醫(yī)學(xué)微生物學(xué) 第7章 呼吸道感染細(xì)菌 學(xué)習(xí)資料

第7章

呼吸道感染細(xì)菌呼吸道感染細(xì)菌以呼吸道為侵入途徑、引起呼吸道及其以外組織器官病變的一類細(xì)菌。包括：結(jié)核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、流感嗜血桿菌、百日咳鮑特菌等。教學(xué)大綱掌握內(nèi)容結(jié)核分枝桿菌主要生物學(xué)性狀；致病物質(zhì)及致病機(jī)制；結(jié)核菌素試驗(yàn)原理及應(yīng)用；特異性防治原則熟悉內(nèi)容白喉棒狀桿菌的形態(tài)染色特性、致病性及微生物學(xué)檢測(cè)法了解內(nèi)容非結(jié)核分枝桿菌的分組及致病性第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌

M.tuberculosis

俗稱結(jié)核桿菌（tuberclebacillus）結(jié)核病的病原菌，肺結(jié)核常見結(jié)核病是危害人類健康的慢性傳染病流行病學(xué)

本菌可侵犯全身各組織器官，肺部感染最多見結(jié)核的發(fā)病率和死亡率曾一度得到控制

艾滋病的流行及耐藥菌株等原因，結(jié)核病卷土重來(lái)我國(guó)疫情：活動(dòng)性肺結(jié)核病人500萬(wàn)人，每年因結(jié)核病死亡約13萬(wàn)人，位各類傳染病第二位結(jié)核桿菌的發(fā)現(xiàn)

德國(guó)的細(xì)菌家羅伯特.科赫（RobertKoch）1882年發(fā)現(xiàn)世界防治結(jié)核病日3月24日世界上第一次發(fā)現(xiàn)了炭疽桿菌；

世界上第一次分離出傷寒桿菌；

世界上第一次發(fā)明了蒸汽殺菌法；

世界上第一次分離出結(jié)核病細(xì)菌；

世界上第一次發(fā)現(xiàn)了霍亂弧菌；1882年3月24日晚，Koch在科學(xué)界發(fā)表演講，稱首次發(fā)現(xiàn)結(jié)核病因一、生物學(xué)性狀1、形態(tài)與染色形態(tài)：細(xì)長(zhǎng)略彎曲的桿菌分枝狀生長(zhǎng)無(wú)芽孢、鞭毛、莢膜可出現(xiàn)L型變異----抗酸陰性而G+顆粒染色：胞壁含大量脂類

抗酸染色，染成紅色，背景呈藍(lán)色分枝桿菌抗酸染色：結(jié)核桿菌不易著色，但加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間后著色，能抵抗鹽酸酒精的脫色，又稱抗酸桿菌（acid-fastbacilli)。

過程：

石碳酸復(fù)紅----3%鹽酸酒精----美蘭

加熱5min1min1minacid-faststainofmycobacteria

抗酸染色結(jié)核分枝桿菌（紅色）

結(jié)核桿菌電鏡圖2、培養(yǎng)特性專性需氧培養(yǎng):營(yíng)養(yǎng)要求高，羅氏培養(yǎng)基（饞）溫度：37℃，pH：6.5～7.2生長(zhǎng)：慢，繁殖一代需14～18h，

3～4周后，可見粟米大菌落（懶）菌落：乳白色或黃色，干而粗糙，不透明，呈菜花狀（怪）液體培養(yǎng)基：表面生長(zhǎng)（粗糙菌膜）結(jié)核分枝桿菌菌落菌膜3、抵抗力三抗抗干燥（塵埃8-10d、干燥痰6-8月）

抗酸堿（處理標(biāo)本，4%NaOH/6%H2SO4）抗堿性染料（培養(yǎng)基內(nèi)加入，抑制雜菌）三敏感紫外線敏感

75％酒精敏感（細(xì)胞壁中含有脂質(zhì)）濕熱敏感（煮沸）4、變異性可發(fā)生變異：如：形態(tài)變異----L型變異，致病耐藥性變異（異煙肼）----染色體突變目前多重耐藥（MDR）流行——全球問題

毒力變異—BCG卡介苗（BCG）：1908年，CalmetteandGuerin將牛型結(jié)核桿菌經(jīng)13年傳230代，獲得的減毒株，用于預(yù)防接種。二、致病性致病物質(zhì):

不產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素?zé)o菌毛及侵襲酶其致病性下列因素有關(guān)：菌體的脂質(zhì)成分代謝產(chǎn)物的毒性細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖所致炎癥免疫病理?yè)p傷（IV超敏反應(yīng)）有關(guān)致病物質(zhì)：菌體成分脂質(zhì)1.索狀因子：破壞線粒體，引起慢性肉芽腫2.磷脂：刺激單核細(xì)胞增生，抑制蛋白酶的分解

（結(jié)核結(jié)節(jié)）（干酪樣壞死）3.硫酸腦苷脂：抑制吞噬體與溶酶體結(jié)合----胞內(nèi)寄生4.蠟質(zhì)D：引起遲發(fā)型過敏反應(yīng)蛋白質(zhì)結(jié)核菌素，引起遲發(fā)型過敏反應(yīng)，致組織壞死，全身中毒多糖趨化炎性細(xì)胞2.致病機(jī)制低毒力TB：Mφ吞噬、殺滅強(qiáng)毒力TB：

Mφ吞噬、TB在Mφ內(nèi)增殖炎癥C浸潤(rùn)、C壞死

早期炎癥，TB易播散

局部：?jiǎn)蝹€(gè)核C浸潤(rùn)（T、Mφ）

肉芽腫、結(jié)核結(jié)節(jié)干酪樣壞死172~4W（CMI、Ⅳ型）結(jié)核結(jié)節(jié)是在細(xì)胞免疫的基礎(chǔ)上，中心為干酪樣壞死，周圍為放射狀排列的上皮樣細(xì)胞，并可見郎格漢斯巨細(xì)胞，再向外為較多淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，結(jié)節(jié)周圍還可見纖維結(jié)締組織包繞3.所致疾?。簜魅驹矗洪_放性結(jié)核病人傳播途徑：呼吸道、消化道、損傷的皮膚黏膜所致疾病

引起多種臟器組織的結(jié)核病，肺結(jié)核為最多見肺感染

原發(fā)感染：外源性感染

兒童多見，無(wú)免疫力，炎癥反應(yīng)較輕，易擴(kuò)散

原發(fā)后感染：外或內(nèi)源性感染

成人多見，有免疫力，局部反應(yīng)劇烈，易局限肺外感染

原發(fā)感染

結(jié)核桿菌↓吸入

肺泡,巨噬細(xì)胞吞噬↓脂質(zhì)抗吞噬

繁殖后破壞巨噬細(xì)胞↓釋放

炎癥原發(fā)灶

經(jīng)淋巴管擴(kuò)散↓肺門淋巴結(jié)腫大

原發(fā)綜合征↓鈣化、纖維化但：病灶內(nèi)仍有細(xì)菌潛伏

1.內(nèi)源性感染的來(lái)源

2.維持機(jī)體免疫力

極少部分-----全身粟粒性結(jié)核或結(jié)腦原發(fā)后感染：多見于成人內(nèi)源性——

原發(fā)病灶內(nèi)外源性——

重新感染（少）病灶多局限、不擴(kuò)散形成結(jié)核結(jié)節(jié)、干酪樣壞死、纖維化等轉(zhuǎn)歸：鈣化、纖維化-----痊愈液化----形成空洞

----開放性結(jié)核（傳染性強(qiáng)）肺外結(jié)核----繼發(fā)感染：免疫力低下者隨血液循環(huán)而播散，腎、骨/關(guān)節(jié)、腸、生殖器、腦（結(jié)核性腦膜炎）、腹腔（結(jié)核性

腹膜炎）等少數(shù)播散至全身BoysufferingfromPulmonarytuberculosis粟粒性肺結(jié)核骨結(jié)核皮膚結(jié)核結(jié)核桿菌感染分布圖帶菌免疫/傳染免疫(infectionimmunity)指結(jié)核桿菌（或BCG）在體內(nèi)存在時(shí)，機(jī)體對(duì)細(xì)菌再次入侵有免疫力，而當(dāng)細(xì)菌從體內(nèi)消失后機(jī)體的免疫力也隨之消失。結(jié)核菌感染依賴細(xì)胞免疫(致敏Th和Mφ)三、免疫性

細(xì)胞免疫和遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）并存

其強(qiáng)弱決定了感染的結(jié)局和預(yù)后

超敏反應(yīng)結(jié)核菌素與蠟質(zhì)D共同刺激T細(xì)胞，形成DTH致敏T細(xì)胞再次遇到結(jié)核桿菌時(shí)，釋放淋巴因子，引起強(qiáng)烈的DTH，發(fā)生干酷樣壞死、液化形成空洞。細(xì)胞免疫：rRNA免疫性和超敏反應(yīng)四、微生物學(xué)檢查1、標(biāo)本：根據(jù)感染部位（痰、腦脊液、尿、糞便）

2、涂片染色鏡檢：抗酸染色3、免疫學(xué)診斷：

結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)、IFN-γ釋放試驗(yàn)等4、分離培養(yǎng)：羅氏培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)3～4周

5、細(xì)菌基因診斷：PCR6.動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(tuberculinskintest,TST)定義：應(yīng)用結(jié)核菌素進(jìn)行皮試，以檢測(cè)受試者對(duì)結(jié)核桿菌是否有遲發(fā)型超敏反應(yīng)和細(xì)胞免疫。原理：皮膚遲發(fā)型超敏反應(yīng)和細(xì)胞免疫共存意義：檢測(cè)機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌的免疫性結(jié)核菌素：舊結(jié)核菌素(OT)、

純蛋白衍生物(PPD)方法：前臂皮內(nèi)注射OT或PPD，48-72h觀察。注意局部有無(wú)硬結(jié)，不能單獨(dú)以紅暈為標(biāo)準(zhǔn)。TBskintest.前臂皮內(nèi)注射PPD.結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性：5～15mm-----出現(xiàn)超敏反應(yīng)，機(jī)體曾感染過結(jié)核，或接種BCG成功，有特異性免疫力強(qiáng)陽(yáng)性：>15mm-----可能有活動(dòng)性結(jié)核，應(yīng)進(jìn)一步檢查陰性：<5mm-----無(wú)結(jié)核桿菌感染或未接種過BCG。

但應(yīng)考慮：原發(fā)感染的早期（T細(xì)胞尚未被致敏）；

嚴(yán)重結(jié)核病患者；艾滋病等免疫功能低下者；使用免疫抑制劑等。48-72小時(shí)后，結(jié)核菌素試驗(yàn)紅腫硬結(jié)直徑>10mm結(jié)核菌素試驗(yàn)

結(jié)果？

應(yīng)用：

①診斷嬰幼兒的結(jié)核?。?/p>

②測(cè)定接種卡介苗后免疫效果；

③結(jié)核分枝桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查；

④測(cè)定的細(xì)胞免疫功能。結(jié)核菌素試驗(yàn)五、防治原則1、預(yù)防:接種卡介苗接種對(duì)象：新生兒及結(jié)核菌素試驗(yàn)陰性兒童接種后可以維持約6-10年2、治療：合理營(yíng)養(yǎng)、注意休息；早發(fā)現(xiàn)，早治療

早期、聯(lián)合、規(guī)則、適量、全程藥物：鏈霉素、利福平、異煙肼（聯(lián)合用藥，減少耐藥菌株）第二節(jié)白喉棒狀桿菌(diphtheriabacillus)白喉棒狀桿菌人類白喉的病原體白喉是一種急性傳染病，其特征是咽喉形成灰白色假膜假膜一、生物學(xué)性狀1、形態(tài)與染色形態(tài)：細(xì)長(zhǎng)微彎，末端膨大呈棒狀排列不規(guī)則，呈V/L染色革蘭染色陽(yáng)性Albert染色：菌體綠色

異染顆粒藍(lán)黑色－有鑒別意義棒狀桿菌白喉?xiàng)U菌Albert染色（X1000)革蘭染色白喉?xiàng)U菌革蘭染色（X1000)

異染顆粒

成分：核糖核酸+多磷酸鹽

作用：儲(chǔ)存養(yǎng)料、鑒定

2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求較高培養(yǎng)基：亞碲酸鉀培養(yǎng)基血平板/呂氏血清黑色菌落白色光滑突起菌落3、抵抗力抵抗力較強(qiáng)抗干燥和寒冷濕熱、消毒劑敏感藥物青霉素、紅霉素敏感

二、致病性1、致病物質(zhì)：(1)白喉毒素(最主要)：

只有攜帶β棒狀桿菌噬菌體的溶原性白喉?xiàng)U菌才能產(chǎn)生外毒素(2)索狀因子：破壞線粒體(3)K抗原：粘附，抗吞噬白喉毒素:成份：一種毒性強(qiáng)、具有高度抗原性的蛋白質(zhì)組成：由A、B兩個(gè)亞單位組成。A---毒性區(qū)，通過促進(jìn)ADPR（腺嘌呤二磷酸核糖）與EF-2結(jié)合，使EF-2失活，抑制易感細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，細(xì)胞功能受損B---無(wú)毒性，吸附細(xì)胞膜受體（HB-EGF)，協(xié)助A鏈入胞。作用靶c：心肌和神經(jīng)細(xì)胞AB細(xì)胞膜2.所致疾病

白喉--急性呼吸道傳染病臨床表現(xiàn)細(xì)菌-----上呼吸道粘膜，生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生毒素細(xì)菌與毒素共同作用引起局部癥狀：炎癥，壞死，纖維蛋白滲出假膜——窒息毒素入血引起全身中毒癥狀（毒血癥）外周N---N炎：膈肌麻痹--呼吸困難聲帶麻痹--聲音嘶啞軟頜麻痹--吞咽困難心肌---心肌炎(死亡主要原因)咽部白喉咽部白色偽膜三、免疫性感染后機(jī)體可獲得牢固的免疫力體液免疫：白喉抗毒素阻止B亞單位與易感細(xì)胞結(jié)合機(jī)體還可通過其它方式獲得免疫力：六個(gè)月以下嬰兒------母親成人--------------隱性感染、疫苗四、微生物學(xué)檢查標(biāo)本：棉簽采取假膜邊緣分泌物直接涂片:

菌體顏色、菌體排列、異染顆粒結(jié)合臨床癥狀可做初步診斷分離培養(yǎng):

呂氏血培養(yǎng)基-------白色菌落亞碲酸鉀血培養(yǎng)基-------黑色菌落毒力鑒定體內(nèi)法：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)體外法：雙向擴(kuò)散（Elek平板法）五、防治原則1、預(yù)防：人工自動(dòng)免疫類毒素（白百破三聯(lián)疫苗）人工被動(dòng)免疫對(duì)易感兒童注射抗毒素緊急預(yù)防，同時(shí)用類毒素延長(zhǎng)免疫力2、治療抗毒素：要早期、足量注射白喉抗毒素（注意皮試）?？股兀呵嗝顾鼗蚣t霉素，預(yù)防繼發(fā)感染第三節(jié)流感嗜血桿菌（H.influenzae）生物學(xué)特性

革蘭陰性小桿菌，多形性無(wú)鞭毛，有毒株有莢膜生長(zhǎng)需要X和V因子（新鮮血液）

巧克力色平板上生長(zhǎng)較佳菌落：灰白色，圓形，光滑與金葡菌共培養(yǎng)：衛(wèi)星現(xiàn)象抵抗力：弱根據(jù)莢膜抗原分ABCDEF六型，B型毒力最強(qiáng)血紅素輔酶Ⅰ或Ⅱ衛(wèi)星現(xiàn)象

（satellitephenomenon）

當(dāng)與金黃色葡萄球菌在血平板上共同孵育時(shí)，由于后者能合成較多的V因子，在金黃色葡萄球菌菌落周圍生長(zhǎng)的流感嗜血桿菌的菌落較大，離金黃色葡萄球菌菌落越遠(yuǎn)的越小。致病物質(zhì)莢膜菌毛內(nèi)毒素：脂寡糖（LOS）IgA蛋白酶所致疾病繼發(fā)性（內(nèi)源性）感染常繼發(fā)于流行性感冒麻疹百日咳結(jié)核病等臨床類型慢性支氣管炎中耳炎鼻竇炎等原發(fā)性（外源性）感染急性化膿性感染：腦膜炎，鼻咽炎等免疫性以體液免疫為主診斷與防治痰液、腦脊液、鼻咽分泌物、血液和膿液等。膿汁、腦脊液、標(biāo)本直接涂片結(jié)合臨床癥狀初步診斷分離培養(yǎng)鏡檢診斷可選用廣譜抗生素。治療預(yù)防莢膜多糖菌苗嗜肺軍團(tuán)菌（L.pneumophila)１９７６年美國(guó)費(fèi)城的一次退伍軍人大會(huì)期間，爆發(fā)原因不明的肺炎，當(dāng)時(shí)稱為軍團(tuán)病，３４人死亡，分離出一種新的Ｇ－桿菌，１９７８年命名為嗜肺軍團(tuán)菌，１９８４年，正式單獨(dú)列為軍團(tuán)菌科、軍團(tuán)菌屬，有３９個(gè)菌種，６１血清型自然界普遍存在，各種水源，人工冷、熱水管道系統(tǒng)中一、生物學(xué)特性革蘭陰性桿菌，常規(guī)染色不易著色，Dieterle鍍銀法染成黑褐色

Giemsa法染色染成紅色菌體形態(tài)易變異，人工培養(yǎng)基上呈多形性，組織中呈短桿狀端生或側(cè)生鞭毛，有菌毛和微莢膜專性需氧菌活性炭-酵母浸出液瓊脂（BCYE),灰白色有光澤S菌落，加0.01％溴甲酚蘭，菌落呈淺綠色有菌體抗原（Ｏ），鞭毛抗原（Ｈ）以氣溶膠方式傳播；化學(xué)消毒劑、干燥、紫外線敏感；對(duì)氯或酸有一定抵抗什么是氣溶膠呢？固體或液體的微小顆粒懸浮在空氣中，就叫做氣溶膠。如：煙囪里冒出的煙，是微小的炭粒懸浮在空氣中形成的；天空的霧，是微小的水粒懸浮在空氣中形成的。煙和霧都是氣溶膠。致病物質(zhì)主要是產(chǎn)生的多種酶類和毒素：

蛋白水解酶、磷酸酶、核酸酶、細(xì)胞毒素等抑制吞噬體和溶酶體融合此外：微莢膜的抗吞噬作用菌毛的黏附作用內(nèi)毒素的作用所致疾病——軍團(tuán)菌病醫(yī)院內(nèi)感染