抗生素類藥物分析

1、在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱,內(nèi)酰胺類 氨基糖苷類 四環(huán)素類 大環(huán)內(nèi)酯類 多烯大環(huán)類 多肽類,1. 抗生素（antibiotics）,2. 分 類,一、概 述,化學純度較低 活性組分易發(fā)生變異 穩(wěn)定性差,3. 來 源,4. 抗生素的特點,生產(chǎn)工藝復雜 發(fā)酵過程不易控制，易受污染,原因,一、概 述,鑒別：物理化學方法、微生物法 檢查：水分、異常毒性、熱原、細菌內(nèi)毒素、降壓物質等 含量/效價測定： 微生物法 ： 與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復雜費時； 理化方法： 準確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差,5. 抗生素質量分析,一、概

2、 述,1. 化學結構,包括青霉素類和頭孢菌素類,青霉素類：6-APA為母核 頭孢菌素類：7-ACA為母核,中 國 藥 科 大 學 藥 學 院 藥 分 教 研 室,二、內(nèi)酰胺類,酸性較強（pKa 2.5-2.8） 臨床常用其堿金屬鹽 （水溶性好）,酸性(羧基),有多個手性碳,旋光性,青霉素類：苯環(huán)取代基 頭孢菌素類：母核有共軛結構,UV（共軛）,干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定,穩(wěn)定性(內(nèi)酰胺),2、主要 理化性質,降解 失效,氧化劑、酸、堿 酶、金屬離子、,青霉素,二、內(nèi)酰胺類,1）羥肟酸鐵反應： 內(nèi)酰胺類 羥肟酸 顯色 2）茚三酮反應 -氨基 藍紫色 3）雙縮脲反應 內(nèi)酰胺類 紫紅色 4）光譜法（

3、UV、NMR） 5）色譜法（HPLC、TLC）,NH2OHHCl NaOH,茚三酮 ,堿性酒石酸銅,呈色反應,3、鑒 別,二、內(nèi)酰胺類,二、內(nèi)酰胺類,4、檢 查,聚合物 有關物質和異構體 吸光度 殘留溶劑 結晶性,5、含量測定 -碘量法（ChP2000）,二、 內(nèi)酰胺類,原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應，但其堿性降解產(chǎn)物可消耗碘,青霉素族 頭孢菌素族,NaOH 水解,4I2H +,8I-,I2+2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6,定量過量,剩 余,5、含量測定,-碘量法（ChP2000）,反應分兩步進行：,水解反應 (按化學計算量進行),氧化-還原反應 (無定量關系，受溫度、p

4、H值和時間等因素影響， 應嚴格控制反應條件并采用標準品平行對照測定),5、含量測定,-碘量法（ChP2000）,因樣品中雜質會消耗碘，故應作空白試驗。,加入樣品，不加堿； 其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿。,空白試驗:,空白試驗與經(jīng)典空白試驗不同：,5、含量測定,-碘量法（ChP2000）,含量 對照品,V樣空 - V樣 W對 V對空 - V對 W樣,靈敏度高：樣品 : 碘 = 1 : 8 反應條件、實驗操作要求高,1份含量,V對、V對空 V樣、V樣空,加試劑次序、反應時間、滴定速度相同,特 點：,5、含量測定,-電位配位滴定法（汞量法）,原理：青霉素不與汞鹽反應，其堿性降解

5、產(chǎn)物可與Hg2+絡和。,Hg+ + 2R-SH (RS)2Hg + 2H+,方法說明： a、空白試驗與碘量法類似，加樣品，不加NaOH b、與碘量法相比，汞量法不需對照試驗,5、含量測定,-其他常用方法,酸堿滴定法：應用廣泛,硫醇汞鹽法,HPLC法：應用廣泛,1. 化學結構,三、氨基糖苷類,都是以氨基環(huán)醇與氨基糖縮合而成的苷； 分子結構中都含有多羥基； 均為堿性抗生素；,鏈霉素,臨床應用其硫酸鹽,堿性(氨基),（糖）：有多個手性碳,旋光性(糖),水 溶 性,溶解度(氨基、羥基),強酸、堿條件均可水解,穩(wěn)定性(苷),2、主要 理化性質,三、氨基糖苷類,3、鑒 別,三、氨基糖苷類,茚三酮反應：具羥

6、基胺類，-氨基酸性質,鏈霉素 + 水和茚三酮 藍紫色,鏈霉素 N-甲基葡萄糖胺,N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應：,紅 色,水解,對二甲氨基苯甲醛,乙酰丙酮 OH-,8-羥基喹啉 NaOBr,坂口（Sakaguchi）反應：(鏈霉胍特有）,麥芽酚（Maltol)反應：(鏈霉糖特有）,三、氨基糖苷類 -鑒別,鏈霉素 麥芽酚 紫紅色,鏈霉素 鏈霉胍 橙紅,硫酸鹽反應,或-萘酚,4、檢 查-,來 源：,發(fā)酵中產(chǎn)生,BP:,薄層色譜法（雜質對照品法）,要求：NC2 2000，C2a峰和C2峰的分離度應符合要求，重復進樣RSD2.0%,三、氨基糖苷類,鏈霉素中鏈霉素B的檢查,慶大霉素C

7、組分測定（系統(tǒng)適用性試驗）,色譜柱：ODS,流動相： H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸鈉溶液(0.2M)，必要時調(diào)節(jié)甲醇的含量。,檢測波長： 330nm（鄰苯二甲醛柱前衍生）,4、含 量 檢 測,三、氨基糖苷類,氨基糖苷類 含量檢測,微生物法、HPLC法等,四、四環(huán)素類,1. 化學結構,四、四環(huán)素類,-OH：酸性 N(CH3)2：堿性 與酸、堿均可成鹽 臨床多用鹽酸鹽,兩 性,旋光性,易發(fā)生異構化，降解等反應，性質不穩(wěn)定,穩(wěn)定性,酚羥基、烯醇基與Ca2+、Mg2+絡合顯色,與金屬離子絡合,2、主要 理化性質,UV和熒光,四、四環(huán)素類,2. 主要理化性質,堿 性 C環(huán)開環(huán)，形成內(nèi)酯 異四環(huán)素,弱酸性（pH2-6） A環(huán)C-4異構化 差向四環(huán)素,酸性（pH 2） C環(huán)脫水 脫水四環(huán)素,四、四環(huán)素類,差向異構體,異四環(huán)素,OH-,四、四環(huán)素類,四、四環(huán)素類,3. 鑒 別,1）濃硫酸反應 2）FeCl3反應： （酚羥基） 顯紅色褐色 3） TLC、HPLC 4）熒光：（含共軛雙鍵）紫外燈照射下產(chǎn)生不同顏色熒光,HPLC法,4. 檢 查,TLC、HPLC法 雜質吸收度（降解產(chǎn)物顏色較深） 殘留溶劑,5. 含