細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)PPT課件

細(xì)胞化學(xué)染色,1,細(xì)胞學(xué)和化學(xué)結(jié)合的一門科學(xué)。以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)原理對(duì)細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（包括酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核算等）作定性、定位、半定量分析的方法 。,2,臨床應(yīng)用,輔助判斷急性白血病的臨床類型。根據(jù)細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果不同，可推斷細(xì)胞所屬系列。輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷。由于血細(xì)胞在病理情況下，其化學(xué)成分及含量發(fā)生變化，可以輔助疾病的診斷，如中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色、鐵染色等。,3,細(xì)胞染色的基本步驟,固定為了保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的不變，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定。分為物理法和化學(xué)法物理法：干燥和火焰固定化學(xué)法：蒸氣固定和液體固定，如甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。,4,有色沉淀反應(yīng) 通過(guò)不同化學(xué)反應(yīng)，是被檢測(cè)物質(zhì)最終形成穩(wěn)定的有色沉淀。1）偶氮偶聯(lián)法：含苯酚的底物，在相應(yīng)酶的作用下釋放出萘酚，萘酚與重氮鹽結(jié)合，偶氮偶聯(lián)形成相應(yīng)顏色的沉淀物。2）普魯士藍(lán)反應(yīng)：細(xì)胞內(nèi)、外的鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成如亞鐵氰化鉀藍(lán)色沉淀。,5,3）雪夫反應(yīng)：過(guò)碘酸氧化細(xì)胞內(nèi)糖類中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無(wú)色品紅形成紅色沉淀物。,6,復(fù)染 目的在于使各種細(xì)胞能顯示出來(lái)便于辨認(rèn)。選擇復(fù)染液的顏色應(yīng)與有色沉淀的顏色有明顯對(duì)比度既能使細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示又能清楚的看出細(xì)胞化學(xué)染色的結(jié)果。,7,鐵 染 色 ferric stain,8,原理健康人骨髓中的鐵主要存在于骨髓小粒和幼紅細(xì)胞中。骨髓中的鐵在酸性環(huán)境下與亞鐵氰化鉀作用，形成普魯士藍(lán)色的亞鐵氫化鐵沉淀，定位于含鐵部位。,9,化學(xué)反應(yīng) 鐵+亞鐵氰化鉀 亞鐵氰化鐵,酸性環(huán)境,藍(lán)色沉淀,10,細(xì)胞外鐵 主要存在于骨髓小粒的巨噬細(xì)胞內(nèi)，反映體內(nèi)貯存鐵。 分-、+、+、+、+五個(gè)等級(jí)。,11,細(xì)胞內(nèi)鐵 存在于中幼紅細(xì)胞、晚幼紅細(xì)胞、及紅細(xì)胞中的鐵（包括鐵粒幼紅細(xì)胞、鐵粒紅細(xì)胞）。 油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)中幼紅和晚幼紅細(xì)胞，記錄胞漿中含有藍(lán)色顆粒細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。,12,鐵粒幼細(xì)胞根據(jù)藍(lán)色鐵顆粒多少粗細(xì)分為：、型。 環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞：胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)色顆粒5顆以上，圍繞核周三分之一以上。 鐵粒紅細(xì)胞：紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)鐵顆粒。,13,參考范圍細(xì)胞外鐵：+細(xì)胞內(nèi)鐵：鐵粒幼細(xì)胞陽(yáng)性率在12%44%。型為主，少數(shù)型。無(wú)環(huán)形鐵粒幼及鐵粒紅細(xì)胞。,14,臨床意義,缺鐵性貧血：細(xì)胞外鐵陰性，細(xì)胞內(nèi)鐵陽(yáng)性率下降或?yàn)榱?。?jīng)鐵劑治療后，其細(xì)胞內(nèi)、外鐵增多，因此鐵染色可作為診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的重要方法。,15,鐵粒幼細(xì)胞貧血：鐵粒幼紅細(xì)胞增多，有時(shí)可見到鐵粒紅細(xì)胞，細(xì)胞外鐵也常增多。因此鐵染色可作為診斷本病的重要方法。,16,骨髓增生異常綜合征：伴環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多，其環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞大于有核細(xì)胞15%,細(xì)胞外鐵也常增多。,17,非缺鐵性貧血：溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、再生障礙性貧血、多次輸血后和白血病等，細(xì)胞外鐵和內(nèi)鐵正?；蛟黾?。感染、肝硬化、慢性腎炎、尿毒癥、血色病等細(xì)胞外鐵明顯增加而鐵粒幼細(xì)胞減少。,18,應(yīng)用評(píng)價(jià) 臨床上應(yīng)用最廣泛的一種細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)。鐵染色的結(jié)果一般是可信的，雖不如血清鐵蛋白敏感，但不受多種病理因素影響，因此鐵染色是反映機(jī)體儲(chǔ)存鐵的金標(biāo)準(zhǔn)。 假陽(yáng)性：骨髓涂片受試劑、玻片清潔度及操作過(guò)程等因素影響，造成細(xì)胞外鐵和內(nèi)鐵假性增高或陰性患者假陽(yáng)性。 假陰性：標(biāo)本凝塊誤認(rèn)為骨髓小粒,19,中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色 neutrophilic alkaline phosphatase NAP,20,原理 中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶的染色方法有Gonmori鈣-鈷偶聯(lián)法和kaplow偶氮偶聯(lián)法。,21,Kaplow偶氮偶聯(lián)法磷酸萘酚鈉 萘酚,包漿中NAP,PH9.6,重氮鹽,不溶性紫黑色沉淀,22,正常細(xì)胞染色反應(yīng) NAP主要存在于中性成熟粒細(xì)胞（包括中性桿狀核細(xì)胞和分葉核細(xì)胞），故成熟中性粒細(xì)胞胞漿呈陽(yáng)性，其他細(xì)胞基本陰性。,23,結(jié)果判讀,胞漿中有紫黑色顆粒結(jié)果為陽(yáng)性，分為+，+，+，+，分別為1分、2分、3分、4分，100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞的積分之和即為積分值。,24,參考范圍,陽(yáng)性率40%,NAP積分值為30130分。,25,臨床意義,1、NAP積分增加：見于細(xì)菌性感染（類白血病反應(yīng)）、再生障礙性貧血、某些骨髓增殖性疾?。?、骨髓纖維化、真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥）、慢性粒細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌、雄激素治療等。,26,2.NAP積分下降：慢性粒細(xì)胞白血病慢性期、急性粒細(xì)胞白血病、陣發(fā)性隨眠性血紅蛋白尿、骨髓異常增生綜合征、惡性組織細(xì)胞病。,27,應(yīng)用評(píng)價(jià),NAP主要用于慢性粒細(xì)胞白血病與類白血病反應(yīng)、PNH與再障及急性白血病類型的鑒別。本實(shí)驗(yàn)影響因素較多，如試劑、生理性波動(dòng)及試驗(yàn)人員及判斷標(biāo)準(zhǔn)等，使結(jié)果相差較大，各單位應(yīng)建立本實(shí)驗(yàn)室參考標(biāo)準(zhǔn)。,28,過(guò)氧化物酶染色peroxidasePOX,29,原理,血細(xì)胞中所含主要為髓過(guò)氧化物酶MPO，MPO是人類中性粒細(xì)胞含量最多的一種蛋白質(zhì)。POX染色方法有多中：復(fù)方聯(lián)苯胺法、二甲基聯(lián)苯胺法、四甲基聯(lián)苯胺法等。,30,二甲基聯(lián)苯胺法： 過(guò)氧化氫 新生態(tài)氧,過(guò)氧化物酶,二氨基聯(lián)苯胺,不溶性沉淀,31,正常細(xì)胞染色反應(yīng),1.粒細(xì)胞系統(tǒng) 分化差的原始粒細(xì)胞為陰性 分化好的原始粒細(xì)胞至成熟粒細(xì)胞各階段均呈陽(yáng)性。陽(yáng)性程度隨細(xì)胞成熟增強(qiáng)。 嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)性最強(qiáng)，嗜堿性粒細(xì)胞陰性。,32,2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：陰性或弱陽(yáng)性 3.其他細(xì)胞：淋巴、紅系、巨核系均為陰性，漿細(xì)胞，組織細(xì)胞可陰性，可陽(yáng)性。,33,臨床意義,輔助診斷急性白血病的首選，主要用于鑒別急性髓細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病。,34,急性淋巴細(xì)胞白血?。涸剂馨图?xì)胞及幼稚細(xì)胞均呈陰性，實(shí)際上急性淋巴細(xì)胞患者骨髓中可殘留部分原始粒細(xì)胞，而出現(xiàn)陽(yáng)性，故參考范圍為陰性或陽(yáng)性3%,35,急性粒細(xì)胞白血?。涸剂＜?xì)胞陰性或陽(yáng)性，常陽(yáng)性，為+，陽(yáng)性顆粒數(shù)較多，顆粒較粗大，急性早幼粒細(xì)胞白血?。涸缬琢＜?xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性，+急性單核細(xì)胞白血?。涸紗魏撕陀字蓡魏思?xì)胞呈陰性或弱陽(yáng)性，其陽(yáng)性顆粒少而細(xì)小。,36,急性紅白血?。涸剂＜?xì)胞呈陽(yáng)性或陰性，原始單核細(xì)胞呈陰性或弱陽(yáng)性，有核紅細(xì)胞呈陰性中性成熟粒細(xì)胞POX活性下降：見于骨髓異常增生綜合征、放射病、退化的中性粒細(xì)胞及某些白血病。,37,應(yīng)用評(píng)價(jià),POX染色是急性白血病形態(tài)學(xué)分型中最重要、首選的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色。 POX染色涂片上細(xì)胞結(jié)構(gòu)不如瑞氏染色清楚，且陽(yáng)性細(xì)胞中已有陽(yáng)性顆粒覆蓋，一定程度上干擾白細(xì)胞顆粒判斷。,38,POX染色測(cè)定MPO的敏感性明顯低于流式細(xì)胞術(shù)對(duì)MPO測(cè)定，所以POX染色陰性的患者并不等于白血病細(xì)胞中不存在此酶，需用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行確認(rèn)。,39,蘇丹黑染色,蘇丹黑B（sudan black B，SBB）是一種脂溶性的重氮染料，能溶解細(xì)胞內(nèi)的含脂結(jié)構(gòu)（如中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇），