癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)及實(shí)驗(yàn)技術(shù).ppt

1、癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)及實(shí)驗(yàn)技術(shù),腫瘤細(xì)胞與癌細(xì)胞的區(qū)別,腫瘤分為良性腫瘤和惡性腫瘤，在惡性腫瘤中，有上皮分化而來的稱為癌，由間葉組織分化而來稱為肉瘤。 癌是起源于上皮細(xì)胞的分化程度低 惡性程度高的惡性腫瘤細(xì)胞。 癌細(xì)胞是惡性腫瘤的一種。,腫瘤,上皮組織良性腫瘤-腺瘤 上皮組織良性腫瘤-腺瘤 上皮組織惡性腫瘤-鱗狀細(xì)胞癌 上皮組織惡性腫瘤腺癌 癌細(xì)胞 上皮組織惡性腫瘤-基底細(xì)胞癌 間葉組織良性腫瘤-脂肪瘤 間葉組織良性腫瘤-血管瘤,浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移,具有局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)程轉(zhuǎn)移能力是惡性腫瘤特有的性質(zhì)它是引起患者死亡的的主要原因，研究腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)臨床治療有十分重要的意義。 癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和癌細(xì)胞浸潤(rùn)是二個(gè)

2、不同的病理過程，浸潤(rùn)是轉(zhuǎn)移的前提，但不等于定發(fā)生轉(zhuǎn)移，而轉(zhuǎn)移則必定包含一個(gè)浸潤(rùn)的過程。,癌細(xì)胞浸潤(rùn),人體浸潤(rùn)-人體組織內(nèi)侵入了異常細(xì)胞或出現(xiàn)了正常情況下不應(yīng)出現(xiàn)的機(jī)體細(xì)胞，以及某些病變 癌細(xì)胞浸潤(rùn)-細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移到其他組織中，并在其他組織中繼續(xù)分裂繁殖，也就是癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。,癌細(xì)胞浸潤(rùn)過程機(jī)理,(1)癌細(xì)胞的增生和運(yùn)動(dòng)：癌細(xì)胞的不斷增生是癌細(xì)胞浸潤(rùn)的前提。增生導(dǎo)致腫瘤組織內(nèi)部壓力增高，細(xì)胞趨向于向周圍擴(kuò)展。癌細(xì)胞同時(shí)能夠移動(dòng)，并具有與細(xì)胞漿內(nèi)微管系統(tǒng)有關(guān)的阿米巴運(yùn)功。移動(dòng)的潛力與癌基因的表達(dá)有關(guān)。,癌細(xì)胞浸潤(rùn)過程機(jī)理,(2)癌細(xì)胞的分離：其分離傾向與細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化和粘附力的下降有密切關(guān)系 癌細(xì)胞表

3、面負(fù)電荷高、與鈣離子結(jié)合能力差、部分上皮性腫瘸的細(xì)胞橋粒體發(fā)育不全等，均促使細(xì)胞的彼此排斥和分離。,癌細(xì)胞浸潤(rùn)過程機(jī)理,(3)間質(zhì)對(duì)浸潤(rùn)的作用：間質(zhì)中除含有癌細(xì)胞自身產(chǎn)物外，基質(zhì)的各種成分對(duì)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)有一定的作用。層連蛋白與惡性程度高的腫瘤細(xì)胞有親和性，有介導(dǎo)癌細(xì)胞與基底膜型膠原粘連的作用，同時(shí)能促進(jìn)癌細(xì)胞的移動(dòng)。,轉(zhuǎn)移,概念及過程：癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移指癌細(xì)胞脫離其原發(fā)部位，通過各種途徑到不連續(xù)的靶組織繼續(xù)增殖生長(zhǎng)，形成同樣性質(zhì)腫瘤的過程。,轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移包括脫離、轉(zhuǎn)運(yùn)、生長(zhǎng)三個(gè)主要環(huán)節(jié)，是一個(gè)非常復(fù)雜的過程：癌細(xì)胞脫離原發(fā)癌群體，粘連侵襲基底膜并在周圍間質(zhì)中浸潤(rùn)生長(zhǎng);與局部毛細(xì)血管或毛細(xì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞

4、密切接觸并穿透其管壁，或突入腔道(漿膜腔)，在血管、淋巴管內(nèi)繼續(xù)存活并被轉(zhuǎn)運(yùn)，癌細(xì)胞與血管或淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞和基底膜粘連，穿透毛細(xì)血管或毛細(xì)淋巴管壁，向周圍間質(zhì)浸潤(rùn)，在基底膜不斷增生。,轉(zhuǎn)移類型,淋巴管轉(zhuǎn)移：癌細(xì)胞侵襲基底膜，并在周圍間質(zhì)中浸潤(rùn)生長(zhǎng)，與毛細(xì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞粘連，穿過內(nèi)皮細(xì)胞間的暫時(shí)裂隙，在淋巴管內(nèi)存活并被轉(zhuǎn)運(yùn)，進(jìn)而粘連并穿過竇內(nèi)皮細(xì)胞和基底膜進(jìn)入淋巴結(jié)實(shí)質(zhì)內(nèi)生長(zhǎng)。 血行轉(zhuǎn)移：癌細(xì)胞侵襲基底膜、在周周間質(zhì)中浸潤(rùn)，然后通過血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙，在血管內(nèi)形成瘤栓，隨血液循環(huán)轉(zhuǎn)移到全身各處。 種植性轉(zhuǎn)移：胸腔或腹腔腫瘤累及漿膜時(shí)，瘤細(xì)胞可以脫落入漿膜腔，種植于鄰近或遠(yuǎn)處漿膜面繼續(xù)生長(zhǎng)，并可引起

5、血性積液及粘連.,細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn),Transwell實(shí)驗(yàn) RTCA技術(shù),細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn),Transwell細(xì)胞遷移及浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn) 1、Transwell小室制備（細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)所需，遷移實(shí)驗(yàn)無此步驟） （1）包被基底膜 （2）水化基底膜,細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn),2、制備細(xì)胞懸液，具體細(xì)胞密度需要通過多次實(shí)驗(yàn)自己摸索。 3、細(xì)胞接種到transwell小室中，含趨化因子的培養(yǎng)基加入細(xì)胞培養(yǎng)板中。 4、細(xì)胞培養(yǎng)12-48小時(shí)（主要依癌細(xì)胞遷移及侵襲能力而定）。 5、結(jié)果統(tǒng)計(jì)： （1）直接計(jì)數(shù)法： A用棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細(xì)胞 B染色：常用染色方法有結(jié)晶紫染色、臺(tái)盼蘭染色、Giemsa染色、蘇木精染色、伊紅染色。 C細(xì)胞計(jì)數(shù)：選取5-10個(gè)視野計(jì)數(shù)。 （2）間接計(jì)數(shù)法： A用棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細(xì)胞 B細(xì)胞培養(yǎng)板中加入含0.5mg/ml MTT的培養(yǎng)基，將小室置于其中，膜浸沒在培養(yǎng)基中，37 4小時(shí)后取出。 C 加入DMSO，將小室置于其中，使膜浸沒在DMSO中，振蕩10分鐘，使甲臜充分溶解。取出小室，酶標(biāo)儀上測(cè)OD值。,細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn),Transwell 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖片（很難做到對(duì)