微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用課件-高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修322

1.什么是發(fā)酵工程？什么是發(fā)酵？什么是傳統(tǒng)發(fā)酵？2.腐乳制作的微生物主要是什么？原理是什么？4.泡菜制作利用的微生物是什么？原理是什么？用水密封泡菜壇的目的是什么？這說(shuō)明泡菜制作需要什么條件？為什么泡菜壇只能裝八成滿(mǎn)？為什么泡菜壇的水槽內(nèi)要注滿(mǎn)水？5.在制作泡菜前，加入“陳泡菜水”的目的是什么？如果制作出的泡菜“咸而不酸”最可能的原因是什么？6.為什么日常生活中要多吃新鮮蔬菜，不宜多吃腌制蔬菜？泡菜制作過(guò)程中清水和鹽的質(zhì)量比是多少？將鹽水煮沸冷卻的目的是什么？泡菜壇內(nèi)有時(shí)會(huì)長(zhǎng)一層白膜，sh么形成的？7.泡菜腌制過(guò)程中為什么要注意腌制時(shí)間、溫度、食鹽濃度？為什么選擇無(wú)裂紋、無(wú)砂眼、壇沿深、蓋子吻合好的泡菜壇？

8.果酒的制作利用的微生物是什么？原理是什么？溫度一般控制在多少？9.果醋的制作利用的微生物是什么？原理是什么？溫度一般控制在多少？10.果酒果醋制作的流程是怎樣的？制作裝置如何設(shè)計(jì)？為什么排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接？結(jié)合果酒、果醋的制作原理，你認(rèn)為應(yīng)該如何使用這個(gè)發(fā)酵裝置？11.葡萄是先沖洗還是先去梗？為什么？能洗得太干凈嗎？裝瓶時(shí)留有1/3的空間是為什么？12.在制作果酒的過(guò)程中，除了酵母菌，是否還有其他微生物生長(zhǎng)？它們會(huì)對(duì)果酒發(fā)酵產(chǎn)生影響嗎？如果有，如何避免這種影響？13.在制作果醋的過(guò)程中，酵母菌是否還會(huì)繼續(xù)發(fā)酵？醋酸菌從何而來(lái)？采用什么措施可以加快果醋的制作？14.用簡(jiǎn)易裝置制作果酒適時(shí)擰松瓶蓋目的是什么？能打開(kāi)瓶蓋嗎？15.果酒制作是否成功如何檢測(cè)？果醋制作是否成功如何檢測(cè)？16.葡萄酒一般呈紅色的原因是什么？第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)第1章

發(fā)酵工程本節(jié)聚焦：什么是培養(yǎng)基？什么是無(wú)菌技術(shù)？怎樣進(jìn)行酵母菌的純培養(yǎng)？1.什么是微生物？研究微生物的前提是什么？無(wú)菌技術(shù)除用來(lái)防止培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么作用？2．什么是培養(yǎng)基？培養(yǎng)基的用途是什么？培養(yǎng)基按物理狀態(tài)可以如何分類(lèi)？3.培養(yǎng)基中一般包含什么成分？為滿(mǎn)足一些微生物的特殊要求，培養(yǎng)基配制還需要注意什么？4．什么是消毒？常用方法有哪些？分別適用于什么對(duì)象？5．什么是滅菌？常用方法有哪些？分別適用于什么對(duì)象？

向經(jīng)過(guò)殺菌處理的牛奶中添加對(duì)人體有益的乳酸菌，再經(jīng)過(guò)發(fā)酵就可以制成酸奶，在家里自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適的事件屢見(jiàn)不鮮，主要原因是在制作過(guò)程中有雜菌混入。那么，怎樣才能保證無(wú)處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？從社會(huì)中來(lái)

應(yīng)該先對(duì)制作用具和原料進(jìn)行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進(jìn)入。防止雜菌污染，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是研究和應(yīng)用微生物的前提，也是發(fā)酵工程的重要基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物關(guān)鍵:(1）提供微生物生長(zhǎng)繁殖所需營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件(2）確保其它微生物無(wú)法混入(3)并將需要的微生物分離出來(lái)培養(yǎng)基的配制無(wú)菌技術(shù)微生物的純化培養(yǎng)從社會(huì)中來(lái)瓊脂固體培養(yǎng)基是實(shí)驗(yàn)室中最常用的培養(yǎng)基之一固體培養(yǎng)基（有凝固劑）液體培養(yǎng)基（無(wú)凝固劑）1、概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。2、作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。3、類(lèi)型：（1）按物理性質(zhì)分微生物在其表面生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落一、培養(yǎng)基的配制固體培養(yǎng)基（有凝固劑）液體培養(yǎng)基（無(wú)凝固劑）3、類(lèi)型：（1）按物理

性質(zhì)分選擇培養(yǎng)基（P16）鑒別培養(yǎng)基（P20）（2）按用途分合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基（3）按成分分如：不加氮源，可分離

菌；加入青霉素，可分離

菌。固氮酵母菌等真一、培養(yǎng)基的配制組分含量提供的主要營(yíng)養(yǎng)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g碳源、氮源和維生素等NaCl5g無(wú)機(jī)鹽；H2O定容至1000ml水表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成4、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：（1）基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽碳源——提供碳元素的物質(zhì)。氮源——提供氮元素的物質(zhì)。（合成多種含碳有機(jī)物）（合成蛋白質(zhì)、核酸等）一、培養(yǎng)基的配制4、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：（1）基本成分：①碳源無(wú)機(jī)碳源——如CO2、HCO3-等。有機(jī)碳源——如葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。思考：培養(yǎng)任何微生物，是否必須添加有機(jī)碳源？

不一定。如自養(yǎng)型微生物利用無(wú)機(jī)碳源（空氣中的CO2）無(wú)機(jī)碳源只是碳源，不提供能量有機(jī)碳源既是碳源，也能提供能量一、培養(yǎng)基的配制4、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：②氮源無(wú)機(jī)氮源——如N2、NH3、NH4+等。有機(jī)氮源——如尿素、氨基酸、牛肉膏、蛋白胨等。思考：培養(yǎng)任何微生物，是否必須添加有機(jī)氮源？不一定。如固氮菌可利用無(wú)機(jī)氮源（空氣中的N2）。NH3既是氮源，也提供能量（硝化細(xì)菌）（1）基本成分：有機(jī)氮源既是氮源，也能提供能量一、培養(yǎng)基的配制4、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：③水——良好的溶劑；——維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定（結(jié)合水）。④無(wú)機(jī)鹽——提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)；——調(diào)節(jié)pH；——維持滲透壓。（1）基本成分：一、培養(yǎng)基的配制4、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：（2）特殊條件：pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、O2氨基酸、維生素、堿基等例如：1.培養(yǎng)乳酸桿菌需要添加

；2.培養(yǎng)霉菌時(shí)需將PH調(diào)至

，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)將PH調(diào)至

；3.培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供

條件。維生素酸性中性或微堿性無(wú)氧一、培養(yǎng)基的配制思考：所有微生物是否都可以用培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)?否。病毒是沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的微生物,必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制的方式增殖,因此不能用培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。幾種微生物的營(yíng)養(yǎng)和能量來(lái)源分析微生物碳源氮源能源藍(lán)細(xì)菌CO2NH4＋、NO3-等光能硝化細(xì)菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類(lèi)等有機(jī)物N2有機(jī)物大腸桿菌糖類(lèi)、蛋白質(zhì)等有機(jī)物蛋白質(zhì)等有機(jī)物1.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基的主要差別在于

；自養(yǎng)型微生物所需的碳源來(lái)自

碳源，異養(yǎng)型微生物所需的碳源來(lái)自

碳源；2.無(wú)機(jī)氮源不但能給自養(yǎng)型微生物提供

，也能作為

；3.含有C、H、O、N的有機(jī)物可作為

微生物的碳源、氮源、能源。碳源無(wú)機(jī)有機(jī)氮源能源物質(zhì)異養(yǎng)型1．（2008·全國(guó)·高考真題）下列關(guān)于細(xì)菌的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．硝化細(xì)菌能以NH3，作為氮源和能源物質(zhì)B．某些細(xì)菌可以利用光能固定CO2合成有機(jī)物C．生長(zhǎng)因子（氨基酸）是某些細(xì)菌生長(zhǎng)過(guò)程中需要額外補(bǔ)充的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)D．含伊紅和美藍(lán)試劑的培養(yǎng)基不能用來(lái)鑒別牛奶中的大腸桿菌D

2．下表是某同學(xué)培養(yǎng)微生物時(shí)配制的培養(yǎng)基，請(qǐng)據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類(lèi)型是

。（2）若除去成分②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。（3）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有

類(lèi)。（4）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是

。自養(yǎng)型微生物

固氮微生物

3

瓊脂（或凝固劑）

3.含有C、H、O、N的有機(jī)物可作為

微生物的碳源、氮源、能源；微生物碳源氮源能源藍(lán)細(xì)菌硝化細(xì)菌根瘤菌大腸桿菌CO2NH4＋、NO3-等光能CO2NH3NH3氧化的化學(xué)能糖類(lèi)等有機(jī)物N2有機(jī)物中的化學(xué)能糖類(lèi)、蛋白質(zhì)等有機(jī)物蛋白質(zhì)、NH4＋、NO3-等有機(jī)物中的化學(xué)能1.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基的主要差別在于

；2.無(wú)機(jī)氮源不但能給有些自養(yǎng)型微生物提供

，也能作為

，碳源氮源能源物質(zhì)異養(yǎng)型NH3：既是硝化細(xì)菌的氮源，又是它的能源物質(zhì)光能自養(yǎng)化能自養(yǎng)異養(yǎng)、固氮菌異養(yǎng)4.同一種物質(zhì)不能既做碳源又做氮源（

）牛肉膏或蛋白胨，可為異養(yǎng)微生物提供碳源和氮源×思考討論獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵——防止雜菌污染無(wú)菌技術(shù)——(1)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被雜菌污染外；(2)

避免操作者被微生物感染。二、無(wú)菌技術(shù)1、對(duì)象：（1）實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和

。（2）培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行

。培養(yǎng)皿接種環(huán)培養(yǎng)基P10注意：實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|。為了避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。二、無(wú)菌技術(shù)消毒滅菌超凈工作臺(tái)2、類(lèi)型：消毒——用較為溫和的物理化學(xué)或生物方法殺死

物體表面或內(nèi)部的部分微生物。滅菌——用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的

微生物，包括芽孢和孢子。二、無(wú)菌技術(shù)芽孢：芽孢和孢子孢子：細(xì)菌、原生動(dòng)物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖作用的無(wú)性生殖細(xì)胞(是繁殖體)。能直接發(fā)育成新個(gè)體。知識(shí)拓展有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體(不是繁殖體)，叫作芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢煮沸3小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜(如溫度、水分適宜)的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌。二、無(wú)菌技術(shù)煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥物消毒法紫外線(xiàn)消毒100℃煮5~6min?？蓺⑺牢⑸锏臓I(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。62~65℃煮30min或80~90℃下處理0.5~1min。可殺死絕大部分微生物，不破壞食物的營(yíng)養(yǎng)成分。用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)用紫外線(xiàn)照射30min，以殺死物體表面或空氣中的微生物。利用高溫導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，從而導(dǎo)致微生物死亡。利用化學(xué)藥物殺死各種微生物紫外線(xiàn)破壞微生物的DNA結(jié)構(gòu)2、類(lèi)型：（1）消毒方法：為加強(qiáng)效果，可在照射前噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液2、類(lèi)型：（1）消毒方法：煮沸消毒法——100℃煮沸5-6min。巴氏消毒法——62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min。耐水耐高溫的器械不耐高溫的液體（如牛奶）化學(xué)藥劑消毒法——70%酒精、氯氣消毒。紫外線(xiàn)消毒法——紫外燈照射。雙手、水源接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)二、無(wú)菌技術(shù)噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液2、類(lèi)型：（2）滅菌方法：濕熱滅菌——用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進(jìn)行滅菌。干熱滅菌——干熱滅菌箱內(nèi)160-170℃下加熱2-3h。灼燒滅菌——直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒。(高壓蒸汽滅菌——高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa、121℃下維持15-30min）培養(yǎng)基耐高溫，需保持干燥的物品。如玻璃器皿(如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器)和金屬器具接種工具（涂布器、接種環(huán)、接種針等）、試管口、瓶口等二、無(wú)菌技術(shù)高壓蒸汽滅菌鍋干熱滅菌箱涂布器例、下列有關(guān)無(wú)菌技術(shù)的說(shuō)法，正確的是（

）A.無(wú)菌技術(shù)的關(guān)鍵是殺滅實(shí)驗(yàn)室中的所有的微生物B.培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行濕熱滅菌C.經(jīng)巴氏消毒法處理的食品因微生物未被徹底消滅，不能在常溫下長(zhǎng)期保存D.無(wú)菌技術(shù)中，若處理對(duì)象為液體，則只能消毒，不能滅菌C二、無(wú)菌技術(shù)6.固體培養(yǎng)基配制的一般步驟是怎樣的？7.什么是培養(yǎng)物？什么是純培養(yǎng)物？什么是純培養(yǎng)？一般包括哪些步驟？8.培養(yǎng)基能倒入平板后再滅菌嗎？9.倒平板時(shí)，為什么要冷卻到50℃左右？如何估計(jì)溫度？錐形瓶瓶口要通過(guò)火焰，為什么？倒平板時(shí)培養(yǎng)皿蓋能完全打開(kāi)嗎？平板冷凝后為何要倒置？10.如何檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否徹底滅菌（平板是否合格）？不小心將培養(yǎng)基濺到皿蓋與皿底間的平板還能用嗎？11.平板劃線(xiàn)操作時(shí)，接種環(huán)在什么時(shí)候灼燒？為什么？灼燒后為何要冷卻再劃線(xiàn)？第二次及其后的劃線(xiàn)為何總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始？12.在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)？如果有，說(shuō)明了什么？13.在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，如果觀(guān)察到了不同形態(tài)的菌落，可能是由哪些原因引起？14.“酵素”是什么？水果“酵素”的制作原理是什么？水果“酵素”中可能含有哪些成分？它是否含有人們無(wú)法從其他食品中獲取但又是維護(hù)健康所必需的成分？水果“酵素”中的所有成分都有益于人體健康嗎？三、微生物的純培養(yǎng)1、概念：(1)接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類(lèi)微生物的群體?！囵B(yǎng)物(2)由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體?！兣囵B(yǎng)物(3)獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程?！兣囵B(yǎng)(4)分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落?！?5)一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物?！獑尉淙⑽⑸锏募兣囵B(yǎng)三、微生物的純培養(yǎng)2、純培養(yǎng)過(guò)程：（以培養(yǎng)酵母菌為例）培養(yǎng)念珠菌顯色培養(yǎng)基大腸桿菌顯色培養(yǎng)基酵母菌培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌和枯草桿菌培養(yǎng)基倒平板配制培養(yǎng)基滅菌接種和分離三、微生物的純培養(yǎng)制備培養(yǎng)基2、純培養(yǎng)過(guò)程：稱(chēng)取去皮馬鈴薯200g，切小塊，加水1000ml，煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過(guò)濾。向?yàn)V液加入20g葡萄糖(可用蔗糖代替)、15～20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。配制培養(yǎng)基滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15~30min。將5～8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃滅菌2h。三、微生物的純培養(yǎng)2、純培養(yǎng)過(guò)程：倒平板待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。過(guò)高：燙手；過(guò)低：培養(yǎng)基凝固。避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基防止雜菌污染培養(yǎng)基(1)防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基;(2)避免培養(yǎng)基的水分過(guò)快的揮發(fā)若培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板不能再用三、微生物的純培養(yǎng)倒平板如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1—2天，無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備成功；否則需要重新制備。思考.如何檢驗(yàn)制備的培養(yǎng)基滅菌是否合格？2、純培養(yǎng)過(guò)程：接種和分離通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線(xiàn)后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。三、微生物的純培養(yǎng)平板劃線(xiàn)法聚集的菌群連續(xù)劃線(xiàn)稀釋分散單個(gè)細(xì)胞菌落生長(zhǎng)繁殖接種環(huán)分區(qū)劃線(xiàn)法連續(xù)劃線(xiàn)法消滅接種環(huán)上原有的雜菌消滅試管口雜菌冷卻后再進(jìn)行—以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。步驟⑥不能劃破培養(yǎng)基？①一旦劃破，會(huì)造成劃線(xiàn)不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；②存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落步驟⑦第二次及以后的劃線(xiàn)前，都要灼燒接種環(huán)。殺死上次劃線(xiàn)時(shí)殘留菌種，使下一次劃線(xiàn)的菌種直接來(lái)源上次劃線(xiàn)的末端，從而使每次劃線(xiàn)時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個(gè)細(xì)胞。

如果相連，最后一個(gè)區(qū)域的微生物可能來(lái)自第一區(qū)域，難以形成單個(gè)菌落。劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，需要灼燒接種環(huán)？除去殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者第一步灼燒接種環(huán)——消滅接種環(huán)上的雜菌試管—菌種灼燒瓶口——消滅試管口雜菌冷卻后再進(jìn)行—以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。2、純培養(yǎng)過(guò)程：接種和分離通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線(xiàn)后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液⑥將皿蓋打開(kāi)一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃3-5條平行線(xiàn)，蓋上皿蓋。⑤試管口通過(guò)火焰，并塞上棉塞③試管口通過(guò)火焰⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始作第二次劃線(xiàn)。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線(xiàn)。三、微生物的純培養(yǎng)平板劃線(xiàn)法2、純培養(yǎng)過(guò)程：培養(yǎng)完成平板劃線(xiàn)后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右(培養(yǎng)溫度因酵母菌種類(lèi)的不同而稍有差異)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h。作對(duì)照。該培養(yǎng)基無(wú)菌落說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有污染警示：在實(shí)驗(yàn)中，不可吃東西、喝水，離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。如何記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果?培養(yǎng)12h和24h后，觀(guān)察菌落的大小、形狀、顏色（是否發(fā)生變化）三、微生物的純培養(yǎng)分區(qū)劃線(xiàn)ABCDE2、純培養(yǎng)過(guò)程：接種和分離連續(xù)劃線(xiàn)注意事項(xiàng):①接種環(huán)只沾

次菌液,但要在培養(yǎng)基

位置連續(xù)劃線(xiàn)多次；

②第一次劃線(xiàn)區(qū)和最后一次劃線(xiàn)區(qū)

（能/不能）相接；

③每次劃線(xiàn)前和劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，接種環(huán)需要

；④最后,培養(yǎng)皿需

培養(yǎng)。一不同不能灼燒滅菌倒置三、微生物的純培養(yǎng)2、純培養(yǎng)過(guò)程：接種和分離思考:1.為什么在操作第一步以及每次劃線(xiàn)之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？灼燒時(shí)期目的取菌種前每次劃線(xiàn)前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。殺死上次劃線(xiàn)時(shí)殘留菌種，使下一次劃線(xiàn)的菌種直接來(lái)源上次劃線(xiàn)的末端，從而使每次劃線(xiàn)時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個(gè)細(xì)胞。殺死接種環(huán)上原有微生物（防止雜菌污染）三、微生物的純培養(yǎng)2、純培養(yǎng)過(guò)程：接種和分離思考:2.在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻再進(jìn)行劃線(xiàn)，目的是什么？避免溫度過(guò)高殺死菌種使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐漸減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落①一旦劃破，會(huì)造成劃線(xiàn)不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；②存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落4.為什么劃線(xiàn)時(shí)要注意不能劃破培養(yǎng)基？3.除第一次劃線(xiàn)外，每次劃線(xiàn)都從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始，目的是什么？三、微生物的純培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)接種和分離酵母菌培養(yǎng)酵母菌滅菌倒平板配制培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基例、在分離、純化細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，劃線(xiàn)接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如下圖，a、b、c、d是劃線(xiàn)的四個(gè)區(qū)域。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A.每次劃線(xiàn)前后都要對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌B.連續(xù)劃線(xiàn)的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落C.甲圖中的a區(qū)域?yàn)閯澗€(xiàn)的起始區(qū)域D.蘸取菌液和劃線(xiàn)要在酒精燈火焰旁進(jìn)行C思維訓(xùn)練評(píng)估論點(diǎn)的可信程度

有一段時(shí)間，水果“酵素”風(fēng)靡各地。水果“酵素”制作的大致過(guò)程是：將洗凈、切成塊狀的水果放入潔凈的容器，再加入糖和水，密封，置于陰涼處發(fā)酵一至兩周。有人說(shuō)，吃水果“酵素”可以美容、減肥、促進(jìn)消化和提高免疫力。請(qǐng)?jiān)u估這一論點(diǎn)是否可信。所謂“酵素”，就是“酶”的另一種說(shuō)法。“酵素”制作就是利用微生物進(jìn)行無(wú)氧呼吸的原理，進(jìn)行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。這樣制作的“酵素”中可能有糖類(lèi)(包括-些簡(jiǎn)單的糖和膳食纖維等)、蛋白質(zhì)(包括多種酶)、有機(jī)酸等成分，不存在它獨(dú)有的、特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，食用后可能會(huì)危害人體健康。因此，“吃水果酵素可以美容、減肥、促進(jìn)消化和提高免疫力”的論點(diǎn)值得懷疑。小結(jié)微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)無(wú)菌技術(shù)煮沸消毒法純培養(yǎng)培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基接種分離平板劃線(xiàn)法稀釋涂布平板法種類(lèi)液體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽消毒巴氏消毒法滅菌濕熱滅菌干熱滅菌灼燒滅菌

1.微生物的純培養(yǎng)既需要適宜的培養(yǎng)基，又要防止雜菌污染。判斷下列相關(guān)表述是否正確。（1）培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對(duì)微生物的生長(zhǎng)越有利。（）（2）消毒和滅菌的殺菌程度存在差異。（）（3）微生物的純培養(yǎng)物就是不含有代謝廢物的微生物培養(yǎng)物。（）×√×一、概念檢測(cè)練習(xí)

2.日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長(zhǎng)的？提示：日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低溫儲(chǔ)存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通過(guò)食鹽、糖等制造高滲環(huán)境，從而抑制微生物的生長(zhǎng)和繁殖；低溫則是通過(guò)降低微生物的代謝速率來(lái)抑制微生物的生長(zhǎng)和繁殖。一、概念檢測(cè)

1.某同學(xué)將5個(gè)手指尖在貼有“洗手前”標(biāo)簽的培養(yǎng)基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個(gè)指尖在貼有“洗手后”標(biāo)簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按一下。將這兩個(gè)培養(yǎng)皿放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，發(fā)現(xiàn)貼有“洗手后”標(biāo)簽的培養(yǎng)皿中菌落較少。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題。（1）這個(gè)實(shí)驗(yàn)中需要進(jìn)行滅菌處理的材料用具有（2）“將指尖在培養(yǎng)基上輕輕按一下”相當(dāng)于微生物培養(yǎng)中的哪一步操作？（3）從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,洗手后我們就能進(jìn)行無(wú)菌操作了嗎？操作時(shí)，我們可以采用什么方法來(lái)避免手上微生物的污染？提示（1）：培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基。提示（2）：接種。（3）提示：通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看到，洗手后手上還有一些微生物，不能直接進(jìn)行無(wú)菌操作?？梢酝ㄟ^(guò)用酒精棉球擦拭雙手，或戴消過(guò)毒的手套等方法來(lái)避免手上微生物的污染。二、拓展應(yīng)用

2.某生物興趣小組將從葡萄皮上成功分離來(lái)的野生酵母菌分別接種于3個(gè)盛有等量同種液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速分別為210r/min，230r/min和250r/min。培養(yǎng)時(shí)間與酵母菌種群密度的關(guān)系如下圖所示。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題。（1）搖床轉(zhuǎn)速不同,意味著培養(yǎng)條件有什么不同？提示：意味著培養(yǎng)液中02含量不同。（2）從圖中數(shù)據(jù)你可以得出什么結(jié)論?其原因是什么?提示：培養(yǎng)液中02含量越高,酵母菌種群密度越大。（3）為什么培養(yǎng)8h后，其中2個(gè)錐形