急性大鼠心肌梗死實驗模型的制備.ppt

1、大鼠心肌梗死實驗模型的制備,背景,有關心肌梗死模型的制作，國內(nèi)外采用結(jié)扎、藥物、冷凍、栓塞、電凝等方法制作兔、大鼠、狗等不同動物的心肌梗死模型，但大多數(shù)學者認為結(jié)扎法復制的心肌梗死模型與心肌梗死實際發(fā)病過程更符合。 由于臨床大多心肌缺血或心肌梗死都是一漸進性過程，會不斷發(fā)生缺血或梗死后再灌現(xiàn)象。而冠狀動脈結(jié)扎法能人為地仿造臨床心肌梗死過程的冠狀動脈梗死，其梗死部位、分布范圍相對一致，病理生理、生化改變與臨床心肌梗死更相似。 綜上所述,結(jié)合實際操作條件,選用結(jié)扎大鼠冠狀動脈結(jié)扎的方法,以建立穩(wěn)定的、適于細胞移植治療心肌梗死的大鼠動物模型。,建模原理,生物體各組織器官要維持其正常的生命活動，需要心

2、臟不停地搏動以保證血運。而心臟作為一個泵血的肌性動力器官，本身也需要足夠的營養(yǎng)和能源，供給心臟營養(yǎng)的血管系統(tǒng)，就是冠狀動脈和靜脈，也稱冠脈循環(huán)。冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部,行于心臟表面。冠狀靜脈伴隨 冠狀動脈收集代謝后的靜脈血，歸流于冠狀靜脈竇，回到右心房。正常情況下，冠狀動脈 之間，尚有豐富的吻合支或側(cè)支。冠狀動脈雖小，但血流量很大。占心排血量的5%，這就保證了心臟有足夠的營養(yǎng)，維持它有力地晝夜不停地跳動。如果冠狀動脈突然阻塞，不能很快建立側(cè)支循環(huán)，常常導致心肌梗塞。但若冠狀動脈阻塞是緩慢形 成的，則側(cè)支可逐漸擴張，并可建立新的側(cè)支循環(huán)，起代償?shù)淖饔?。左冠狀動脈為最大冠狀動

3、脈分支.主要供應左心室前壁和側(cè)壁，其主要分支是左前降支和左回旋支.選用結(jié)扎鼠左冠狀動脈前降支中上13處結(jié)扎的方法,冠狀動脈突然阻塞，側(cè)支循環(huán)不及起代償?shù)淖饔?以建立穩(wěn)定的、適于細胞移植治療心肌梗死.,1 實驗步驟和觀察項目,1. 1實驗動物健康雄性Wistar大鼠30只,體質(zhì)量250 25 g制作心肌梗死動物模型的大鼠體重以200 250 g為宜（動物太小，不利于操作，耐受創(chuàng)傷能力低；而體重及鼠齡太大，則不利術后觀察生存期，而且麻醉劑量不好掌握，凝血功能較差，不易止血。實驗動物由廣西醫(yī)科大學實驗中心提供。）,1. 2 試驗材料和藥品 : 10%水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、小動物呼吸機、心

4、電圖機、大白鼠手術板、5ml注射器2個、7號或4號針頭、眼科剪、手術燈、眼科開瞼器、小鑷子、小彎鉗、縫針、縫合線(6 - 0線)、小無菌棉簽 1.3 麻醉 SD大鼠稱重(兩只Wistar大鼠體重各為290g及360g), 號鼠腹腔注射烏拉坦1.45ml號鼠腹腔注射 10%水合氯醛1ml。,1. 4氣管插管 大鼠仰臥固定于手術臺上。沿頸部中線切開皮膚，分離組織暴露氣管，用7號注射針頭做為插管以45度斜進針從甲狀軟骨下緣輕輕水平插入約0.71.5cm 斜面朝上。固定好,氣管插管，呼吸比為1：2，呼吸頻率90次rain，潮氣量14 mlkg。關閉呼吸機，四肢接心電圖機記錄術前心電圖。完畢打開呼吸機，

5、 (此時作心電圖與開胸后結(jié)扎前心電圖對照,驗證是否為先天變異或?qū)嶒炃爱惓Ｐ碾妶D機未借到，所以心電圖未能做),甲狀軟骨下緣,1.5開胸及冠狀動脈結(jié)扎 心前區(qū)域剃毛, 在心臟搏動最明顯處,第三肋間隙水平開胸,皮膚切口約1. 52. 0 cm,逐層鈍性分離肌肉至胸膜。剪開胸膜,用眼科開瞼器撐開肋間肌切口,以無菌棉球向下壓迫左肺以保護肺臟剪開心包,用無菌棉簽推開左心耳。在左心耳下距主動脈根部23 mm處,用6 - 0線穿過一小束心肌,并結(jié)扎。(1)結(jié)扎后左室壁變蒼白,并出現(xiàn)室壁運動減弱。(2)術中結(jié)扎成功標識:心電監(jiān)護見II導聯(lián)大鼠于結(jié)扎冠狀動脈后QRS波峰降低，J點上移，ST段明顯抬高.證明心肌缺血

6、存在心肌梗死（證明結(jié)扎成功，心電圖于結(jié)扎前與結(jié)扎后的心電圖改變,排除手術操作造成人為性大鼠心肌缺血） 。然后加大通氣量,充分使肺復漲,并清理胸腔。,左心耳,在左心耳下距主動脈根部23 mm處可見一粉紅色細小血管,1.6 關胸及術后處理 逐層關胸, 斷開呼吸機,清理呼吸道（拔出氣管插管后應注意將大鼠舌頭外提，防止舌根后墜出現(xiàn)缺氧窒息）并觀察大鼠呼吸，以淺快呼吸，頻率3040次/min為宜。術后單籠飼養(yǎng)。 注:手術過程中大鼠冠狀動脈結(jié)扎后可能馬上出現(xiàn)心律失常，室性停搏或心室纖維顫動，立即解除對心臟的擠壓或同時進行心內(nèi)按壓可以使心臟恢復搏動。,1.7 術后抗感染及護理 大鼠本身具有比較強的抗感染能力

7、，但是預防感染有利于促進術后恢復，并且良好的術后護理可以提高動物模型的生存率。因此，術前所用手術器械均要用75酒精浸泡消毒。術后腹腔注射青霉素80萬U。待大鼠麻醉清醒后即可與其糖水和飼料，無須禁食。術后可適量補充能量。冬天應注意保噯。,2 檢測指標,2.1 術前和術中做的心電圖 2.2 組織病理學檢查 開胸結(jié)扎冠狀動脈后1d、2d及3 d分批處死實驗鼠。取其心臟，沿心臟縱軸剖開左右心室，用10福爾馬林溶液固定24 h，然后垂直于心臟縱軸從心尖部至心底部分別橫切4個切面，石蠟包埋，連續(xù)5 um厚度切片，HE染色，觀察左室壁心肌組織的病理變化，確定心肌梗死的存在。,3 結(jié)果討論,兩只實驗鼠死亡原因討論： 號實驗鼠在結(jié)扎冠狀動脈時心臟停止跳動死亡號實驗鼠在關閉胸腔時呼吸停止死亡 考慮以下可能原因： . 鼠齡過大，適應手術能力較適齡鼠差，多篇文獻提出實驗鼠體重以250 25 g 為宜，本次實驗鼠體重分別為 290g及360g;,. 實驗鼠體重較實驗前預期的要重，麻醉劑有使用過量的可能，實驗鼠術中出現(xiàn)呼吸抑制； . 開瞼器撐開術口壓迫肺臟時間過長，可能存在氣胸肺不張造成實驗鼠缺氧； . 壓迫心臟時造成大血管移位扭轉(zhuǎn)，重要臟器供血不足； .術中失血過多，造成血壓下降，失血性休克；,. 結(jié)扎冠狀動脈時部位未掌握好，結(jié)扎部位過高（結(jié)