病理技術(shù)理論與操作手冊

常規(guī)病理技術(shù)

特殊染色技術(shù)理論及操作手姆

組織化學(xué)技術(shù)

免疫組化染色技術(shù)

2005年3月

目錄

第一篇

常規(guī)標本制作程序

第一節(jié)組織標本收集取材和固定

一、標本收集和查驗程序

二、活檢組織取材

（-）取材時必須注意以下問題

（二）各種器官取材的方法

第二節(jié)尸體解剖的受理和規(guī)則

一、中華醫(yī)學(xué)會規(guī)定尸檢受理規(guī)則

二、尸體解剖須知

三、尸體剖檢的一般常識

四、一般尸體解剖的主要步驟與要求

五、尸體剖檢的取材和固定

六、科學(xué)研究材料的取材

第三節(jié)組織固定

（一）固定的作用

（二）固定的目的

（三）固定的注意事項

（四）固定液的使用

第四節(jié)病理常規(guī)制作程序

一、常規(guī)石蠟切片制作法

（一）組織脫水

（二）組織的透明

（三）組織浸蠟

（四）組織塊包埋

（五）蠟塊的修切

（六）石蠟切片

（七）裱片

（八）烘烤切片

（九）切片的普通染色

（十）蘇木素的種類及其配制法

（H—）伊紅染液的配制

二、超聲波快速石蠟制片法

三、快速石蠟制片法

第五節(jié)冰凍切片

（-）冷凍切片的種類

（二）冷凍切片的目的

（三）冷凍切片的制作方法

（四）冷凍切片的快速染色法

（―）MW固定組織

（二）MW快速石蠟制作法

（三）MW技術(shù)的特殊染色法

（四）MW技術(shù)的免疫組化染色法

第二篇

各種組織特殊染色法

一、膠原纖維染色法

1、VanGieson染色法

2、Masson氏三色染色法

二、網(wǎng)狀纖維染色法

1Gomorfs氨銀法

2、Godon和Swet氏法

3、Wilder氏法

4、Foot氏法

三、彈性纖維染色法

1、Weigert氏雷鎖辛品紅法

2、Gomori醛品紅法

3、Unna地衣紅技術(shù)

4、VerhofF氏酒精蘇木素技術(shù)

四、橫紋肌染色法

1、磷鴿酸蘇木素染色法(PTAH)

2、Masson氏法染色法

3、VanGieson氏法

五、基底膜的顯示

1、六氨銀顯示法

2、PAS顯示法

3、Masson氏三色染色法

4、AFOG法

5、六氨銀——AFOG聯(lián)合染色法

六、纖維素染色法

1、MSB的改良法

2、PTAH法

七、細菌染色法

1、Warthin-Satamy氏法顯示幽門螺桿菌

2、甲苯胺藍染色法

3、Wade-Fite氏抗酸菌染色法

4、Grocott-Gomori氏六氨銀改良法顯示真菌

5、六氨銀改良法顯示組織胞漿菌

八、病毒包涵體染色法

1、Macchiaello氏改良法顯示SARS病毒包涵體

2、Giemsa法顯示多種病毒涵體

3、伊紅和甲基藍顯示合胞和巨細胞病毒包涵體

九、淀粉樣物的染色法

1、甲基紫法

2、改良的剛果紅甲醇法

十、神經(jīng)系統(tǒng)染色技術(shù)

（一）蘇木素VG法染中樞神經(jīng)

（二）神經(jīng)細胞尼氏體染色

（三）改良的Masland、Glees方法

（四）改良的Palmgren氏法染神經(jīng)纖維

（五）改良的Eger飛氏法染變性軸索

（六）改良的Loyez氏法染神經(jīng)髓鞘

第三篇

組織化學(xué)及其顯示法

一、色素顯示法

1、硫酸亞鐵法

2、MassonFontana氨銀法

二、含鐵血黃素顯示法

1、Peris亞鐵氟化鉀法

三、脂褐素顯示法

1、PAS法

2、Schmorl氏法

四、鈣鹽顯示法

1、硝酸銀法

五、脂類染色法

1、蘇丹山?IV聯(lián)合法

2、油紅法

3、蘇丹黑B法

4、Schultz法顯示膽固醇與膽固醇酯

六、糖類

1、PAS顯示法

2、AB法

3、ABPAS

七、核酸

1、Feulgen顯示DNA法

2、核仁組成區(qū)和糖多糖復(fù)合顯示法

3、粘多糖和核仁組成區(qū)雙染法

八、酶組織化學(xué)

1、改良的Gomori氏硝酸鉛法

2、改良的Gomori氏硝酸鉛法

3、Gomoris鈣鉆法

4、a-磷酸祭脂法

5、磷酸奈酯AS-TR（或AS-BJ）法

6、酸、堿性磷酸酶雙染色法

第四篇

免疫組織化學(xué)技術(shù)

一、免疫組織化學(xué)的意義

二、免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展概況

（一）免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)

（二）免疫酶細胞化學(xué)技術(shù)

（三）非標記抗體酶法

（四）親和細胞化學(xué)法

（五）堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶法

（六）免疫金銀法

（七）LSAB法

（八）EnVision?Systems法

（九）真空負壓LSAB法

三、常用免疫組織化學(xué)染色方法

（―）ABC法

（二）LSAB法

（三）真空負壓LSAB法

（四）Envision?Systems法

（五）免疫組化雙染色法（I）

（六）免疫組化雙染色法（II）

（七）細胞培養(yǎng)片免疫熒光染色法

（A）真空負壓、免疫熒光染色法染細胞培養(yǎng)片

四、抗原修復(fù)

（一）為什么要進行抗原修復(fù)

（二）用什么方法進行抗原修復(fù)

1、真空負壓抗原修復(fù)法

2、微波輻射抗原修復(fù)法

3、高壓抗原修復(fù)法

4、隔水熱抗原修復(fù)法

5、電爐加熱抗原修復(fù)法

（三）抗原修復(fù)必須注意的問題

五、作好免疫組化染色必須注意的問題

六、免疫組化陽性病例的評判及相關(guān)問題

七、常用抗體的應(yīng)用范圍及選用

（一）常用上皮細胞及腫瘤標記物

（二）常用的時間葉源性組織及其腫瘤的檢測抗體

（三）肌組織及其相關(guān)腫瘤的常用抗體

（四）淋巴組織及相關(guān)腫瘤檢測的常用抗體

（五）神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌及其相關(guān)腫瘤抗體

（六）其它

八、免疫組織化學(xué)在乳腺癌中的應(yīng)用

第一篇常規(guī)標本制作程序

第一節(jié)組織標本收集取材固定

一，標本收集和查驗程序。

對于所有送檢的標本，必須認真執(zhí)行查驗程序，方能進入下一程

序，其主要程序是：

1,收集標本時：要仔細查對申請單上的姓名與標本上

的姓名，序號是否一致；標本的件數(shù)與申請單是否相符;

標本是否用固定液固定過。

2,標本經(jīng)上述驗收后，進行編號登記，以防錯亂。編

號按年份和流水號兩種方法，如果為了今后的查找較為

方便，按年份編號為較好。

二，活檢組織取材：在外科送檢的諸多材料中，對于每

一例病例的材料，大小都不一樣，但對于較大的標本，不可

能都對其進行制作切片，因此，選擇適合于病理技術(shù)制作，

適合于病理診斷且有利于回顧性研究等各方面的材料，是病

理活檢的關(guān)鍵，通常把這過程稱為取材。

（一）取材時必須注意以下問題：

①取出所有送檢的標本，量其大小，稱其重量，描寫其

色澤，質(zhì)地，形狀和肉眼所見表面情況。當標本切開后，

應(yīng)詳細描寫其切面的顏色，硬度，病變部位等，必要時繪

圖說明。

②對于細小標本如肺支氣管穿刺物標本胃腸鏡活檢標本

山等，應(yīng)將其染上伊紅顏色后，用擦鏡紙或特別脫水袋將

其包上或裝上，以防漏出脫水盒的小孔。

③對于有傳染性的標本，讓標本徹底固定后再取材。如

結(jié)核瘤標本等。

④對于罕見特殊的標本，應(yīng)小心保存好，在不影響診斷的

情況下，盡量保存好大體標本。以利于教學(xué)標本，陳列標本的收集。

⑤邊取材邊固定，組織標本較多的單位，取材經(jīng)常要花

上兒個小時，如果從下午2：30開始取材，至5：30完成，那么先取

的材料就可以多固定兒個小時一，如此可以防止固定時間不足，同時也

可防止組織發(fā)生自溶。

⑥對于骨髓穿刺的組織，可先用10%硝酸浸泡30分鐘

左右，然后再與其它組織進行處理。

⑦骨組織和鈣化組織，應(yīng)徹底脫鈣后，方能進行制作。

具體用大頭針能順利扎入骨組織則可。

⑧活檢組織取材，不能太厚，以不超過2mm為宜。以

防脫水不徹底，不利于制片。

⑨每取完一例標本后，所有的工具如刀，剪，盤鑲，

切板等，必須用水沖洗干凈，以免污染，混淆于其它病例。

⑩組織取完即刻放入打印好號碼的盒內(nèi)，放入固定液

中固定。

（二）各種器官及其腫瘤取材的方法

1、乳腺：

纖維腺瘤：肉眼觀察其形狀、體積、包膜是否完整，切面是否

均勻，有無壞死，取材：腫瘤連包膜1-3塊（即周邊組織1塊，

包膜與周邊組織1塊，如果腫瘤不大，上述幾種即周邊包膜和腫

瘤可取1塊）。

乳腺癌：體積，皮膚顏色，有無水腫或變硬，腫大淋巴結(jié)，數(shù)量,

組別，硬度，及切面情況。沿乳腺的最長徑經(jīng)過乳頭切開，觀察

腫瘤的面積，顏色，硬度及浸潤情況等。取材：乳頭及其下組織,

腫瘤及腫瘤交界處，腫瘤下胸肌，全部淋巴結(jié)（注明組別），根據(jù)

各種病變的情況，確定取材的塊數(shù)，如切緣、包膜、腫瘤等均應(yīng)

取到各組淋巴結(jié)分別全部切材。

2、食管癌：

切除的食管長度及周徑，管壁有無水腫或粘連，腫大淋巴結(jié)的

位置，大小，硬度及數(shù)目。沿腫瘤對側(cè)縱形切開，腫瘤大小及形

狀。取材：腫瘤上下交界處各取一塊?；蜓亻L軸通過腫瘤全徑取

出大切片或分成數(shù)段，全部淋巴結(jié)，分別切塊包埋

3、胃潰瘍及胃癌：

全胃或部分切除，大彎及小彎長度，腫大淋巴結(jié)的部位、大小，

硬度及數(shù)目，病變處相應(yīng)漿膜面有何變化。一般沿大彎剪開，觀

察病變大小，深度，邊緣及周圍變化，如為癌瘤，屬何種類型，

與大小切端的距離。取材：病變及與其交界處胃壁全層的胃組織

（盡量側(cè)重于小彎，并注意沿長軸切取組織塊），上下切端組織，

腫大的淋巴結(jié)（注明組別）

4、闌尾：一般于近、中、遠三段各取一組織塊，遠端一塊盡量靠

近尖端，以免遺漏尖癌。已被剖開者，沿縱軸取組織塊，如檢查

時不能發(fā)現(xiàn)病變所在，需多做斷面，以尋覓病變部位和取組織塊。

5、腸癌：切除腸管的長度，腫瘤生長部位、大小、局部漿膜等

情況。如為十二指腸癌，則應(yīng)注意與特氏壺腹的關(guān)系。取材：腫

瘤及交界處腸壁全層組織，上下切端，腫大的淋巴結(jié)。

6、腸梗阻：梗阻部位、長度、直徑及表面變化（顏色、水腫、充

血、出血）；檢查腸系膜的變化，沿病變血管解剖，作多數(shù)橫斷

面，觀察血管壁是否變厚，尋找栓塞的起止部位；腸粘膜有無潰

瘍。取材：病變最顯著處及腸的兩端各切一塊，病變血管（帶些

系膜）各切一塊。

7、腸套疊：注意套疊部位及套疊關(guān)系，尋找闌尾，腸壁是否增

厚及變硬，以手指放入小腸為引導(dǎo)，沿腸系膜剪開，尋找有無原

發(fā)病變（在套入部位的最前端尋找有無腫瘤、潰瘍等到變化）。切

面觀察各層腸壁的厚度、水腫、充血、出血、壞死及硬變等到情

況。取材：原發(fā)病變（如腫塊，潰瘍等）。有變化的腸壁厚度，闌

尾，腫大淋巴結(jié)。

8、腸結(jié)核：外部有無粘連，白色斑塊、結(jié)節(jié)、狹窄，病變上下的

腸段有何改變，有無淋巴結(jié)腫大。沿病變對側(cè)切開，觀察病變情

況（潰瘍、突起、體積、有無息肉樣改變，腸道是否變?yōu)楠M窄或

增厚）。取材：病變部，上下切緣，腫大的淋巴結(jié)。

9、肝活體組織：大小、形狀、顏色、表面及切面有無結(jié)節(jié)狀或纖

維組織增生，有無灰白色結(jié)節(jié)等。取材：包含各病變的組織，如

標本較小，全部切取。

10、陰莖癌：腫瘤生長的部位，大小，潰爛及向陰莖浸潤情況，

切端與腫瘤明顯浸潤處的距離?？v切（通過尿管）觀察切面情況。

取材：腫瘤切面一塊，陰莖截除端一塊。

11、腎結(jié)核：注入福爾馬林固定一周再切，體積，表面是否光滑,

有無粘連、灰白色小結(jié)節(jié)，輸尿管長度，直徑，及硬度。沿輸尿

管及腎盂切開，腎盂是否擴張，切面破壞情況，粘膜變化，主質(zhì)

變化，乳頭情況，（注明哪一個）；輸尿管厚度，有否梗塞，粘膜

情況。取材：腎主質(zhì)包括病變及交界處，輸尿管及切端。

12、腎盂積水：先抽去積液，再注入固定液后再檢查。腎體積、

表面性狀（色澤、平滑否、結(jié)節(jié)、粘連）。沿腎、腎盂及輸尿管切

開，注意阻塞部位及原因。觀察腎盞、腎盂及輸尿管擴張情況，

腎實質(zhì)厚度。取材：腎實質(zhì)厚處及薄處各取一塊，輸尿管各取一

塊。

13、腎癌：腎及腫瘤之體積及重量，腫瘤部位及與腎的關(guān)系，表

面有無水腫或粘連，有無腫大淋巴結(jié)。切面：腫瘤位置、形狀、

大小、顏色、包膜、壞死、出血、囊性變，腎盂與輸尿管中有無

蔓延。取材：腫瘤包括其旁的正常組織，腫瘤以外的腎組織、輸

尿管。

14、膀胱癌：全部或部代分膀胱切除，除非癌瘤位于前側(cè)，一般

沿前側(cè)切開，腫瘤位置，與輸尿管中及膀胱的關(guān)系、體積、生長

情況及浸潤情況，有無淋巴結(jié)（大小，硬度，切面變化）。取材：

沿縱軸方向取材。腫瘤及膀胱壁全層組織；乳頭狀瘤應(yīng)包括蒂部

組織，三角區(qū)組織。

15、前列腺：形態(tài)，體積，顏色，硬度，包膜情況。切面：顏色,

質(zhì)均勻否，有無壞死，出血，囊性變。作多個與尿道垂直的平行

切面觀察。取材：顏色均勻處取一塊，不均勻時在發(fā)黃處盡量多

切，包含尿道。

16、肺葉或肺段：先自支氣管注入福爾馬林固定。檢察前應(yīng)觀察

X線片。病變與支氣管有關(guān)者，沿支氣管切開；病變不沿支氣管

者，可作書頁狀切開：

①肺癌：位置在支氣管哪一支，距切端多遠，大小，形狀,

質(zhì)地是否均勻，有無壞死、空洞、邊緣有無纖維組織圍繞

或不規(guī)則浸潤，是否壓迫支氣管干，肺門淋巴結(jié)情況。取

材：癌組織，癌與正常組織的交界處，支氣管斷端，肺門

或局部淋巴結(jié)。

②支氣管擴張：新鮮時剪開，系囊形或圓柱形（管形）擴

張，屬哪級支氣管，擴張的支氣管之直徑，或?qū)挾?，管?/p>

厚度，顏色周圍組織有何變化，粘膜光滑或呈皺紋，管腔

有無膿液，是否穿破形成肺膿腫。取材：擴張的支氣管，

支氣管周圍發(fā)炎組織，膿腫壁。

③肺膿腫：部位、直徑、單腔或多腔，其中膿液性質(zhì)及氣

味，有無懸梁狀血管，腔壁光滑度，厚度，是否與支氣管

相通，有無散布的小膿腫，有無支氣管擴張，支氣管中有

無異物，膿腫內(nèi)有無硫磺樣顆粒。取材：膿腫壁，與膿腫

有關(guān)的支氣管，肺組織。

④肺結(jié)核空洞：部位，直徑，單腔或多腔，腔中有無膿液、

干革命酷樣壞死、懸梁狀血管，空洞壁厚度，及硬度，腔

內(nèi)為肉芽或纖維組織，尋找與支氣管連通的屢管及所散播

的病變，肺門淋巴結(jié)情況。取材：空洞壁，散播的病變，

肺門淋巴結(jié)。

⑤肺囊腫：數(shù)目，部位，直徑，囊腫壁光滑度及厚度，與

支氣管的關(guān)系，收集囊內(nèi)液體檢查其性狀。取材：囊腫壁

及其旁肺組織，如為包蟲病，則應(yīng)在包蟲囊的液體中尋找

子囊及幼蟲頭節(jié)（離心后）。

17、脾臟：重量，大小、顏色，表面有否粘連，然后沿脾長軸

作多個平行切開，在切面上看包膜及脾髓情況。

①淤血性脾腫大或脾功能亢進，注意靜脈內(nèi)有無血栓，靜

脈壁有無變化，有無梗死，切面上有無含鐵小結(jié)節(jié)。

②脾破裂：注意踴裂部位，長度，有無血凝塊充填破裂口。

取材：帶有包膜的脾組織，脾中心組織，脾門附近包括較大的

血管，如有副脾，淋巴結(jié)各一塊，脾破裂應(yīng)包括裂呂充物。

18、淋巴結(jié)：大小，形狀，包膜情況，成群者注意相互間粘連

情況，切面的顏色，均勻度，質(zhì)地，包膜，等情況。取材：整

個短軸切面，互相粘連者包括粘連部位。

19、骨腫瘤：檢查前先看其X片。有皮膚軟組織者將與腫瘤

無關(guān)部剔除，然后鋸開，有條件者，可與鋸開前攝X線片以

作比較。

檢查腫瘤體積及形狀，切面顏色，硬度，出血，壞死，囊變，

何處為原發(fā)，與骨膜，骨皮質(zhì)及骨髓之間關(guān)系，有無破壞情

況，有無包膜，其厚度及硬度，無包膜者注意其對軟組織浸潤

情況。取材：腫瘤及與組織交界處，骨破壞處，軟組織浸潤處。

20、甲狀腺：重量，大小，形狀，有無結(jié)節(jié)，尋找背面有無甲

狀旁腺，切面質(zhì)地是否均勻，含膠質(zhì)狀況，有無結(jié)節(jié)，出血，

壞死，鈣化，囊變等，有無細小灰白色疤痕樣病變。

甲狀腺腺瘤與腺癌：腫瘤部位，大小，包膜完整否，切面質(zhì)

地，有無出血，壞死，鈣化，囊性變及其內(nèi)容物，有無乳頭或

絨毛狀改變，腫瘤以外組織有無灰白色小節(jié)。

取材：最大面積，切成數(shù)塊全作切片，如為根治術(shù)，要取全部

淋巴結(jié)。

21、刮宮或陰道排出物標志：疑有妊娠者，須仔細尋找有無胎

盤絨毛，眼觀不能判斷時一，須取組織塊，尤應(yīng)注意檢查血凝塊。

22、子宮標本：除按要求檢查病變外，如須研究宮頸癌，可與

子宮頸12點，3點，6點，9點處取宮頸及宮頸內(nèi)膜交界處組

織，必要時取其他各點組織。

23、卵巢腫瘤：形狀大小，較大者應(yīng)稱其重量，表面色澤，光

滑度，與輸卵管的關(guān)系，有無粘連，囊性者自膨大部遠端剪開,

查囊與輸卵管腔是否相通，單房或多房，內(nèi)壁光滑度，有無質(zhì)

或乳頭狀生長區(qū)，乳頭脆性，囊內(nèi)容物性質(zhì)。實性腫瘤切面色

澤、硬度，有無出血，壞死，變性等。

取材：囊性瘤取囊壁較厚處，實質(zhì)，突起處，囊與輸卵管

相連處及輸卵管。實性瘤取邊緣及中央不同結(jié)構(gòu)組織及輸卵

管。

24、胎盤：形狀，大小，重量，母體面絨毛有無缺損、出血、

鈣化、變性壞死，及其范圍大小，羊膜和血管情況，臍帶長度,

直徑，有無扭轉(zhuǎn)打結(jié)、血管栓塞等。

取材：母體面、子體面臍帶各一塊。

25、瘦管或竇道組織：應(yīng)作多數(shù)橫斷面檢查，適當取材。

26、眼球標本：標本固定后，先經(jīng)緩慢脫水至今95%酒精，然

后切開，除病變部位特殊取材外，一般取水平切面，通過視神

經(jīng)和瞳孔。要求保存眼球隊的完整性，如結(jié)膜、視神經(jīng)、黃斑

及晶狀體等，都應(yīng)完整無缺，切時刀刃銳利，以免人為地損壞

眼球結(jié)構(gòu)。若須行火棉膠切片，而本單位無條件時，可送到有

關(guān)單位檢查。

27、軟組織腫瘤標本：部位、大小、形狀、色澤、表面有無包

膜，完整否，硬度，切面有無出血、壞死、囊性變等，與周圍

組織的關(guān)系，切面暴露最大面，必要時多作兒個平行切面。

取材：腫瘤，周圍組織，切端組織。

28、其它標本：依上述原則檢查及取材，如標本有特殊情況，

則依其特點處理。⑵

第二節(jié)尸體解剖的受理和規(guī)則

一、中華學(xué)會尸檢受理規(guī)則

1、必須遵照國家有關(guān)規(guī)定受理尸檢；

2、受理尸檢范圍包括①普通病理尸檢；②涉及醫(yī)、患爭議的尸

檢（由衛(wèi)生行政主管部門指定的尸檢機構(gòu)實施）。

3、受理尸檢部門應(yīng)是具備獨立尸檢能力的①醫(yī)院病理科；②醫(yī)

學(xué)院校的病理學(xué)教研室；經(jīng)醫(yī)政部門注冊的病理學(xué)診斷中心。

4、主持尸檢（主檢）人員應(yīng)是接受過尸檢訓(xùn)練、具有中級以上

專業(yè)職稱的病理學(xué)醫(yī)師或病理學(xué)教師，必要時，邀請法醫(yī)參與尸檢。

5、申請或委托尸檢方，包括①有關(guān)醫(yī)院；②衛(wèi)生行政部門；③

司法機關(guān)；④死者的親屬或代理人；⑤被受理尸檢方認可的其他申請

或委托方。

6、申請或委托尸檢方必須向受理尸檢方遞交有關(guān)資料。

（1）死者的死亡證明。

（2）有申請或委托主當事人簽名、負責(zé)人簽名和加蓋委托單位

公章的尸檢申請書委托書。

（3）逐項認真填寫的尸檢申請書（包括死者的臨床資料要點和

其他需要說明的情況）。

7、互者親屬或代理人簽署說明尸檢有關(guān)事項的《死者親屬或代

理人委托尸檢知情同意書》（由受理尸檢方制定），并確認以下事項。

（1）同意有關(guān)受理尸檢機構(gòu)對死者進行尸檢。

（2）授權(quán)主持尸檢人員根據(jù)實際需要確定尸檢的術(shù)式、范圍、

臟器或組織的取留及其處理方式。

(3)主持尸檢人員負責(zé)遺傳尸檢后的體表切口縫合，不參與尸檢后

遺體的其它安置事項。

(4)明確新生兒和圍生期胎兒尸檢后的尸體處理方法。

(5)同意對尸檢過程進行必要的攝影、錄像，并確認是否同意

教學(xué)示教。

(6)尸檢病理學(xué)診斷報告書可提供死者所患的主要疾病和死因;

難以做出明確結(jié)論時，可僅提交病理描述性尸檢報告。

(7)尸檢病理學(xué)診斷報告書發(fā)送給委托尸檢方。

(8)下列情況的尸檢可不受理。

(1)委托尸檢手續(xù)不完備者(包括未按規(guī)則交納尸檢費用者)。

(2)拒簽《死者親屬或代理人委托尸檢知情同意書》者《包括

對于尸檢的術(shù)式、范圍、臟器或組織的取留及其處理方式等持有異議,

從而影響尸檢實施和尸檢結(jié)論形成者》。

(3)委托尸檢方與受理尸檢方就涉及尸檢的某些重要問題未能

達到協(xié)議者。

(4)死者死亡超過48h未經(jīng)冷凍或冷凍超過7d者。

(5)疑因或確因烈性傳染病死亡的病例，尸檢方不具備相應(yīng)尸

檢設(shè)施條件者。

(6)因其他情況不能受理者⑶。

二、尸體解剖須知

1,一般尸體解剖的病例由醫(yī)生填寫正規(guī)的尸體解剖申請單，并由

家屬簽名同意解剖。

2,醫(yī)教部加蓋同意解剖公章。

3,醫(yī)療糾紛病例，必須有醫(yī)療單位和家屬要求的尸體解剖委托

書，委托書需簽名或加蓋公章。

4,醫(yī)療糾紛病例，必須經(jīng)醫(yī)教部同意并辦妥一切必要的手續(xù)，如

尸體處理，按規(guī)定交費。

5,必須提供詳細的病歷材料。

6,特殊情況去外單位、外地尸檢時需由委托單位和個人支付交

通、解剖人員過時餐費用。

三、尸體解剖的一般常規(guī)

1,參加尸檢的一切人員，都應(yīng)態(tài)度嚴肅，保持尸體清潔，頭部及

外陰部須用紗布遮蓋，參觀者必須嚴守尸檢室規(guī)則，未經(jīng)許可，

不得隨意取用尸檢器材及標本，在未得出正確結(jié)論前，對尸檢所

見不得隨意外傳。

2,尸檢時剖檢者應(yīng)戴手套、口罩，著隔離衣及橡皮圍裙等。鋸骨

時應(yīng)增戴紗手套。尸檢過程中應(yīng)注意個人保護，手套被刺破應(yīng)及

時更換，皮膚被刺破應(yīng)即時行創(chuàng)口清洗消毒處理。操作時應(yīng)注意

保持清潔，手套、刀剪、器械及尸體表面有血染時，應(yīng)隨退即洗

凈，切勿將污水濺起或灑于地上。

3,尸體檢時所見由尸檢室技術(shù)人員或指定工作人員，按剖檢者口

述填寫臨時記錄單，必要時攝影記錄，做為書寫尸檢記錄的基礎(chǔ)。

4,一般尸檢的程序可按體表，體腔（腹腔，胸腔）、心包腔，各

內(nèi)臟器官（胸腔器官、頸部器官、腹部器官、盆腔器官）及神經(jīng)

系統(tǒng)的順序，進行檢查，根據(jù)需要，可更動剖栓程序。

5,必要時一，采取心血，其它體液，分泌物或器官組織作細菌培養(yǎng)。

病毒性腦炎或疑有病毒性腦炎的病例，需采取腦組織上作病毒分

離者，須在死后3小時內(nèi)進行剖檢，首先剖檢腦部。采取細菌培

養(yǎng)或病毒分離標本的部位，應(yīng)先消毒以免污染。須采取電鏡標本

者，按有關(guān)操作進行。

6,中毒或疑有中毒的病例，或猝死不能明確診斷的病例，必要時

應(yīng)保留足量的胃內(nèi)容物、糞、屎、心血、胃、肝，腎、心或腦組

織送作毒物化學(xué)檢查。

7,新生兒剖檢時，應(yīng)注意肺臟曾否呼吸，發(fā)現(xiàn)心、血管畸形時、

應(yīng)將心與肺一并取出，仔細檢查心與肺循環(huán)的關(guān)系。有顱內(nèi)出血

時，應(yīng)檢查大腦鐮及小腦鐮有無撕裂出血。注意檢查臍帶，必要

時做細菌培養(yǎng)。

8,與手術(shù)有關(guān)死亡病例的尸檢，須有外科醫(yī)生到場，其中至少要

有一名參加該手術(shù)的醫(yī)生，以便報告病史、手術(shù)經(jīng)過、術(shù)后情況、

可能存在的問題及提出對尸檢的要求。尸檢時切口最好不經(jīng)手術(shù)

切口，對創(chuàng)口內(nèi)外，手術(shù)部縫合及周圍情況應(yīng)仔細觀察，必要時

攝影記錄，若一時在原位不能弄清須解決的有關(guān)問題，則連同周

圍組織一并切下，以便仔細剖析。

9,各器官檢查，應(yīng)托觀察表面性狀，（形狀，色澤，硬度），再檢

查局部病變的特點，最后切開檢查。剖開臟器時，應(yīng)一刀切開。

注意觀察切面情況，勿立即用水沖洗。剖開的一般原則：a,顯露

器官的最大面積，一般從長軸剖開；b,將器官內(nèi)導(dǎo)管一齊切開，

顯露其分布及關(guān)系。

10,若發(fā)現(xiàn)器官內(nèi)有嚴重結(jié)核感染，如肺，腎，腸等，應(yīng)將整

個器官小心取出立即放入固定液中，同時用固定液注入器官的血

管或?qū)Ч軆?nèi)，待整個器官完全固定后，才切開檢查。

11,尸檢時應(yīng)盡少破壞尸體的外形，檢查完畢后，應(yīng)吸去體腔

內(nèi)的血水，凡不需保留的器官，均應(yīng)放回體腔內(nèi)，并應(yīng)以木屑或

其它吸水物質(zhì)填塞，逢合切口?？p合時要盡量注意整副尸體外形,

將體表洗凈擦干，包裹或穿著妥善后放入尸箱內(nèi)。

12,尸檢時如發(fā)現(xiàn)法定傳染病，應(yīng)在確診后及時報告衛(wèi)勤領(lǐng)導(dǎo)

機關(guān)，必要時報告當?shù)匦l(wèi)生防疫機構(gòu)。尸檢時應(yīng)按傳染病隔離消

毒常規(guī)執(zhí)行。

13,烈性傳染病尸檢時尸檢者、助手及參加人員（非尸檢工作

人員不得參觀），都應(yīng)穿隔離衣，尸檢污水須經(jīng)消毒后才能排出。

尸檢服裝，場所及各種污染用品均須用漂白粉液，過氧乙酸，甲

酚皂溶液或福爾馬林蒸氣等徹底消毒，器械用高壓蒸氣滅菌事用

碳酸氫鈉水煮沸一小時以上，尸體應(yīng)火葬。留做檢查的標本應(yīng)徹

底固定，然后檢查。

14,尸檢時用作細菌培養(yǎng)及其它各種檢驗標本均須附有檢驗申

請單一并送檢驗科，檢驗后將報告單交回病理科，由尸檢者粘貼

或抄錄于該尸檢報告中。

15,尸檢完畢后，各種器械、尸檢臺、手套、隔離衣等，應(yīng)及

時清洗消毒。

16,尸檢完畢，主檢人應(yīng)向臨床醫(yī)生做尸休的簡短小結(jié)，并須

在24小時內(nèi)寫出大體檢查記錄，三日內(nèi)做出初步病理診斷，送交

有關(guān)臨床科室。

四，一般尸體解剖的主要步驟與要求

(一)［體表檢查］稱體重，量體長，觀察發(fā)育、營養(yǎng)狀況，檢查體表

有無黃疸，發(fā)疳，出血點，疤痕，創(chuàng)口等，及其部位，大?。谎邸⒍?、

鼻、口腔等有無潰瘍、分泌物或液體流出，外生殖器有病變，淺表淋

巴結(jié)腫大否；有無尸冷、僵、腐敗現(xiàn)象。

(二)［體腔檢查］

(1)胸、腹壁皮膚切開及剝離：根據(jù)情況，選擇Y形、

T形或直線切口切開皮膚。切開腹膜時，先切一小孔，插入

兩指，再從兩指之間剪開，以免劃破內(nèi)臟。剝離胸壁皮膚時,

應(yīng)注意將胸肌一并剝離，但勿損及肋間肌。

(2)腹腔檢查：檢查腹腔內(nèi)有無積液和積氣，腹膜情況,

各器官的位置。與關(guān)系，有無粘連，肝脾腫大否，其邊緣在

鎖骨中線肋緣下及劍突下兒厘米，檢查左右橫膈的高度。

(三)［胸腔檢查］

(1)必要時在胸腔未切開前檢查有無氣胸?？捎凶⑸淦?/p>

吸水后，在第一肋間處自胸壁刺入，觀察有無氣體自水面下

上升。

（2）在肋骨軟骨聯(lián)接線內(nèi)側(cè)約0.5cm處，將第二肋骨到

肋弓的軟骨切斷，緊沿胸骨后壁將橫及縱隔割離，注意勿損

及心包及大血管，然后檢查胸腔有無積液，其量及性質(zhì)，必

要時涂片檢查與細菌培養(yǎng)。

（3）切斷第一肋骨，分離胸鎖關(guān)節(jié)，將胸骨及肋骨取下,

觀察各器官的位置，兩肺表面情況，胸腺是否已經(jīng)脂肪化。

鋸開胸骨，看骨髓造血情況。

（4）自心尖部向上，作人形剪開心包，檢查腔內(nèi)液量，

心包膜內(nèi)壁情況，必要時取心血作細菌培養(yǎng)。

（5）疑有空氣體栓塞時，將心包剪開一小口，用鏡子拉

緊切口兩側(cè)心包膜，心包腔內(nèi)注滿水，然后，在水上剪開右

心房及肺動脈，觀察有無氣泡逸出，或者先結(jié)扎進出心臟的

大血管，取出心臟，淹沒于水下剪開右心，觀察有無氣泡逸

出。

（四）［各臟器的取出］

各器官取出前，應(yīng)仔細檢查周圍情況及與其他器官的關(guān)系，檢查

有困難時一，一時不能明確者，可與其它器官一并取出，然后再仔細檢

查。檢查各器官前，應(yīng)稱其重量，量大小。

（1）心臟的取出與檢查，在體內(nèi)剖開右心，檢查肺動脈

有無栓塞后，將心臟提起，從根部或心包膜內(nèi)壁分別剪斷上、

下腔靜脈，（于距瓣膜2cm處）肺靜脈和主動脈（于距瓣膜

5cm處），取出心臟，（若有心、血管畸形，則應(yīng)將心臟連同

肺臟一并取出）。檢查心臟增大否，外膜光滑度，有無滲出

物等，心臟按血流方向剖開，測量各瓣膜的周徑及左右心室

的厚度。

A：右心剖開法：第一步，用刀或剪將右心從上、下靜脈入口

處直線剖開，如欲避免破壞竇房結(jié)，從下腔靜脈向上，剖至房室

間溝上1cm處，向右心耳剪開，保持上腔靜脈口完整，上腔靜脈

至少保留1cm。第二步，從此線中點沿心臟右緣剖至心尖部，檢查

三尖瓣，并用手指檢查動脈有無血栓或狹窄。第三步，從心尖部

沿心室中隔剖至肺動脈，檢查肺動脈瓣。

B：左心剖開法：第一步，用刀或剪將左心房從左、右靜脈入口

之間作直線剖開，以手指檢查二尖瓣是否狹窄。第二步，從此線

的左端沿心臟左緣剖開至心尖剖。第三步，從心尖部沿心室中隔,

避開肺動脈剖開肺動脈剖開主動脈，檢查二尖瓣與主動脈瓣。

剖開有瓣膜病變的心臟時，應(yīng)注意避免破壞有病變的瓣膜。

心臟剖開后，檢查心肌厚度、硬度、色澤、心內(nèi)膜光滑度，瓣膜

周圍有無增厚，及贅生物，有無狹窄或關(guān)閉不全，檢查冠狀動脈

開口情況。

（2）肺臟的取出：可由肺根部將主支氣管和血管切斷取

出，或與頸部器官一并取出。如兩層胸膜間有粘連，需細

心分離，勿損及肺，如粘連牢固，可連同胸膜壁層一并剝離,

取出肺臟。取出后檢查其表面情況。切開檢查肺切面的改變,

有無病灶、氣腫、萎陷等，肺門淋巴結(jié)腫大否，切面情況。

(3)頸部器官的取出：A,充分分離頸部皮膚與軟組織,

用長刀刺入割斷舌下系帶，緊沿下頜骨內(nèi)面向左、右盡量地

將下頜與舌間的軟組織分離。B,將舌拉下，自硬腭后緣割

離軟腭，注意應(yīng)將兩側(cè)扁桃體完全取下。C,將舌、咽、喉

頭、氣管、食管、肺拉下于橫膈上將食管、下腔靜脈及主動

脈切斷，連同胸腔器官一并取出。

(4)腹腔及盆腔器官的取出：

一般先將脾臟摘出，繼之取出小腸、腎上腺、肝、膽囊、胃、

十二指腸、胰，最后取出腎及盆腔器官。

①將脾臟提至腹腔前方，割斷脾門部血管，取出脾臟。檢

查其大小，重量，硬度，表面色澤。切面有無外翻；有無糊

狀物刮下，脾門血管及脾小體、脾小梁的情況等。

②小腸與大腸的取出前，應(yīng)檢查腸系膜淋巴結(jié)及血管，

找出空腸的起端，切斷，自腸系膜附著處將腸割下，直至直

腸處將其切斷取出，腸的斷端應(yīng)鉗緊或結(jié)扎，以免糞便污染

腹腔。待其他器官檢查完畢后再檢查腸。先量其長度，在腸

系膜附著處沿縱軸剪開腸腔，檢查粘膜有無病變，腔內(nèi)有無

寄生蟲等，必要時可保持腸與腸系膜的關(guān)系，并將其一并取

出。

③十二指腸在原位從前面剪開，用手擠壓膽囊：看膽道通

暢否。沿胃大彎剪開胃，檢查粘膜病變，將胃及十二指腸從

后壁分離，與胰臟一并取出，在檢查胰臟前，注意觀察脾靜

脈有何變化。檢察胰臟重量，大小，硬度，作多橫切面，檢

查切面情況。

④小心分離腎上腺周圍組織，取出腎上腺，分離右側(cè)腎上腺

時，將肝向上方推，注意分離與皮膚上腺相連的肝組織，腎

上腺取出后，作多人橫切面，檢察皮質(zhì)與髓質(zhì)的特征，有無

出血等。

⑤取出肝與膽囊前，應(yīng)仔細檢查膽管、門靜脈、肝靜脈，然

后剪斷肝門的膽管及血管，分離鐮狀韌帶，將門靜脈及肝背

部部一段下腔靜脈與肝一并取出。檢查肝的大小，重量，硬

度，色澤，注意檢查肝靜脈及腔靜脈，切面外翻否，小葉結(jié)

構(gòu)清楚否及有無其它病變。

⑥分離腎周圍脂肪結(jié)締組織，將腎提出，凸面向上剖開，注

意包膜剝離要難否，檢查表面的性狀，切面皮質(zhì)及髓質(zhì)紋理

是否清楚，腎盂粘膜有無病變。然后連輸尿管一起取出腎臟。

⑦盆腔內(nèi)器官的取出：先分離腹膜及周圍組織，再取盆腔器

官，男性可將直腸、膀胱一并取出，結(jié)腸斷端應(yīng)結(jié)扎或縫合。

（五）腦與脊髓的取出：

1,從兩耳后經(jīng)頭頂部作一切口，將刀插入切口，切開頭皮，

向前后剝離，劃好鋸線。此線自前額中心處向左右兩側(cè)延伸，經(jīng)

耳廓上緣，再向后向上延至枕外隆突近處，按鋸線切斷兩側(cè)潁肌。

鋸時注意鋸到抵抗力減少時即停止，然后用鑿鑿開，注意勿損及

硬腦及腦組織。

2,取腦時，將兩側(cè)額葉向上，向后提起，依次切斷視神經(jīng)，

內(nèi)頸動脈，漏斗?，動眼神經(jīng)，再剪開小腦天幕兩側(cè)，用左手將腦

手托起，切斷其余神經(jīng)，然后用脊髓刀盡量切取較長的一段脊髓

與腦一起取出，腦一般需固定5-10天后再切開檢查，腦的一般切

法如下：A,經(jīng)四疊體上緣和大腦腳上方斜向切斷中腦，分離腦

干與大腦。B在灰結(jié)節(jié)部將大腦作冠狀切開，檢查各基底神經(jīng)核,

外囊，島葉，下視丘,側(cè)腦室，第三腦室，然后向前向后每隔0.5-2cm

作多個切面檢查。C向小腦蚓部作坐橫切面，露出第四腦室底，

腦橋經(jīng)面丘，延髓經(jīng)橄欖核中部作橫切面檢查。D如為腦膜炎，

及腦室擴張等病例，可經(jīng)額極及枕極的聯(lián)線稍高處作水平切面檢

有。

3,用骨鑿鑿去鞍背和兩柵床突，仔細取出腦垂體。必要時鑿

開中耳或?qū)⒅卸〕觥?/p>

4,脊髓的取出法，中線切開背部皮膚，及棘突兩側(cè)鋸開，椎

板，取下棘突及椎板。剪斷硬脊膜外脊神經(jīng)根。切斷馬尾，輕輕

將脊髓連硬脊膜一并取出，取出時一，應(yīng)避免牽拉擠壓。也可人

前面鋸開椎體，取出脊髓。

（六）骨髓檢查：

一般病例取小片胸骨及椎骨，觀察共骨髓情況，血液病病例取一側(cè)

股骨縱行鋸開，觀察骨髓改變情況，股骨取法如下：先切斷骸下韌

帶，然后沿膝外側(cè)、大腿外側(cè)直到股骨大粗隆切開皮膚、肌肉，并

分離出股骨，離斷貌關(guān)及膝關(guān)節(jié)，取出股骨，填入長短相同的木棒,

整復(fù)外形。

［采取細菌培養(yǎng)的方法］

1,心血培養(yǎng)標本：

(1)用無菌鑲子提起右心耳，在下腔靜脈入口處

的上方進行燒灼消毒，(用一有柄銅片在酒精燈上燒

紅，燒灼器官表面，面積約2*2cm).

(2)用無菌吸管或注射器從消毒部位插入，順下

腔靜脈入口推進，取血液2-3ml

(3)在無菌操作下，將吸取之血液立即注入無菌

的肉湯培養(yǎng)基，或有玻璃珠的培養(yǎng)瓶內(nèi)，立即洗凈吸

管或注射器，以免凝固，若在右心取不到血液，可從

下腔靜脈吸取。

2,腔(胸腔、腹腔)內(nèi)滲出液，心包腔內(nèi)積液，必要時作

細菌培養(yǎng)，采取液體時應(yīng)盡量避免污染。采取腦脊液培養(yǎng)

時，于尸檢前用無菌手術(shù)，在第二及第三腰椎間隙作穿刺，

取腦脊液2-3ml,置于無菌試管內(nèi)送檢。

3,腸內(nèi)容物培養(yǎng)：在回腸末端及乙狀結(jié)腸下端，或病變明

顯處的漿膜面經(jīng)燒灼滅菌后剪開，用棉花拭子插入腸腔內(nèi)，

在粘膜面擦取粘液、滲出物粘膜，放入無菌試管或培養(yǎng)基

內(nèi)送檢。

4,臟器細菌培養(yǎng)：臟器表面灼燒滅菌，切取不小于

2*2*1.5cm的組織塊，裝無菌容器內(nèi)送檢。

5,腦組織作病毒分離：用無菌手術(shù)取大腦皮質(zhì)，中腦，海

馬，腦橋組織塊，每塊不小于2*2*1.5cm,以冰瓶保藏迅速

送檢。路途遙遠者，可將檢材放入無菌甘油瓶內(nèi)，在低溫

下送檢［支

五，尸檢材料的取材和固定

尸體解剖的材料取材，有兩種方法：

1,尸體解剖的內(nèi)臟，當處理完后，可選取其中有病變

的部分取材（粗?。?，然后存放于固定液中固定，當完全

固定后，再行修切成適合于制片的組織塊（細?。Ｒ话?/p>

厚度不超過3mm.

2,將所有的內(nèi)臟，經(jīng)逐一處理后，全部固定起來，待

其完全固定后，再行取材。

六，科學(xué)研究材料的取材：

這方面材料的來源是各種研究單位，根據(jù)自己課題的需

要，設(shè)計出適合于本課題研究所需的模型，利用不同的動物,

如小鼠，大鼠，兔，貓，豬，狗，雞，牛，猴等進行實驗，

然后取其全臟器或部分組織，進行實驗，對于此類標本，情

況特殊，應(yīng)認真給予對待。

動物標本全部臟器的每個臟器取一塊，對于部分臟器的根據(jù)

需要取材。

第三節(jié)常規(guī)病理標本的制作程序

常規(guī)組織固定

在組織病理學(xué)中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標本的保存，都

必須進行及時的適當?shù)暮陀行У墓潭ā＝M織只有經(jīng)過固定，才能完成

隨后的一系列的制作，直至切片的最后完成。每個醫(yī)務(wù)工作人員都能

容易地把組織固定起來，但是，要清楚了解固定的過程及其定義是一

件十分不易的事，下面我們將逐一解答如下。

（一）、固定的作用

組織經(jīng)一系列的處理后，就必須進行固定，當然有的組織是先固

定，再進行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學(xué)的角度其簡單

的定義是，保持細胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使之盡量保持細胞、

組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，而從免疫組化技術(shù)的角度，固定的作用不僅

是使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反

應(yīng)；防止細胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質(zhì)；以保持組織的固

有形態(tài)和結(jié)構(gòu)；更重要的是保持組織或細胞的抗原性，不但要使抗原

不導(dǎo)致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象，才能在免疫組化染色時,

不產(chǎn)生過深的背景，影響對陽性物的判斷。

（二）固定的目的

1、能防止細菌的腐蝕和組織的自溶。細菌無處不存在，它們

隨時都可污染腐蝕未經(jīng)處理的組織。固定液可以固定任何蛋白

質(zhì)，凡有生命的東西，都由蛋白質(zhì)組成，蛋白質(zhì)被固定，生命

就停止，細菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人們?？?/p>

碰到這樣的問題，一塊肉不經(jīng)處理放了幾天后就會變質(zhì)，這是為

什么呢？除了細菌參與外，其本身也是很重要的。因為組織離體

后，供應(yīng)這此組織的血液隨之消失，細胞缺氧，細胞內(nèi)溶酶體膜

的結(jié)構(gòu)受到破壞，破壞后釋放出溶酶體酶，日常生活中常碰到的

肉變質(zhì)，就是細菌污染加組織自溶的結(jié)果。

2、保存細胞固有的物質(zhì)，能凝固或沉淀細胞內(nèi)或組織液，糖

元等，使細胞或組織基本上保持與生活時的物質(zhì)一樣。細胞的固

有物質(zhì)，即細胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基器、溶酶體、過氧

體，細胞骨架，組織液，抗原、糖元等。這些物質(zhì)，如果不將其

及時固定，是很容易喪失的，尤其是溶酶體，很容易受到破壞，

因此應(yīng)特別小心。

3、使組織硬化，便于切塊。剛離體的組織，除了胃組織以外,

都是柔軟的組織，尤其是胃腸道的組織，如果在沒有固定時就取

材，效果就很差，不是取材不規(guī)整，就是厚薄不均，粘膜和肌層

很容易分開，因此，要取得規(guī)整標致的材料，就必須將組織徹底

固定，再行取材。

4、對某些具有傳染性的標本，能防止疾病的擴散。病理標本、

種類繁多，成份復(fù)雜，各種病例都有，具有傳染性的病種也不少,

如結(jié)核、肝炎、麻風(fēng)、性病等等。對于此類標本，應(yīng)進行徹底的

固定后，再行取材，如結(jié)核球，固定時間應(yīng)在3-5天。

5、保存好大體標本。對于有教學(xué)任務(wù)的醫(yī)院病理科，除搞好

疾病的診斷外，還有收集有價值的大體標本，有些大體標本，是

很難得到的。因此要求在平時就要留心觀察，小心處理。遇到有

教學(xué)價值的罕見的典型的標本，就必須及時固定，認真給予對待。

6、可增強染色的作用。組織經(jīng)過及時的固定，最終可見到切

片有鮮艷的染色，而些時如果有一批未經(jīng)及時固定的組織，將看

到最終的結(jié)果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得結(jié)論，固定

可以增強染色的作用。

（三）固定的注意事項

1、組織固定越新鮮越好。組織一經(jīng)離體，就能及時地固定，

這是最好的。根據(jù)實驗，如果要獲得某些酶的染色，固定最好在

組織離體后30秒至1分鐘。對于其它達不到些要求是越快越好。

2、組織固定，組織塊不宜過大。凡是需要固定的組織，都不

應(yīng)該太大太厚，這是因為所有的固定液穿透力不夠強，浸透度不

夠快的緣故。如果較大厚的組織，不經(jīng)處理就進行固定，那么待

固定液進入至中間對可能這些組織早就發(fā)生自溶了。因此，對于

較大的組織，必須先進行處理，切成制片材料再行固定，這是最

佳的處理方法，如遇到胃腸的器官，則應(yīng)將其剪開，放平后，再

行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因這類組織、粘

膜和肌層容易分開，沒固定時，難以取得最佳制片材料，對于產(chǎn)

酶類的器官如肝、腎、脾等，更要處理好，否則更容易出現(xiàn)自溶

現(xiàn)象。

3、對不同類型的組織應(yīng)適當合理地選擇固定液。有的固定液

對于組織有膨脹作用。固定劑是一種化學(xué)試劑，有液體和固體之

分，一般使用較多的是液體，而固體固定劑如多聚甲醛，則多用

于實驗研究的組織固定。固定劑的種類繁多，成份復(fù)雜，對組織

的作用不盡相同，英國著名的組織化學(xué)專家Pearse指出：對于每

個既定的組織化學(xué)方法來說，選擇最合適的方法是極為重要：在

組織化學(xué)研究準備階段不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切

地知道它們對于各種組織成分的反應(yīng)基團的效用。Jones(1973),

指出理想的固定劑必須具備的條件是，防止?jié)B透損傷和妝縮，以

達到在各級可見度的水平皆無形態(tài)變化；要求組織所有的成分能

保留于原位。他認為有三種試劑即甲醛、戊二醛和丙稀醛接近于

達到上述要求。即為了更好地把組織中各種成分盡量保存好，盡

量好給予顯示出來，就決不能千篇一律地使用一種固定液，而必

須認真地深入研究各種固定液的性能和使用方法。例如：丙酮，

它對組織有明顯的皺縮，硬化作用，平常它是決不會被用來作固

定液的，用它不但太浪費，造價太高，而且也使切片較為困難，

但是，對于某些酶的研究，狂犬病腦組織的固定，某些細胞的培

養(yǎng)等。最好的固定液還是丙酮。因為如果使用福爾馬林固定液、

石蠟切片顯示酸堿磷酸酶就顯示不好，狂犬病病毒的包函體就會

消失掉，又如醋酸，它對膠原纖維等有膨脹的作用。由于各種固

定液對不同的組織有不同的作用，因此許多專家將根據(jù)各種固定

液的優(yōu)缺點，配制出許多混合液的方法來，給組織的良好固定起

到了非常積極的作用。但是，值得指出的是并非所有的固定液都

不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，對組織固定

很好，組織中各物質(zhì)的染色也十分清晰，但對固定脫水盒為銅質(zhì)

的組織時，效果就不好，原因是醋酸跟酮可發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生醋酸

銅，沉淀于組織中，可造成對抗原的損害，對于免疫組織化學(xué)的

顯示，經(jīng)實驗證明：可呈弱陽性乃至陰性。由此可見，固定液的

選擇正確與否決定著對某些病例的免疫組化標記的成敗關(guān)鍵。在

我們的日常工作科研中，對于組織的固定，應(yīng)有針對性的選擇，

方能獲得滿意的效果。

4、組織固定，時間不宜太短，也不宜太長。時間太短，就不

能很多的固定組織，因為不管組織大小，固定液浸入組織之中，

都需要有一定的時間，時間太短，就會影響組織固定的效果，對

以后一系列關(guān)系的處理都有影響，切片質(zhì)量難以保證，固定時間

太長，也不好。組織長時間的固定，福爾馬林會產(chǎn)生一種酸，影

響核的染色。對于固定很長時間的陳列性標本制片后切片染色不

鮮艷，顯得非常陳舊。另外，長時間的固定往往會出現(xiàn)福爾馬林

色素，尤其是造血器官的標本，更應(yīng)注意。固定時間過長，可降

低抗原的活性。

5、固定液的量要充分。固定液量的足夠與否決定著組織固定

的成敗，有的人認為，固定液的量與組織的比應(yīng)是20：1,這個

要求對于小組織來說是完全可以達到的，但對于大標本來說，則

是一件非常困難的事情。因為對于大醫(yī)院來說，每天都有兒十上

百例的標本，小如大頭針大小，大的達幾十斤的腫瘤，對于這樣

大的標本，按20：1的比例來做，顯然是不可能的事，既要做到

組織能固定好，又不使組織吹干就必須具體情況具體處理。對于

大的標本，原則上是不讓其暴露部分被吹干，這是因為在現(xiàn)實111

當中，大的標本往往露出容器一大半，因此對于這種情況，應(yīng)取

些脫脂棉或紗布，浸濕固定液后，蓋于組織表面，以免使組織被

風(fēng)干，影響制片效果。

6、特殊病例或特殊物質(zhì)應(yīng)選擇特殊的固定液。一般的病例標

本，如沒特殊的要求，都可以應(yīng)用甲醛配成的各種固定液來固定。

但是，如果要顯示狂犬病毒的包含體時，應(yīng)用上述的的固定液就

不行了，必須采用丙酮來固定，顯示糖元，可選擇無水酒精或丙

酮來固定組織。固定劑是一種化學(xué)語試劑，有液體和固體及之分,

平常使用的多為液體，Pearse指出，對每個既定的組織化學(xué)方法

來說，選用最合適的固定方法是極為重要的；在組織化學(xué)研究中

的準備階段，不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它

們對于各種組織成分反應(yīng)基團的效用。

7、組織的第二次固定或后固定。在一般的常規(guī)病理活檢組織

中，往往用一種固定液，就能夠達到目的，獲得滿意的結(jié)果。但

是，對于某些特殊病例光用一種固定液是不夠的，必須根據(jù)不同

的情況，使用特殊的固定液再次將組織固定，或者在切片后染色

前再行固定。這種方法稱為二次固定或后固定。例如：胚胎性橫

紋肌肉瘤，由于腫瘤細胞發(fā)育較幼稚，完全不象成熟的橫紋肌組

織所固有的橫紋，在進行特殊染色前，就必須用Zenker氏固定液

進行第二次固定，方能較好地顯示出橫紋肌纖維來。否則，效果

不佳。另外，電鏡固定的標本，通常都需要后固定。其使用方法

是先用戊二醛固定，再用奧酸固定。

（四）固定液的使用

當前，應(yīng)用于固定試劑的種類較多，它們對于固定不同的組織成分起

著不同的作用，因此我們在使用時應(yīng)該了解不同固定劑的效能，才能

合理的固定組織。根據(jù)Bencro"的分類法，將不同的固定劑分為四種

類型：

I類：醛類，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。

II類：氧化劑類，四氧化鉞（奧酸），高毓酸鉀，重格酸鉀等。

III類：蛋白變性類，甲醇，乙醇，醋酸等。

IV類：其他，氯化汞，苦味酸等。⑸

上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技

術(shù)方面中用到。下面根據(jù)使用的需要，將著重介紹兒種常用的固定劑。

（十）甲醛

甲醛商品名為福爾馬林，一般市售的含甲醛37—40%,由甲醛氣體飽

和于水而成，比重為1.12。它也可以穩(wěn)定的固體形式存在，它的成分

為高分子量的聚合體，稱為多聚甲醛。

甲醛溶液較難純化，在每批市售商品中，都含有不少的雜質(zhì)如甲醇，

這種在組織化學(xué)方法當中，能使酶鈍化，影響其反應(yīng)。甲酸，它可使

固定液變酸，在陳列標本或長時間固定的組織，由于酸的作用，往往

細胞核染色欠佳。

甲醛有效固定作用的要點是，在蛋白質(zhì)末端基團之間形成交聯(lián)鏈。參

與甲醛固定蛋白質(zhì)的基團，主要為氨基，亞氨基及酰氨基，肽，股基,

羥基，SH和芳香環(huán)。甲醛與組織蛋白類的反應(yīng)是多樣和復(fù)雜的，因

為它能和多種不同的功能基團結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵。

甲醛有這種交聯(lián)的功能，也是它的缺點，在用甲醛固定過的組織中，

需要做免疫組化的，往往提倡用酶消化或熱抗原修復(fù)法來使蛋白與甲

醛交聯(lián)的醛鍵斷裂開，以利于后來的染色。

甲醛可配成簡單的或混合的固定液，最簡單和最容易掌握的方法，就

是取10ml甲醛液，加水90ml,這就是10%的福爾馬林.當然，現(xiàn)在使

用的固定液要求較為嚴格些，最好是使用緩沖福爾馬林固定液，這將有

利于后來的免疫組化染色的需要.

從組織學(xué)的觀點來說，甲醛是一種良好的固定劑，它有很多的優(yōu)點：

1.組織收縮較少，損傷少，保存固有物質(zhì)好.

2.固定均勻，穿透力強.

3.能使組織硬化，增進組織彈性,有利于切片.

4.能保存脂肪及脂類物質(zhì).

5.成本較低.

雖然甲醛有上述的優(yōu)點，但這都是相對而言，任何物質(zhì)都不可能

十全十美的，它也有許多缺點：

1.雜質(zhì)含量較多，如甲醇，可鈍化酶類，影響反應(yīng).

2.含有微量甲酸，導(dǎo)致固定液酸變，影響染色.

3.可產(chǎn)生福爾馬林色素，影響觀察.

4.不能固定尿酸和糖類物質(zhì).

5.容易揮發(fā)，污染環(huán)境，可導(dǎo)致標本干涸.

6.可長期存在于固定過的組織上.有人做過實驗，組織用甲醛

固定后在流水中沖洗5小時后，仍留有相當多的甲醛與蛋白質(zhì)

相結(jié)合，但需要經(jīng)過長時間的流水沖洗（24天的沖洗）方能除去.

可見存在于組織上的甲醛是不可能除去的.因為臨床活檢不可

能有這么長的時間來沖洗組織.因此要特別指出的是，在其后的

各種技術(shù)操作中，要特別注意到甲醛的存在，必須要想辦法除去

它，否則將會給各種染色造成影響，甚至導(dǎo)致失敗.

應(yīng)用甲醛，可以配成許多種固定液：

1.10%緩沖福爾馬林固定液

甲醛100ml

蒸儲水900ml

NaH2P。4?H2O4g

Na2HPO4（無水）6.5g

該固定液是當今流行的固定液，因它對組織固定較好,損傷較

少，因?qū)ζ浜蟮母鞣矫娴难芯慷驾^好，尤其是對免疫組化的染

色.

2、10%福爾馬林固定液

甲醛100ml

自來水900ml

這是一種最簡單的固定液，適合于邊遠地區(qū)攜帶的固定液，

但由于它的單一性，因此，只要有條件的單位都不要求使用

這種固定液。

3、10%福爾馬林鹽固定液

甲醛100ml

自來水900ml

Nacl9克

先將Nacl溶于水，再加入甲醛。這也是一種較為簡單的固定

液，但由于加入Nacl,它是一種重金屬鹽物質(zhì)，加入了它可

促進和改善染色，增加染色的強度。

4、Bouin氏固定液

苦味酸飽和水溶液75ml

甲醛2ml

冰醋酸5ml

該固定液中的冰醋酸，對膠原纖維等組織有膨脹作用。而甲

醛對組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用，用以抵消彼此

間的副作用。使組織固定達到優(yōu)良的固定水平。

5.醛糖鈣固定液

甲醛100ml

蔗糖300ml

乙酸鈣20g

蒸鐳水90ml

先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鐳水，后加入甲醛。該固定液對于

做酶的組織化學(xué)的研究效果較好，組織固定后，做冰凍切片,

再給予顯示。

當前國內(nèi)外基本上都還是要用甲醛來固定組織。從免疫組織

化學(xué)的角度來說，甲醛固定的組織大部分都可以用免疫組化

的手段來檢測，據(jù)多人認為，它對IgA,IgM,J鏈，K鏈和

入鏈的標記效果較好，且背景清晰。但美中不足的是：經(jīng)它

固定的組織，可與蛋白形成醛交聯(lián)蛋白，這種醛鍵可封閉抗

原。固此，在免疫組化實際檢測中，應(yīng)根據(jù)不同的要求和需

要，采用酶消化或者其它抗原修復(fù)如微波、高壓等的方法，

以便破壞醛鍵重新暴露抗原。

(2)酒精：又稱乙醇，為無色透明的液體，沸點是78度，

工業(yè)酒精是95%O

酒精它有許多優(yōu)點：

1、可保存尿酸結(jié)晶和糖原等物質(zhì)。高濃度的酒精如95%,無水酒

精可保存上述兩種物質(zhì)，因它們易溶于水，因此，要證明上述兩種物

質(zhì)的存在，就不能用含水的固定液來固定組織。

2、能在任何比例的情況下與水混合，在病理技術(shù)中，酒精是一種

十分重要的試劑，它起著關(guān)鍵的作用。如果沒有酒精，將會無法完成

必要的工作。如組織的脫水，切片染色前后都離不開酒精，在常規(guī)的

工作中，通常都用95%的工業(yè)酒精來配成60%、70%、80%、90%等

不同的濃度來使用。

3、可溶解苯類物質(zhì)為染色步驟中的橋梁試劑。常規(guī)活檢等切片上

的石蠟必須除去，才能進行染色，能除去石蠟的物質(zhì)有苯及汽油等,

常用的有苯類試劑，苯不溶于水，但能溶于酒精，酒精在這里充擔(dān)著

除去苯和連接水的作用，為切片入水架起了橋梁，因此稱它為橋梁試

劑。

4、能除去切片上的水份，使切片無水化。切片經(jīng)染色后，由于所

用的試劑都為水溶液，因此在切片上含有大量的水份，這些水份經(jīng)系

列梯度酒精的置換吸附后，到無水酒精中已完全無水，這樣處理對于

切片的保存是有好處的，否則，切片將會褪色。

5、可用來保存標本。大體標本經(jīng)福爾馬林固定后，如為了陳列保

存，必須取出沖冼。然后移入75%的酒精中。如果用福爾馬林作陳列

標本的固定液，則因為福爾馬林含有雜質(zhì)較多，液體容易酸化，時間

一長，會逐漸變?yōu)槲ⅫS色或淡黃色，影響美觀，影響陳列的效果。

6、可與其它試劑配成多種的混合固定液，有時為了加快固定，常采

用酒精和其它試劑來配成混合固定液，這種固定液在固定的同時，兼

有對組織脫水的作用。應(yīng)用酒精配成的混合固定液有：

①Carnoy氏固定液

氯仿300ml

冰醋酸100ml

95%酒精600ml

該固定液固定組織快速，在固定的同時兼有脫水的作用。溶液中的氯

仿和酒精，對組織的收縮較厲害，但應(yīng)用了冰醋酸，這種現(xiàn)象便被中

和去。

②AF固定液

甲醛100ml

冰醋酸50ml

95%酒精850ml

這種固定液的作用與上液有相似之處，但要注意的是，凡使用含有醋

酸的固定液，其脫水用具不能使用銅制的脫水盒，因冰醋酸跟銅離子

起反應(yīng)，生成醋酸銅，這種物質(zhì)可沉淀于組織間，可破壞組織中的抗

原，造成免疫組化檢測的失敗。應(yīng)用時應(yīng)多加注意。

酒精也有許多不足之處，它的缺點是：

1、可溶解脂類物質(zhì)，凡要證明組織是否含有脂類和類脂

物時，切不能用含有酒精的固定液去固定組織，也不能用石蠟切片，

因為酒精可將它們?nèi)芙馊?，而石蠟切片組織中含有的脂類物質(zhì)，則在

組織脫水時被溶解去，只留下脂類或類脂物所占有的空間。

2、對組織收縮較大，不宜作單純固定液。高濃度的酒精,

對組織有顯著的收縮作用，造成組織發(fā)硬易脆，難以切片等現(xiàn)象。因

此，它不作為單純的固定液。

3、滲透力不強。當用酒精固定組織時;組織表面很快就

被固定，并形成了一層蛋白膜，這層膜可阻擋固定液向里滲透，造成

了中間組織固定不佳的現(xiàn)象。

4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡經(jīng)酒精固定的組

織，核的染色都不好。

5、可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經(jīng)染色后，

是必須洗去多余的染液，二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片

時，必須仔細地掌握顯微鏡下觀察，還要掌握酒精的濃度，低濃底的

酒精脫色力強，稍不注意，便可脫去切片上大部分的顏色。切片脫水

時，要較快地通過低濃度的酒精，以免使已著染的顏色被脫去。

6、價格較貴。從經(jīng)濟學(xué)的角度，應(yīng)用酒精固定組織劃不

來，例如：一瓶500ml的甲醛，可配成500ml的固定液，按每例標本

需要100ml計，可固定50例標本，而一瓶500ml的酒精，即使配成

80%酒精，也只能固定6例標本，因此，若用酒精固定組織，其價格

比用甲醛固定組織的要高8倍。

(3)冰醋酸。冰醋酸為無色透明的液體，易揮發(fā)，氣味大，一打

開瓶蓋，整個文章都可聞其味道，純醋酸在17℃時常為結(jié)晶狀，因

稱為冰醋酸，在冬天使用時，可用微波爐進行解凍，再行使用，它的

優(yōu)點有：

1、能迅速固定染色質(zhì)，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快,

固定效果均勻，對于染色質(zhì)的固定快，因此，用其作固定的切片染色

好，在配其它染色液如明研蘇木素和伊紅時一，常常需加入一定量的醋

酸，以促進染色。

2、能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。

各種固定液對組織都有收縮的作用，尤其是對富含纖維的組織。而它

不但不會使組織收縮，而且還會令許多組織發(fā)生膨脹的作用。根據(jù)這

個特點，用它配成許多種不同的混合固定液，以達到固定好，收縮少,

易切片，效果好等目的。用它配成的混合固定液有：

(1)Zenker氏固定液：⑹

重鋁酸鉀25G

升汞50G

蒸儲水1000ml

冰醋酸50ml

先將重銘酸鉀和升汞溶于水中，尢其是重鋁酸鉀，應(yīng)用熱水或加溫的

方法將其溶解，然后過濾貯存于帶蓋的玻璃瓶中