浙江專版2025版高考生物一輪復(fù)習(xí)第十單元生物技術(shù)實(shí)踐第34講克隆技術(shù)教案

PAGEPAGE21第34講克隆技術(shù)考試標(biāo)準(zhǔn)加試考試標(biāo)準(zhǔn)加試1.植物的克隆b2.動(dòng)物的克隆a考點(diǎn)一植物的克隆1．植物細(xì)胞全能性(2)全能性表達(dá)的條件①離體：已經(jīng)分化的植物體細(xì)胞，只有在離體條件下才能表現(xiàn)出全能性。②無(wú)菌：培育基一旦被污染，快速生長(zhǎng)的各種雜菌不僅會(huì)與培育物爭(zhēng)奪養(yǎng)分，而且會(huì)產(chǎn)生大量對(duì)培育物有害的物質(zhì)。③確定的養(yǎng)分物質(zhì)：如水、無(wú)機(jī)鹽、蔗糖、維生素等。④植物生長(zhǎng)調(diào)整劑：為促進(jìn)脫分化和再分化，培育基中須要加入確定的植物生長(zhǎng)調(diào)整劑，如生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素等。(3)全能性表達(dá)的難易程度①分化程度低的細(xì)胞>分化程度高的細(xì)胞。②受精卵>配子>體細(xì)胞。③植物細(xì)胞>動(dòng)物細(xì)胞。2．植物組織培育程序配制培育基：配制含有適當(dāng)養(yǎng)分物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的半固體培育基切取消毒的組織塊獲得愈傷組織：由相對(duì)沒(méi)有分化的活的薄壁細(xì)胞團(tuán)組成的新生組織誘導(dǎo)新植株eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(以適當(dāng)配比的養(yǎng)分物質(zhì)和生長(zhǎng)調(diào)整劑誘導(dǎo)愈傷組織,再生新植株，通過(guò)液體懸浮培育分散成單細(xì)胞→,胚狀體→植株,用纖維素酶和果膠酶制備原生質(zhì)體→原生質(zhì)體培育,→新植株))3．植物細(xì)胞培育和器官培育的措施通過(guò)平衡的植物激素配比進(jìn)行調(diào)控。(1)適量的激烈素和細(xì)胞分裂素配比，可誘導(dǎo)芽的分化。(2)適量的吲哚乙酸及適當(dāng)減除其他某些激素，可誘導(dǎo)生根。4．原生質(zhì)體培育與植物細(xì)胞工程(1)原生質(zhì)體培育植物細(xì)胞eq\o(→,\s\up7(纖維素酶、果膠酶),\s\do5(0.5～0.6mol/L的甘露醇))原生質(zhì)體eq\o(→,\s\up7(培育))新植株。(2)植物細(xì)胞工程的操作過(guò)程5．植物克隆技術(shù)的應(yīng)用(1)轉(zhuǎn)基因植株培育。(2)細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)。(3)單倍體育種。(4)誘發(fā)、篩選突變體。思索探討1．進(jìn)行植物組織培育時(shí)，既用到消毒技術(shù)，也用到滅菌技術(shù)，它們分別針對(duì)哪些對(duì)象？為何需進(jìn)行“無(wú)菌操作”。提示對(duì)培育材料及操作者衣著、手臂應(yīng)進(jìn)行消毒，對(duì)培育基應(yīng)進(jìn)行滅菌。由于雜菌不僅爭(zhēng)奪養(yǎng)分，還會(huì)產(chǎn)生毒素，故應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌操作。2．若培育物取自植物的幼莖、葉片等含有葉綠體的部位，愈傷組織中是否會(huì)含有葉綠體？提示培育物經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成相對(duì)沒(méi)有分化的細(xì)胞，因此，愈傷組織中不含葉綠體。

3．將無(wú)根的非洲菊幼苗轉(zhuǎn)入無(wú)植物激素的培育基中，在相宜的溫度和光照等條件下培育一段時(shí)間后，應(yīng)出現(xiàn)的現(xiàn)象是下列①～④中的哪一種？提示細(xì)胞分裂素促進(jìn)細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)芽的分化；生長(zhǎng)素可以促進(jìn)不定根、側(cè)根的形成；此題中雖然培育基中沒(méi)有植物激素，但由于外植體為“菊幼苗”而非離體的組織或細(xì)胞，故仍可自行產(chǎn)生激素，從而產(chǎn)生如圖②所示的生長(zhǎng)現(xiàn)象。4．生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素在植物組織培育中的相互作用及其應(yīng)用(1)細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例合適?愈傷組織會(huì)分化出根和芽。(2)細(xì)胞分裂素多，生長(zhǎng)素少?只長(zhǎng)莖葉不長(zhǎng)根。(3)生長(zhǎng)素多，細(xì)胞分裂素少?只長(zhǎng)根，不長(zhǎng)莖葉。(4)生長(zhǎng)素少，細(xì)胞分裂素也少?愈傷組織接著生長(zhǎng)，不發(fā)生分化。題型一植物細(xì)胞的全能性和組織培育方法1．下圖為玉米植物(2n＝20)組織培育的簡(jiǎn)略表示，下列有關(guān)說(shuō)法不正確的是()①eq\o(→,\s\up7(脫分化))②eq\o(→,\s\up7(再分化))③→④A．①→②的培育基中須要加入確定配比的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，還要加入瓊脂和蔗糖等B．②的分化程度比①低，全能性比①高C．若①是花藥，則④是單倍體植株，將④的種子用確定濃度的秋水仙素處理可獲得純合子D．若將②在搖床上進(jìn)行液體懸浮培育可以獲得細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大的胚性細(xì)胞答案C解析玉米為二倍體，其單倍體植株高度不育，不能產(chǎn)生“種子”。2．青蒿素是從植物黃花蒿的葉片中所提取的一種代謝產(chǎn)物，而莖及其他部位中的青蒿素含量及其微小，下列關(guān)于利用植物組織培育生產(chǎn)青蒿素的敘述中，正確的是()A．在黃花蒿組織培育過(guò)程中無(wú)需光照B．加入大量生長(zhǎng)素可提高青蒿素的產(chǎn)量C．可通過(guò)大量培育愈傷組織以干脆獲得青蒿素D．可大規(guī)模栽培組織培育苗以獲得藥用成分答案D解析植物組織培育包括脫分化和再分化兩個(gè)過(guò)程，其中脫分化過(guò)程不須要光照，而再分化過(guò)程須要光照，A項(xiàng)錯(cuò)誤；生長(zhǎng)素對(duì)脫分化和再分化過(guò)程具有調(diào)整作用，但不能干脆提高青蒿素的產(chǎn)量，B項(xiàng)錯(cuò)誤；青蒿素是從植物黃花蒿的葉片中所提取的一種代謝產(chǎn)物，而莖及其他部位中的青蒿素含量及其微小，因此通過(guò)大量培育愈傷組織不能干脆獲得青蒿素，C項(xiàng)錯(cuò)誤；可大規(guī)模栽培組織培育苗以獲得藥用成分，D項(xiàng)正確。植物組織培育過(guò)程的兩個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)(1)脫分化形成愈傷組織的過(guò)程不須要光，再分化過(guò)程須要光，因?yàn)橛鷤M織利用有機(jī)養(yǎng)分成分，而試管苗須要進(jìn)行光合作用以自養(yǎng)。(2)種子是植物的幼體，包含胚根、胚軸和胚芽，而不是高度分化的體細(xì)胞，故由種子萌發(fā)形成植株是植物的生長(zhǎng)現(xiàn)象，并未體現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性。題型二影響植物組織培育的因素3．植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性因素。依據(jù)不同依次運(yùn)用這兩類激素，會(huì)得到不同的試驗(yàn)結(jié)果。若先運(yùn)用生長(zhǎng)素，后運(yùn)用細(xì)胞分裂素，試驗(yàn)結(jié)果是()A．有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化B．細(xì)胞既分裂也分化C．細(xì)胞分化頻率提高D．有利于細(xì)胞分化，但細(xì)胞不分裂答案A解析植物組織培育過(guò)程中，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的運(yùn)用依次不同，培育的結(jié)果不同。先運(yùn)用生長(zhǎng)素，后運(yùn)用細(xì)胞分裂素，有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化；先運(yùn)用細(xì)胞分裂素，后運(yùn)用生長(zhǎng)素，細(xì)胞既分裂也分化；兩者同時(shí)運(yùn)用，細(xì)胞分化頻率提高。4．如圖表示植物組織培育過(guò)程。據(jù)圖分析下列敘述正確的是()A．⑤植株根尖細(xì)胞的全能性比①植株根尖細(xì)胞的強(qiáng)B．②試管的培育基中含有植物生長(zhǎng)調(diào)整劑，不含有機(jī)物C．③試管中的細(xì)胞具有細(xì)胞質(zhì)豐富、細(xì)胞核和液泡都大的特性D．調(diào)整④培育基中植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的比例可誘導(dǎo)產(chǎn)生不同的植物器官答案D解析由于⑤是由①上的組織經(jīng)培育形成的個(gè)體，故二者的全能性應(yīng)當(dāng)相同，A項(xiàng)錯(cuò)誤；由①到②的過(guò)程中植物細(xì)胞不能進(jìn)行光合作用，因而②試管中含有有機(jī)物如蔗糖等，故B項(xiàng)錯(cuò)誤；③試管中細(xì)胞為愈傷組織細(xì)胞，液泡小，故C項(xiàng)錯(cuò)誤。題型三植物細(xì)胞工程的應(yīng)用5．(2024·臺(tái)州月考)某科研團(tuán)隊(duì)利用植物細(xì)胞工程技術(shù)，把基因序列已知的抗除草劑(Bar)基因?qū)朐|(zhì)體獲得抗除草劑大豆。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題：(1)對(duì)于已獲得的Bar基因可以用____________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。圖中的a過(guò)程通常運(yùn)用相同的______________酶和DNA連接酶，使目的基因與載體連接形成重組DNA分子。(2)在b過(guò)程中，獲得原生質(zhì)體除了須要纖維素酶和果膠酶，還須要用到的試劑是___________。(3)勝利導(dǎo)入重組DNA的原生質(zhì)體經(jīng)脫分化形成I________________，進(jìn)而生長(zhǎng)發(fā)育成植株。下列不屬于I細(xì)胞應(yīng)具有的特征是____________。A．薄壁細(xì)胞 B．細(xì)胞質(zhì)豐富C．液泡小 D．細(xì)胞核小(4)若要推斷轉(zhuǎn)基因抗除草劑大豆是否培育勝利，比較簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法是____________________________________________________________________________。答案(1)PCR限制性核酸內(nèi)切(2)(較高濃度的)甘露醇(3)愈傷組織D(4)用確定濃度的除草劑噴灑，視察轉(zhuǎn)基因大豆的生長(zhǎng)狀況解析(1)PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因；圖中a為形成重組DNA分子的過(guò)程，該過(guò)程首先須要用限制性核酸內(nèi)切酶切割外源DNA和載體，其次須要用DNA連接酶將目的基因與載體連接形成重組DNA分子。(2)用酶混合液處理植物細(xì)胞時(shí)，酶混合液中含有相宜濃度的甘露醇，其作用是調(diào)整細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓，防止細(xì)胞吸水脹破。(3)勝利導(dǎo)入重組DNA的原生質(zhì)體經(jīng)脫分化形成I愈傷組織，進(jìn)而生長(zhǎng)發(fā)育成植株。愈傷組織細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大。(4)若要推斷轉(zhuǎn)基因抗除草劑大豆是否培育勝利，比較簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法是用確定濃度的除草劑噴灑，視察轉(zhuǎn)基因大豆的生長(zhǎng)狀況。6．某探討小組欲將已知抗鹽基因?qū)朐|(zhì)體培育抗鹽菊科植物。請(qǐng)回答：(1)為獲得大量抗鹽基因，可通過(guò)____________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，也可將其連接到____________上，通過(guò)大腸桿菌培育擴(kuò)增。(2)制備葉片原生質(zhì)體的酶混合液中，一般含較高濃度的甘露醇，其目的是避開(kāi)制備的原生質(zhì)體____________。酶混合液需通過(guò)____________________________滅菌，才能用于無(wú)菌原生質(zhì)體的制備，整個(gè)無(wú)菌操作過(guò)程需在______________中進(jìn)行。(3)可通過(guò)________________方法，干脆將抗鹽基因?qū)朐|(zhì)體的細(xì)胞核。此外，還可用聚乙二醇融合、電擊等方法導(dǎo)入。導(dǎo)入后的原生質(zhì)體需再生出____________，經(jīng)持續(xù)分裂獲得愈傷組織，進(jìn)一步分化獲得再生植株并擴(kuò)大繁殖。(4)利用帶有標(biāo)記的抗鹽基因特殊片段與從轉(zhuǎn)基因植株提取的RNA進(jìn)行________________，驗(yàn)證抗鹽基因是否被整合到受體細(xì)胞中并轉(zhuǎn)錄。通過(guò)將擴(kuò)大繁殖的再生植株轉(zhuǎn)接到含有________________________的培育基，依據(jù)生長(zhǎng)狀況初步篩選出抗鹽植株。(5)為了獲得大量該轉(zhuǎn)基因植株，可將帶腋芽的莖段轉(zhuǎn)入相宜培育基中，獲得大量________，然后轉(zhuǎn)入生根培育基中誘導(dǎo)生根，形成再生植株。再生植株需進(jìn)行________(不定項(xiàng)選擇：A.無(wú)菌處理B．熬煉C．去除根部殘留的培育基D．逐步提高濕度處理)后才能移種大田。答案(1)PCR質(zhì)粒(2)吸水脹破過(guò)濾(G6玻璃砂漏斗)超凈臺(tái)(3)顯微注射細(xì)胞壁(4)分子雜交較高濃度NaCl(鹽)(5)叢狀苗B、C解析(1)抗鹽菊科植物的培育采納了基因工程技術(shù)和植物組織培育等技術(shù)。在基因工程技術(shù)中，抗鹽基因?yàn)槟康幕颍梢圆杉{聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增目的基因，也可以通過(guò)將連接有目的基因的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中使其擴(kuò)增。(2)原生質(zhì)體的制備確定要放在高滲溶液中，避開(kāi)植物細(xì)胞去壁后原生質(zhì)體過(guò)度吸水而脹破；酶在高溫下易失活，所以酶混合液無(wú)法采納高壓蒸汽滅菌法滅菌，可用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾除菌。(3)植物細(xì)胞去壁后可采納顯微注射法導(dǎo)入目的基因。原生質(zhì)體培育過(guò)程中必需首先再生出細(xì)胞壁，然后再經(jīng)過(guò)脫分化形成愈傷組織，最終經(jīng)過(guò)再分化形成植株。(4)若抗鹽基因勝利整合并轉(zhuǎn)錄出RNA，則相應(yīng)的RNA能夠跟抗鹽基因的模板鏈互補(bǔ)配對(duì)，所以可用分子雜交的方法進(jìn)行鑒定，而抗鹽基因勝利表達(dá)的抗鹽植株，則應(yīng)當(dāng)通過(guò)種植利用其可以耐受高濃度食鹽的特性進(jìn)行篩選。(5)在植物組織培育過(guò)程中，應(yīng)當(dāng)將帶芽莖段先放在生芽培育基中得到叢狀苗，然后再轉(zhuǎn)入生根培育基中得到再生植株幼苗，幼苗要去除根部殘留的培育基，經(jīng)過(guò)漸漸降低濕度的熬煉后才能在大田種植。考點(diǎn)二動(dòng)物的克隆1．動(dòng)物細(xì)胞、組織培育(1)動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物的細(xì)胞和組織培育。(2)動(dòng)物細(xì)胞培育的過(guò)程①概述：動(dòng)物細(xì)胞培育包括組織塊的切取、組織細(xì)胞的分散及細(xì)胞培育三個(gè)階段。分散組織細(xì)胞常用的方法有機(jī)械消化法和胰酶消化法。②原理：細(xì)胞增殖。③條件：a.足夠的養(yǎng)分供應(yīng)——微量元素、無(wú)機(jī)鹽、糖類、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、血清等。b．相宜的溫度：36.5℃±0.5℃；相宜的pH：7.2～7.4c．氣體環(huán)境eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(O295%的空氣：用于需氧呼吸、細(xì)胞代謝,CO25%：維持pH))d．無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境④流程取材：從動(dòng)物組織切片中切取小片樣品↓機(jī)械消化或胰酶消化單個(gè)細(xì)胞懸浮液↓轉(zhuǎn)入培育液原代培育：從機(jī)體取出后馬上進(jìn)行的細(xì)胞、組織培育↓分瓶傳代培育：將原代培育細(xì)胞分成若干份，接種到若干份培育基中，使其接著生長(zhǎng)、增殖(3)動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培育過(guò)程：切取組織小片→胰蛋白酶酶解→原代培育→傳代培育。2．細(xì)胞系和細(xì)胞株(1)細(xì)胞系的類型：連續(xù)細(xì)胞系(惡性細(xì)胞系：具有異體致瘤性；不死性細(xì)胞系：保留接觸抑制現(xiàn)象，不致癌)和有限細(xì)胞系。(2)細(xì)胞株：通過(guò)確定的選擇或純化方法，從原代培育物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞。可分為連續(xù)細(xì)胞株和有限細(xì)胞株。3．克隆培育法(1)概念：把一個(gè)單細(xì)胞從群體中分別出來(lái)單獨(dú)培育，使之繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群體的技術(shù)。(2)基本要求：必需確定所建成的克隆來(lái)源于單個(gè)細(xì)胞。(3)提高細(xì)胞克隆形成率的措施有：①選擇相宜的培育基；②添加血清；③以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)；④激素(胰島素等)刺激；⑤運(yùn)用CO2培育箱；⑥調(diào)整pH等。4．動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用(1)細(xì)胞融合①概念：是指在確定的條件下將兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。②原理：細(xì)胞膜的流淌性。③誘導(dǎo)融合的方法a．物理方法和化學(xué)方法：電激法、聚乙二醇等。b．生物方法：滅活的病毒(如仙臺(tái)病毒)。(2)細(xì)胞雜交①概念：基因型不同的細(xì)胞間的融合就是細(xì)胞雜交。②過(guò)程③應(yīng)用：由于細(xì)胞雜交中染色體簡(jiǎn)潔丟失，利用雜交細(xì)胞檢測(cè)特定染色體丟失與特定基因產(chǎn)物(蛋白質(zhì))削減的對(duì)應(yīng)關(guān)系可以進(jìn)行基因定位。(3)雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體的制備過(guò)程①依據(jù)上圖完善下面的過(guò)程②為什么選擇B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合？答案a．選擇B淋巴細(xì)胞：若實(shí)行單個(gè)的B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖形成細(xì)胞群，這樣的細(xì)胞群就能產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。b.選擇骨髓瘤細(xì)胞：在體外培育的條件下，腫瘤細(xì)胞(如骨髓瘤細(xì)胞)具有無(wú)限增殖的特性。5．動(dòng)物的克隆繁殖(1)動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度①受精卵具有全能性。②多能細(xì)胞只具有分化出多種組織細(xì)胞的潛能。③單能細(xì)胞只能分化為一種細(xì)胞。④高度分化的細(xì)胞不再分化為其他細(xì)胞。(2)動(dòng)物難以克隆的根本緣由在動(dòng)物的個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞分化使得細(xì)胞發(fā)生了基因的差異表達(dá)，細(xì)胞基因組中基因的活動(dòng)很不完全。(3)細(xì)胞核移植試驗(yàn)和動(dòng)物的克隆繁殖①核移植：利用一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核來(lái)取代另一個(gè)細(xì)胞中的細(xì)胞核，形成一個(gè)重建的“合子”。②動(dòng)物的克隆繁殖提示①動(dòng)物難以克隆的根本緣由：分化了的動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的調(diào)整蛋白，關(guān)閉了細(xì)胞核中與個(gè)體發(fā)育有關(guān)的基因。②重組卵發(fā)育成一個(gè)新個(gè)體，體現(xiàn)了細(xì)胞核的全能性而非動(dòng)物細(xì)胞的全能性。③重建合子的細(xì)胞質(zhì)必需來(lái)自卵細(xì)胞的緣由：卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中沒(méi)有與關(guān)閉個(gè)體發(fā)育有關(guān)基因的調(diào)整蛋白。④動(dòng)物克隆屬于無(wú)性繁殖，產(chǎn)生新個(gè)體的性別、絕大多數(shù)性狀與供核親本一樣。思索探討1．區(qū)分原代培育和傳代培育(1)原代培育①細(xì)胞懸浮液第一次在瓶中培育，沒(méi)有分瓶培育之前的細(xì)胞培育。②有時(shí)把最初的若干次傳代歸入原代培育范圍。(2)傳代培育①細(xì)胞懸浮液培育一段時(shí)間后，分瓶再進(jìn)行的細(xì)胞培育。②將細(xì)胞從一個(gè)培育瓶轉(zhuǎn)移或移植到另一個(gè)培育瓶，就稱為傳代培育。2．比較細(xì)胞系和細(xì)胞株種類來(lái)源特點(diǎn)細(xì)胞系有限細(xì)胞系通常由二倍體細(xì)胞傳代培育建成有接觸抑制；不能連續(xù)培育連續(xù)細(xì)胞系由傳代細(xì)胞連續(xù)培育建成發(fā)生了轉(zhuǎn)化，多數(shù)具有異倍體核型；有些具有異體致瘤性；有些具有不死性，但不致癌細(xì)胞株有限細(xì)胞株通過(guò)確定的選擇或純化方法，從原代培育物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞傳代次數(shù)有限一般具有恒定的染色體組型、同功酶類型、病毒敏感性和生化特性等連續(xù)細(xì)胞株可連續(xù)多次傳代3.動(dòng)物細(xì)胞培育過(guò)程中，也須要將動(dòng)物細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)，這與視察植物細(xì)胞的有絲分裂中的解離作用類似。兩種處理方法的結(jié)果最大的區(qū)分是什么？提示動(dòng)物細(xì)胞培育過(guò)程中的處理，動(dòng)物細(xì)胞還保持活性；但在植物細(xì)胞的解離過(guò)程中，細(xì)胞被解離液殺死，已經(jīng)失去活性。4．單克隆抗體的制備分析(1)細(xì)胞融合完成的標(biāo)記是什么？提示細(xì)胞核融合成一個(gè)核。(2)雜交瘤細(xì)胞的特性是什么？提示既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生大量特異抗體。(3)獲得單克隆抗體的兩個(gè)場(chǎng)所在哪里？提示若在培育基中進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞培育，則從培育液中提?。蝗粼谛∈蠡蚱渌麆?dòng)物腹腔中培育，則從腹水中提取。(4)在單克隆抗體制備過(guò)程中，一般認(rèn)為有兩次篩選過(guò)程，請(qǐng)說(shuō)明。提示第一次是篩選出雜交瘤細(xì)胞(用選擇培育基)，其次次是進(jìn)一步篩選出能產(chǎn)生人們所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。(5)用特定的選擇培育基篩選：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(“BB”細(xì)胞、“瘤瘤”細(xì)胞)都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞(“B瘤”細(xì)胞)才能生長(zhǎng)。(6)單克隆抗體有哪些優(yōu)點(diǎn)？提示特異性強(qiáng)、靈敏度高，可大量制備。5．通過(guò)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得的克隆動(dòng)物，其遺傳物質(zhì)是否和供核細(xì)胞的遺傳物質(zhì)完全一樣？提示不完全一樣。細(xì)胞核遺傳物質(zhì)一樣，但細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)和供應(yīng)去核卵細(xì)胞的個(gè)體幾乎完全一樣(分析遺傳物質(zhì)來(lái)源時(shí)，確定要留意細(xì)胞核遺傳物質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)的區(qū)分)。題型一動(dòng)物細(xì)胞培育與克隆繁殖1．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培育的敘述，正確的是()A．連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞大多具有二倍體核型B．某些癌細(xì)胞在合適條件下能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞C．由多個(gè)祖細(xì)胞培育形成的細(xì)胞群為一個(gè)克隆D．未經(jīng)克隆化培育的細(xì)胞系細(xì)胞具有相同的性狀答案B解析連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞大多數(shù)具有異倍體核型；癌細(xì)胞仍能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞，如小鼠畸胎癌細(xì)胞能分化為各種正常體細(xì)胞；由一個(gè)共同的祖細(xì)胞培育形成的細(xì)胞群為一個(gè)克隆；未經(jīng)克隆化培育的細(xì)胞系具有異質(zhì)性。2．(2015·安徽，31Ⅱ)科研人員采納轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過(guò)乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路途如圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)由過(guò)程①獲得的A為_(kāi)______________________________________________________。(2)在核移植之前，必需先去掉受體卵細(xì)胞的核，目的是______________________________。受體應(yīng)選用____________期卵母細(xì)胞。(3)進(jìn)行胚胎移植時(shí)，代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生______________，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活供應(yīng)了可能。(4)采納胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆，理論上可獲得無(wú)限個(gè)轉(zhuǎn)基因綿羊，這是因?yàn)開(kāi)_______________________________________________________________________。答案(1)含目的基因的重組DNA分子(2)保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞MⅡ中(3)免疫排斥反應(yīng)(4)整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培育解析(1)依據(jù)題意可知，要將人凝血因子IX基因?qū)刖d羊胎兒成纖維細(xì)胞，必需構(gòu)建基因表達(dá)載體，所以由過(guò)程①獲得的A為含目的基因的重組DNA分子。(2)在核移植之前，為了保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞，必需先去掉受體卵細(xì)胞的核。受體應(yīng)選用減數(shù)其次次分裂中期(MⅡ中期)的卵母細(xì)胞。(3)進(jìn)行胚胎移植時(shí)，代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活供應(yīng)了可能。(4)采納胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆，理論上可獲得無(wú)限個(gè)轉(zhuǎn)基因綿羊，這是因?yàn)檎嫌心康幕虻某衫w維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培育。比較動(dòng)物細(xì)胞培育、核移植與動(dòng)物細(xì)胞融合比較動(dòng)物細(xì)胞培育核移植動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞增殖動(dòng)物細(xì)胞核的全能性細(xì)胞膜的流淌性過(guò)程細(xì)胞A、B融合雜交細(xì)胞有絲分裂多個(gè)相同雜交細(xì)胞結(jié)果相同分化程度的細(xì)胞群與供體基本相同的個(gè)體雜交細(xì)胞關(guān)鍵環(huán)節(jié)細(xì)胞增殖(分裂)、細(xì)胞癌變核融合、細(xì)胞分化人工誘導(dǎo)細(xì)胞膜融合應(yīng)用①生產(chǎn)生物制品；②基因工程；③檢測(cè)有毒物質(zhì)①加速良種繁育；②愛(ài)護(hù)瀕危物種；③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白；④供應(yīng)克隆器官、組織等獲得雜種細(xì)胞，制備細(xì)胞產(chǎn)物，如單克隆抗體

題型二單克隆抗體的制備3．關(guān)于下面制備單克隆抗體過(guò)程示意圖的敘述，不正確的是()A．①表示已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞均是從小鼠的脾臟中提取的B．②促進(jìn)細(xì)胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介導(dǎo)C．④中的篩選是通過(guò)抗原—抗體反應(yīng)進(jìn)行的D．⑤可以無(wú)限增殖答案A解析已免疫的B淋巴細(xì)胞可以從小鼠的脾臟中提取，也可以從血漿中提取，骨髓瘤細(xì)胞是從小鼠的骨髓中提取的。單克隆抗體是利用已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞得到的，融合方法可以用化學(xué)方法——聚乙二醇，生物方法——滅活的病毒等。假如要篩選能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群，可以通過(guò)檢測(cè)抗原—抗體反應(yīng)，假如有反應(yīng)說(shuō)明產(chǎn)生了抗體。融合細(xì)胞具有雙親的特點(diǎn)，既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生單一抗體。4．(2024·嘉興期末)如圖是制備抗體的兩個(gè)途徑的模式圖，下列敘述正確的是()A．圖中獲得的抗體1和抗體2結(jié)構(gòu)完全相同B．抗體1和抗體2的制備過(guò)程均涉及細(xì)胞篩選C．Y細(xì)胞的增殖過(guò)程須要供應(yīng)適量的O2，不須要供應(yīng)CO2D．①和④過(guò)程的原理分別是細(xì)胞增殖和堿基互補(bǔ)配對(duì)原則答案B解析抗體1和抗體2的氨基酸排列依次相同，但空間結(jié)構(gòu)不確定相同，抗體1由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生，其形成經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的加工，抗體2是在大腸桿菌中產(chǎn)生，其內(nèi)沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，A項(xiàng)錯(cuò)誤；②處須要通過(guò)選擇培育基的篩選，得到既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的Y細(xì)胞；重組DNA分子的構(gòu)建和導(dǎo)入過(guò)程的勝利率較低，所以也須要篩選，B項(xiàng)正確；動(dòng)物細(xì)胞培育須要?dú)怏w環(huán)境，培育液中須要供應(yīng)氧氣和二氧化碳。所需的氣體CO2的作用是維持培育液的pH，C項(xiàng)錯(cuò)誤；①過(guò)程表示動(dòng)物細(xì)胞融合，其結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是細(xì)胞膜的流淌性，D項(xiàng)錯(cuò)誤。模擬演練1．下列各項(xiàng)中屬于克隆技術(shù)的是()A．把鯉魚(yú)胚胎細(xì)胞的細(xì)胞核移到去核鯽魚(yú)成熟卵中B．體外培育基底層干細(xì)胞來(lái)培植皮膚用于植皮手術(shù)C．將小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞結(jié)合成雜交瘤細(xì)胞D．將人工授精的受精卵體外培育形成胚胎答案B解析把鯉魚(yú)胚胎細(xì)胞的細(xì)胞核移到去核鯽魚(yú)成熟卵中屬于核移植，A項(xiàng)錯(cuò)誤；體外培育基底層干細(xì)胞來(lái)培植皮膚用于植皮手術(shù)屬于克隆技術(shù)，B項(xiàng)正確；將小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞結(jié)合成雜交瘤細(xì)胞屬于細(xì)胞融合技術(shù)，C項(xiàng)錯(cuò)誤；將人工授精的受精卵體外培育形成胚胎，屬于有性生殖，D項(xiàng)錯(cuò)誤。2．下圖表示利用棉花葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體培育進(jìn)行遺傳改良的過(guò)程，據(jù)圖分析下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．①過(guò)程需在相宜條件下用纖維素酶和果膠酶的混合物處理B．②過(guò)程能定向誘導(dǎo)原生質(zhì)體產(chǎn)生優(yōu)良性狀的突變C．③過(guò)程中葉肉細(xì)胞失去了其特有的結(jié)構(gòu)和功能D．④過(guò)程需用相宜配比的植物激素處理答案B解析植物細(xì)胞壁主要是由纖維素和果膠組成的，常選用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體。紫外線照耀誘變育種所依據(jù)的原理是基因突變，這種突變是不定向的。③過(guò)程是脫分化，指已經(jīng)分化的植物器官、組織或細(xì)胞，當(dāng)受到創(chuàng)傷或進(jìn)行離體(也受到創(chuàng)傷)培育時(shí)，已停止分裂的細(xì)胞又重新復(fù)原分裂，細(xì)胞變更原有的分化狀態(tài)，失去原有的結(jié)構(gòu)和功能，成為具有未分化特性的細(xì)胞。④是再分化，需用相宜配比的植物激素誘導(dǎo)。3．(2024·鄞州中學(xué)測(cè)試)下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培育的敘述，錯(cuò)誤的是()A．在培育基中加入胰島素可提高動(dòng)物細(xì)胞克隆形成率B．細(xì)胞克隆可以從一般細(xì)胞系中分別出缺乏特殊基因的突變細(xì)胞系C．連續(xù)細(xì)胞系可認(rèn)為是發(fā)生了轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系，大多數(shù)具有二倍體核型D．無(wú)限細(xì)胞系比有限細(xì)胞系更簡(jiǎn)潔克隆答案C解析胰島素可促進(jìn)葡萄糖等物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入組織細(xì)胞，A項(xiàng)正確；細(xì)胞克隆即克隆培育法，是將單一細(xì)胞從細(xì)胞群體中分別出來(lái)單獨(dú)培育形成純系的技術(shù)，從一般細(xì)胞系中分別出單個(gè)突變細(xì)胞即可采納這種方法培育成細(xì)胞系，B項(xiàng)正確；連續(xù)細(xì)胞系大多具有異倍體核型，C項(xiàng)錯(cuò)誤；無(wú)限細(xì)胞系增殖實(shí)力更強(qiáng)，更易克隆，D項(xiàng)正確。A．過(guò)程①導(dǎo)入的誘導(dǎo)基因使成纖維母細(xì)胞發(fā)生基因突變B．丙細(xì)胞既能持續(xù)分裂，又能分泌單一的抗體C．過(guò)程②屬于動(dòng)物細(xì)胞培育過(guò)程中的原代培育D．過(guò)程③④所用的培育基中都含有聚乙二醇答案B解析外源基因的導(dǎo)入過(guò)程屬于基因重組，A項(xiàng)錯(cuò)誤；丙細(xì)胞能產(chǎn)生單克隆抗體，說(shuō)明丙細(xì)胞具有連續(xù)分裂且能分泌單一抗體的實(shí)力，B項(xiàng)正確；②表示細(xì)胞分化過(guò)程，C項(xiàng)錯(cuò)誤；③是誘導(dǎo)細(xì)胞融合的過(guò)程，所用的培育基含有聚乙二醇或滅活的仙臺(tái)病毒，而④過(guò)程不用聚乙二醇，D項(xiàng)錯(cuò)誤。5．下圖是煙草葉片原生質(zhì)體分別和培育的流程圖。請(qǐng)回答：煙草葉片消毒→酶解→獲得原生質(zhì)體→原生質(zhì)體檢測(cè)→原生質(zhì)體培育→獲得愈傷組織(1)酶解時(shí)，在纖維素酶和果膠酶的混合液中，還需添加________來(lái)提高混合液的滲透壓，以便獲得完整的原生質(zhì)體。(2)獲得原生質(zhì)體后，可用__________________法檢測(cè)原生質(zhì)體是否存活。然后將原生質(zhì)體制成懸浮液，滴加在____________________上，用顯微鏡視察并計(jì)數(shù)。要判定原生質(zhì)體是否已形成細(xì)胞壁，可用________________法鑒別。(3)欲通過(guò)原生質(zhì)體培育得到愈傷組織，從培育基的成分(除瓊脂外)考慮，配制培育基時(shí)須要留意的主要方面是_________________________________________________________。答案(1)甘露醇(2)紅墨水染色血細(xì)胞計(jì)數(shù)板質(zhì)壁分別(3)養(yǎng)分物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的適當(dāng)配比解析(1)為防止原生質(zhì)體吸水脹破，可加入相宜濃度的甘露醇溶液來(lái)提高混合液的滲透壓。(2)活細(xì)胞的質(zhì)膜具有選擇透性，紅墨水非細(xì)胞生長(zhǎng)所需物質(zhì)，不會(huì)被汲取，而死細(xì)胞的質(zhì)膜變?yōu)槿感?，紅墨水可進(jìn)入使細(xì)胞染色；細(xì)胞顯微計(jì)數(shù)的常用裝置為血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，形成細(xì)胞壁的細(xì)胞置于較高濃度的溶液中會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分別現(xiàn)象。(3)植物組織培育過(guò)程中須要適當(dāng)配比的養(yǎng)分物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)整劑誘導(dǎo)，才能順當(dāng)發(fā)生脫分化，形成愈傷組織。課時(shí)訓(xùn)練一、選擇題1．(2024·臺(tái)州中學(xué)統(tǒng)考)下列過(guò)程不涉及植物組織培育技術(shù)的是()A．由馬鈴薯的莖尖培育出無(wú)病毒植株B．白菜和甘藍(lán)經(jīng)體細(xì)胞雜交過(guò)程培育出雜種植株C．轉(zhuǎn)入抗卡那霉素基因的煙草細(xì)胞培育出轉(zhuǎn)基因植株D．二倍體水稻剛萌發(fā)的種子經(jīng)秋水仙素處理后培育出四倍體植株答案D解析植物組織培育屬于無(wú)性繁殖技術(shù)。將離體的植物組織、細(xì)胞培育成完整植株，需制備相應(yīng)的培育基并添加適當(dāng)配比的養(yǎng)分物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)整劑誘導(dǎo)，即必需依靠植物組織培育技術(shù)，故A、B、C項(xiàng)均涉及該技術(shù)；用秋水仙素處理二倍體水稻剛萌發(fā)的種子即可得到四倍體植株，無(wú)須利用植物組織培育技術(shù)，故選D項(xiàng)。2．(2024·江蘇，11)牛雄性胚胎中存在特異性H-Y抗原，可在牛早期胚胎培育液中添加H-Y單克隆抗體，篩選胚胎進(jìn)行移植，以利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行生物制藥。下列相關(guān)敘述正確的是()A．H-Y單克隆抗體由骨髓瘤細(xì)胞分泌B．應(yīng)選用原腸胚做雌雄鑒別C．鑒別后的雄性胚胎可干脆做胚胎移植D．用H-Y抗原免疫母?？色@得相應(yīng)抗體答案D解析H-Y單克隆抗體是由已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞形成的雜交瘤細(xì)胞分泌的，A項(xiàng)錯(cuò)誤；一般選用囊胚期的滋養(yǎng)層細(xì)胞做性別鑒定，B項(xiàng)錯(cuò)誤；利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行生物制藥，應(yīng)選擇雌性胚胎，C項(xiàng)錯(cuò)誤；用H-Y抗原免疫母牛，可使母牛針對(duì)該抗原產(chǎn)生相應(yīng)抗體，D項(xiàng)正確。3．科學(xué)家將豹蛙的囊胚期細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞中，形成重組細(xì)胞，然后培育重組細(xì)胞形成囊胚，最終發(fā)育為成體豹蛙。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．“多莉”羊培育方法與題中獲得成體豹蛙方法本質(zhì)相像B．囊胚期細(xì)胞已發(fā)生分化，但細(xì)胞核中的基因組完整C．重組細(xì)胞形成成蛙過(guò)程須要進(jìn)行胚胎移植，但不能用原腸胚期的胚胎進(jìn)行移植D．重組細(xì)胞最初分裂時(shí)雖然進(jìn)行了DNA復(fù)制，但基因轉(zhuǎn)錄并未起先答案C解析豹蛙和“多莉”羊的培育過(guò)程都采納了細(xì)胞核移植技術(shù)，本質(zhì)相像，A項(xiàng)正確；細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，遺傳物質(zhì)并未變更，基因組的完整性得以保留，B項(xiàng)正確；蛙類屬于卵生動(dòng)物，無(wú)須進(jìn)行胚胎移植，C項(xiàng)錯(cuò)誤；重組細(xì)胞最初分裂時(shí)進(jìn)行了DNA復(fù)制，但基因轉(zhuǎn)錄尚未起先，重組細(xì)胞起先第三次分裂時(shí)核受體細(xì)胞的調(diào)整蛋白全部被卵細(xì)胞質(zhì)中的蛋白因子替代，核DNA重新編排，胚細(xì)胞基因才起先表達(dá)，D項(xiàng)正確。4A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的B淋巴細(xì)胞B．②過(guò)程實(shí)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是細(xì)胞膜具有確定的流淌性C．③確定是雜交瘤細(xì)胞D．④是經(jīng)篩選培育獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群答案C解析①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的具有免疫實(shí)力的B淋巴細(xì)胞，A項(xiàng)正確；②過(guò)程為B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的過(guò)程，原理是細(xì)胞膜具有確定的流淌性，B項(xiàng)正確；假如只考慮兩兩融合，③可能有3種融合細(xì)胞，即雜交瘤細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞，C項(xiàng)錯(cuò)誤；④過(guò)程表示用抗體陽(yáng)性檢測(cè)篩選出能無(wú)限增殖并能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞群，D項(xiàng)正確。二、非選擇題5．(2024·紹興柯橋中學(xué)期中)如圖可表示細(xì)胞融合技術(shù)的一些過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答：(1)若A、B到C過(guò)程是體外受精過(guò)程，則對(duì)已取得的精子必需先進(jìn)行________處理，若需獲得更多的卵細(xì)胞一般要對(duì)雌性個(gè)體注射____________，使其______________。(2)若該過(guò)程是制備單克隆抗體的過(guò)程，在A、B到C的過(guò)程中，A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞，B細(xì)胞為能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，那么D細(xì)胞稱為_(kāi)_________細(xì)胞。從融合細(xì)胞中選擇出它的方法是在特定的選擇培育基中培育，篩選出該類細(xì)胞后還需進(jìn)行__________培育和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選可獲得數(shù)量足夠的能分泌所需抗體的細(xì)胞。(3)若A、B細(xì)胞為植物細(xì)胞，D細(xì)胞在植物組織培育時(shí)，先配制__________培育基，再加入確定比例的植物激素，當(dāng)生長(zhǎng)素相對(duì)較少時(shí)，愈傷組織可發(fā)育形成______________________。(4)若要培育轉(zhuǎn)基因植物，則可采納________________法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中。受體細(xì)胞應(yīng)當(dāng)是________(A.體細(xì)胞B．卵細(xì)胞C．受精卵D．雄配子)。為了得到農(nóng)桿菌的單菌落，常采納的分別方法有兩種，即__________________和________________。(5)植物組織培育和微生物培育都須要無(wú)菌操作，下列不相宜用高壓蒸汽滅菌的是_____。A．接種環(huán)和鑷子B．三角瓶和廣口瓶C．發(fā)芽培育基和生根培育基D．用于培育的幼莖和幼芽答案(1)獲能促性腺激素超數(shù)排卵(2)雜交瘤克隆化(3)MS叢狀苗(4)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化A劃線分別法涂布分別法(5)D解析(1)受精之前，對(duì)已取得的精子先進(jìn)行獲能處理；若需更多的卵細(xì)胞，一般要對(duì)雌性個(gè)體注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵。(2)依據(jù)題中信息可確定圖中D細(xì)胞為雜交瘤細(xì)胞；對(duì)獲得的雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)行克隆化培育以擴(kuò)大數(shù)量。(3)若要培育轉(zhuǎn)基因植物，則可采納誘導(dǎo)生芽或生根的培育基(MS培育基)培育；當(dāng)生長(zhǎng)素相對(duì)較少時(shí)，愈傷組織可發(fā)育形成叢狀苗。(4)若要培育轉(zhuǎn)基因植物，通常采納農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中；受體細(xì)胞應(yīng)當(dāng)是植物體細(xì)胞；為了得到農(nóng)桿菌的單菌落，常采納的分別方法有兩種，即劃線分別法和涂布分別法。(5)四個(gè)選項(xiàng)中不相宜用高壓蒸汽滅菌的是用于培育的幼莖和幼芽。6．(2024·寧波九校期末聯(lián)考)苦蕎富含黃酮類化合物等養(yǎng)分物質(zhì)，在降血糖、降血脂等方面功效顯著。查爾酮合成酶(CHS)是黃酮類化合物合成的關(guān)鍵酶，如圖為將CHS基因?qū)肟嗍w，培育高產(chǎn)黃酮苦蕎品系示意圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)基因工程的核心是________________________。(2)可利用__________________、____________________方法獲得CHS基因。(3)過(guò)程①中切開(kāi)質(zhì)粒的酶是__________。它能在質(zhì)粒特定的部位切割的緣由是__________。(4)過(guò)程②③分別是_________?？嗍w細(xì)胞能培育成植株的根本緣由是___________________。(5)為培育轉(zhuǎn)基因苦蕎植物，還可將該植物幼葉消毒后，用_________________酶混合液處理，獲得原生質(zhì)體。酶混合液中含有相宜濃度的甘露醇，其作用是_________________。將目的基因?qū)氲皆|(zhì)體，經(jīng)培育形成愈傷組織，再通過(guò)____________________得到分散的胚性細(xì)胞，發(fā)育成________________，生長(zhǎng)發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。(6)愈傷組織繼代次數(shù)過(guò)多會(huì)丟失細(xì)胞全能性的表達(dá)實(shí)力，下列緣由錯(cuò)誤的是________。A．愈傷組織發(fā)生遺傳變異B．愈傷組織不能分散成單細(xì)胞C．愈傷組織中激素平衡發(fā)生變更D．愈傷組織對(duì)外源激素敏感性發(fā)生變更答案(1)形成重組DNA分子(2)從基因文庫(kù)中獲得化學(xué)方法合成或PCR擴(kuò)增(3)限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別特定的核苷酸序列并在特定的位點(diǎn)切割DNA分子(4)脫分化、再分化植物細(xì)胞的全能性(或細(xì)胞中含有發(fā)育成完整個(gè)體所必需的全部基因)(5)纖維素酶和果膠(寫(xiě)全才可)維持滲透壓液體懸浮培育胚狀體(6)B解析(1)基因工程的核心是基因工程的其次步，即形成重組DNA分子。(2)CHS基因?yàn)槟康幕?，其獲得方法有從基因文庫(kù)中獲得、化學(xué)方法合成或PCR擴(kuò)增。(3)質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是DNA，切開(kāi)質(zhì)粒的酶是限制性核酸內(nèi)切酶；由于限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別特定的核苷酸序列并在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子，所以它能在質(zhì)粒特定的部位切割。(4)過(guò)程②③為植物的組織培育過(guò)程，分別是脫分化、再分化；由于植物細(xì)胞具有全能性，所以苦蕎細(xì)胞能培育成植株。(5)植物細(xì)胞用纖維素酶和果膠酶處理，去除細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體；制備原生質(zhì)體時(shí)，酶混合液中含有相宜濃度的甘露醇，有利于維持滲透壓；將目的基因?qū)氲皆|(zhì)體，經(jīng)培育形成愈傷組織，再通過(guò)液體懸浮培育得到分散的胚性細(xì)胞，發(fā)育成胚狀體，生長(zhǎng)發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。(6)愈傷組織繼代次數(shù)過(guò)多會(huì)發(fā)生遺傳變異、激素平衡的變更、對(duì)外源激素敏感性的變更，使得愈傷組織丟失細(xì)胞全能性的表達(dá)實(shí)力。7．(2024·臺(tái)州模擬)請(qǐng)回答雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備的有關(guān)問(wèn)題：(1)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體時(shí)，利用確定的物質(zhì)，如生物誘導(dǎo)劑__________________作介導(dǎo)，使經(jīng)免疫的小鼠B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出融合的細(xì)胞再進(jìn)行細(xì)胞的__________________培育，獲得純系細(xì)胞，同時(shí)還要進(jìn)行__________________檢驗(yàn)，以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細(xì)胞。(2)獲得雜交瘤細(xì)胞后，在體外培育時(shí)須要特殊加入的自然成分是__________________。(3)有關(guān)雜交瘤細(xì)胞體外培育的敘述，正確的是_____________________________。A．用固體培育基培育B．用滋養(yǎng)層細(xì)胞支持生長(zhǎng)C．能進(jìn)行傳代培育D．須要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研磨破裂獲得產(chǎn)物(4)現(xiàn)在欲利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體，科研小組將與抗體形成有關(guān)的關(guān)鍵基因通過(guò)噬菌體導(dǎo)入到受體細(xì)胞，該技術(shù)的核心步驟是___________，噬菌體是這些關(guān)鍵基因的_______。答案(1)滅活的(仙臺(tái))病毒克隆化抗體(2)動(dòng)物血清(3)C(4)形成重組DNA分子載體解析(1)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體時(shí)，利用確定的物質(zhì)，如生物誘導(dǎo)劑滅活的(仙臺(tái))病毒作介導(dǎo)，使經(jīng)免疫的小鼠B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出融合的細(xì)胞再進(jìn)行細(xì)胞的克隆化培育，獲得純系細(xì)胞，同時(shí)還要進(jìn)行抗體檢驗(yàn)，以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細(xì)胞。(2)獲得雜交瘤細(xì)胞后，在體外培育時(shí)須要特殊加入的自然成分是動(dòng)物血清。(3)雜交瘤細(xì)胞體外用液體培育基培育，A項(xiàng)錯(cuò)誤；用滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)，不是用滋養(yǎng)層細(xì)胞支持生長(zhǎng)，B項(xiàng)錯(cuò)誤；雜交瘤細(xì)胞能進(jìn)行傳代培育，C項(xiàng)正確；抗體為分泌蛋白，不須要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研磨破裂獲得產(chǎn)物，D項(xiàng)錯(cuò)誤。故選C。(4)現(xiàn)在欲利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體，科研小組將與抗體形成有關(guān)的關(guān)鍵基因通過(guò)噬菌體導(dǎo)入到受體細(xì)胞，該技術(shù)的核心步驟是形成重組DNA分子，噬菌體是這些關(guān)鍵基因的載體。8．人的血清白蛋白在臨床上需求量很大，通常從人血中提取。由于艾滋病病毒(HIV)等人類感染性病原體造成的威逼