù)活菌⑤依據(jù)的原理相同⑥都需要在火焰旁進(jìn)行接種A．①②B．③④

C．①⑥D(zhuǎn)．②④C（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)：可以利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察缺點(diǎn)3.微生物的數(shù)量測(cè)定（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）①常用方法：

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②原理：稀釋涂布平板法思考：活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是否與活菌實(shí)際數(shù)目吻合？為什么？統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只有一個(gè)菌落因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。

例：兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。1、甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230。

2、乙同學(xué)在該濃度下涂布了A、B、C三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

你認(rèn)為這兩位同學(xué)的做法正確嗎？如果有問題，錯(cuò)在哪？甲：沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布3個(gè)平板）乙：A組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計(jì)算平均值注：誤差太大，須重做或再多設(shè)幾組?注意事項(xiàng)①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30—300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。②為使結(jié)果接近真實(shí)值將同一稀釋度至少涂布三個(gè)平板作重復(fù)組，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)來表示。⑤每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行尿素分解菌的分離過程中，從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，A、B兩同學(xué)分別得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。1、A同學(xué)篩選出150個(gè)菌落。

2、B同學(xué)篩選出50個(gè)菌落。B認(rèn)為A的培養(yǎng)基被雜菌污染了，或培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì)，因而導(dǎo)致不能分解尿素的細(xì)菌也能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。A確認(rèn)自己的操作無誤，但也拿不出能令人信服的證據(jù)。

?原因：⑴土樣不同⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質(zhì))小結(jié)：通過這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對(duì)照組的設(shè)置是必不可少的。方案一：由其他同學(xué)用與A同學(xué)相同土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案二：將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測(cè)：a.如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無誤；b.如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。一、提出問題土壤中含有能分解尿素的細(xì)菌，我們?nèi)绾畏蛛x它們？每克土壤樣品究竟含有多少這樣的細(xì)菌？土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)二、使用的培養(yǎng)基：1.從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基2.該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？③此培養(yǎng)基能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌？為什么？碳源：葡萄糖氮源：尿素能。該培養(yǎng)基的唯一氮源為尿素，只有產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌才能利用尿素作為氮源而生存。15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4H2O定容至1000mL三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)㈠.土壤取樣細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長(zhǎng)，絕大多數(shù)分布在距地表3～8cm的土壤層。在城市，常見的是公園里、街道旁、花盆中的土壤；在農(nóng)村，則容易收集到農(nóng)田或菜園里的土壤。你打算選擇什么樣的土壤做實(shí)驗(yàn)?zāi)?？◆取樣要求：先鏟去表層土，再取樣?！羧⊥翗佑玫男¤F鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。（二）樣品的稀釋測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用1×104、1×105

和1×106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？如果不同，你打算選用多大的稀釋范圍？當(dāng)你第一次做這個(gè)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，可以將稀釋的范圍放寬一點(diǎn)。例如，可以將1×103～1×107倍稀釋的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)，以保證能從中選擇出菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)?！魬?yīng)在火焰旁稱取土壤10g。將稱好的土樣倒入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，塞好棉塞。◆在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行。◆在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)。以保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。

細(xì)菌稀釋度為104、105、106放線菌稀釋度為103、104、105真菌稀釋度為102、103、104為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？原因：土壤中各類微生物的數(shù)量是不同的。結(jié)論：為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。（三）微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1～2d。本實(shí)驗(yàn)中，我們可以每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間：細(xì)菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃培養(yǎng)3～4d一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間），同種我微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。菌落特征可作為菌種鑒定的重要依據(jù)。（四）操作提示

1.將涂布器從酒精中取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒。不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。2.要按照前面學(xué)習(xí)過的無菌操作的方法，進(jìn)行規(guī)范