T-SXSF 18-2025 軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.40CCSB66SXSF2024-12-30發(fā)布IT/SXSF18-2025前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4外植體采集與消毒 5初代培養(yǎng) 6繼代培養(yǎng) 27生根培養(yǎng) 28煉苗與移栽 29苗期管理 310檔案管理 3附錄A（資料性）MS基本培養(yǎng)基 4T/SXSF18-2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由山西省林學(xué)會(huì)提出并監(jiān)督管理。本文件由山西省林學(xué)會(huì)團(tuán)本標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：山西省林業(yè)生態(tài)實(shí)驗(yàn)基地。本文件主要起草人：郭曉霄、王小華、馬倩、郭曉雯、成允海、李志剛、李朋、劉璐、劉捷、王敏、杜雁梅。1T/SXSF18-2025軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程本文件確立了軟棗獼猴桃（Actinidiaarguta(Sieb.etZucc.)Planch.exMiq.）組織培養(yǎng)程序，規(guī)定了軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)的外植體采集與消毒、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗與移栽、苗期管理和檔案管理等。本文件適用于軟棗獼猴桃組培苗的生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T2289林木種苗生產(chǎn)經(jīng)營檔案3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4外植體采集與消毒4.1采集春季選擇生長健壯、無病蟲害的當(dāng)年生幼嫩枝條。4.2清洗將枝條剪去葉片，切成3cm～5cm帶腋芽莖段，兩端距芽≥1cm，用肥皂水浸泡5min～10min，再用自來水流動(dòng)沖洗30min。4.3消毒在超凈工作臺(tái)上，將清洗后的莖段放入濃度為75%的酒精中浸泡20s，無菌水沖洗3次，每次3min；再用0.1%HgCl2溶液浸泡5min～6min，無菌水沖洗5次，每次3min；用無菌濾紙吸干表面水分備用。5初代培養(yǎng)5.1配制培養(yǎng)基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，pH5.8～6.0，在121℃下滅菌15min～30min。MS基本培養(yǎng)基配方見附錄A。5.2接種2T/SXSF18-2025在超凈工作臺(tái)，用無菌刀片切去莖段兩端滅菌失活的部分，接入初代培養(yǎng)基中，每瓶1個(gè)。5.3培養(yǎng)放入溫度23℃~25℃、相對(duì)空氣濕度20%～30%、光照強(qiáng)度2000lx～2200lx、光照時(shí)間12h/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。6繼代培養(yǎng)6.1配制培養(yǎng)基MS+6-BA0.5mg/L+ZT1.0mg/L，pH5.8～6.0，在121℃下滅菌15min～30min。6.2接種將初代培養(yǎng)萌發(fā)的無菌短枝接入培養(yǎng)基中，每瓶接種5～6株。6.3培養(yǎng)培養(yǎng)條件同5.3，培養(yǎng)20d～30d后將叢生芽切分后繼續(xù)轉(zhuǎn)接，反復(fù)繼代培養(yǎng)。7生根培養(yǎng)7.1配制培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.2mg/L，pH5.8～6.0，在121℃下滅菌15min～30min。7.2接種選取生長健壯、高2cm～2.5cm的叢生芽切分為單株，接種至生根培養(yǎng)基中，每瓶6～8株。7.3培養(yǎng)培養(yǎng)條件同5.3，誘導(dǎo)分化生根，直至移植。8煉苗與移栽8.1煉苗當(dāng)苗高≥3.0cm，根長在0.5cm～1.5cm時(shí)，將試管苗轉(zhuǎn)移到日光溫室中，在自然光照下煉苗，溫度控制在25℃左右，封口煉苗3d～5d，開口煉苗3d～5d。8.2移栽8.2.1基質(zhì)準(zhǔn)備基質(zhì)采用蛭石、泥炭土2:3的比例混合。移栽前用0.3%～0.5%高錳酸鉀溶液噴灑基質(zhì)。8.2.2栽植陰天下午，洗凈試管苗根部培養(yǎng)基，栽植到基質(zhì)中，放到溫室苗床培養(yǎng)。3T/SXSF18-20259苗期管理初期溫度控制在20℃~25℃,空氣濕度≥85%，適度遮陰；10d后，逐步降低空氣濕度至50%~60%，直至長出新葉。10檔案管理按照LY/T22