人力資源管理論文-自體和異體血液在全血分離實驗體系中對免疫細(xì)胞因子的影響.doc

人力資源管理論文-自體和異體血液在全血分離實驗體系中對免疫細(xì)胞因子的影響作者：夏曉峰郭峰錢寶華花美仙【摘要】目的：運用系統(tǒng)血液免疫反應(yīng)分離實驗體系，探討在抗原激活的情況下異體血細(xì)胞對反應(yīng)體系中細(xì)胞因子含量水平影響的變化規(guī)律。方法：以S180作為激活抗原，加異體血細(xì)胞與自體血細(xì)胞對比，37孵育1h，取上清液用ELISA法測定IL-8、TNF-、IFN-的分泌量。結(jié)果：IL-8的分泌量異體紅細(xì)胞實驗組（133.92135.85）%與自體紅細(xì)胞對照組（37.9327.74）%相比明顯上升（P0.05）；TNF-的分泌量異體紅細(xì)胞實驗組（8.313.57）%與自體紅細(xì)胞實驗組（16.5510.38）%相比明顯下降（P0.05）；IFN-分泌量無明顯差異。結(jié)論：異體紅細(xì)胞對自體血液免疫反應(yīng)細(xì)胞因子的分泌具有雙向調(diào)控作用，提示異體輸血對受者的血液免疫反應(yīng)具有干擾和失平衡的不良影響?！娟P(guān)鍵詞】淋巴細(xì)胞；紅細(xì)胞；抗原；免疫調(diào)控；細(xì)胞因子EffectsofAutogeneticandAllogenousBloodonCytokinesbyMeansofNaturalIsolatedExperimentalSystemAbstractObjectiveAutogeneticandallogenouserythrocytesregulatetheimmunologicalreactionsactivatedbyantigensbymeansofnaturalisolatedexperimentalsystem,toobservethechangesofcytokines.MethodsUsinginactivatedS180asactivatingantigenandautologousplasmaasreactionsubstratum,Afterincubationanhourin37,supernatefluidissuspendedanddetectedthechangeofIL-8、TNF-andIFN-byELISAassay.ResultsThesecretionofIL-8ofallogenouserythrocytesexperimentalgroup(133.92135.85)%ismuchhigherthanthatofautogeneicerythrocytescontrolgroup(37.9327.74)%(P0.05),ThelevelofTNF-ofallogenouserythrocytesexperimentalgroup(8.313.57)%ismuchlowerthanthatofautogeneicerythrocytesexperimentalgroup(16.5510.38)%(P0.05)；theexpressionofIFN-紅細(xì)胞在天然免疫防御網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要作用，紅細(xì)胞在補體系統(tǒng)天然免疫反應(yīng)的參與下有黏附和調(diào)理抗原、清除循環(huán)免疫復(fù)合物、調(diào)控淋巴細(xì)胞表達免疫分子和細(xì)胞因子等作用。有實驗證明在庫存血中有多達14種以上炎性細(xì)胞因子，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶和TNF-濃度的增加在臨床的異體輸血時都可造成免疫功能的不利影響1。結(jié)合了補體的病原體可以被紅細(xì)胞補體受體免疫分子黏附，激發(fā)對致病原發(fā)生連鎖的系統(tǒng)血液天然免疫反應(yīng)，同時紅細(xì)胞還可參與相關(guān)免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。本實驗研究是運用全血分離實驗體系2，通過ELISA的方法測定上清液中相關(guān)細(xì)胞因子IL-8、TNF-、IFN-分泌量在實驗體系反應(yīng)中的變化，探討其可能存在的臨床意義。1材料與方法1.1材料1.1.1酸性枸櫞酸鈉葡萄糖溶液（acidcitratedextrose,ACD）抗凝的健康成人新鮮全血由解放軍上海血站提供。1.1.2磷酸鹽緩沖溶液（phosphatebufferedsolution,PBS）和癌細(xì)胞懸液（S180）由解放軍上海血站血液免疫研究室自行制備。1.1.3紅細(xì)胞裂解液（10）購于深圳晶美生物公司。1.1.4IL-8、TNF-、IFN-酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒（ELISA法）購于法國DIACLONE公司。1.2方法1.2.1血漿的分離制備采集新鮮的健康成人ACD抗凝全血10mL，室溫下2000r/min離心5min，吸取上層血漿至另一試管備用。1.2.2紅細(xì)胞懸液（RBC）的制備小心吸取沉底紅細(xì)胞100L，加入2mL生理鹽水溶液中洗滌，2000r/min離心5min，棄上清，全自動血細(xì)胞分析儀計數(shù)，光學(xué)顯微鏡下觀察證實不含白細(xì)胞和血小板后，調(diào)整紅細(xì)胞懸液濃度為1108/mL。1.2.3白細(xì)胞懸液（WBC）的制備取全血細(xì)胞懸液1.6mL加4mL蒸餾水在冰水中輕輕混勻作用不超過1min，立即加4mL1.8%氯化鈉液混勻，2500r/min離心5min，棄上清，調(diào)整白細(xì)胞懸液濃度為1106/mL。1.3分離實驗體系的設(shè)計和建立實驗共分6只試管，以自體或異體血漿作為反應(yīng)基質(zhì)，分離實驗組以滅活腹水癌細(xì)胞S180作為激活抗原，其對照組加NS作為對照，即（注：*為加異體血漿組）：0.1mL異體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL異體血漿*（加異體血漿）。0.1mL異體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿（加自體血漿）。0.1mL異體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL異體血漿*（加異體血漿）。0.1mL異體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿（加自體血漿）。0.1mL自體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿（加自體血漿）。0.1mL自體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿（加自體血漿）。將上述6只試管置于37水浴箱中溫育1h，加蓋，中間搖勻2次，間隔20min；完成后，2000r/min離心5min；小心取出上清液約400L裝入安瓿管中，編號，置于-20冰箱中冷藏待測。1.4上清液細(xì)胞因子IL-8、TNF-、IFN-的檢測實驗前20min從冰箱中取出試劑盒和待測樣品，平衡至室溫（25），96孔板用包被緩沖液稀釋的試劑，每孔加100L，4過夜，洗板3次；加100L待檢樣品上清液于已包被的反應(yīng)孔中（同時做空白、陰性及陽性孔對照），37孵育1h，洗板3次；于反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的streptavidin-HRP100L，室溫下孵育20min，洗板3次；于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液100L，避光反應(yīng)20min使其顯色；于各反應(yīng)孔中加入2mol/L硫酸100L終止反應(yīng)；在ELISA酶標(biāo)檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔A值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并比較各孔實測值。1.5統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)以xs表示，統(tǒng)計學(xué)處理采用t檢驗或方差分析，P0.05為差異顯著。2結(jié)果2.1IL-8、TNF-、IFN-分泌量（pg/mL）的變化在S180激活情況下，異體紅細(xì)胞能夠?qū)ψ泽w血液免疫反應(yīng)的細(xì)胞因