SCI論文寫作與投稿 第2版-課件 5-SCI論文結果與討論寫作(一)

5SCI論文結果與討論寫作（一）SCI論文寫作與投稿5.1結果的內容與結構5.2結果的寫作要求5.3結果寫作的常見問題5.4結果寫作實例評析5.5“材料與方法”“結果”對比5SCI論文結果與討論寫作（一）第2頁2025年3月31日SCI論文寫作與投稿1）結果的內容

論文主題研究的直接、顯式發(fā)現(xiàn)（原始結果），包括研究簡述和結果報告。（1）研究簡述。對某研究作不帶細節(jié)的簡潔描述或介紹，涉及主題、目標、對象、方法、常識、特例等：對象包括對象設置、樣本選取或制備，涉及數(shù)量、時間、實驗次數(shù)、范圍、成員、儲存等，常識包括概念、原理、知識等介紹。常識在表面上不屬結果，卻是結果寫作較重要的內容，缺少這部分內容而直接展示或描述結果，會讓讀者有突兀之感，易造成閱讀障礙，必要的常識是結果寫作的重要內容。結果與方法密切對應，方法產生結果，結果來自方法，結果一定是針對某一特定方法使用的具體結果，方法有某種調整或變化，對應的結果就隨著發(fā)生相應變化。最核心的內容應是對方法的描述，不是詳寫方法具體內容與步驟，而是提及方法名稱或對方法簡要交待，通常用簡短語句（一兩句話）交待用了什么方法即可，必要時可輔以常識。這里的方法是以下結果報告中描述的結果的來源。

5.1

結果的內容及結構第3頁（2）結果報告。結果描述，對研究簡述的研究所獲得的原始結果詳細描述，是經(jīng)過某種處理而形成的與主題、方法對應的主要處理結果。相對隨后對其進行討論而得出的新結果（討論結果，研究結果）也一種原始結果。原始結果一般是直接、明顯、具體、膚淺、感性，多用圖表顯示，加上文字表述；討論結果通常是間接、隱含、抽象、深奧、理性的，常用文字表述（宜定性和定量相結合）。原始結果用圖表顯示形成圖表結果，用文字表述形成文字結果。文字表述可從不同層次、方面來進行，如說明、對比、解釋、樣本選取或制備等，即對原始結果以不同的文字表達方式從不同角度重新描述，就形成不同的文字結果類型，如說明結果、對比結果、解釋結果、樣本選取或制備結果等，本質上就是結果分析。其中不同層次、方面通常限于本原始結果范圍內，即從多個不同角度來考察、分析結果。如果考察、分析的角度超出了本原始結果，比如加進了他人、作者前期相關研究結果以及知識、文獻等來進行論證、整合或體系化，則屬于討論。結果有典型實例、案例的結果支撐時，論文的可信度、說服力會提升。

5.1

結果的內容及結構第4頁2）結果的結構主題1（一級層次標題）研究簡述（主題、目標、對象、方法、常識等）結果報告（圖表結果、說明結果、對比結果、解釋結果等）主題2（一級層次標題）研究簡述（主題、目標、對象、方法、常識等）結果報告（圖表結果、說明結果、對比結果、解釋結果等）……主題n（一級層次標題）研究簡述（主題、目標、對象、方法、常識等）結果報告（圖表結果、說明結果、對比結果、解釋結果等）主題1（一級層次標題）子主題1.1（二級層次標題）

研究簡述（主題、目標……

）

結果報告（圖表結果、說明結果……）子主題1.2（二級層次標題）

研究簡述（主題、目標……）

結果報告（圖表結果、說明結果……）……

5.1

結果的內容及結構第5頁第6頁

總結：結果的內容與結構（1）統(tǒng)籌確定主題。結果涉及多個主題及其分解，包含多個層次、類別的數(shù)據(jù)資料，層次、類別不同，結果的性質就不同，而具體性質又決定結果在討論中的重要、詳略程度及描述細節(jié)、表述手段。結果寫作應統(tǒng)籌全文來確定主題，與前文材料與方法及后文討論相結合，全盤考慮，系統(tǒng)關聯(lián)，主次分清，讓論文各個相關部分貫通、協(xié)調、對應而自成一體。

（2）確定層次標題。結果表達分若干段，一段對應一個主題，或為層次標題形式，每個標題有一段或幾段，對應一個主題。標題與主題密切相關，主題可成為標題或包含在標題中。按主題重要、復雜程度及類別等對結果布局，從最重要到最不重要、由簡單到復雜、按研究問題邏輯關系、按類別相同或差異性排列，與材料與方法、討論中的相應標題基本對應。

5.2

結果的寫作要求第7頁（3）避免重復表述。論文中有些內容可能有交叉，既可寫到這部分，也可寫到那部分，最終寫到哪部分，取決于論文內容布局和結構安排，布局和安排不當就會造成重復。結果寫作須明確哪些內容納入結果，哪些放到討論，前者通常只描述結果而不解釋，但后者須解釋，且解釋越詳細、深入越好，并與已有成果比較，解釋，但不必與結果中已詳述的內容重復。（4）科學整理數(shù)據(jù)。對數(shù)據(jù)選用合適方法按輕重、主次做科學分類、整理，提煉、取舍，避免所有數(shù)據(jù)全盤托出，或只選取符合自己預期的數(shù)據(jù)。對異常數(shù)據(jù)給予說明，除非有確鑿證據(jù)表明其錯誤方可舍去。對過多出現(xiàn)的數(shù)據(jù)可考慮以補充部分的形式呈現(xiàn)?？疾鞌?shù)據(jù)的準確、詳實、一致及相關性。準確指真實，不偽造和篡改數(shù)據(jù)；詳實指完整，不隱瞞或遺漏數(shù)據(jù)；一致指同一，不出現(xiàn)前后矛盾的數(shù)據(jù)；相關指相扣，不出現(xiàn)與主題無關的數(shù)據(jù)。

5.2

結果的寫作要求第8頁（5）客觀描述結果。對各主要方法及由其獲得的現(xiàn)象、數(shù)據(jù)客觀真實地從多個角度、層面來描述，基本按結果的內容及結構來行文，如研究簡述和結果報告，最好有典型實例（常見例證）、最佳案例（理想例證）結果的支撐。（6）表述言簡意賅。結果的內容取自基礎科研活動，較為全面、詳細，主題或目的可能不夠集中，表述也較為隨意，但經(jīng)過了處理、分析后的結果，內容上有所聚類、凝練、集中，對其表述應簡潔、嚴謹、概括。不要簡單堆積實驗記錄、數(shù)據(jù)或觀察、調查事實，而要突出有代表性和科學價值的數(shù)據(jù)，重要數(shù)據(jù)詳述，一般數(shù)據(jù)簡述，可有可無數(shù)據(jù)去掉。

5.2

結果的寫作要求第9頁（7）取舍文字圖表。采用文字、圖、表多種方式表示結果，文字優(yōu)先。數(shù)據(jù)較少時，如對少量測定結果，宜用文字；數(shù)據(jù)較多時，宜用圖表。圖表數(shù)據(jù)通常應完整、全面，再配以文字說明、總結，指出數(shù)據(jù)所蘊含的特性、趨勢、意義，但避免贅述，忌用冗長語句介紹、解釋圖表。對相同的數(shù)據(jù)用文字、圖、表同時表述時，不要重復過多，但可以少量重復，即應有所側重，以一種方式為主。（8）淡化解釋結果。原始結果屬一手材料，結果寫作側重結果說明、分析，而不是結果解釋，解釋意味著融進了個人主觀色彩，容易破壞結果的原始性。必要時可適當解釋，描述結果間差異，幫助讀者先清楚了解結果的意義。結果和討論合寫時，結果中常有詳細的解釋結果，但這種解釋主要是針對討論而出現(xiàn)的，屬于討論。

5.2

結果的寫作要求第10頁（9）避免討論結果。結果側重展現(xiàn)、展示，不是議事、說理。避免總結結果的啟示，探究結果的機理，推理結果的意義，提出結果的展望。這些屬于對結果的討論和認識，對整個論文很重要，但論文核心畢竟在于“論”，通過對結果的討論來提出新認識，因此這類內容應放在討論部分，放在結果部分就會錯位。

（10）正確使用單位。結果中往往有較多的量值（數(shù)據(jù)）展示、呈現(xiàn)，離不開數(shù)值和計量單位。

5.2

結果的寫作要求第11頁實驗數(shù)據(jù)或圖表結果太多，相應的分析結果、說明結果偏少或沒有出現(xiàn)了不充分、不準確或不一致的數(shù)據(jù)，降低了研究結果的可信度用仿真結果代替實驗結果和測量數(shù)據(jù)，結果作為論據(jù)的可靠性有限實驗預測、測量結果不明確，同一量的測量數(shù)據(jù)的有效位數(shù)不一致正文與圖和（或）表對同一結果或對象的展示、說明重復或不一致圖特別是照片圖的質量較差，字符、標尺等無法看清，多文種混用圖表中的信息不能支撐論題、論點，出現(xiàn)了無關或可有可無的數(shù)據(jù)對結果展現(xiàn)、表述類別的區(qū)分認識不夠，把對結果的分析當作討論對結果的意義解釋太多，加進過多的作者個人認識，主觀色彩濃厚對常規(guī)結果對他人研究重要性的認識不夠，忽視對常規(guī)結果的說明

5.3

結果寫作的常見問題第12頁H7N9virulentmutantsdetectedinchickensinChinaposeanincreasedthreattohumans

CellResearch,Vol.27,No.12,Dec.2017:1409-1421第13頁

5.4

結果寫作實例評析實例的結果部分（主題、層次標題）第14頁結果實例主題1評析（一）目標：監(jiān)測家禽中H7N9病毒的演變樣本收集及處置：201307~201701，24省家禽市場、農場、野生鳥類棲息地和屠宰場，112593；接種到10日大雞胚檢測結果：①3664種流感病毒；293株H7N9已在17省分離出來；②6種從福建、廣東、江蘇和浙江雞場采集樣本中分離出來；

③其他病毒從活禽市場收集的樣本中分離出來第15頁結果實例主題1評析（二）目標：檢測可能顯著影響病毒生物特性的關鍵突變方法：對293種病毒的HA、PB2基因部分測序發(fā)現(xiàn)結果：①293種禽流感病毒中有280、266種在HA上分別有186V、226L突變，但無一種在PB2上有627K或701N突變；②在2017年廣東的雞體中分離出的7種病毒中，在HA裂解位點里有編碼4種氨基酸(-KRTA-)的12種額外核苷酸(-aaacggactgcg-)第16頁結果實例主題1評析（三）目標：研究病毒間的基因關系方法：對來自不同采樣時間、地點和物種的83種代表性病毒測序病毒HA結果：①HA基因在核苷酸水平上共享88-100%的一致性，形成4個系統(tǒng)發(fā)育組；②第1組的HA共享超過97%的一致性，與2013/H7N9的HA聚合在一起；③其他3組HA屬當時出現(xiàn)在中國且僅在鴨子中檢測的病毒病毒NA結果：①NA基因在核苷酸水平上共享90-100%的一致性，形成3個系統(tǒng)發(fā)育組；②病毒6個內部基因表現(xiàn)出明顯多樣性，83種病毒的PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因在核苷酸水平上共享84.8、88.6、86.8、86.4、88.5-100%的一致性；③PB1、NP分別在系統(tǒng)發(fā)育樹中形成8個組，PB2、PA、M、NS形成6、9、5、4個組第17頁結果實例主題1評析（四）基因組分類結果：①H7N9分為23種不同基因型；②主要病毒歸為基因1、2型，分別在8、9個省檢測到，其他病毒只在1～3個省檢測到；③攜帶4種氨基酸插入其HA的7種病毒屬于基因1~3型時間尺度系統(tǒng)發(fā)育分析結果：HA突變可能由兩種不同H7N9病毒引起，其中一種與其他病毒重組會形成幾種基因型第18頁結果實例主題2評析已有結果：與雞體高致病性H5和H7流感病毒有關的HA裂解位點里的最小序列是-BXBR-或-RXXR-[34,35]；新H7N9的序列是-KRTAR-，符合高致病性的-RXXR-的標準；并非有這些序列的所有H5或H7病毒都是雞致病性的[36,37]事實：H7N9突變體從活禽市場健康雞體分離出來目標：調查指數(shù)毒株CK/SD008毒性

方法：測試此毒株的靜脈致病指數(shù)IVPI

[38]對象：10個6周大無特定病原體(SPF)雞群材料：0.1ml1:10稀釋無細菌尿囊液，含CK/SD008107.7雞胚半數(shù)感染量EID50方法：靜脈注射接種病毒結果：所有雞接種24h后死亡，IVPI值3方法：收集3只接種病毒的雞大腦和內臟，雞胚病毒滴度結果：器官檢測到接種病毒，平均滴度值5.3～7.9log10EID50/g方法：13只SPF雞鼻內接種CK/SD008的106EID50；3只雞接種3日后殺死，病毒滴定，另外10只雞觀察疾病和死亡跡象。結果：接種后雞的咽部和泄殖腔拭子中能檢測到病毒在雞體系統(tǒng)復制；被觀察的雞在感染后4日內死亡結論：2013年中國出現(xiàn)的在2017年分離出的H7N9已突變?yōu)殡u高致病性毒株第19頁已有結果：H5N1的HA裂解位點上的多重堿性氨基酸序列是對哺乳動物產生致命的先決條件[25,39]；但并非所有有這種序列的H5N1在哺乳動物中均是致命的[40,41]）目標：在HA中插入四胺基酸是否會增加H7N9在哺乳動物中的毒性方法：對HA插入的老鼠和雪貂測試病毒的復制和毒性：①3只6周BALB/c老鼠鼻內接種CK/SD008106.0EID50病毒，3日后殺死；②收集鼻甲、肺、脾臟、腎臟和大腦，病毒滴定；③5只老鼠組接種101.0-107.0EID50，確定病毒老鼠半數(shù)致死量MLD50，持續(xù)兩周每天監(jiān)測老鼠體重、疾病體征及死亡結果：①老鼠鼻甲和肺中有病毒復制，脾臟、腎臟或大腦中沒有；②接種任何劑量病毒的老鼠中均未發(fā)現(xiàn)疾病體征或死亡情況，所有老鼠體重增加結論：CK/SD008的MLD50大于7.5log10EID50結果實例主題3評析第20頁目標：評估雪貂體中的病毒復制方法：兩只雪貂鼻內接種CK/SD008的106.0EID50，4日后收集器官，雞胚病毒滴定結果：兩只雪貂肺、扁桃體、大腦檢測到CK/SD008，脾臟或腎臟中沒有(與2013年H7N9禽流感病毒只在扁桃體和呼吸道復制不同[16])方法：①評估雪貂CK/SD008傳播常規(guī)動物模型；②用未傳播的CK/S1053作陰性對照；③三只雪貂組鼻內接種CK/S1053、CK/SD008的106EID50；④雪貂放在帶有隔離器的不同籠子；⑤24h后將三只幼雪貂放在相鄰籠子；⑥每兩只雪貂用分隔物分開；⑥接種2日(暴露1日)后每隔2日收集雪貂鼻腔清洗液，評估病毒脫落；⑦接種14日后收集所有雪貂血清，血凝抑制抗體檢測結果實例主題4評析結果：觀察結束時，鼻腔清洗液有病毒，由暴露的幼雪貂的血清轉化來，證實呼吸道飛沫傳播①所有直接感染雪貂體內檢測到病毒；②暴露9日從暴露在感染CK/SD008的3只雪貂中一只檢測到低病毒滴度，暴露在感染CK/S1053的任一雪貂未檢測到；③暴露或感染CK/SD008的雪貂體重減少1.9-8.2%，直接感染CK/S1053的下降4.0-4.6%；④每一直接感染組的兩只雪貂體溫升高；⑤血清轉化發(fā)生在所有直接感染病毒的雪貂及暴露在感染CK/SD008的雪貂組的一只雪貂結論：CK/SD008在雪貂體低效呼吸道飛沫方式傳播，與本課題2013年成果類似[16]第21頁已有結果：PB2中兩種氨基酸627K、701N對哺乳動物流感病毒的毒性和傳播很重要，本課題以前成果(一些H9N2的內部基因與H7N9的相似，由雪貂感染后易獲得PB2627K或701N突變，即PB2兩種突變，簡稱PB2突變)；CK/SD008不含PB2突變目標：研究這些突變是否發(fā)生在CK/SD008在雪貂體內復制過程中方法：對接種4日后的雪貂器官及傳播研究中的雪貂鼻腔清洗液中PB2基因測序結果：傳播研究中直接感染的雪貂器官和鼻腔清洗液中含攜帶PB2突變的病毒；暴露的雪貂鼻腔清洗液中的病毒只含PB2627K突變。從家禽分離出來的H7N9中未檢測到PB2突變，從人分離出來的648個H7N9中約有83%含有PB2突變結論：H7N9在人體復制過程中容易獲得這些突變結果實例主題5評析新目標：評估CK/SD008在人體復制后獲得突變的風險方法：對雞胚有限稀釋，從雪貂肺樣本中提純突變體結果：分析基因組序列，確認兩種病毒，每種含一種PB2突變方法：進一步研究老鼠和雪貂結果：①PB2突變顯著提升CK/SD008的聚合酶活性；②老鼠鼻甲和肺的PB2兩種病毒滴度明顯高于用CK/SD008接種的老鼠；③所有3只老鼠的大腦及1只老鼠的脾臟和腎臟中檢測到PB2病毒；④PB2病毒造成嚴重疾病，在低劑量下致死老鼠(MLD50為1.8、3.4log10EID50)第22頁方法：評估PB2兩種病毒在雪貂體內的復制（對接種PB2病毒與CK/SD008的雪貂的器官組織嗜性、病毒滴定進行比較，研究其在雪貂的呼吸道飛沫傳播）結果：①直接感染組中，所有雪貂均檢測到病毒；PB2/627K暴露組中，在一只暴露1日后的雪貂和另外幾日測試的所有三只雪貂檢測到病毒；PB2/701N暴露組中，在一只暴露3、5日后的雪貂和兩只暴露7、9日后的雪貂檢測到病毒。②一只感染PB2/627K的雪貂在接種7日后體溫升高，但在感染PB2/701N的雪貂中未檢測到明顯體溫變化。③直接感染病毒的雪貂有11.3～28.9%的體重下降。④一只接種PB2/627K的雪貂顯示出嚴重疾病(震顫和斜頸)，接種10日后開始癱瘓(殺死)；一只接種PB2/701N的雪貂病得很重，10日后死亡。⑤所有接種、暴露的雪貂中均發(fā)生血清轉化方法：重復PB2/627K雪貂傳播實驗，將CK/S1053、A/Anhui/1/2013(AH/1)作為陰性、陽性對照結果：沒有檢測到CK/S1053傳播，但檢測到PB/627K、AH/1傳給了所有三只雪貂結論：新雞致命性H7N9在老鼠中高度致命，在PB2獲627K或701N突變后，在雪貂中傳播更有效結果實例主題6評析第23頁已有結果：受體結合偏好對流感病毒傳播很重要，在HA的G186V、Q226L中的兩種氨基酸突變出現(xiàn)在本研究中分離出的H7N9禽流感病毒的90%以上，這兩種氨基酸在H7禽流感病毒與人類受體結合的過程中起著關鍵作用[18]方法：測試CK/SD008及在2013年分離出來的攜帶HA186V、226L的兩種病毒CK/S1053和AH/1的受體結合特性結果：CK/SD008和CK/S1053、AH/1與α2,6-siaylglycopolymer（人類受體）的結合比與α2,3-siaylglycopolymer（禽類受體）的結合更有親和力結果實例主題7評析第24頁已有結果：熱穩(wěn)定性對某些高致病性H5N1實驗室適應性病毒的傳播有重要意義[6]方法：對包括本傳播研究中使用的五種H7N9病毒、一種2016年的H7N9禽流感病毒和一種H5N1禽流感病毒在內的七種流感病毒的熱穩(wěn)定性與2009年的H1N1大流行性流感病毒(SC/1)進行比較，并使用Imai等[6]所述的方法結果：2013年的兩種H7N9禽病毒CK/S1053、AH/1比人病毒SC/1更不穩(wěn)定，但CK/SD008及其PB2突變體連同2016年的H7N9、H5N1有與SC/1相近或更強的熱穩(wěn)定性結果實例主題8評析第25頁第26頁

6.5

“結果”“材料與方法”對比“結果”與“材料與方法”內容類別對比MaterialsandMethodsResults第27頁結果主題1與“材料與方法”主題3對比1.H7N9禽流感病毒監(jiān)測和遺傳分析(1)目標：監(jiān)測家禽中H7N9病毒的演變樣本收集及處置：201307~201701，24省家禽市場、農場、野生鳥類棲息地和屠宰場，112593；接種到10日大雞胚檢測結果：①3664種流感病毒；293株H7N9已在17省分離出來；②6種從福建、廣東、江蘇和浙江雞場采集樣本中分離出來；

③其他病毒從活禽市場收集的樣本中分離出來目標：檢測可能顯著影響病毒生物特性的關鍵突變方法：對293種病毒的HA、PB2基因部分測序發(fā)現(xiàn)結果：①293種禽流感病毒中有280、266種在HA上分別有186V、226L突變，但無一種在PB2上有627K或701N突變；②在2017年廣東的雞體中分離出的7種病毒中，在HA裂解位點里有編碼4種氨基酸(-KRTA-)的12種額外核苷酸(-aaacggactgcg-)3.樣本收集和病毒隔離樣本制備：201307～201701、112593個、分類(鳥的環(huán)境、泄殖腔和氣管拭子)、24省、來源(活禽市場、家禽養(yǎng)殖場、家禽屠宰場、野生鳥類棲息地糞便)隔離方法：放置在最低基本培養(yǎng)基中，接種到雞胚，收集尿囊液，檢測雞紅細胞HA活性隔離材料：樣本收集管、青霉素、鏈霉素、基本培養(yǎng)基、雞胚、抗血清、禽流感病毒等，涉及數(shù)量，適用范圍，具體方法(接種、收集、檢測、直接測序)、環(huán)境條件(溫度、時間)等ResultsMaterialandMethods第28頁結果主題1與“材料與方法”主題4對比H7N9禽流感病毒監(jiān)測和遺傳分析(2)目標：研究病毒間的基因關系方法：對來自不同采樣時間、地點和物種的83種代表性病毒測序病毒HA結果：①HA基因在核苷酸水平上共享88-100%的一致性，形成4個系統(tǒng)發(fā)育組；②第1組的HA共享超過97%的一致性，與2013/H7N9的HA聚合在一起；③其他3組HA屬當時出現(xiàn)在中國且僅在鴨子中檢測的病毒病毒NA結果：①NA基因在核苷酸水平上共享90-100%的一致性，形成3個系統(tǒng)發(fā)育組；②病毒6個內部基因表現(xiàn)出明顯多樣性，83種病毒的PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因在核苷酸水平上共享84.8、88.6、86.8、86.4、88.5-100%的一致性；③PB1、NP分別在系統(tǒng)發(fā)育樹中形成8個組，PB2、PA、M、NS形成6、9、5、4個組基因組分類結果：①H7N9分為23種不同基因型；②主要病毒歸為基因1、2型，分別在8、9個省檢測到，其他病毒只在1～3個省檢測到；③攜帶4種氨基酸插入其HA的7種病毒屬于基因1~3型；時間尺度系統(tǒng)發(fā)育分析結果：HA突變可能由兩種不同H7N9病毒引起，其中一種與其他病毒重組會形成幾種基因型4.遺傳和系統(tǒng)發(fā)育分析子對象1：H7N9的RNA目標：提取H7N9的RNA方法：完成RT-PCR、產品測序、使用引物序列、編輯核苷酸序列、分析系統(tǒng)發(fā)育、評估樹拓撲、基因片段組分類材料：病毒提取試劑盒、基因特異性引物、生物系統(tǒng)DNA分析儀、DNAStar軟件包Seqman模塊、MegaClustalW軟件包等子對象2：兩組H7N9病毒目標：創(chuàng)建HA基因貝葉斯時間分辨系統(tǒng)樹方法：分析核苷酸替換模型、對數(shù)正態(tài)分布式不相關松弛時鐘、靈活有效種群容量樹；運行MCMC鏈，每3000步取樣；丟棄前10%老化樣本；選擇MCMC設置，實現(xiàn)200個參數(shù)崗位老化有效樣本容量；評估數(shù)據(jù)材料：Tracer1.6的AICM模塊ResultsMaterialandMethods第29頁結果主題2與“材料與方法”主題6對比2.雞體中H7N9HA基因突變CK/SD008的復制和毒性已有結果：與雞體高致病性H5和H7流感病毒有關的HA裂解位點里的最小序列是-BXBR-或-RXXR-[34,35]；新H7N9的序列是-KRTAR-，符合高致病性的-RXXR-的標準；并非有這些序列的所有H5或H7都是雞致病性的[36,37]事實：H7N9突變體都是從活禽市場中健康的雞體分離出來的目標：調查CK/SD008毒性方法：測試CK/SD008的靜脈致病指數(shù)IVPI[38]對象：10個6周大無特定病原體(SPF)雞群材料：0.1ml1:10稀釋無細菌尿囊液，含CK/SD008107.7雞胚半數(shù)感染量EID50方法：靜脈注射接種病毒結果：所有雞接種24h后死亡，IVPI值3方法：收集3只接種病毒的雞的大腦和內臟，雞胚病毒滴度結果：器官檢測到接種病毒，平均滴度值5.3～7.9log10EID50/g方法：13只SPF雞鼻內接種CK/SD008的106EID50；3只雞接種3日后殺死，病毒滴定，另外10只雞觀察疾病和死亡跡象結果：接種后雞的咽部和泄殖腔拭子中能檢測到病毒在雞體系統(tǒng)復制；被觀察的雞在感染后4日內死亡結論：2013年中國出現(xiàn)的在2017年分離出的H7N9已突變?yōu)殡u高致病性毒株6.雞研究目標：確定病毒的病原性、靜脈致病指數(shù)(IVPI)對象1：13只雞的組(①10只6周齡雞+②3只接種病毒疫苗的死雞的器官)方法：①放在隔離器的籠子，靜脈接種，觀察疾病或死亡；②接種病毒疫苗、收集死雞器官、病毒滴定材料：①白色來亨雞、無細菌含病毒尿囊液(0.1ml1:10稀釋)；②CK/SD008、雞胚對象2：13只雞的組方法：鼻內接種(病毒疫苗)：①殺死3只(接種3日)，收集死雞氣管、泄殖腔拭子及器官，病毒滴定；②對其他10只觀察疾病或死亡材料：①CK/SD008的106EID50病毒疫苗、雞胚；②陰性對照雞ResultsMaterialandMethods第30頁結果主題3與“材料與方法”主題7對比3.H7N9病毒CK/SD008在老鼠體內的復制和毒性已有結果：H5N1的HA裂解位點上的多重堿性氨基酸序列是對哺乳動物產生致命的先決條件[25,39]；但并非所有有這種序列的H5N1在哺乳動物中均是致命的[40,41]）目標：在HA中插入四胺基酸是否會增加H7N9在哺乳動物中的毒性方法：對HA插入的老鼠和雪貂測試病毒的復制和毒性：①3只6周BALB/c老鼠鼻內接種CK/SD008106.0EID50病毒，3日后殺死；②收集鼻甲、肺、脾臟、腎臟和大腦，病毒滴定；③5只老鼠組接種101.0-107.0EID50，確定病毒老鼠半數(shù)致死量MLD50，持續(xù)兩周每天監(jiān)測老鼠體重、疾病體征及死亡結果：①老鼠鼻甲和肺中有病毒復制，脾臟、腎臟或大腦中沒有；②接種任何劑量病毒的老鼠中均未發(fā)現(xiàn)疾病體征或死亡情況，所有老鼠體重增加結論：CK/SD008的MLD50大于7.5log10EID507.老鼠研究目標1：確定老鼠半數(shù)致死量(MLD50)的值對象：5只老鼠的組方法：輕度麻醉、鼻內接種疫苗、體重減輕和死亡數(shù)監(jiān)測材料：老鼠(VitalRiverLaboratories,Beijing,China)，CO2，10倍序列稀釋劑

(含50μl

CK/SD008101-107或CK/SD008PB2/627K、701N101-106EID50病毒疫苗)目標2：評估病毒的復制對象：3只老鼠的組方法：輕度麻醉、鼻內接種疫苗、殺死老鼠、收集老鼠器官、病毒傳染性滴定材料：CO2、含50μl測試病毒的106EID50疫苗、雞胚ResultsMaterialandMethods第31頁結果主題5與“材料與方法”主題7對比5.H7N9病毒CK/SD008PB2在老鼠體內的復制和毒性已有結果：PB2中兩種氨基酸627K、701N對哺乳動物流感病毒的毒性和傳播很重要[22-27]，本課題以前成果(一些H9N2的內部基因與H7N9的相似，由雪貂感染后易獲得PB2627K或701N突變，即PB2兩種突變，簡稱PB2突變)[42]；CK/SD008不含PB2突變目標：研究這些突變是否發(fā)生在CK/SD008在雪貂體內復制過程中方法：對接種4日后的雪貂器官及傳播研究中的雪貂鼻腔清洗液中PB2基因測序結果：傳播研究中直接感染的雪貂器官和鼻腔清洗液中含攜帶PB2突變的病毒；暴露的雪貂鼻腔清洗液中的病毒只含PB2627K突變。從家禽分離出來的H7N9中未檢測到PB2突變，從人分離出來的648個H7N9中約有83%含有PB2突變結論：H7N9在人體復制過程中容易獲得這些突變新目標：評估CK/SD008在人體復制后獲得突變的風險方法：對雞胚有限稀釋，從雪貂肺樣本中提純突變體

結果：分析基因組序列，確認兩種病毒，每種含一種PB2突變

方法：進一步研究老鼠和雪貂

結果：①PB2突變顯著提升CK/SD008的聚合酶活性；②老鼠鼻甲和肺的PB2兩種病毒滴度明顯高于用CK/SD008接種的老鼠；③所有3只老鼠的大腦及1只老鼠的脾臟和腎臟中也檢測到PB2病毒；④PB2病毒造成嚴重疾病，在低劑量下致死老鼠(MLD50為1.8、3.4log10EID50)7.老鼠研究目標1：確定老鼠半數(shù)致死量(MLD50)的值對象：5只老鼠的組方法：輕度麻醉、鼻內接種疫苗、體重減輕和死亡數(shù)監(jiān)測材料：老鼠(VitalRiverLaboratories,Beijing,China)，CO2，10倍序列稀釋劑

(含50μl

CK/SD008101-107或CK/SD008PB2/627K、701N101-106EID50病毒疫苗)目標2：評估病毒的復制對象：3只老鼠的組方法：輕度麻醉、鼻內接種疫苗、殺死老鼠、收集老鼠器官、病毒傳染性滴定材料：CO2、含50μl測試病毒的106EID50疫苗、雞胚ResultsMaterialandMethods第32頁結果主題4與“材料與方法”主題8對比4.H7N9病毒CK/SD008在雪貂體內的復制和傳播目標：評估雪貂體中的病毒復制方法：2只雪貂鼻內接種CK/SD008的106.0EID50，4日后收集器官，雞胚病毒滴定結果：2只雪貂肺、扁桃體、大腦檢測到CK/SD008，脾臟或腎臟中沒有(與2013年H7N9禽流感病毒只在扁桃體和呼吸道復制不同[16])方法：①評估雪貂CK/SD008傳播常規(guī)動物模型；②用未傳播的CK/S1053作陰性對照；③3只雪貂組鼻內接種CK/S1053、CK/SD008的106EID50；④雪貂放在帶有隔離器的不同籠子；⑤24h后將3只幼雪貂放在相鄰籠子；⑥每2只雪貂用分隔物分開；⑥接種2日(暴露1日)后每隔2日收集雪貂鼻腔清洗液，評估病毒脫落；⑦接種14日后收集所有雪貂血清，血凝抑制抗體檢測結果：觀察結束時，鼻腔清洗液有病毒，由暴露的幼雪貂的血清轉化來，證實呼吸道飛沫傳播。①所有直接感染雪貂體內檢測到病毒；②暴露9日后從暴露在感染CK/SD008的3只雪貂中1只檢測到低病毒滴度，暴露在感染CK/S1053的任一雪貂都未檢測到；③暴露或感染CK/SD008的雪貂體重減少1.9-8.2%，直接感染CK/S1053的下降4.0-4.6%；④每一直接感染組的兩只雪貂體溫升高；⑤血清轉化發(fā)生在所有直接感染病毒的雪貂及暴露在感染CK/SD008的雪貂組中的1只結論：CK/SD008在雪貂體內以低效呼吸道飛沫方式傳播，與本課題2013年研究成果類似[16]8.雪貂研究目標1：病毒復制

對象：兩只雪貂組(4月齡，血清對流感病毒呈陰性雌性，WuxiCayFerretFarm)方法：麻醉、鼻內接種疫苗、殺死、收集器官、病毒滴定材料：氯胺酮(2020mg/kg)、甲苯噻嗪(1mg/kg)，測試病毒的106EID50疫苗(500L)，雞胚目標2：呼吸道飛沫傳染；HI抗體檢測

對象：3只雪貂的組；3只幼齡雪貂的組方法：鼻內接種疫苗、放在隔離器的籠子；幼齡放在與隔離器相鄰籠子(雙層網(wǎng)隔開)。收集鼻洗液、血清，病毒傳染性滴定材料：106EID50病毒疫苗、隔離器、籠子、雙層網(wǎng)分隔物、雞胚條件：籠子空氣自由流通；接種1日后暴露，14日收集血清；環(huán)境溫度20-22℃，相對濕度30-40%；氣流方向水平，接種雪貂流向暴露雪貂，氣流速度0.1m/sResultsMaterialandMethods第33頁結果主題6與“材料與方法”主題8對比6.H7N9病毒CK/SD008

PB2在雪貂體內的復制、毒性及傳播方法：評估PB2兩種病毒在雪貂體內的復制(對接種PB2與CK/SD008的雪貂器官組織嗜性、病毒滴定作比較，研究在雪貂的呼吸道飛沫傳播)結果：①直接感染組所有雪貂均檢測到病毒；PB2/627K暴露組在1只暴露1日后的雪貂和另外幾日測試的所有3只雪貂檢測到病毒；PB2/701N暴露組中，在1只暴露3、5日后的雪貂和兩只暴露7、9日后的雪貂檢測到病毒。②1只感染PB2/627K的雪貂在接種7日后體溫升高，但在感染PB2/701N的雪貂中未檢測到明顯體溫變化。③直接感染病毒的雪貂有11.3～28.9%的體重下降。④1只接種PB2/627K的雪貂顯示出嚴重疾病(震顫和斜頸)，接種10日后開始癱瘓(殺死)；1只接種PB2/701N的雪貂病得很重，10日后死亡。⑤所有接種、暴露的雪貂中均發(fā)生血清轉化方法：重復PB2/627K病毒在雪貂中的傳播實驗研究，將CK/S1053、A/Anhui/1/2013(AH/1)分別作為陰性、陽性對照結果：未檢測到CK/S1053傳播，檢測到PB/627K、AH/1傳給所有3只雪貂結論：新雞致命性H7N9在老鼠中高度致命，在PB2獲627K或701N突變后，在雪貂中傳播更有效8.雪貂研究目標1：病毒復制

對象：兩只雪貂組(4月齡，血清對流感病毒呈陰性雌性，W