GB-T45200-2025 飼料中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的測(cè)定 高效液相色譜法 2025-01-24 2025-08-01

ICS65.120CCSB46中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T45200—2025飼料中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的測(cè)定高效液相色譜法Determinationofneohesperidindihydrochalconeinfeeds—Highperformanceliquidchromatography2025-01-24發(fā)布2025-08-01實(shí)施國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布/GBT45200—2025前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)提出并歸口。本文件起草單位:山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、山東奔月生物科技股份有限公司、成都大帝漢克生物科技有限公司。本文件主要起草人:張瑋、王振東、王英英、杜寧、張蕓、布巖林、孫延軍、閆傳琦、劉婕、楊智國(guó)、李俊玲、趙學(xué)峰、李會(huì)榮、張坤、崔立軍、余淼、鄧蘋玲、鄧虹。Ⅰ/GBT45200—2025飼料中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的測(cè)定高效液相色譜法范圍1本文件描述了飼料中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的高效液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料、復(fù)合預(yù)混合飼料中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的測(cè)定。本文件方法在配合飼料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料的檢出限為0.5mgkg/,定量限為5.0mgkg/。/,定量限為1.0mg/kg;復(fù)合預(yù)混合飼料的檢出限為2.5mgkg規(guī)范性引用文件2下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682GB/T20195分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法動(dòng)物飼料試樣的制備術(shù)語(yǔ)和定義34本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理試樣中的新甲基橙皮苷二氫查耳酮用甲醇甲酸乙腈溶液提取,經(jīng)固相萃取柱凈化后,高效液相色-譜儀測(cè)定,外標(biāo)法定量。試劑或材料5除非另有規(guī)定,僅使用分析純?cè)噭?。?GB/T6682,一級(jí)。5.15.25.35.45.55.65.75.8甲醇:色譜純。甲酸:色譜純。乙腈:色譜純。甲醇溶液(90%,體積分?jǐn)?shù)):量取甲醇(5.290)mL,用水稀釋至100mL,混勻。甲酸乙腈溶液(2%,體積分?jǐn)?shù)):移取甲酸(5.32.)0mL,用乙腈(5.4)稀釋至100mL,混勻。提取液:量取甲醇(5.2400mL)、甲酸乙腈溶液(5.6100)mL,混勻。甲酸溶液(0.1%,體積分?jǐn)?shù)):移取甲酸(5.31.)0mL,用水稀釋至1000mL,混勻。5.9標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mgmL/):準(zhǔn)確稱取新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)品(C28H36O15,CAS號(hào):20702-1/GBT45200—202577-6,純度≥98.0%10mg)(精確至0.01mg)于10mL容量瓶中,用甲醇(5.2)溶解并定容,混勻,-18℃以下保存,有效期6個(gè)月。容量瓶中,用甲醇(5.2)5.10稀釋定容,混勻,-18℃以下保存,有效期1個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液:分別準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.10)于容量瓶中,用甲醇溶液(5.5)稀釋定5.91mL于10mL標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(/):準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液()100gmLμ5.11容,配制成質(zhì)量濃度分別為/、/、/、/、/和/0.5gmL1gmL5gmL10gmL20gmL50gmL標(biāo)準(zhǔn)系μμμμμμ列溶液。臨用現(xiàn)配。固相萃取柱:填料為N-丙基乙二胺、三官能十八烷基、合成石墨化炭黑,598mg6mL/,或性能相5.12當(dāng)者。5.13微孔濾膜:0.45μm,有機(jī)系。儀器設(shè)備6高效液相色譜儀:配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。6.16.2分析天平:精度分別為0.1mg0.、01mg。渦旋振蕩器。6.36.46.56.66.7氮吹儀:帶加熱裝置,控溫精度±2℃。離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于5000rmin/。固相萃取裝置。渦旋混合器。樣品7按照GBT20195/制備試樣。取樣品至少200g,粉碎使其全部通過(guò)0.425mm孔徑的分析篩,充分混勻,裝入密閉容器中,備用。試驗(yàn)步驟8提取8.1平行做2份試驗(yàn)。稱取試樣2.5g(精確至0.1mg)于50mL離心管中,準(zhǔn)確加入提取液(5.7)10mL,渦旋混勻,振蕩提取,/離心,上清液備用。20min5000rmin5min凈化8.2準(zhǔn)確移取配合飼料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料上清液(8.14mL)過(guò)固相萃取柱(5.12),流速小于1mLmin/,收集流出液,再加入3mL甲醇(5.2)過(guò)柱,抽干,收集所有流出液,混勻后用40℃氮?dú)獯蹈?準(zhǔn)確加入1mL甲醇溶液(5.5)溶解殘留物,渦旋混勻,過(guò)微孔濾膜(5.13),待測(cè)。準(zhǔn)確移取復(fù)合預(yù)混合飼料上清液(8.14mL)過(guò)固相萃取柱(5.12),流速小于1mLmin/,收集流出液,再加入3mL甲醇(5.2)過(guò)柱,抽干,將所有流出液收集至10mL容量瓶中,用甲醇(5.2)定容,混勻,過(guò)微孔濾膜(5.13),待測(cè)。測(cè)定8.3液相色譜參考條件8.3.1液相色譜參考條件如下:2/GBT45200—2025a)色譜柱:C18色譜柱,長(zhǎng)250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒度,或性能相當(dāng)者;5mμb)流動(dòng)相:A相為乙腈(5.4),B相為0.1%甲酸溶液(5.8),梯度洗脫程序見表1;c)流速:1.0mLmin/;d)柱溫:35℃;)進(jìn)樣量:;e10Lμf)檢測(cè)波長(zhǎng):281nm。表1梯度洗脫程序時(shí)間A相B相min%%0.00.520204060602020808060404080809.09.511.512.016.0標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液測(cè)定8.3.2在儀器的最佳條件下,分別取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(5.11)和試樣溶液(8.2)上機(jī)測(cè)定。新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見附錄A。定性8.3.3以保留時(shí)間定性,試樣溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的保留時(shí)間應(yīng)與質(zhì)量濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的保留時(shí)間一致,其相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)。定量8.3.4以新甲基橙皮苷二氫查耳酮的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),以色譜峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的質(zhì)量濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi),若超出線性范圍,應(yīng)將試樣溶液用甲醇(5.2)稀釋后重新測(cè)定。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí),試樣溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的質(zhì)量濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度相差不超過(guò)30%。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理9試樣中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w計(jì),數(shù)值以毫克每千克(mgkg/)表示。多點(diǎn)校準(zhǔn)按式()1計(jì)算,單點(diǎn)校準(zhǔn)按式()2計(jì)算。w=ρ×V1×V3×f×1000m×V×1000…………(1)2式中:———試樣中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);wρ———由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升3/GBT45200—2025(μg/mL);———試樣提取溶液的總體積,單位為毫升(mL);———試樣溶液最終體積,單位為毫升(mL———超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍后的稀釋倍數(shù);V1V3f);1000———換算系數(shù);———試樣質(zhì)量,單位為克();gm———凈化時(shí)所用試樣提取溶液的體積,單位為毫升(mL)。V2w=A×ρs×V1×V3×f×1000…………(2)As×m×V2×1000式中:———試樣中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量,單位為毫克每千克(mgkg/);w———試樣溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的峰面積;A———標(biāo)準(zhǔn)溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);———試樣提取溶液的總體積,單位為毫升(mL);ρsV1———試樣溶液最終體積,單位為毫升(mL);V3f———超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍后的稀釋倍數(shù);1000———換算系數(shù);———標(biāo)準(zhǔn)溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的峰面積;Asm———試樣質(zhì)量,單位為克();g———凈化時(shí)所用試樣提取溶液的體積,單位為毫升(mL)。V2測(cè)定結(jié)果