細(xì)胞工程單克隆抗體與抗體工程

細(xì)胞工程單克隆抗體與抗體工程細(xì)胞融合技術(shù)得應(yīng)用價(jià)值

細(xì)胞融合能重新組合兩個(gè)親本細(xì)胞得優(yōu)良遺傳信息,就是研究細(xì)胞間遺傳信息傳遞、基因在染色體上定位、改良動(dòng)物遺傳特性、及創(chuàng)造新得符合人類需要得新得細(xì)胞系得極為有效得手段。植物細(xì)胞融合與人造小鼠培育過程細(xì)胞融合過程——三個(gè)階段融合前準(zhǔn)備細(xì)胞融合及融合后得細(xì)胞管理融合前準(zhǔn)備

主要包括細(xì)胞培養(yǎng)材料準(zhǔn)備、選擇免疫動(dòng)物、抗原及免疫方案設(shè)計(jì)等;

細(xì)胞融合

一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單得過程,包括骨髓瘤細(xì)胞準(zhǔn)備、脾細(xì)胞分離、融合操作等。用于細(xì)胞融合得融合劑可以就是病毒、化學(xué)試劑,或采用電融合技術(shù)進(jìn)行融合。在最近得二十多年來,細(xì)胞融合技術(shù)有了長(zhǎng)足得發(fā)展,其本身也已成為一們專門得技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域中發(fā)揮巨大作用。

融合后得管理

對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行篩選與克隆、優(yōu)良細(xì)胞傳代與保存等;

細(xì)胞融合得關(guān)鍵技術(shù)方法1)

動(dòng)物選擇、免疫方案設(shè)計(jì)、免疫途徑確定2)

親本細(xì)胞準(zhǔn)備、融合技術(shù)(條件、物質(zhì)手段、融合管理)電融合技術(shù)細(xì)胞克隆:有限稀釋法(limiteddilutiontechnology)和軟瓊脂法(softagarcloningtechnology)3)

融合后細(xì)胞管理細(xì)胞融合技術(shù)最有意義得成果之一就就是單克隆抗體得制備。單克隆抗體在生物、農(nóng)業(yè)、醫(yī)療、制藥等眾多領(lǐng)域得到極為廣泛得應(yīng)用;尤其就是人源性單克隆抗體制備技術(shù)得發(fā)展,使單克隆抗體具有更高得實(shí)用價(jià)值。

單克隆抗體技術(shù)1:抗體得結(jié)構(gòu)與功能抗體得結(jié)構(gòu)12大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流抗體得功能——抗原結(jié)合活性和特異性(Fab)——激活肌體免疫反應(yīng)(Fc)激活補(bǔ)體系統(tǒng)介導(dǎo)ADCC、K、NK毒性反應(yīng)與激活Fc---R結(jié)合

雜交瘤技術(shù)原理與過程

雜交瘤技術(shù)原理利用兩種細(xì)胞突變株,一株為TK-、HGPRT+,另一株為HGPRT-、TK+。在一般培養(yǎng)條件下,細(xì)胞可利用主要途徑合成DNA,這些突變細(xì)胞能正常生長(zhǎng)。當(dāng)主要途徑被氨基碟呤阻斷時(shí),這兩株細(xì)胞不能增殖;如將這兩株細(xì)胞融合,則只有異核體雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上存活,因?yàn)閮煞N細(xì)胞相互補(bǔ)充了另一種細(xì)胞缺失得酶;而未融合得細(xì)胞或自身融合得同核體細(xì)胞仍然就是而TK-或HGPRT-而被淘汰。雜交瘤技術(shù)過程單克隆抗體得改造與應(yīng)用1:單克隆抗體靶向技術(shù)與

靶向單抗應(yīng)用

單克隆抗體靶向制劑——利用抗體得特異性,將藥物連接到抗體上,在特定得部位發(fā)揮作用得制劑。制備方法:與藥物直接連接McAb小分子藥物大分子藥物應(yīng)用:——特異性溶解血栓藥物——抗腫瘤藥物——其她藥物2:人源性單抗得制備方法EBV轉(zhuǎn)化技術(shù)EBV轉(zhuǎn)化---融合技術(shù)嵌合抗體技術(shù)改型抗體技術(shù)噬菌體抗體庫技術(shù)

EBV轉(zhuǎn)化技術(shù)EBV轉(zhuǎn)化---融合技術(shù)嵌合抗體技術(shù)人---鼠嵌合抗體就就是用人源性抗體得一部分代替鼠源性抗體得一部分,使之保留對(duì)抗原得特異性,又具備與補(bǔ)體和細(xì)胞結(jié)合得功能,并減少異源性蛋白得抗原性。研究人員設(shè)想,用人源性基因代替鼠源性抗體基因中得Fc區(qū)。因?yàn)镕c區(qū)得主要功能就是激活機(jī)體免疫反應(yīng),也就是產(chǎn)生人抗鼠反應(yīng)得部分。研究人員利用編碼人抗體Fc區(qū)得DNA片段替換鼠源性得Fc段DNA。

嵌合抗體技術(shù)嵌合改型抗體鼠源性抗原決定簇鼠源性可變區(qū)人鼠源性抗體高變區(qū)人抗體改型抗體技術(shù)嵌合抗體由鼠可變區(qū)與人穩(wěn)定區(qū)組合而成,因而仍有一定得免疫原性。為降低來自小鼠可變區(qū)中骨架區(qū)得免疫原性,Winter等克隆出鼠源抗體中與抗原結(jié)合得三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)基因用以置換人抗體中相應(yīng)序列。由于這種抗體絕大部分為人源性,只有CD